刺槐未成熟合子胚的体细胞胚胎发生和植株再生
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《植物组织培养》试题及答案
试卷编号NO：高等函授教育《植物组织培养》试题学号：姓名：一名词解释：（10*2分=20分）1、植物细胞组织培养2、细胞全能性3、脱分化4、外植体5、试管苗驯化6、间接不定芽发生7、双极性8、微体嫁接9、人工种子10、体细胞无性系变异二填空：（30*1分=30分）1、目前植物组织培养应用最广泛的方面是和。
2、由脱分化的细胞再分化出完整植株有两种途径，一种叫做，另一种叫做。
3、培养用具的常用灭菌方法有、、。
4、某些生长调节物质及抗生素、酶类物质遇热不稳定，对其灭菌时不能进行，而要进行。
5、一般来说，黑暗条件下有利于的增殖，而往往需要一定的光照。
6、植物离体授粉技术通常包括、、三个方面。
7、一般液体培养的继代时间较短，继代一次；而固体培养继代时间可以长些，继代一次。
8、外植体器官发生的三种途径包括、、。
9、从再生植株倍性来看，小孢子培养通常产生植株，胚培养通常产生植株，通常产生三倍体植株。
10、脱毒苗鉴定与检测的主要方法有、、、。
11、在生长素中，对于许多作物花粉的启动、分裂、形成愈伤组织和胚状体起着决定性作用，但是对却有抑制作用。
12、用平板培养法培养单细胞或原生质体时，常用来衡量细胞培养效果。
13、用药剂处理是诱导染色体加倍的传统方法。
三计算题（1*10分=10分）某培养基的配方是MS＋BA 2.0mg/L＋NAA 0.5mg/L＋2.5%蔗糖＋0.7％琼脂粉。
MS母液的浓度分别是：大量元素２０倍，微量元素500倍，铁盐100倍，有机物５０倍；BA母液浓度1.0 mg/ml ，NAA母液浓度0.1mg/ml。
要配制400ml 该培养基，需要吸取各种母液各多少ml？分别称取蔗糖、琼脂粉各多少克？（要求写出计算步骤）四简答题（5*5分=25分）1、造成组织培养过程中发生污染的原因有哪些？如何有效控制污染？2、简述外植体消毒的一般步骤。
3、胚培养在科学研究及生产实践中有哪些应用？4、结合花粉培养，简述看护培养法。
秦艽体细胞胚胎发生及植株再生的研究
ＷＥ ｉｘａ Ｑ ｎ ｌ ｇ Ｉ － ｉ Ｉ －ｉ Ｌ Ｙａ ｎ
（ｐ ｃａ Ｃｏ ｓＬ ｂ ｒｔｒ ｏ ｅｒ ｔ ｉ ｓ ｔｔ， ａ ｓ ｃ ｄ ｍ ｆ Ｓ ｅｉ ｒｐ ａｏａ ｙ ｆ ｅ ｅ ａ Ｉ ｔｕｅ Ｇ ｎｕＡ ａ ｅ ｙｏ ｌ ｏ Ｂ Ｍａ ｒ ｎ ｉ ｌ
Ｋｅ ｗｏ ｄ ｙ ｒ ｓ：Ｇｅ ｔ ｎ ｃｏ ｈ ｌ ａｌ ｃ ｌ ｓｃ ｌ ｒ； ｌｎ ｒｇ ｎ ｒｔ ｎ ｎｉ ａｍａ ｒｐ ｙｌ Ｐ ； ａ ｕ ｕｔ ｅ ｐａ ｔ ｅ ｅ ｅａｉ ａ ａ ｌ ｌ ｕ ｏ
秦 艽 （ ｅ ｔ ｎ ａｒ ｈｌ ａ１ 为 龙 胆科 龙 胆 立体 细胞 再 生 系 ，研究 各 种激 素 对秦 艽 体 细胞 分 化 Ｇ ｎｉ ａｍ ｃｏ ｙｌ Ｐ ｌ） ａ ｐ ａ ．
ｔ ａ ｉｅ ｅ ｘ ｌ ｎ ｓ ａ ｄ ｐ ａ ｔｇ ｏ ｈ ｒ ｇ ａｉ ｎ ａ ｅ ｔ ａ ｉ ｅｅ ｔｅ ｅ ｔ ｎ ｓ ｍａｉ ｍ ｒ ｏ ｅ ｅ ｉ， ｈ ｔｄ ｆｒ ｎｔｅ ｐ ａ ｔ ｎ ｌ ｎ ｒ ｗｔ ｅ ｕｌｔｏ ｇ ｎ ｓ ｈ ｄ ｄ ｆ ｒ ｎ ｆ ｃ ｓｏ ｏ ｔｃ ｅ ｂ ｙ ｇ ｎ ｓｓ ａ ｈｅ ｂ ｓ ｄｉ ｍ ｏ ｉ ｄｕ ｅ ｓ ｍａ ｉ ｍｂ ｏ ｅ ｓｓ ｏ ｎ ｉ ｎ ｃ ｏ ｈｙｌ ｌ ｌＣｏｙ ｅ ｏ Ｓ ＭＳ ｎｄ ｔ ｅ ｔｍｅ ｕ ｔ ｎ ｃ ｏ ｔｃ ｅ ｒ ｇ ｎｅ ｉ ｆＧｅ ｔａ ａ ｍａ ｒ ｐ ｌａ Ｐａ ｔｌ ｄ ｎ Ｗａ ｙ
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针叶树体细胞胚胎发生研究进展
问题 。
团 的 维持 和 增 殖 ； 细 胞 胚 的 成 熟 ； 细 胞 胚 的 萌 体 体
发 和 植 株再 生 。
１ 针 叶树体 细胞 胚 胎发 生研 究 概 况 １７ ９ ６年 ． ｕｚｎ和 Ｃ ａｕ Ｄｒ ａ ｈ ｌｐ第 一 次 报 道 了斑 克 松 的类胚 结 构 。Ｄ ｒａ ｕｚｎ于 １ ８ ９ ０年 又在 花旗 松 和 白云杉
取 得 了可喜 的进 展 。据 不 完 全 统 计 ， 目前 为 止 ， 到 国
内外 已从 冷 杉 属 （ ｂ ｓ 、 叶 松 属 （ Ａｉ ）落 ｅ
） 云杉 属 、
两种 方式 ， 直接 体 细 胞 胚 胎 发 生 和 间 接 体 细 胞 胚 即 胎发 生 』 ｃｕｈ认 为 ， 接 体 细 胞 胚 胎 发 生形 成 。Ｓｈｃ 直 的再 生 植 株 具 有 更 强 的 遗 传 稳 定 性 Ｊ 。从 已经 体 胚 培 养成 功 的针 叶 树 种 看 ， 管 针 叶 树 通 过 体 细胞 尽 胚 胎 发 生 实现 植 株 再 生 的 过 程 比较 复 杂 ， 同树 种 不 间体 细胞 胚 植 株 再 生 频 率 差 异 很 大 ， 同一 树 种 内 且 不 同 基 因 型 间 的胚 胎 发 生 能 力 也 存 在 很 大 差 异 ， 但
的研 究 ， 并根 据处 于 不 同时期 的体 细胞胚 所 具有 不 同
在 我 国 ， 映红 和郭 仲 琛从青 杆的未 成熟 合子 胚 李 培养 中获得 了体 细胞 胚 胎 的 再 生 植 株 Ｊ 黄健 秋 和 。 卫 志 明从 马 尾松 和 云 南松 的 成熟 合 子胚 诱 导体 细 胞 胚胎 发 生获 得 成功 Ｊ杨 金玲 等研 究 了光 、 Ｂ 蔗 糖 ， Ａ Ａ、
态 效 益 。本 文 就针 叶树 体 细 胞 胚 胎 发 生 研 究 领 域 的
团 的 维持 和 增 殖 ； 细 胞 胚 的 成 熟 ； 细 胞 胚 的 萌 体 体
发 和 植 株再 生 。
１ 针 叶树体 细胞 胚 胎发 生研 究 概 况 １７ ９ ６年 ． ｕｚｎ和 Ｃ ａｕ Ｄｒ ａ ｈ ｌｐ第 一 次 报 道 了斑 克 松 的类胚 结 构 。Ｄ ｒａ ｕｚｎ于 １ ８ ９ ０年 又在 花旗 松 和 白云杉
取 得 了可喜 的进 展 。据 不 完 全 统 计 ， 目前 为 止 ， 到 国
内外 已从 冷 杉 属 （ ｂ ｓ 、 叶 松 属 （ Ａｉ ）落 ｅ
） 云杉 属 、
两种 方式 ， 直接 体 细 胞 胚 胎 发 生 和 间 接 体 细 胞 胚 即 胎发 生 』 ｃｕｈ认 为 ， 接 体 细 胞 胚 胎 发 生形 成 。Ｓｈｃ 直 的再 生 植 株 具 有 更 强 的 遗 传 稳 定 性 Ｊ 。从 已经 体 胚 培 养成 功 的针 叶 树 种 看 ， 管 针 叶 树 通 过 体 细胞 尽 胚 胎 发 生 实现 植 株 再 生 的 过 程 比较 复 杂 ， 同树 种 不 间体 细胞 胚 植 株 再 生 频 率 差 异 很 大 ， 同一 树 种 内 且 不 同 基 因 型 间 的胚 胎 发 生 能 力 也 存 在 很 大 差 异 ， 但
的研 究 ， 并根 据处 于 不 同时期 的体 细胞胚 所 具有 不 同
在 我 国 ， 映红 和郭 仲 琛从青 杆的未 成熟 合子 胚 李 培养 中获得 了体 细胞 胚 胎 的 再 生 植 株 Ｊ 黄健 秋 和 。 卫 志 明从 马 尾松 和 云 南松 的 成熟 合 子胚 诱 导体 细 胞 胚胎 发 生获 得 成功 Ｊ杨 金玲 等研 究 了光 、 Ｂ 蔗 糖 ， Ａ Ａ、
态 效 益 。本 文 就针 叶树 体 细 胞 胚 胎 发 生 研 究 领 域 的
细胞名词解释
细胞名词解释1.愈伤组织：原意是指植物体的局部受创伤刺激后，在其伤⼝表⾯新⽣的⼀团薄壁细胞。
在组织培养中是指在⼈⼯培养基上由已经分化的外植体的细胞重新分裂⽣长⽽形成的⼀团⽆特定形状、⽆序⽣长的薄壁细胞。
在⼀定条件下离体状态的植物组织中已经分化并停⽌⽣长的细胞重新分裂⽣长所形成的⽆组织结构的细胞团。
2.外植体：指植物组织培养中作为培养材料的离体组织块离体器官或离体细胞。
3.胚状体：由外植体或愈伤组织产⽣的与正常受精卵发育成的胚相类似的胚胎状结构。
据来源分为体细胞胚与⽣殖细胞胚。
4.极性：⾼等植物均具⼀主轴，各器官沿此主轴有顺序的进⾏⽣长分化。
主轴的⾸尾两端在⽣理形态上都有着明显差异，通常⾸段⽣芽尾端长根（形态学上端下端）这种现象叫极性。
5.植株再⽣：指通过组织培养技术将植物的细胞、组织、器官等培养成完整植株的过程。
6.形态发⽣（形态建成）：指⽣物个体发育或再⽣过程中⽣物体及其器官的形态结构的形成过程。
7.试管苗：指在⽆菌离体条件下的⼈⼯培养基上对植物细胞、组织或器官进⾏培养所获得的再⽣植株。
8.玻璃苗：指外表呈玻璃状，幼茎、叶⽚呈现半透明⽔渍状态的畸形试管植物。
9.体细胞⽆性系：指由同⼀个外植体反复进⾏继代培养后得到的⼀系列后代。
在细胞培养中，由单细胞形成的后代叫但细胞⽆性系。
10.培养基：⽤于满⾜植物正常发育所需各种营养物质的总和。
11.初代培养：指从植物体上分离外植体进⾏的第⼀次培养。
12.继代培养：将初代培养的培养物（愈伤组织、芽等）重新切割转移到新的培养基上继续扩⼤培养的过程。
13.固体培养：指加⼊琼脂等固化剂使培养基呈固体状态所进⾏的培养。
14.液体培养：指不加Agar等固化剂使培养基呈液体状态所进⾏的培养。
U11、细胞⼯程：按照⼀定的设计⽅案，通过在细胞、亚细胞或组织⽔平上进⾏实验操作，获得重构的细胞、组织、器官以及个体，创造优良品种和产品的综合性⽣物⼯程。
2、摇床：常⽤来进⾏细胞悬浮培养，可根据震荡⽅式分为⽔平往复式和回旋式两种，震荡速度因培养材料和培养⽬的的不同⽽不同，常⽤的震荡速度为100r/min.3、培养瓶：⼀般的植物组织和细胞培养常⽤玻璃三⾓瓶、试管、各种⼤⼩的⼴⼝玻璃瓶时，有时甚⾄⽜奶瓶和罐头瓶也都可以利⽤，特别是在进⾏快速繁殖时更常⽤造价较低的培养器⽫。
新陆早32号、33号的体细胞胚胎发生和植株再生比较研究
ｆ 新疆 农 垦 科 学院 棉 花 研 究 所 。 石河 子 ８ ２ ０ ） ３ ０ ０
摘 要： 以新 疆 主 栽 品种 新 陆 早 ３ ２号 、 ３号 和 对 照 Ｙ ， 研 究 材 料 ， 过 不 同 浓度 的激 素组 合 成 功诱 导获 得 了 ３ Ｚ 为 通 体 细胞 胚 ． 进 一 步发 育成 苗。 究发 现 ， 并 研 所用 的 ｌ ２种 激 素 组合 均 能有 效 诱 导 愈伤 组 织 虽 然 ＩＡ＋ Ｔ 组 合早 ３ ． ３号 的 快速 兮 化 ， 在 增 殖 生长 过 程 中体 细胞 胚 容 易褐 化 、 亡 ； ２４Ｄ ＋ＫＴ组 合 但 死 在 ， 一
中， ． ｍｇ・ 一 ，一 十０ １ ０１ Ｌ ２４Ｄ ． ｍｇ・ ＫＴ诱 导 新 陆 早 ３ Ｌ ３号 的 分 化速 度 较 快 ；新 陆 早 ３ ２号 在 高 比例 ２４Ｄ／ ，一 ＫＴ激 素 组 合 （ ． ｍｇ Ｌ ，一 ＋０２ｍｇ Ｌ。 ０ １ － ～２４Ｄ ． － ＫＴ和 Ｏ２ｍｇ・ －２４Ｄ 十０５ｍｇ・ －ＫＴ） 进 下 分 化 较 快 ； 陆 早 ３ ． Ｌ ，一 ， Ｌ 促 新 ３号 的
ｖ ｒ ０ Ｘｉｌ ａ ２ａ ｄＸｉｌ ａ ３ Ｇｏ ｓ ｐｕ ｈｒｕｕ Ｌ） ａ ｓｆ ｍ ｎｕ ｏ３ ｎ ｎｕ ｏ３ （ ｓ ｙ ｉｍ ｉ ｔｍ ． ｒ ｚ ｚ ｓ
ＬＩ Ｌｉ Ｗ ＡＮＧ ｕａ Ｗ ＡＮＧ — ｎ ， Ｕ ， Ｊ ｎ， Ｘｕ ｗｅ ｇ ＺＨＯＵ ａ —ｅ ｇ， Ｘｉ ｏ ｆ ｎ ＫＯＮＧ ａ — ｕ ，ＹＵ Ｘｉｎ ｈ ｉ Ｙｕ
ｅ ｔ ｉ ｎ ｅ ｔ ｔ ｎｏ Ｔ ａ ｄ２４ Ｄ ｉ ｍｅ ｉｍ （ ． ｍｇ Ｌ ２ 一 ＋ ． ｍｇ Ｌ ｒ ． ｍｇ Ｌ ，一 ０５ｍｇ Ｌ Ｔ ． ｄ ｈｈｇ ｃ ｃ ｎｒ ｉ ｆ ｎ ，一 ｄ ｕ ０ １ ・ － ， Ｄ ０２ ｗｉ ｈ ｏ ａｏ Ｋ ｎ ４ ・－ ＫＴ ｏ ２ ‘ － ４Ｄ＋ ． ０ ２ ’－ ） Ｋ
摘 要： 以新 疆 主 栽 品种 新 陆 早 ３ ２号 、 ３号 和 对 照 Ｙ ， 研 究 材 料 ， 过 不 同 浓度 的激 素组 合 成 功诱 导获 得 了 ３ Ｚ 为 通 体 细胞 胚 ． 进 一 步发 育成 苗。 究发 现 ， 并 研 所用 的 ｌ ２种 激 素 组合 均 能有 效 诱 导 愈伤 组 织 虽 然 ＩＡ＋ Ｔ 组 合早 ３ ． ３号 的 快速 兮 化 ， 在 增 殖 生长 过 程 中体 细胞 胚 容 易褐 化 、 亡 ； ２４Ｄ ＋ＫＴ组 合 但 死 在 ， 一
中， ． ｍｇ・ 一 ，一 十０ １ ０１ Ｌ ２４Ｄ ． ｍｇ・ ＫＴ诱 导 新 陆 早 ３ Ｌ ３号 的 分 化速 度 较 快 ；新 陆 早 ３ ２号 在 高 比例 ２４Ｄ／ ，一 ＫＴ激 素 组 合 （ ． ｍｇ Ｌ ，一 ＋０２ｍｇ Ｌ。 ０ １ － ～２４Ｄ ． － ＫＴ和 Ｏ２ｍｇ・ －２４Ｄ 十０５ｍｇ・ －ＫＴ） 进 下 分 化 较 快 ； 陆 早 ３ ． Ｌ ，一 ， Ｌ 促 新 ３号 的
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体细胞胚发生
植物物种和品种基因型影响 愈伤组织的分化
• 程林梅等（2001）的研究表明，利用不同 基因型大豆品种的下胚轴作外植体进行组培时， 培养基对愈伤组织的影响不明显；细胞分裂素 （KT）和NAA的配比浓度对其愈伤组织的分 化影响显著；不同基因型大豆植株再生作用差 异明显；外植体取材时间和取材部位对再生植 株的形成也具有较大的影响，再生能力最强的 取材部位时从子叶节到下胚轴6mm区段,当下 胚轴长到2~3cm时取材最佳。
2 氮源 除生长素外，培养基中氮源的形态也会影响离 体条件下的胚胎发生。只有当培养基中含有一定量 的还原态氮时，才能出现胚胎发生过程。 在以KNO3为唯一氮源的培养基上建立起来的 愈伤组织，去掉生长素后不能形成胚。然而，若在 55mmol/LKNO3的培养基中加入少量的 (5mmol/L)NH4Cl形态的氮，胚胎发生过程就会出 现。
不同浓度的激素对烟草愈伤组织的影响
愈伤分化
器官分化的植物激素控制理论
• 大量的实验结果表明：
大多数植物组织或器官的再生作用符合器 官分化的植物激素控制理论。
即：生长素与细胞分裂素的比例小时则产 生苗，比例大时则生根，而两种激素的比例适中 时，则产生无结构的愈伤组织。
器官发生途径
外植体 脱分化 愈伤组织 再分化
• 1.4.1.2位置效应
1.4.2 器官分化信息传递
1.4.2.1 胞外信号分子
• 胞外通讯信号分子又称第一信使(first messenger)。在植物细胞外的通讯信号分子，， • 如植物激素主要通过维管束系统在细胞与器官间 进行调节。它在植株的某些发育阶段，于特， • 部位发生作用。植物激素信号由位于膜或其它部 位的受体所接收，进一步直接或间接地影响： • 因表达。当植物激素以直接的形式影响基因表达 时，就会产生在转录、翻译等水平上的不同， • 应，从而控制酶的合成，影响代谢变化，最终产 生某些生理反应。
不同凝固剂对陆地棉体细胞胚胎发生和植株再生的影响
胞 培 养 中的 褐 化 问 题 ， 但 因 水 化 现 象 严 重 而 影 响胚 性愈 伤 组 织增 殖 和 体 细 胞 胚 状 体 发 生 ，其 效 果 不 如 Ｐ ｙ ｈ— ｔ ｅ 因此 ， 陆地 棉 体 细 胞 培 养 过 程 中 的 胚 性 愈 伤 组 织诱 导 、 细 胞 胚 状 体发 生 和 值 株 再 生 过 程 中 ， 用 ａ ｌ ｇ 在 体 宜
棉 花 学 报
Ｃｏｔｎ Ｓ ｉｎ ｅ ２ ０， ２ １ ：－ ｔ ｃｅ ｃ ０１ ２ （ ） ３ ９ ｏ
不同凝 固剂对 陆地 棉体 细胞胚 胎 发 生和 植株 再 生的影 响
张 巧 ， 汪静 儿 ， 林 君 ， 燕树 峰 ， 吴大鹏 ， 秦 利 ， 陈进 红 ， 彩霞 ， 洪 祝水 金
ｐ ｉｃ ｔ ｎ ｔｅｓ ｍａｉ ｅ ｒ ｏ ｅ ｅｉ ａ ｄｐａ ｔ ｅ ｅ ｅａｉｎｏ ｌｎ ｏ ｏ Ｇｏ ｓｐ ｕ ｈｒｕｕ Ｌ） ｅｍｐａ ｍｓＣｏ ｅ ｌ ａｉ ，ｈ ｏ ｔ ｍｂｙ ｇ ｎ ｓ ｎ ｌｎ ｇ ｎ ｒｔ ｆ ｐ ａ ｄｃ Ｕ ｎ（ ｓｙ ｉｍ ｉ ｔｍ ．ｇ ｒ ｌｓ ， ｋ ｒ １ ｉ ｆ ｏ ｃ ｓ ｒ ｏ ｕ ｓ ３ ２
Ａｂ ｔ ｃ： ｅ ｅ ｅ ｔ ｏ ｔ ｅｔ ｒ ｅｄ ｆｅ ｅ ｔ ｅ ｌ ｇ ａ ｅ ｔ， ｇ ｒ ｇ ｌｉ ｎ ｈ ｔ ｇ ｌ ｏ ａｌ ｓｉ ｄ ｃｎ ， ｍｂ ｙ ｇ ｎ ｃｃ ｌ ｓａ ｓｒ ｔ Ｔｈ ｆ ｃｓ ｆ ｈ ｅ ｉ ｒｎ ｌ ｎ ｇ ｎ ｓ ａ ａ ， ｅ ｒ ｅ ａ ｄ Ｐ ｙ ａ ｅ ， ｎ ｃ ｌ ｕ ｉ ｇ ｅ ｒ ｏ ｅ ｉ ａ ｌ ｍ— ａ ｈ ｇ ｉ ｔ ｕ ｎ ｕ
（ 江大 学 农 业 与 生 物技 术学 院农 学 系 ， 州 ３０ ２ ） 浙 杭 １０ ９
百合体细胞胚胎发生和植株再生
- 1
选用 百合 ( L i li um spp. ) OT 系 ( OT H y br ids Lily ) 杂交 品种 黄天 霸 ( Manissa ) 幼嫩 花蕾的 子 房、 花柱、 花药、 花丝、 花瓣作为外植体 ( 表 1) , 建立 无菌培养 , 研究外植体对胚性愈伤组织诱导的影响 , 选用花丝诱导的幼嫩愈伤组织作为诱导胚性愈伤组 织的材料研究体细胞胚胎发生。 1. 2 方 法 1. 2. 1 不同部位外植体的愈伤组织诱导 将经过 自来水流水冲洗的百合幼嫩花蕾浸泡在饱和洗洁精 溶液中 20 min, 流水冲洗干净, 在超净工作 台上用 75% ( V / V ) 酒精消毒 30 s, 再用 无菌水冲 洗 4 次。 接种时, 除去花蕾外层花瓣, 用剪刀和镊子把花冠切 开, 分别取出 子房、 花柱、 花药、 花丝及内部 幼嫩花 瓣, 切成 0. 5 cm 长的小段, 接种于预备试验筛选的 适宜培养基 M S+ 0. 2 m g L NAA + 0. 2 m g L- 1 6 BA, 蔗 糖和琼脂 粉含量分 别为 30 与 5 g L- 1 ( 下文同) 。试验采用单因素随机区组设计。每 处理接种 30~ 90 瓶 , 子房与花柱外植体以每 10 瓶 为一次重复, 其他外植体以 30 瓶为一次重复 , 每 50 mL 三角瓶 接 种一 个 外植 体 材料 , 在 ( 25 2) , 70% ~ 80% 的相对空气湿度下培养 ( 下文同 ) 。20 d 后记录外植体愈伤组织产生情况, 计算分析出愈率、 污染率。 出愈率( % ) = ( 产生愈伤组织的外植体数 / 未发
- 1
N A A+ 0. 2 mg L
- 1
L - 1 6 BA; 激素 诱导体 细胞胚 胎 L1
发生的影响效应为 2, 4 D> KT > 6 BA, 最佳培养基配方为 M S+ 1. 0 mg 6 BA+ 1. 0 mg L - 1 IBA 。 文献 标志码 : A
选用 百合 ( L i li um spp. ) OT 系 ( OT H y br ids Lily ) 杂交 品种 黄天 霸 ( Manissa ) 幼嫩 花蕾的 子 房、 花柱、 花药、 花丝、 花瓣作为外植体 ( 表 1) , 建立 无菌培养 , 研究外植体对胚性愈伤组织诱导的影响 , 选用花丝诱导的幼嫩愈伤组织作为诱导胚性愈伤组 织的材料研究体细胞胚胎发生。 1. 2 方 法 1. 2. 1 不同部位外植体的愈伤组织诱导 将经过 自来水流水冲洗的百合幼嫩花蕾浸泡在饱和洗洁精 溶液中 20 min, 流水冲洗干净, 在超净工作 台上用 75% ( V / V ) 酒精消毒 30 s, 再用 无菌水冲 洗 4 次。 接种时, 除去花蕾外层花瓣, 用剪刀和镊子把花冠切 开, 分别取出 子房、 花柱、 花药、 花丝及内部 幼嫩花 瓣, 切成 0. 5 cm 长的小段, 接种于预备试验筛选的 适宜培养基 M S+ 0. 2 m g L NAA + 0. 2 m g L- 1 6 BA, 蔗 糖和琼脂 粉含量分 别为 30 与 5 g L- 1 ( 下文同) 。试验采用单因素随机区组设计。每 处理接种 30~ 90 瓶 , 子房与花柱外植体以每 10 瓶 为一次重复, 其他外植体以 30 瓶为一次重复 , 每 50 mL 三角瓶 接 种一 个 外植 体 材料 , 在 ( 25 2) , 70% ~ 80% 的相对空气湿度下培养 ( 下文同 ) 。20 d 后记录外植体愈伤组织产生情况, 计算分析出愈率、 污染率。 出愈率( % ) = ( 产生愈伤组织的外植体数 / 未发
- 1
N A A+ 0. 2 mg L
- 1
L - 1 6 BA; 激素 诱导体 细胞胚 胎 L1
发生的影响效应为 2, 4 D> KT > 6 BA, 最佳培养基配方为 M S+ 1. 0 mg 6 BA+ 1. 0 mg L - 1 IBA 。 文献 标志码 : A
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（ 京林业大学生物科学与技术学院 北 林 木 育 种 国家 工 程 实 验 室 林木花卉遗传育种教育部重点实验室 北 京 １０ ８ ） ０ ０ ３
摘
要 ： 以 刺槐 不 同 胚 龄 的 未 成 熟 合 子 胚 为外 植 体 ， 用 混 合 正 交 试 验 设 计 ， 究 幼 胚 胚 龄 和 不 同 外 源 激 素 种 类 采 研
关 键 词 ： 刺 槐 ；未 成 熟 胚 ； 性 愈 伤 组 织 ； 细 胞 胚 ； 株 再 生 胚 体 植
中 图 分 类 号 ：Ｓ １ ． ６ ７ ８ ４ 文 献 标 识 码 ： Ａ 文 章 编 号 ：０ １—７ ８ ２ １ Ｏ１—０ ６ １０ ４ ８（ ０ ２） ０ ０—１ ０
Ｓ ｍ ａ ｉ ｏ ｔｃ Ｅｍ ｂ ｙ ｇ ｎｅ ｉ ｎｄ Ｐｌ ｎ ｇ ｎｅ ａ ｉ ｎ ｆ ｏ ｍ ｍ ａ ｕ ｅ Ｚｙ ｏ ｉ ｒ ｏ ｅ ｓｓａ ａ ｔ Ｒｅ ｅ ｒ ｔｏ ｒ ｍ Ｉ ｔ ｒ ｇ ｔｃ
佳 培 养 基 ， 愈 率 最 高 为 ９ ． ２ ± ． ２ ；ＭＳ＋Ｎ Ａ ． ・ 出 ５４ ％ ００％ Ａ ０ ５ ｍｇ Ｌ～ ＋Ｂ ０ ５ ｍ ・ ‘ ＋谷 氨 酰 胺 ２ ０ ｍ ・ ～ ＋水 解 Ａ ． ｇ Ｌ 。 ５ ｇ Ｌ 酪 蛋 白 ５ ０ｍｇ Ｌ 是 体 细 胞 胚 诱 导 和 分 化 的最 佳 培养 基 ， 接 体 细胞 胚 发 生 率 最 高 为 ９ ． ０ ±０ １ ％ ， 过 愈 伤 ０ ・ 直 ２４％ ．２ 通
及 质 量 浓 度 对 刺 槐 胚 性 愈 伤 组 织 的 诱 导 和 体 细 胞 胚 分化 、 发 的影 响 。结 果 表 明 ： 花 后 ８周 （ ５天 左 右 ） 胚 性 萌 开 ５ 是
愈 伤 组 织 和 体 胚 诱 导 的 最佳 外 植 体 取 材 时 期 ；ＭＳ＋ ， Ｄ５ ０ｍ ・ ＋Ｂ ． ・ 是 诱 导 胚 性 愈 伤 组 织 的 最 ２４ ． ｇ Ｌ Ａ０ ５ｍｇＬ
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第 ４ ８卷 第 １ 期
２０ １２年 １ 月
林
业
ＳＣＩ ＥＮＴＩ Ａ
ＳＩ ＶＡＥ Ｌ
Ｓ ＮＩ Ｉ ＣＡＥ
Ｊ ｎ．， ａ ２ ０ １２
刺 槐 未 成 熟 合 子胚 的体 细胞 胚 胎 发 生 和植 株再 生
习 洋 胡 瑞 阳 王 欢 孙 鹏 袁存 权 李 允 菲 戴 丽 李 云
组 织 诱 导 体 细胞 胚 发 生 的 频 率 最 高 为 ９ ． ３ ± ．９ 。一 旦 形 成 球 形 胚 ， 培 养 物 转 接 到 不 含 任 何 生 长 调 节 剂 ０７ ％ ０４％ 将
的 Ｍ Ｓ培 养 基 上 ， 细 胞 胚 经 成 熟 萌 发 可 进 一 步 形 成 完 整 小 植 株 。 体
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摘
要 ： 以 刺槐 不 同 胚 龄 的 未 成 熟 合 子 胚 为外 植 体 ， 用 混 合 正 交 试 验 设 计 ， 究 幼 胚 胚 龄 和 不 同 外 源 激 素 种 类 采 研
关 键 词 ： 刺 槐 ；未 成 熟 胚 ； 性 愈 伤 组 织 ； 细 胞 胚 ； 株 再 生 胚 体 植
中 图 分 类 号 ：Ｓ １ ． ６ ７ ８ ４ 文 献 标 识 码 ： Ａ 文 章 编 号 ：０ １—７ ８ ２ １ Ｏ１—０ ６ １０ ４ ８（ ０ ２） ０ ０—１ ０
Ｓ ｍ ａ ｉ ｏ ｔｃ Ｅｍ ｂ ｙ ｇ ｎｅ ｉ ｎｄ Ｐｌ ｎ ｇ ｎｅ ａ ｉ ｎ ｆ ｏ ｍ ｍ ａ ｕ ｅ Ｚｙ ｏ ｉ ｒ ｏ ｅ ｓｓａ ａ ｔ Ｒｅ ｅ ｒ ｔｏ ｒ ｍ Ｉ ｔ ｒ ｇ ｔｃ
佳 培 养 基 ， 愈 率 最 高 为 ９ ． ２ ± ． ２ ；ＭＳ＋Ｎ Ａ ． ・ 出 ５４ ％ ００％ Ａ ０ ５ ｍｇ Ｌ～ ＋Ｂ ０ ５ ｍ ・ ‘ ＋谷 氨 酰 胺 ２ ０ ｍ ・ ～ ＋水 解 Ａ ． ｇ Ｌ 。 ５ ｇ Ｌ 酪 蛋 白 ５ ０ｍｇ Ｌ 是 体 细 胞 胚 诱 导 和 分 化 的最 佳 培养 基 ， 接 体 细胞 胚 发 生 率 最 高 为 ９ ． ０ ±０ １ ％ ， 过 愈 伤 ０ ・ 直 ２４％ ．２ 通
及 质 量 浓 度 对 刺 槐 胚 性 愈 伤 组 织 的 诱 导 和 体 细 胞 胚 分化 、 发 的影 响 。结 果 表 明 ： 花 后 ８周 （ ５天 左 右 ） 胚 性 萌 开 ５ 是
愈 伤 组 织 和 体 胚 诱 导 的 最佳 外 植 体 取 材 时 期 ；ＭＳ＋ ， Ｄ５ ０ｍ ・ ＋Ｂ ． ・ 是 诱 导 胚 性 愈 伤 组 织 的 最 ２４ ． ｇ Ｌ Ａ０ ５ｍｇＬ
ｚ ｇ ｔｃ ｅ ｒ ｏ ａ ｅ，ａ ｌ ａ ｈ ｉ ｄ ａ ｄ ｃ ｎ ｅ ｔａ ｉ ｎ ｏ ｌ ｎ ｒ ｗｔ ｅ ｕ ａ ｏ ｓ ｉ ｕ ｔ ｒ ｄ ａ ｏ ａ ｌ ｓａ ｄ ｓ ｍａ ｉ ｙ ｏ ｉ ｍｂ ｙ ｇ ｓｗｅ ｌ ｓｔ ｅ ｋ ｎ ｎ ｏ ｃ ｎ ｒ ｔｏ ｆｐ ａ ｔｇ ｏ ｈ ｒ ｇ ｌ ｔ ｒ ｎ ｃ ｌ ｅ ｍｅ ｉ ｎ ｃ ｌｕ ｎ ｏ ｔｃ ｕ
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第 ４ ８卷 第 １ 期
２０ １２年 １ 月
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ＳＣＩ ＥＮＴＩ Ａ
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刺 槐 未 成 熟 合 子胚 的体 细胞 胚 胎 发 生 和植 株再 生
习 洋 胡 瑞 阳 王 欢 孙 鹏 袁存 权 李 允 菲 戴 丽 李 云
组 织 诱 导 体 细胞 胚 发 生 的 频 率 最 高 为 ９ ． ３ ± ．９ 。一 旦 形 成 球 形 胚 ， 培 养 物 转 接 到 不 含 任 何 生 长 调 节 剂 ０７ ％ ０４％ 将
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