小鼠腹水型肝癌细胞系Hca 2
小鼠腹水型肝癌细胞系Hca-P/L6的克隆细胞株X淋巴道转
移能力的测定实验
大连医科大学
基础医学院
2011级临床8班
段梦莹A110100259
叶永英A110100255
于舒晗A110100250
刘晋宏A110100256
小鼠腹水型肝癌细胞系Hca-P/L6的克隆细胞株X淋巴道转移
能力的测定实验
段梦莹1，于舒晗1，叶永英1，刘晋宏1，张宏颖23
（1大连医科大学基础医学院2011级8班辽宁大连 1164002.中国科学院大连化学物理研究所国家色谱研究分析中心,辽宁大连116023; 3. 大连医科大学病理学与法医学教研室,辽宁大连116044）
摘要: [目的]建立小鼠腹水型肝癌淋巴道高转移细胞系HCa - P /L6细胞模型并将其单细胞克隆株接种于615小鼠脚垫培养检测其淋巴道转移能力。[方法]将小鼠腹水型肝癌淋巴道低转移细胞株(HCa - P)经615小鼠腹中线皮下接种的方法获得淋巴结转移瘤1代细胞HCa - P /L1 ,再经小鼠淋巴系统筛选5次,筛选高转移细胞系HCa - P /L6。615小鼠脚垫接种,检测单克隆细胞株淋巴道转移能力。[结果]从HCa - P中筛选出具有多部位转移特性的淋巴道高转移细胞系HCa -P /L6 ,转移率为100%。[结论] 从HCa - P中筛选出了淋巴道高转移细胞系HCa - P /L6。
关键词: HCa - P；HCa - P /L6细胞模型；淋巴道；转移
中图分类号: R286. 91文献标志码:A
恶性肿瘤的转移是癌症患者死亡的重要原因。为了探索肿瘤转移的某些律，实验中从同一个肿瘤中分离出不同转移能力的克隆细胞, 这对临床肿瘤治疗工作具有非常重要的意义。Hca- F 是小鼠腹水型肝癌高淋巴道转移单克隆瘤株, 可用于肿瘤淋巴道转移机制的研究及抗肿瘤药物的筛选。1990年大连医学院病理学教研室从小鼠腹水型肝癌淋巴道转移细胞系Hca - F25 /L 中分离出具有淋巴道不同转移能力的两株瘤细胞,其中高转移克隆株HCa - F (16A_3 - F_3)淋巴结转移率为78. 6% ～89. 4% ,低转移克隆株HCa - P (A_2 - 0)淋巴结转移率为15% ～15. 4%[1],被广泛应用于肿瘤淋巴道转移机制研究及药物筛选[2]。根
据瘤异质性( Tumor heterogeneity)学说,恶性肿瘤的不同亚克隆细胞株在生长速度、侵袭能力、对生长信号的反应、对抗癌药物敏感性等方面都可存在差异。1992 年,Chen等[3]对小鼠腹水型肝癌高(16A_3 - F_3) 、低(A_2 - 0)转移克隆稳定性进行了研究,结果提示,高转移克隆细胞株有效维持时间是在体外传20代以内。2003年,白洁等[4]对小鼠腹水型肝癌高淋巴道转移株HCa - F进行再克隆,结果分离出3个转移力不同的瘤株。因此,为了给肿瘤淋巴道转移机制和中药活性成分筛选的研究提供一对可互为对照的转移力不同的肿瘤细胞,必须对低转移细胞株进行重新筛选。本文以小鼠腹水型肝癌淋巴道低转移细胞株HCa - P为瘤源, i采取经体内淋[3]巴系统筛选的方法,筛选具有高转移倾向的小鼠腹水型肝癌细胞系。但近来研究中发现此瘤株的淋巴结转移率不够稳定, 考虑到肿瘤的遗传
-X细胞进行不稳定性,因此我们选择稳定性较强的小鼠腹水型肝癌淋巴Hca-P/L
6
试验。通过可转移性小鼠腹水型肝癌淋巴Hca-P/L
-X细胞转移试验，研究其转
6
移变化规律，从感性上认识肿瘤侵袭与淋巴道转移的生物学特征，了解肿瘤动物实验模型建立的过程及意义并试图建立适用于研究肿瘤淋巴道转移实验模型，我们进行了本次实验。
一、材料
1.1研究对象
的克隆细胞株X由大连医科大1. 1.1 细胞系: 小鼠腹水型肝癌细胞系Hca-P/L
6
学病理学与法医学教研室张宏颖筛选。
1.1.2 实验动物: 615种系小鼠 ,雄性 , 6～8周龄，体重 18～22 g，由大连医科大学实验动物中心提供 (实验动物生产许可证 SCXK (辽 ) 2002 - 0002,实验动物使用许可证 SYXK(辽 ) 2002 - 0005)。
1.2主要仪器及器皿：搪瓷盆、温度计、离心管、1ml注射器、手术刀、眼科手术剪、眼科手术镊、乳胶手套、生理盐水、1%来苏儿溶液、75%酒精棉、10% 甲醛固定液等。
二、研究方法
2.1细胞系获取。从液氮罐中取出高转移力小鼠腹水型肝癌细胞塑料冻存管，立即放入40度的温水中，一分钟内使冻存液全部融化，立即送入无菌室中。取出细胞悬液放入离心管中，用生理盐水洗涤2次，离心，弃上清，在加1ml生理盐水吹打均匀。向小鼠腹腔内接种0.2mlHCa-F细胞悬液，于第6天无菌条件取腹水。
2.2.615小鼠皮下接种肿瘤细胞。取615小鼠癌性腹水0.1ml（2×10^6个），接种于615小鼠右腋中线皮下。定期观察肿瘤生长及淋巴结肿大情况。于接种18天后处死全部小鼠，取瘤体及相关淋巴结，同时观察肺、肝、肾等器官。将上述组织固定于10%甲醛固定液中，石蜡包埋制片，HE染色，显微镜检查。
2.3.组织取材。将皮下瘤体、淋巴结、肺、肝、肾选取病变部位，切成厚2—3mm 的小于2cm×1cm大小的组织块，10%中性甲醛固定。经冲洗（用递升浓度的酒精等）、透明（用二甲苯等）、浸蜡（用石蜡），然后用石蜡将组织包埋成蜡块，再经切片机切片和染色制成切片。作苏木精-伊红染色。
2.4.切片脱色。石蜡切片法、HE染色法。
2.4.1脱水程序及时间：组织固定，冲洗，然后：
①脱水。以下列顺序进行：60%酒精30分钟→80%酒精1—2小时→95%酒精2—4小时或过夜→95%酒精2—4小时→100%酒精2—4小时→100%酒精2—4小时或过夜。
②透明：二甲苯I30—45分钟；二甲苯Ⅱ30—45分钟。
③浸蜡。蜡碗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ（各30—45分钟）；包埋。
④修蜡块。修蜡块，贴号。
⑤切片。
⑥烘烤。烘烤切片60—70摄氏度，1小时。
⑦染色。
2.4.2 HE切片染色程序与方法:
①切片脱蜡水洗：将烘干的切片浸入二甲苯Ⅰ、Ⅱ各5-10分钟：
无水酒精3-10分钟（消除二甲苯）→95%酒精1-3分钟→80%酒精1-3分钟→70%酒精1-3分钟→50%酒精1-3分钟→自来水冲洗5分钟以上（洗去切片上的酒精，切片透明）→蒸馏水清洗（防止污染苏木精染液）。
②HE染色：苏木精-伊红染色是先用苏木精将组织切片适当的过染，经水洗后再用盐酸酒精分化，弱碱性水溶液显蓝。使胞核呈明显的蓝色，胞质及背景无色。再经水洗后用伊红染胞质，染成深浅不同程度的粉红色至红色：苏木染色（染核）5-15分钟→自来水冲洗3-5分钟→0.5%盐酸酒精溶液分化数秒钟→自来水洗1-5分钟→弱碱性水溶液显蓝30-60秒→自来水冲洗5-10分钟→蒸馏水洗1-2次→伊红1分钟→蒸馏水洗1-2次。
③脱水、透明、封固：脱水、透明的目的是使存留在切片上的水分及漂浮的染色液全部除净，经透明剂的作用后，将脱水剂清除出来，使切片产生适宜的折光率。最后用盖玻片及封固剂封固，便于观察和长期保存。
80%酒精30-40秒→95%酒精30-60秒→无水酒精Ⅰ1-5分钟→污水酒精Ⅱ1-5分钟→二甲苯Ⅰ1-5分钟→二甲苯Ⅱ1-5分钟→中性树胶封固。
三、实验结果
3.1 HCa - P /L6 -X的形态学特点
将HCa - P细胞接种于小鼠腹部中线皮下, 21 d后小鼠右侧腹股沟淋巴结肿大，腹中线接种部位形成局部移植瘤,质硬,灰白色见图1。右侧腹股沟肿大淋巴结组织(HCa - P /L6 )病理学改变见图2,可见淋巴结中淋巴结部分结构尚存,大的多边形细胞呈片状分布,异型性明显,与原位移植瘤形态相似,表明此淋巴结中的肿瘤组织是移植瘤发生了淋巴道转移的结果。
把HCa - P /L6瘤细胞接种于培养液中培养,在倒置显微镜下的形态见图3,可见细胞呈悬浮生长,体积大,圆形,胞浆透亮,有的成簇生长,部分细胞处于分裂增殖状态,但细胞体积
比HCa - P略大。
图1 HCa - P /L6的单克隆细胞株X接种于615小鼠形成的腹股沟淋巴结转移瘤图片
右侧腹股沟淋巴结肿大,腹中线接种部位形成局部移植瘤,质硬,灰白色。
图2 HCa - P /L6的单克隆细胞株X接种于615小鼠形成的腹股沟淋巴结转移瘤组织学图片
可见大的多边形细胞呈片状分布,大小不等,具有明显的异型性,并可见多核瘤巨细胞。部分细胞呈片状坏死改变,血管间质少。
图3 HCa - P /L6的单克隆细胞株X的形态学特点
细胞呈悬浮生长,体积大,圆形,胞浆透亮,有的成簇生长,部分细胞处于分裂增殖状态,但细胞体积比HCa - P略大
3.2 HCa - P /L6的单克隆细胞株X在 615小鼠淋巴系统内的转移率（表1）
四、讨论
4.1由表1证实可移植性小鼠腹水淋巴道向其他部位发生转移。
4.2肿瘤转移，是导致肿瘤复发，促进患者死亡的重要原因。因此研究研究转移的激励和影响因素，对提高恶性肿瘤的治愈率和生.率有很大意义。淋巴道转移是绝大多数癌早期最常见的转移途径，其转移机制尚不清楚[5]。原因之一是缺乏较好的淋巴道转移动物模型。因此，建立稳定而可靠的淋巴道转移动物模型机有重要的意义。由于肿瘤存在着遗传不稳定性，经过一段时间的使用后，肿瘤的基因有可能发生变异导致其生物学表型的变化。本实验使用的实验动物是近交系615小鼠，雌雄兼用，6~8周龄，体重18-22g，由大连医科大学实验动物中心提供。
4.3高转移力小鼠腹水型肝癌细胞(HCa-P)，是小鼠腹水型肝癌高淋巴道转移单克隆瘤株，可用于肿瘤淋巴道转移机制的研究及抗肿瘤药物的筛选，由大连医科大学病理教研室建株并保存。
4.4本实验选用615小鼠建立动物实验模型是由于淋巴系统比较发达，易于肝癌淋巴道转移实验的进行，提高试验成功率[4]。小鼠移植性肝癌的一般生物学特性与分化较好的人类肝细胞治疗有很大相似之处，有利于进一步的研究。
4.5恶性肿瘤侵入淋巴管以后随淋巴瘤转移，首先到达局部淋巴结使其发生转移，然后可继续至其他淋巴结，再然后可经胸导管入血继发血道转移。少数肿瘤细胞液可逆性转移或者越过相应的引流淋巴结发生跳跃式转移。
4.6淋巴道转移是恶性上皮肿瘤早期转移的主要形式，若能了解肿瘤淋巴道转移的机制，对于治疗恶性肿瘤有重大意义。但由于肿瘤转移本身的多变性、复杂性，
影响因素的多样性，以及研究手段的限制，目前尚没有明确的淋巴道转移相关基因的报道，尚未发现确切的可以控制恶性肿瘤转移药物。在小鼠腹水型肝癌淋巴道转移实验基础上做进一步研究，可以了解基因水平控制的肿瘤淋巴道转移，和淋巴道转移的机制，对研究开发抗肿瘤转移药物有重要的意义。
参考文献
[1] 凌茂英, 刘希凤, 关淑琴,等. Hca - F25 /L不同转移力细胞克隆的筛选及其特性[J]. 大连医学院学报, 1990,1: 1 - 7.
[2] 孙成荣, 唐建武, 孙明忠,等. 采用定量蛋白质组学技术筛选小鼠肝癌淋巴道转移相关蛋白[J]. 生物化学与生物物理进展, 2007, 34 (8) : 856 - 864.
[3] 陈桑, 凌茂英, 刘希风,等. 小鼠腹水型肝癌高、低转移克隆稳定性的研究[J]. 大连医学院学报, 1992, 14: 32- 37.
[4] 白洁, 王波, 侯力,等. 小鼠腹水型肝癌高淋巴道转移瘤株Hca - F的再克隆技术[J]. 大连医科大学学报,2003, 25 (1) : 65 - 66
[5]张宏颖，唐建武，朱秀婷，等小鼠腹水型肝癌淋巴道高转移细胞系HCa - P /L6细胞模型的建立及其药物敏感性的评价.大连医科大学学报,2008,30(8):297-304
原位移植法建立肝脏H22肝癌细胞移植瘤小鼠模型
World Journal of Cancer Research 世界肿瘤研究, 2015, 5, 15-20 Published Online January 2015 in Hans. https://www.360docs.net/doc/f413877672.html,/journal/wjcr https://www.360docs.net/doc/f413877672.html,/10.12677/wjcr.2015.51003 Orthotropic Transplantation to Establish H22 Hepatocellular Carcinoma Model in Mice Chen Han1,2, Hengxiao Wang1,2*, Zhaoxia Wang3 1Department of Immunity, Institute of Basic Medicine, Shandong Academy of Medical Sciences, Ji’nan 2School of Medicine and Life Sciences, University of Jinan-Shandong Academy of Medical Sciences, Ji’nan 3Department of Pathology, Institute of Basic Medicine, Shandong Academy of Medical Sciences, Ji’nan Email: *wanghengxiao@https://www.360docs.net/doc/f413877672.html, Received: Nov. 24th, 2014; revised: Dec. 22nd, 2014; accepted: Dec. 30th, 2014 Copyright ? 2015 by authors and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). https://www.360docs.net/doc/f413877672.html,/licenses/by/4.0/ Abstract Objective: To establish a liver orthotropic transplantation tumor model with H22 cells, for the further development of the related experimental study. Methods: A certain number of H22 cells were directly injected in the left lobe of the liver in C57BL/6 mice, establishing a transplanted tu-mor model of hepatocellular carcinoma in situ. Results: After 7 days of surgery, the liver surface appeared irregular size nodules, nodules increased with the prolongation of time increases, the late abdominal organs appeared invasion, adhesion, ascites was increased. Histopathological ex-amination of liver tumor tissues and adjacent tissues of cancer showed that liver orthotropic transplantation tumor formation rate was 100%, no spontaneous regression. Conclusions: Ortho-tropic injection of H22 cell established orthotropic transplantation tumor formation in the liver, and the tumor formation time was relatively short, tumor formation processes associated with organ metastasis and ascites. This model was reasonable to simulate the pathological and physio-logical body of liver cancer in human, and could satisfy the requirement of research on liver can-cer. Keywords Hepatocellular Carcinoma, Orthotropic Transplantation, Experimental Animal Models 原位移植法建立肝脏H22肝癌细胞 移植瘤小鼠模型 韩琛1,2，王恒孝1,2*，王朝霞3 *通讯作者。
肝癌小鼠造模实验方法
肝癌小鼠造模实验方法 (1)肿瘤细胞悬液的制备小鼠肿瘤细胞用小鼠腹腔培养，然后抽取腹水，是 取得大量肿瘤细胞最便捷的方法。具体操作如下：将肿瘤细胞株复苏后，接种于babl/c （昆明小鼠）腹腔，培养8-10天后，接种小鼠的腹腔内长出含肿瘤细胞的腹水，选择腹水饱满的小鼠，在超净台内于无菌条件下消毒小鼠腹部，用注射器抽取淡腹水为瘤源，放入无菌容器内，加入无菌生理盐水稀释瘤液，小心摇匀，并置冰水上保存。若用多只动物做瘤源时，则应混合腹水。(腹水应为淡黄色浓稠液体，若为深黄色或红色则应弃去不用。) (2)肿瘤细胞计数取少量腹水，放置于干试管内，用生理盐水稀释100倍，用 枪头吸取少许腹水，滴于载玻片上，推片，镜下观察细胞形态：细胞为圆形，胞浆均匀，透明，折光性好，分布均匀。并于镜下进行细胞分类计数，其中肿瘤细胞数应≥95％。 (3)肿瘤细胞接种腹水用无菌生理盐水调整细胞浓度为1*107mL ，在小鼠右侧腋下(右侧腋窝 皮下？)常规接种H22瘤液0．2mL ／只(含2*106个瘤细胞)（5*106）？。全程严格无菌操作， 40min 内完成。 (4)分组与给药昆明小鼠用上法造模，造模后再将腹水瘤小鼠按体重分层，随 机分为阳性对照组(CTX)、青蒿素各剂量组(150mg ／kg 、300mg ／kg)、青蒿琥酯P0组(60mg ／kg)、青蒿琥酯ip 组(60mg ／kg)、青蒿醇提物和青蒿水提物各剂量组 (1000mg ／kg 、4000mg ／kg)和模型对照组(Model)，每组各lO 只小鼠。造模24h 后，阳性对照组(CTX)20mg ／kg 和青蒿琥酯ip 组(60mg ／kg)，腹腔注射0．2mL ／只，每天1次，连续lOd ：其它组灌胃给药，灌服溶液0．4mL ／只，每天1次，连续lOd 。模型对照组仅予等量CMC-Na 溶液，连续lOd 。平均每只小鼠每天给等量鼠料，每周换垫料2次，每日换新鲜水1次。记录各小鼠死亡的时间。 其他问题： 检测药物对肿瘤的抑制作用，给药时间怎么确定？ 1、 造模后第二天给药 2、 肿瘤长出一定体积后在给药
精选-病例讨论-肝癌腹水
一月份病例讨论 护士长：肝癌是各种慢性肝病发展的晚期阶段，给患者带来极大的痛苦，同时也造成沉重的社会经济负担。做好肝腹水患者的护理，可以有效缓解患者的症状、减少痛苦，缩短住院时间，减少并发症的发生，提高患者的生活质量。今天组织大家一起讨论一下肿瘤晚期患者伴腹水的护理。下面请王越来汇报一下病例。 简要病史：27床，沈希增，患者，男，39 岁，因“原发性肝癌介入术后两月余”予 10 月 16 日收住入院。入院诊断是 1.原发性肝癌，2.肝硬化失代偿期。患者自诉有乙肝病史 10 余年，无家族史，无过敏史。实验室阳性指标： RBC： 2.76*10 ?12/L，HGB：84g/L，凝血酶原时间：21.3 秒，抗凝血酶Ⅲ：51 秒，D-二聚体：6.63ug/ml,AFP：〉1210ng/ml。患者去年 11 月因上腹部不适于当地医院就诊发现肝占位，行 CT 考虑原发性肝癌，AFP〉700ng/ml，诊断为原发性肝癌。今年 1 月、2 月于苏州明基医院行 TACE 术两次，术后反应轻。今年 3 月于上海查 MR 复查示肝右叶肝癌，门静脉右支受侵，无外科手术指征，于我科 2014-03-25、 05-04 行TACE 术 2 次， 6 月复查 MRI 肝右后叶及右前叶较大病灶内部坏死，周围区有活性肿瘤组织。考虑介入治疗有效，于 2014-06-09，07-09、08-06 行 TACE 术三次，术后恢复可，一月前患者出现右侧胸壁、右侧锁骨疼痛，至我院行全身骨扫描提示多发性骨转移，MRI 提示肝内病灶仍有增多，考虑患者肿瘤晚期，予行天晴依泰抑制骨转移。现患者仍感全身疼痛，为行进一步治疗，门诊拟“原发性肝癌
原代小鼠肝细胞制备
细胞培养室肝细胞原代培养标准操作规程 实验试剂 培养基：William’s E Medium(GiBCO 12551-032), 谷氨酰胺(GiBco 21051-024-100g)292mg/L，双抗（GiBco 15140-122 penicillin +10,000Units/mL, streptomycin +10,000μg /mL）5mL/500mL, 胰岛素(GiBCO 12585-014 4 mg/mL)8μg/mL, 地塞米松（中国药品生物制品检定所）5mg/L。 D-Hanks’液（CaCl2 0.55g/L, NaCl 8.0g/L, KCl 0.4g/L, KH2PO4 0.06g/L, Na2HPO4?7H2O 0.06g/L, NaHCO3 0.35g/L, 三蒸水溶解，NaHCO3调pH 7.2-7.4, 4℃保存） 0.05%胶原酶Ⅳ溶液(（Sigma C5138-1G） D-Hanks’液溶解, 0.22μm微孔滤膜过滤除菌, -20℃ 保存）) PBS预灌流溶液（NaCl 8.0g/L, KCl 0.2g/L, KH2PO40.2g/L, Na2HPO4?7H2O 1.56g/L, EDTA 0.1mM, 三蒸水溶解, NaHCO3调pH 7.2-7.4, 0.22μm微孔滤膜过滤除菌，4℃保存） 鼠尾胶原（GiBCO A10483-01 20mL/ 瓶）（0.05 mg/ mL）用0.02M 的醋酸稀释,临用现配） 0.02M 的醋酸：115μL的醋酸(大于99%)用水稀释至100mL 0.05 mg/ mL-200μL鼠尾胶原（5 mg/ mL）用0.02M的醋酸稀释至20 mL Overlay(0.25 mg/ mL的Matrigel（BD 356237）(用William’s E Medium稀释，视具体批号而定稀释倍数，临用现配） Hanks’液（CaCl2 0.14g/L, NaCl 8.0g/L, KCl 0.4g/L, KH2PO4 0.06g/L, MgCl2?6H2O 0.10g/L, MgSO4.7H2O 0.10g/L, Na2HPO4?7H2O 0.09g/L, NaHCO3 0.35g/L, D-葡萄糖 1.0 g/L，三蒸水溶解，NaHCO3调pH 7.2附近，4℃保存） 实验仪器 CO2 恒温培养箱（日本SANYO 公司）； Sigma高速离心机； IX-51 型荧光倒置显微镜（日本尼康公司）； DHL-A电脑恒流泵（上海青浦沪西仪器厂）； 液相-质谱联用分析系统（LC/MS/MS）由美国Thermo系列四元泵、在线脱气机、自动进样器、以及Thermo Finnigan LTQ线性离子阱质谱检测器，系统工作软件为XcaLibur（美国）； Sigma5310离心机； ZHWY-103B多振幅轨道式恒温培养振荡器（上海智城分析仪器制造有限公司）。 实验方法 实验准备
辨证论治联合手术及化疗对H22肝癌小鼠疗效的观察
上海中医药大学学报第26卷第4期2012年7月 辨证论治联合手术及化疗对H22肝癌小鼠疗效的观察 王艳明 1，2 方肇勤 1 张园园 1 潘志强 1 卢文丽 1 1．上海中医药大学基础医学院（上海201203） 2．河北省廊坊市妇幼保健中心（河北廊坊065000） 【摘要】目的：探索建立同病异证H22肝癌小鼠中药个体化辨证论治联合手术及化疗的综合治疗方案及初步评价其疗效。方法：采用H22肝癌细胞腋下实体瘤小鼠及小鼠标准化、计量化辨证方法，观察中药个体化辨证论治联合手术及化疗的综合治疗方案对小鼠带瘤生存时间、抑瘤率和证候等的综合疗效。结果：建立了中药个体化辨证论治联合手术及化疗方法，该方法在抑瘤率、术后早期生存率，以及改善小鼠免疫紊乱与衰退方面显示出一定的优势。结论：在实验室可以模拟临床，建立起肿瘤小鼠个体化辨证论治 联合手术及化疗方法， 为综合治疗方案的探索、优化和提高提供了方法学。【关键词】肝癌；小鼠；辨证论治；中西医结合；方法学【中图分类号】R285．5【文献标志码】A 【文章编号】1008-861X （2012）04-0087-05 ［基金项目］国家科技重大专项课题（2009ZX09502-018）［作者简介］王艳明，女，在读硕士生，主治医师，主要从事 中医学证和辨证论治的研究。［通讯作者］方肇勤，教授，博士生导师。E-mail ：zqfang@sh163．net 原发性肝癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，其 恶性程度高，发展迅速，病死率高，严重危害着患者的生命健康。当前，原发性肝癌治疗的首选是手术，当不具备手术指征时，常采用肝癌局部介入化疗和物理疗法，放疗也有采用。在我国，大多肝癌患者会 主动寻求中医药治疗， 因此，中西医结合治疗成为肝癌治疗的主要模式。中医药防治肝癌主要采取辨证论治的方法，针对肝癌邪毒、痰瘀、脾虚等主要病机，以及不同患者的特殊证候，予以清热解毒、行气活血、化痰软坚、健脾益气等综合治疗及个体化的辨证 论治 ［1-3］ 。项目组在前期的研究中发现肝癌小鼠与人类近似， 存在着证候的自然发生、兼夹和演变，是肝癌辨证论治研究的理想模式生物［4］ ，并逐步建立 起大鼠和小鼠标准化诊法和辨证方法［5-9］，尝试开 展了以中药复方为主的辨证论治［10-11］ ，取得了积极 的进展。并在以往的试验中利用基因芯片的检测发现同病异证的肝癌小鼠在神经-内分泌系统存在一 些重要激素的表达特征，具有各自的物质基础［12］ 。为了模拟临床实际，建立肝癌小鼠中西医结合治疗方法，并以此为基础，不断探索和优化中西医结合肝 癌防治方法、 揭示中西医结合防治肝癌的作用机制，我们在以往工作的基础上，进一步探索中药辨证论治联合手术及介入化疗对H22肝癌小鼠的治疗及 疗效评价， 报道如下。1材料与方法 1．1实验动物健康雄性昆明小鼠140只，体质量（25?1）g ，购自上海斯莱克实验动物有限公司，动 物生产许可证号为SCXK （沪）2008-0003，动物使用 许可证号为SYXK （沪）2009-0069。1．2药物 1．2．1中药方剂（1）基本方：半枝莲15g ，白花蛇舌草15g ，香附10g ，八月札10g ，郁金10g ，延胡 索10g ， 当归10g ，川芎10g ，桃仁10g ，法半夏10g ，陈皮10g ，神曲10g 。 （2）气虚方：半枝莲15g ，白花蛇舌草15g ，香附10g ，八月札10g ，郁金10g ，延胡索10g ，当归10g ，川 芎10g ， 桃仁10g ，法半夏10g ，陈皮10g ，神曲10g ，生晒参10g ，黄芪15g ，白术10g ，阿胶10g 。 （3）阳气虚方：半枝莲15g ，白花蛇舌草15g ，香附10g ，八月札10g ，郁金10g ，延胡索10g ，当归10g ，川芎10g ，桃仁10g ，法半夏10g ，陈皮10g ，神曲10g ，生晒参10g ，黄芪15g ，白术10g ，阿胶10g ，淫羊藿10g ，山茱萸10g ，杜仲10g 。 （4）气阴阳虚方：半枝莲15g ，白花蛇舌草15g ，香附10g ，八月札10g ，郁金10g ，延胡索10g ，当归10g ，川芎10g ，桃仁10g ，法半夏10g ，陈皮10g ，神 曲10g ， 生晒参10g ，黄芪15g ，白术10g ，淫羊藿10g ，山茱萸10g ，杜仲10g ，阿胶10g ，熟地黄20g ，炙鳖甲10g ，炙龟甲10g 。 中药制备：以上4方均按标准的中药水煎醇沉方法，浸膏分别浓缩至1g /ml 。 1．2．2局部介入用化疗液每0．2ml 含5-Fu · 78·
肝癌细胞系与正常细胞系中的组蛋白修饰差异分析
Hans Journal of Computational Biology 计算生物学, 2018, 8(3), 49-57 Published Online September 2018 in Hans. https://www.360docs.net/doc/f413877672.html,/journal/hjcb https://https://www.360docs.net/doc/f413877672.html,/10.12677/hjcb.2018.83007 The Difference Analysis of Histone Modifications in Cancer Cell Line HepG2 and Normal Cell Line Hepatocyte Yuxian Liu1, Qianzhong Li1,2* 1Laboratory of Theoretical Biophysics, School of Physical Science and Technology, Inner Mongolia University, Hohhot Inner Mongolia 2The State Key Laboratory of Reproductive Regulation and Breeding of Grassland Livestock, Inner Mongolia University, Hohhot Inner Mongolia Received: Aug. 31st, 2018; accepted: Sep. 13th, 2018; published: Sep. 20th, 2018 Abstract Liver cancer is a malignant tumor with high cancer morbidity and mortality in the world. More and more studies have found that the histone modifications (HMs) have an important impact on the occurrence of cancer. In order to understand the changes of HMs in liver cancer, we calculate the distribution patterns of eleven HMs in the promoter region for two kinds of cell lines, and analyze the correlation between HM and gene expression, and the correlation between HMs. The results show that there are two kinds of distribution patterns of HMs in promoter region, and the HMs values are generally higher in cancer cell line than in normal cell line. The results indicate that the Spearman correlation between H3K9me3 and gene expression is different in two kinds of cell lines, and the trends of distributions of HMs and correlation are consistent. By analyzing the HMs in highly and lowly expressed genes of two kinds of cell lines, it is found that the difference of HMs is remarkable in highly expressed genes. These results indicate that the analysis of changes for HMs is significant for the study of liver cancer. Keywords Liver Cancer, Histone Modifications, Gene Expression 肝癌细胞系与正常细胞系中的组蛋白修饰差异分析 刘育仙1，李前忠1,2* *通讯作者。
shRNA抑制CLIC1基因表达对小鼠肝癌细胞株Hca-F生物学行为的影响
shRNA抑制CLIC1基因表达对小鼠肝癌细胞株Hca-F生物学行为的影响
大连医科大学 博士学位论文 shRNA抑制CLIC1基因表达对小鼠肝癌细胞株Hca-F生物学行为 的景程 姓名：李荣宽 申请学位级别：博士 专业：病理与病理生理学 指导教师：唐建武 201006
shRNA抑制CLIC 1基因表达对小鼠肝癌 细胞株Hca．F生物学行为的影响 博士研究生：李荣宽指导教师： 唐建武教授专业 名称：病理学与病理生理学 摘要 背景：转移潜能是恶性肿瘤最重要的生物学特征之一，也是肿瘤患者死亡率高、预后差的主要原因。对于上皮来源的恶性肿瘤，淋巴道转 移是其早期转移的主要方式，但确切机制目前仍不清楚。原发性肝癌 (primary carcinoma of the liver)是最常见恶性肿瘤之一，包括肝细胞癌 (hepatocellular carcinoma，HCC)、肝内胆管上皮癌(intrahepatic cholangiocarcinoma，IHCC)、肝细胞及胆管上皮细胞混合癌三种细胞类 型，其中90％以上为肝细胞癌。全世界每年新发约62．6万例HCC患者， 其中的半数以上病例发生在我国。同时，它也是恶性程度最高、致死率 最高的肿瘤之一，位居全球恶性肿瘤死因第三位、我国恶性肿瘤死因第 二位。即便是经过根治性切除手术治疗，5年的复发转移率仍高达60％， 因此，揭示肝癌转移的分子机制及其关键调控环节，进而采取相应的干 预措施，将有助于减少、甚至避免病人术后发生复发转移，从而达到降 低死亡率的目的。 Hca．F和Hca．P是将小鼠肝癌细胞株H22在61 5小鼠体内反复接种和筛选后得到的一对来源于同一亲本细胞、但是淋巴道转移潜能显著 不同的小鼠肝癌腹水型细胞株。其中Hca．F具有高淋巴道转移潜能，接 种到6l 5小鼠体内后其淋巴结转移率超过70％，Hca．P是低转移潜能 的细胞株，其淋巴结转移率低于30％。通过对比研究二者的差异，可以 为我们揭示小鼠肝癌的淋巴道转移机制提供有益的参考。本课题组在前 期工作中已经应用不同的方法，对Hca．F和Hca．P这一对具有高低不通 淋巴道转移潜能的细胞株进行了一系列系统的研究。首先，利用抑制性 消减杂交技术(suppression substractive hybridization，SSH)及基因 芯片 (Genechip)高通量筛选(high throughput screen，HTS)技术得出了Hca．F 细胞和Hca．P细胞之间一系列差异表达基因，继而采用定量蛋白质组学技术建立了高低淋巴道 转移潜能小鼠肝癌细胞的荧光差异蛋白表达图
肝癌晚期打嗝怎么办
肝癌晚期打嗝怎么办 文章目录*一、肝癌晚期打嗝怎么办*二、肝癌晚期吃什么好*三、如何预防肝癌 肝癌晚期打嗝怎么办1、肝癌晚期打嗝怎么办 可以到医院检查一下,看看是肝癌侵犯膈肌导致的打嗝,还是普通的打嗝。也可以采用中医中医状态疗法。通过调节五脏六腑的功能状态,恢复人体阴阳平衡、脏腑平衡,使气血和调,达到人与自然、人体内环境的和谐调顺,从而铲除癌细胞的生存土壤,从根本上控制癌细胞的转移和扩散。 2、胃肝癌晚期症状有哪些 2.1、肝癌晚期会出现腹胀。肝癌晚期腹胀,很多是因为腹水,虽然腹水可以通过抽吸,以及灌注等方式控制、缓解,但是到肝癌晚期,腹水增长速度非常快,一次抽腹水量也是有限制的,所以病人会非常难受,吃不下东西,一方面也是受到腹胀的影响,一方面也是癌症晚期,直接影响食欲和精神状态。 2.2、肝癌晚期患者,往往会出现食欲下降。由于癌瘤导致的疼痛不适、情绪紧张抑郁,及胃肠道念珠菌病、便秘等关系,所以胃口不佳,另外常由于胃、食管下段或肝的肿瘤刺激,横膈膜导致时候呃逆现象,在精神、营养的摄入上的不足,加重了病情。此外还会出现恶心呕吐的情况,这可能是治疗引起的的副作用,也有可能是癌症侵犯消化、神经系统所导致。 2.3、肝区疼痛,一直伴随着肝癌的整个病程。肝癌晚期也不
例外。绝大多数中晚期肝癌患者,以肝区疼痛为常见症状,发生率超过50%。肝区疼痛,一般位于右肋部或剑突下,疼痛性质为间歇性、持续性隐痛。钝痛或刺痛,疼痛前一段时间内,患者可感到右上腹不适。疼痛可时轻时重,或短期自行缓解。疼痛产生的原因,主要是肿瘤迅速增大,压迫肝包膜,产生牵拉痛,也可因肿瘤的坏 死物,刺激肝包膜所致。 3、肝癌晚期能活多久 肝癌的治疗属于一个系统过程,存活时间主要取决于癌组织 的扩散范围、患者身体机能、自身心理素质等。另外,不同的治 疗方法患者的存活期也是不同的。对于肝癌晚期患者而言,体内 癌肿已经发生转移扩散,大部分专家给患者所估测的时间一般也 会在几个月左右,但仍有很多的患者坚持治疗,生存期得到了3-5年的延长。 对于肝癌晚期患者而言,找到延长生命的方法是患者的心愿。临床上,肝癌晚期的治疗方法有多种,但很多的方法存在一的的 弊病,因此在选择治疗方法时一定要谨慎,切勿因为治疗而治疗, 一定要根据自身实践情况选择合适治疗,这才是至关重要的。 肝癌晚期吃什么好1、维生素:维生素A、C、E、K等都有一 定的辅助抗肿瘤作用。维生素C主要存在于新鲜蔬菜、水果中。胡萝卜素进入人体后可转化为维生素A,所以肝癌病人者应多含 vc多的蔬菜和水果。
细胞生物学小鼠细胞培养实验报告
广州大学 综合设计性实验报告 学院生命科学学院 课程细胞生物学实验 实验项目细胞培养 实验题目小鼠肝细胞的原代培养 专业生物技术 年级、班别生技142 姓名徐嘉宽 学号 1414300030 任课教师陈鲲
细胞培养 ——小鼠细胞的原代培养 摘要目的探讨体外分离和培养小鼠肾、脑、心肌细胞的方法。方法采用脱臼法处死新生小鼠，结合酶消化法和组织块法对新生小鼠肾、脑、心肌细胞进行了体外分离、培养。（用眼科剪把新生小鼠心肌细胞组织剪成小于1mm3大小的植块，然后用胰蛋白酶消化5~10min，最后将心肌组织块接种于培养瓶中进行体外培养。脑和肾直接进行组织块培养。）结果比较成功地进行了原代肾、脑、心肌细胞培养，并进行了形态学观察。结论采用该方法能够实现对小鼠心肌、肾、脑细胞的体外原代培养，较好观察到心肌、脑、肾细胞的形态。 关键词原代培养小鼠细胞组织块法酶消化法 1前言 初步了解动物细胞原代培养的基本方法、原理和基本操作过程，初步掌握无菌操作方法。学习植块培养法、营养液的配置及酸碱度的调节。细胞培养是当前细胞生物学乃至整个生命科学研究与生物工程中最基本的实验技术。当前，细胞培养技术广泛应用于分子生物学、遗传学、免疫学、肿瘤学、细胞工程等领域，已发展成为一种重要的生物技术。了解动物细胞培养的技术的基本操作过程，观察体外培养细胞的生长特征，并对原代培养有一个基本概念。结合酶消化法和组织块法通过无菌操作培养新生小鼠细胞。 2实验原理 原代细胞培养是指直接从动物体内获取的细胞、组织或器官，经体外培养后，直到第一次传代为止。这种培养，首先用无菌操作的方法，从动物体内取出所需的组织（或器官），用植块培养法或酶解法，在人工培养下，使其不断地生长及繁殖。 细胞培养是一种操作繁琐而又要求十分严谨的实验技术。要是细胞能在体外长期生长，必须满足两个基本要求：一是供给细胞存活所必须的条件，如适量的水、无机盐、氨基酸、维生素、葡萄糖及其有关的生长因子、氧气、适宜的温度，注意外环境酸碱度与渗透压的调节。二是严格控制无菌条件。 3实验用品 3.1器材 解剖剪、镊1套；眼科剪7把、眼科镊6把；吸管直、弯头各7支，2 ml刻度吸管5支；吸管胶头：小18个、大6个；细胞培养瓶5个；青霉素瓶及瓶塞：6个（其中一个用于分装胰酶液）；培养皿(用于解剖取材)：大、小各1套。烧杯：5～10ml 2个、100 ml 1个。用于无菌操作：解剖镊1把，广口瓶大、小各1个（装消毒棉球），医用棉花、纱布，有盖白瓷盘1个、消毒盒3个、牛皮纸、棉绳。小培养皿(装盖玻片)1个。
落地生根水提物对H22肝癌小鼠免疫功能的影响分析
落地生根水提物对H22肝癌小鼠免疫功能的影响分析 发表时间：2019-12-12T12:48:00.970Z 来源：《医药前沿》2019年32期作者：杨志杰樊星花梁宇红[导读] 目的：探讨落地生根水提物对H22肝癌小鼠免疫功能的影响。 （广西医科大学第四附属医院暨柳州市工人医院药学部广西柳州 545005）【摘要】目的：探讨落地生根水提物对H22肝癌小鼠免疫功能的影响。方法：建立H22荷瘤小鼠模型，随机分为空白组、阳性组（5-FU）、模型组、水提物低剂量组（4g/kg生药量）、中剂量组（8g/kg生药量）及高剂量组（16g/kg生药量）共6组，每组10只。阳性组按20mg?kg-1腹腔注射5-FU，模型组、空白组灌服等体积生理盐水，连续给药15天。进行碳廓清试验，计算抑瘤率、脾脏指数、胸腺指数和肝脏指数。结果：落地生根水提物中、高剂量组可明显抑制H22实体瘤生长（P＜0.05），抑瘤率分别为65.68%和74.56%。中、高剂量组可显著增高碳廓清指数（P＜0.05）与脾脏指数（P＜0.05），仅中剂量组对胸腺指数有显著增高作用（P＜0.05），落地生根水提物对肝 脏指数无影响。结论：落地生根水提物对H22荷瘤小鼠的免疫系统有一定的保护作用，能调节巨噬细胞吞噬功能的作用，增强机体的免疫功能，提高抗肿瘤能力。 【关键词】落地生根水提物；H22；免疫功能；小鼠【中图分类号】R964 【文献标识码】B 【文章编号】2095-1752（2019）32-0206-03 落地生根Bryophyllum pinnatum (L.f.) Oken为景天科(Crassulaceae)落地生根属(BryophllurnSalisb)植物，在广西、广东、云南、福建和台湾等地区广泛分布，别名为花蝴蝶、倒吊莲、土三七、叶生根、番鬼牡丹、叶爆芽、天灯笼、枪刀草、厚面皮、著生药等，全草入药，性酸、寒[1]。除具有观赏价值外，还具有药用价值，可治创伤出血、疔疮、乳腺炎、跌打损伤吐血、热性胃痛、关节肿痛、急性中耳炎、皮肤溃疡等[2]。在国外，落地生根广泛分布于非洲、美洲热带以及印度和澳大利亚，作为传统药物用于腹泻、呕吐、镇痛、抗炎、抗病原微生物、利什曼病及抗变态反应等[3]。本实验就落地生根对H22肝癌小鼠免疫功能影响做研究，尝试对落地生根水提物抗肿瘤的作用进行初步探讨。 1.资料与方法 1.1 一般资料 1.1.1细胞株及动物小鼠H22肝癌细胞由广西医科大学药理学教研室提供，经本实验室传代保存。昆明种小鼠60只，体质量18～22g，雌雄不拘，由广西医科大学实验动物中心提供。试验动物使用许可证 SCXK2009-0002。 1.1.2药品与试剂落地生根采取于广西来宾市忻城县，经河池学院化学与生物工程学院邓晰朝副教授鉴定为鉴定景天科(Crassulaceae)落地生根属(BryophllurnSalisb)植物落地生根Bryophyllum pinnatum (L.f.) Oken。氟尿嘧啶注射液（5-FU），天津金耀药业有限公司，批号1504261。一得阁墨汁购于一得阁墨业有限责任公司。 1.2 仪器 多功能提取浓缩机组(上海顺仪实验设备有限公司)；分析天平(日本岛津公司)；DRAGON LAB移液器(20～200μL)( 大龙兴创实验仪器（北京）有限公司)；酶标仪（美国伯乐BIO-RAD公司）。 1.3 药材提取 取6100g落地生根干药材，加10倍量蒸馏水，回流提取3次，每次1小时，过滤，合并3次滤液，浓缩成浸膏，浸膏量为1246.8g，置于4℃冰箱，待用。 1.4 造模、分组及给药 取冻存的H22肝癌细胞，复苏为0.9%氯NaCL溶液混悬，小鼠腹腔注射，连续传两代。无菌条件下取H22肝癌小鼠腹水，稀释成含量为1×107?mL-1的细胞悬液后于小鼠右侧腋窝皮下接种，小鼠接种肿瘤细胞悬液后称体重，随机分为空白组、阳性组（5-FU）、模型组、水提物低剂量组（4g?kg-1生药量）、中剂量组（8g?kg-1生药量）及高剂量组（16g?kg-1生药量）共6组，每组10只。空白组为正常小组，阳性组按20mg?kg-1给予5-FU腹腔注射，模型组、空白组灌服等体积生理盐水。各组均于接种后24小时开始给药，每天1次，连续15天。 1.5 小鼠碳廓清实验 末次给药24小时后,尾静脉注射以生理盐水稀释4倍的印度墨汁,每10g体质量注射0.1mL，墨汁注入后立即计时，于注入墨汁后第2（t1）、10min（t2），分别从内眦静脉丛取血20μL，加入到2mL 0.1% Na2CO3溶液中，摇匀。以0.1% Na2CO3溶液作空白对照，用酶标仪在600nm波长处比色测定光密度值（OD）。将小鼠处死，取肝、脾，称质量，计算吞噬指数（a)。吞噬指数计算方法：K=（lgOD1-lgOD2)/(t2-t1).吞噬指数（a)=体质量×K1/3（肝质量+脾质量）。 1.6 瘤重、胸腺指数、脾脏指数、肝脏指数的测定 分别称取小鼠体重，脱颈椎处死小鼠，剥离肿瘤组织，取小鼠脾脏、胸腺和肝脏，精密称定，计算抑瘤率、脾脏指数、胸腺指数和肝脏指数：肿瘤抑制率（%）={1-（平均实验组瘤重/平均对照组瘤重）}×100%；胸腺指数=胸腺质量/体重；脾脏指数=脾脏质量/体重；肝脏指数=肝脏质量/体重。 1.7 统计学处理 采用SPSS22.0统计软件进行数据分析，所有数据均以-x±s表示，两组间差异比较采用t检验，P＜0.05表示差异具有统计学意义。 2.结果 2.1 抑瘤作用 研究结果显示，与模型组比较，落地生根水提物中、高剂量组可明显抑制小鼠H22实体瘤生长（P＜0.05)，抑瘤率分别为65.68%和74.56%，与5－氟尿嘧啶作用相当，见表1。 表1 落地生根水提物对小鼠瘤重及免疫脏器指数的影响
小鼠免疫力对接种人类肝癌细胞系9724生长的影
小鼠免疫力对接种人类肝癌细胞系9724生 长的影 作者：张志培，施新猷，李六金，刘雪松，江逊，彭磊，赵佐庆 【关键词】肝癌细胞 关键词: 肝癌细胞;接种;免疫缺陷小鼠;T细胞;细胞毒;流式细胞仪 摘要:目的探讨不同免疫力小鼠的免疫细胞对人类肝癌细胞系9724生长的影响及异种特异性细胞毒杀伤能力. 方法将培养后的人类肝癌细胞系接种到不同免疫力小鼠（免疫正常的BALB/c，B缺陷的CBA/N，T缺陷的BALB/c nude及T，B缺陷的C.B-17SICD小鼠）右后臀皮下，观察其生长;取实验和相应的正常鼠脾细胞进行细胞毒杀伤试验. 结果 BALB/c和CBA/N小鼠不成瘤;BALB/c nude和C.B-17SCID 小鼠100%成瘤;SCID免疫重建组用BALB/c外周淋巴细胞重建SCID （BALB/c-PBL-SCID）的不成瘤，用CBA/N外周淋巴细胞重建的SCID （CBA/N-PBL-SCID）成瘤，接种过瘤的BALB/c和CBA/N小鼠脾细胞对癌细胞有较强的细胞毒杀伤作用，对照组和nude，SCID小鼠无杀伤作用;SCID免疫重建有较小的杀伤作用. 结论 T细胞在异种瘤移植排斥中起主要的免疫杀伤作用，这种排斥是异种特异性的;肿瘤免疫需要综合性免疫作用.
Keywords:hepatocarcinoma cell;vaccination;immunodefi-cient mice;T lymphocytes;cytotoxicity;flow cytometry Abstract:AIM To explore the effect of immune cells in var-ious mice with different immune on growth of human hepato-carcinoma cells in these mice and xenospecific cytotoxicity of these mice to hepatocarcinoma cells.METHODS The hu-man hepatocarcinoma cells cultured were inoculated subcuta-neous into the posterior limbs in various mice with different immune（including normal immune mice-BALB/c，B lympho-cyte deficient mice-CBA/N，T lymphocyte deficient mice-BALB/c nude and T，B lymphocytes combined deficient mice-C.B-17SCID）and their growth in the mice.Were surveyed And the spleen cells were harvested from both experiment groups in5weeks after being inoculated and from control groups a to examine direct cytotoxicity to the hepatocarci-noma cells.RESULTS There were no carcinoma growth in BALB/c，CBA/N mice and immunoreconstructed SCID mice with BALB/c mice peripheral blood lymphocytes（BALB/c-PBL-SCID）but100%carcinoma growth in SICD，nude and immunoreconstructed SCID mice with CBA/N
肝癌晚期病人手脚浮肿还能活多久
肝脏是人体最为重要的器官，有着"将军之官"的美称。肝功能在许多方面均发挥着非常重要的作用，医学专家形象地喻为人体内的"巨型化工厂"，当肝癌到了晚期时，往往意味着病情加重，预后较差，致死率也较高，此时患者的生存期成为患者和家属非常关注的问题之一，尤其是在出现不明症状时，更是引起患者的担忧，害怕自己活不长了，如出现手脚浮肿的情况，那肝癌晚期病人手脚浮肿还能活多久呢？ 关于肝癌晚期病人手脚浮肿还能活多久这个问题，很难给出明确的答案，与患者的体质、病情的严重程度以及选择的治_疗方法有关。当患者出现手脚浮肿的情况时，应及时查明病因，并给予对症的治_疗，缓解症状，减轻患者痛苦。肝癌晚期患者手脚浮肿是由多方面的原因造成的，如肿瘤消耗以后导致患者营养不良、低蛋白血症，此时应加强营养，注意蛋白质的补充，必要时可以输注血浆或者人血白蛋白，也可以使用利尿剂，有助于缓解脚肿的情况。肿瘤转移后引发的脏器功能受损，如肝肾功能受损，也会引起手脚浮肿的情况，此时除了对患者进行养肝护肾的治_疗外，还应积极进行抗肿瘤的治_疗，控制病情发展，才能从根本上缓解患者症状。 对于肝癌晚期的治_疗，多数患者已经失去了手术的机会，通过放化疗可以抑杀机体内的癌细胞，控制病情，但也会产生一系列的副作用，损伤患者机体，导致患者免疫力下降，建议在放化疗的过程中配合中医药的治_疗，有助于减轻化疗引起的毒副作用，增强患者免疫功能，使治_疗能够顺利完成，并提高机体对放化疗的敏感性，提高整体的治_疗_效果。对于年老体弱、广泛转移，失去西医治_疗机会的患者，采用中医保守治_疗，可以控制病情发展，抑制扩散转移，还能全面调理患者机体，补充元气，提高患者的免疫力和抵抗力，缓解临床症状，提高生存质量，延长生存时间。 中医治_疗是我国传承发展了几千年的艺术瑰宝，与阴阳、五行相结合，在治_疗时注重患者全身的机制平衡，应及时将其纳入治_疗方案中。袁希福祖辈中，出过很多有名的中医，如曾多次奉召进京，为皇亲国戚医病，因其医术高超、医德高尚，被同治、光绪皇帝先后颁发圣旨，诰封为“奉直大夫”的袁积德。由于出身中医世家，耳濡目染让袁希福对中医产生了浓厚的兴趣，因而12岁时就在祖父指导下开始熟读医书，并先后至北京中医药大学及中_国中医研究院深造，师从多位名家，为从事中医中_药治_疗恶性肿瘤打下坚实的理论基础。 从医近40年来，袁希福接诊各类肿瘤患者数万名，其中不少都是复发患者，或病属晚期，甚至是被判“死刑”的末期患者。尽管无法挽救每一位患者的生命，但他尽力帮助患者减轻痛苦，延长生命，甚至有些患者实现了临床康复或长期的带瘤生存。据了解，袁希福先后多次受邀参加国内外中医药学术会议，如2009年12月受邀赴澳大利亚参加“第六届世界中医药大会”;2010年3月受邀到美国旧金山参加“国际中医药研讨会”;2017年5月受邀赴德国参加第48届世界中医药大会;2018年6月22日至6月28日，袁希福受邀参加了“一带一路”--第三届加中传统医药国际论坛”，并被授予“一带一路”中医药国际传播杰出贡献奖。 部分参考案例： 案例1：王敬贺(化名)，男，肝癌，江苏人 求医经历：2014年年底，王敬贺老是感觉右腹部有胀痛、刺痛感，且劳累后疼痛更加严重。去医院检查结果显示：肝癌。为了能让老人接受更好的治_疗，2015年1月家人带着老人到上海某医院求诊，并做了肝癌切除手术，术后三次复查，前两次检查便已发现小淋巴结，可医院建议继续观察。2015年4月21日，第三次复查时，CT显示：肝门区及腹膜后淋巴结转移。 由于眼见着老人出现小淋巴结，到最后发展成腹膜后淋巴结转移。这让家人对西医的治_疗建议产生了怀疑，于是他拒绝了放疗建议，到郑州希福中医肿瘤医院求诊。 治_疗方案：2015年5月1日取了30剂中_药，吃中_药一周，王敬贺就感觉浑身冒火、
原代细胞培养：原代肝细胞
【嘉美生物】肝是生物转化和蛋白质合成的主要器官，也是药物毒性作用发挥的主要场所。因此许多的体外测试都选用肝细胞来研究药物间的相互作用和其他一些生化过程。 嘉美生物用于培养原代细胞的组织采集于各大医院（包括协和医院、301医院、北三医院等），采集根据美国IRB 和HIPAA批准的方案进行。这些原代细胞均来自新鲜组织，并采用公司专利的技术来优化目的细胞生长条件，降低杂细胞（如脂肪细胞、纤维细胞等）的污染。分离的细胞经过短暂培养、传代，然后迅速冻存。这些保持分化状态的细胞可以用于评估体外药物模型系统和调节特定基因的遗传功能。 嘉美生物原代肝细胞产品均经过严格的QA/QC检测，可以直接用于药物优化和筛选、基因克隆、表达图谱分析以及各种分子生物学和药物学实验的研究。 凭借着先进的技术设备和资深的专业经验，嘉美生物能为您提供高品质的原代细胞产品和特殊的定制服务： 1、各种新鲜原代肝细胞 嘉美生物除提供多种人、小鼠、大鼠、猴等新鲜肝细胞产品外，嘉美生物还可以为您提供特定动物、特定组织、特定年龄的新鲜肝细胞定制服务。 2、各种原代细胞提取物 嘉美生物除提供的人、小鼠、大鼠、猴等四大类的肝微粒体、肝S9、CYP450酶和其他亚细胞提取物外，嘉美生物还可以为您提供专业的原代细胞提取物定制服务。 嘉美生物可以同时提供高质量的原代细胞产品和专业的个性化定制服务，为您的研究提供最新鲜优质的实验材料，提供其他原代细胞相关专业服务（原代肝细胞靶药分析服务、原代细胞靶药优化服务和原代细胞药物筛选等）。嘉美生物能完美整合各类原代细胞类服务，是原代细胞分离，原代细胞提供，原代细胞实验课题服务中的佼佼者。