单纯疱疹病毒2型感染与非淋菌性尿道炎的病因关系

单纯疱疹病毒2型感染与非淋菌性尿道炎的病因关系【摘要】目的探讨非淋菌性尿道炎(NGU)患者单纯疱疹病毒2型(HSV2)感染的流行病学状况及实验室诊断方法。

方法实验分为NGU患者组和健康对照组。

免疫快速测定法(C C 快速法)检测沙眼衣原体(CT)，培养法检测解脲支原体(UU),血清酶联免疫吸附法(ELISA法)检测血清HSV2抗体，荧光定量聚合酶链反应(FQ PCR)检测尿道分泌物HSV2。

结果NGU 患者组的CT、UU感染率分别为23.27%和30.91%。

NGU患者组和健康对照组的HSV2 IgG、IgM、HSV2DNA阳性率分别为38.18%/18.03%、10.91%/1.64%、19.63%/4.92%，两组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。

NGU患者组无CT、UU、阴道毛滴虫、念珠菌感染的HSV2阳性率为33.33%，与对照组相比差异亦有统计学意义(P<0.05)。

结论HSV2是NGU的重要病原体之一。

FQ PCR法作为HSV感染的实验室诊断技术具有很好的临床应用价值。

【关键词】非淋菌性尿道炎；单纯疱疹病毒2型；血清学酶联免疫吸附实验；荧光定量聚合酶链反应非淋菌性尿道炎(nongonococcal urethritis, NGU)为最常见的性传播疾病之一，在欧美国家的发病率已经超过淋病。

近年来，NGU发病率在我国逐年上升，占报告病例总数的第3位，仅次于淋病和尖锐湿疣。

其病原体复杂多样，沙眼衣原体(chlamydia trachomatis, CT)和解脲支原体(ureaplasm urealtyticum, UU)是其中最主要的病原体[1 3]，但临床上相当部分的患者无明显病因。

有研究报道单纯疱疹病毒(herpes simplex virus, HSV)与NGU发病有一定关系[4]。

为明确HSV感染与NGU发病的病因学关系，我们进行了NGU人群中HSV2感染的流行状况的研究，现报告如下。

1 材料与方法1.1 临床资料275例NGU患者(NGU患者组)来源于我院皮肤科、性病专科及妇科门诊，其中男165例，女110例，均按卫生部制定的NGU的诊断标准选择病例[3]。

临床症状为尿痛、尿频、分泌物多、尿道口红、尿道痒、尿道不适、排尿不尽感等，每例至少有以上3种症状。

患者年龄20-63岁，平均34.9岁。

已婚192例，未婚83例，有婚外性行为者78例。

平均NGU病程6.5月。

对既往有生殖器疱疹病史及本次就诊时有可疑疱疹皮损者予以剔除。

对照组61例，为健康体检人员，男24例，女37例，年龄27-44岁，平均36.1岁，CT、UU、阴道毛滴虫、念珠菌检测均为阴性。

1.2 标本采集和处理1.2.1 血清标本NGU患者组及对照组均抽取静脉血2mL，离心后留取，-80℃保存。

1.2.2 分泌物标本按常规方法用无菌一次性棉拭子自男性尿道2-3cm处和女性宫颈管内1-2cm处取材，拭子停留10s旋转取出。

NGU患者组留取3份，分别接种UU培养基及用于CT和HSV2检测；正常对照组取1份，用于HSV2检测。

余置-4℃保存。

1.3 方法1.3.1 HSV2血清抗体检测血清样本以ELISA血清试剂盒(海南华美生化公司产品)检测HSV2血清抗体，具体方法参照试剂盒使用说明。

1.3.2 分泌物CT、UU等检测采用英国“立明”衣原体抗原免疫快速测定法(C C快速法)检测CT；以支原体培养鉴定试剂盒(广东珠海市朗峰生物技术有限公司产品)检测UU；阴道毛滴虫及念珠菌镜检由性病门诊实验室完成。

1.3.3 FQ PCR检测HSV2DNA PE Gene Amp 5700 型PCR仪为美国Perkin Elemer 公司产品。

所用的HSV2荧光定量PCR诊断试剂盒购自中山医科大学达安基因诊断中心(卫生部生物试剂定点生产单位)，试剂盒包括DNA提取液、HSV PCR反应管、阳性定量参考品(107基因拷贝/mL)。

标本处理后，加入PCR反应管，放入仪器样品槽。

设置循环条件：93℃2min预变性，93℃45s-55℃60s先做10个循环后，再以93℃30s-55℃45s做30个循环，保存文件，运行。

反应结束后保存检测数据，分析结果。

2 结果2.1 NGU的病因学构成NGU患者组中CT感染率为23.27%(64/275),UU感染率为30.91%(85/275)，阴道毛滴虫感染率为0.73%(2/275)，念珠菌感染率为1.09%(3/275)，HSV2感染率为19.63%(54/275)；两种以上病原体感染率为20.46%(56/275)；原因不明者为24.73%(68/275)。

2.2 两组HSV2 IgG、IgM、HSV2DNA阳性率的比较NGU患者组中HSV2IgG阳性105例，占38.18%，正常对照组HSV2IgG阳性11例，占18.03%，两者比较差异有统计学意义(χ2=8.966, P<0.005)；NGU患者组中HSV2IgM阳性30例，占10.91%，正常对照组HSV2IgM阳性1例，占1.64%，两者比较差异有统计学意义(χ2=4.075, P<0.05)；NGU患者组中HSV2DNA阳性54例，占19.63%，正常对照组HSV2DNA阳性3例，占4.92%，两者比较差异有统计学意义(χ2=6.669, P<0.01)；NGU患者组中102例无CT、UU、阴道毛滴虫、念珠菌感染，占37.09%。

这102例患者中HSV2DNA阳性34例，占33.33%，正常对照组HSV2DNA阳性3例，占4.92%，两者比较有显著性差异(χ2=17.565, P<0.001)。

3 讨论NGU是由多种病原体(除淋球菌外)感染而引起的尿道炎的总称,其中CT是最常见的病原体。

NGU中30%-50%的病例由CT引起，10%-20%的病例由UU引起，约1%-17%的病例由阴道毛滴虫引起，还有小于10%的病例与HSV、白色念珠菌、细菌性阴道病有关[5]。

由于检测技术、病例选择、病例数量及地理分布的差异，各研究报告存在较大差异。

本研究结果显示，以CT、UU感染阳性率较高，其次为HSV2，与Chen等[6]的研究结果相近。

其中有24.73%患者查不出上述病原体，因缺乏实验条件，未做鉴定。

有报道认为大肠杆菌、表皮葡萄球菌及腐生葡萄球菌等可能成为NGU的致病菌。

本研究中是否也存在这种情况，有待于进一步证实。

文献报道[7]，ELISA法是目前主要用于检测HSV抗原或抗体的非培养方法，在没有生殖器疱疹临床损害而无法检测HSV抗原时，测定血清抗体具有它的优越性。

IgM抗体一般出现较早，为一过性，提示患者正在感染期；IgG抗体是在感染1周后出现，而且可持续很长时间，IgG阳性代表HSV感染或曾经感染过HSV。

Beauman[8]认为，在HSV2抗体阳性的患者中，20%有典型的皮损，20%的患者可能无症状或皮损位于宫颈等隐蔽部位而不能发现，另外60%的患者有皮损但由于不典型，表现为阴唇、阴茎及肛周的裂隙和局限性红斑等而不被注意。

本研究发现NGU患者组血清HSV2 IgG、IgM阳性率分别为38.18%和10.91%，与谭志建等[9]的报道相近，提示存在HSV2感染；而正常对照组HSV2IgG、IgM阳性率分别为18.03%和1.64%，两组相比差异有统计学意义，表明应用ELISA法检测HSV2抗体有一定意义。

近年来，HSV引起NGU的情况越来越受到重视，但这方面的研究报道还很少。

血清抗体检测只能表明HSV曾经感染，不能证实活动性排毒，亦不能做出肯定的病因学关系判断[10]。

细胞学检查是最经典的直接诊断方法，从病变部位取材，通过组织病理和电镜观察病毒颗粒，但受取材部位和病变时机的影响，敏感性和特异性不高。

病毒培养法被认为是检测HSV的金标准，但操作时间过长，设备和技术条件要求高，临床上不易实施。

随着分子生物技术的发展，可用型特异性DNA探针进行核酸分子杂交用于检测HSV DNA,与病毒培养法相比,PCR检测HSV不受皮疹形态的影响，以其简便、快速、高敏感性和高特异性的优点引起人们重视。

其高度的敏感性就在于它不仅能检测HSV，而且能检测HSV DNA，对HSV 感染有确诊意义，有利于HSV感染的早期诊断和及时治疗。

本研究采用的FQ PCR法因减少了人为干扰，避免交叉污染，其特异性和敏感性均较常规PCR法高[11]。

结果显示，NGU患者组阳性率为19.63%,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)，102例无CT、UU、阴道毛滴虫、念珠菌感染的NGU患者HSV2DNA阳性34例，占33.33%，与对照组比较差异亦有统计学意义(P<0.001)。

表明此种感染的病原体以CT、UU、HSV2为主，NGU与HSV2感染的关系不容忽视。

HSV2检测阳性中有18例曾因尿道炎(宫颈炎)长期使用抗生素未愈，有25例曾多次测UU、CT均为阴性但自觉症状明显，因此，对NGU患者尤其是有症状而UU、CT均为阴性者或持久不愈者有必要进行HSV2感染的检测，以明确诊断。

患者组两种以上病原体混合感染率为20.46%,提示患者中高比例的混合感染可能是导致临床持久不愈的原因之一，对UU、CT及其他病原体阳性的患者也应排除合并HSV2感染的可能。

重视对NGU患者进行HSV2感染的检测，对于控制NGU 发病率的增长具有重大意义。

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