碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液(0.05molL,pH9.6)
ELISA试剂及溶液配制及实验步骤
ELISA试剂及溶液配制①包被液：0。
05mol/L碳酸盐缓冲液（pH9.6)0。
75g碳酸钠,1。
46g碳酸氢钠，加去离子水定容至500ml。
②0。
02mol/L磷酸盐缓冲液(pH7。
4）0。
2g磷酸二氢钾，2。
90g磷酸氢二钠，8g氯化钠，加去离子水定容到1000ml。
③抗体稀释液：0。
02mol/L PBS(pH7.4)+0。
2％BSA0。
2gBSA加配好的0.02mol/L磷酸盐缓冲液溶解定量至100g。
④封闭液：0。
05mol/L碳酸盐缓冲液（pH9.6）+2.0％BSA2.0gBSA加配好的0。
05mol/L碳酸盐缓冲液溶解定量至100g。
⑤洗涤液：0。
02mol/L PBS(pH7.4）+0.05％Tween—20将50ulTween—20溶入100ml0。
02mol/L磷酸盐缓冲液中，震荡混匀。
⑥显色液：TMB-过氧化氢尿素溶液A液（3，3’，5，5’—四甲基联苯胺，TMB)：称取TMB20mg溶于10ml无水乙醇中，完全溶解后，加双蒸水至100ml。
B液(0。
1mol/L柠檬酸-0.2mol/L磷酸氢二钠缓冲液，pH5.0—5.4)：称取Na2HPO4·12H2O14。
34g，柠檬酸1。
87g溶于180ml双蒸水，加0.75％过氧化氢尿素1.28ml，定容至200ml，调pH至5。
0—5.4。
将A液和B液按1：l混合后即成TMB—过氧化氢尿素应用液。
⑦终止液：2mol/L H2SO4溶液10ml98%浓硫酸加入60ml双蒸水中，定容至100ml，室温保存。
⑧酶标二抗：HRP标记的羊抗兔 IgG，应用时用抗体稀释液稀释3000倍。
2。
2.6 抗血清的分离采集血液后，去掉针头,缓慢注入已经灭菌的三角烧瓶中,待凝固后用灭菌滴管将血液沿边缘剥离,室温放置1小时,再放入4℃冰箱过夜(不能冰冻,否则产生溶血)，使血清充分析出。
第二天取出后以4℃3000r/min离心30min，取上清，分装后-20℃保存备用。
ELISA试剂及溶液配制及实验步骤
ELISA试剂及溶液配造之阳早格格创做①包被液：0.05mol/L碳酸盐缓冲液(pH9.6)0.75g碳酸钠,1.46g碳酸氢钠,加来离子火定容至500ml.②0.02mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.4)0.2g磷酸二氢钾，2.90g磷酸氢二钠，8g氯化钠，加来离子火定容到1000ml.③抗体密释液：0.02mol/L PBS(pH7.4)+0.2%BSA0.2gBSA加配佳的0.02mol/L磷酸盐缓冲液溶解定量至100g.④启关液：0.05mol/L碳酸盐缓冲液(pH9.6)+2.0%BSA2.0gBSA加配佳的0.05mol/L碳酸盐缓冲液溶解定量至100g.⑤洗涤液：0.02mol/L PBS(pH7.4)+0.05%Tween-20将50ulTween-20溶进100ml0.02mol/L磷酸盐缓冲液中，震荡混匀.⑥隐色液：TMB-过氧化氢尿素溶液A液(3，3’，5，5’-四甲基联苯胺，TMB):称与TMB20mg溶于10ml无火乙醇中，实足溶解后，加单蒸火至100ml.B液(0.1mol/L柠檬酸-0.2mol/L磷酸氢二钠缓冲液，pH5.0-5.4):称与Na2HPO4·12H2O14.34g，柠檬酸1.87g溶于180ml单蒸火，加0.75%过氧化氢尿素1.28ml，定容至200ml，调pH至5.0-5.4.将A液战B液按1：l混同后即成TMB-过氧化氢尿素应用液.⑦终止液：2mol/L H2SO4溶液10ml98%浓硫酸加进60ml单蒸火中，定容至100ml，室温保存.⑧酶标二抗：HRP标记表记标帜的羊抗兔 IgG，应用时用抗体密释液密释3000倍.2.2.6 抗血浑的分散支集血液后，来掉针头，缓缓注进已经灭菌的三角烧瓶中，待凝固后用灭菌滴管将血液沿边沿剥离，室温搁置1小时，再搁进4℃冰箱过夜(没有克没有及冰冻，可则爆收溶血)，使血浑充分解出.第二天与出后以4℃3000r/min离心30min，与上浑，分拆后-20℃保存备用.间交ELISA法检测家兔抗血浑效价(1)抗本包被用包被液(0.05mol/L的碳酸盐缓冲液，pH9.6)把抗本密释为0.01mg/ml，将密释佳的抗本液于每个酶标板孔中加进100μl.把酶标板置进干盒内，于4℃包被过夜.(2)洗板弃来包被液，用洗涤液加谦所有酶标孔，用纱布战卫死纸包住扣搞.1次，终次将火扣搞.(3)启关正在酶联板上每孔加进250μl启关液(pH9.6，0.05mol/L碳酸盐缓冲液含2.0%BSA)，将酶联板置于干盒内，4℃孵育过夜.也可37℃孵育2h.(4)弃来启关液，洗涤1次共上.(5)加一抗(家兔抗血浑)将免疫小鼠抗血浑10μl 加到990μl 的抗体密释液中造成1:100的抗血浑.(于1.5ml的EP管中支配).给酶标板上A止的1号孔加100μl的1:100的血浑.给酶标板上A止的2到12孔各加进抗体密释液100 μl，而后给A组的第二孔加进100μl 1:100的抗血浑，吹吸十次后吸与100μl的血浑加到第三孔，再吹吸十次与100μl加到第四孔，依次加到第12孔，终尾从第十二孔中吸出100μl放弃.那样每孔均为100μl，通过11次二倍密释，血浑密释度为1:204800.B、C止共上支配.给D止的前二个孔只加进100μl的抗体密释液搞为空黑对于照，3-4孔加进100μl密释100倍的阳性血，5-6孔没有加抗本，只用启关液启关，每孔加进100μl密释100倍的抗血浑做对于照.加完后将酶连板搁正在干盒内37℃孵育1h.(6)洗涤共上.(7)加酶标二抗各孔加进密释倍数为1:3000的酶标二抗（羊抗兔）100μl，37℃干盒内孵育1h.(8)洗涤共上(9)隐色每孔各加A，B液50μl后将酶连板搁进干盒内躲光3min安排，当阳性对于照孔隐蓝绿色时终止.终止时每孔加进50μl的2mol/L浓硫酸[32-34].(10)检测终止后赶快用酶标仪测定酶连板各孔A405战A450的值.。
碳酸氢钠碳酸钠缓冲液的配置
碳酸氢钠碳酸钠缓冲液的配置
碳酸氢钠碳酸钠缓冲液是一种常用的缓冲液，可以用于调节溶液的pH 值。
它的配置方法如下：
1. 准备所需试剂：碳酸氢钠（NaHCO3）、碳酸钠（Na2CO3）、去离子水。
2. 根据所需pH值和缓冲液体积，计算所需的碳酸氢钠和碳酸钠的摩尔浓度。
碳酸氢钠和碳酸钠的摩尔浓度比应为1:1，可以根据以下公式计算：
C1 = 10^(pKa - pH)
C2 = 10^(pH - pKa)
其中，C1为碳酸氢钠的摩尔浓度，C2为碳酸钠的摩尔浓度，pKa为碳酸氢钠和碳酸钠的共同pKa值，pH为所需的缓冲液pH值。
3. 根据计算得到的摩尔浓度和缓冲液体积，计算所需的碳酸氢钠和碳酸钠的质量。
可以使用以下公式：
m1 = C1 * V * M1
m2 = C2 * V * M2
其中，m1为碳酸氢钠的质量，m2为碳酸钠的质量，V为缓冲液体积，M1和M2分别为碳酸氢钠和碳酸钠的摩尔质量。
4. 将计算得到的碳酸氢钠和碳酸钠分别加入到去离子水中，搅拌至完
全溶解。
5. 根据需要，可以使用酸或碱调节缓冲液的pH值。
需要注意的是，碳酸氢钠碳酸钠缓冲液的pH值受温度影响较大，因
此在配置时应注意控制温度。
此外，碳酸氢钠碳酸钠缓冲液的pH值
范围较窄，一般适用于pH值在8.0-10.0之间的实验。
如果需要在其
他pH值范围内进行实验，可以选择其他适合的缓冲液。
碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液(0.05molL,pH9.6)
北京雷根生物技术有限公司 碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液(0.05mol/L,pH9.6) 简介：平衡盐溶液(Balanced Salt Solution ，BSS)与细胞生长状态下的pH 值、渗透压等环境状态一致，具有维持渗透压、控制酸碱平衡、供给细胞生存代谢所必需的能量和无机盐成分等作用，可满足体外实验中细胞生存并维持一定的代谢的基本需要。
Leagene 碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液(0.05mol/L,pH9.6)主要由碳酸钠、碳酸氢钠、防腐剂等组成，pH 值为9.6，主要用于ELISA 实验中包被96孔板的孔，与ELISA 包被缓冲液(1×)极其相似。
该试剂为1×工作液，直接使用，仅用于科研领域，不用于临床诊断或治疗 组成：操作步骤(仅供参考)：1、 在实验前一天，用BSA 或其他包被用物质溶解于碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液(0.05mol/L,pH9.6)，包被96孔板。
2、 注意不要包被用作空白对照的孔，用塑料膜包裹平板，4℃温育过夜。
注意事项：1、 注意密闭保存，避免挥发。
一旦开封，保质期就会大大缩短。
2、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：12个月有效。
亦可短期内室温存储。
相关：编号 名称 IT0243 Storage 碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液(0.05mol/L,pH9.6) 500ml 4℃ 使用说明书 1份编号 名称 CC0005 磷酸缓冲盐溶液(1×PBS,无钙镁) CS0001 ACK 红细胞裂解液(ACK Lysis Buffer) DF0111中性福尔马林固定液(10%) DM0007瑞氏-姬姆萨复合染色液 TC0699葡植物总糖和还原糖检测试剂盒(硝基水杨酸法) TC1167 尿素(Urea)检测试剂盒(脲酶波氏比色法)。
常用缓冲溶液的配制方法
常用缓冲溶液的配制方法1.氯化钾-盐酸缓冲液(0・2mol/L)邻苯二甲酸氢钾：分子量=204.23,0.2mol/L邻苯二甲酸氢钾溶液含40.85g/L 4.磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液pH 0.2mol/LNa2HPO4(mL)0.1mol/L柠椽酸(mL)pH0.2mol/LNa2HPO4(mL)0.1mol/L柠椽酸(mL)2.2 0.40 10.60 5.2 10.72 9.28 2.4 1.24 18.76 5.4 11.15 8.85 2.6 2.18 17.82 5.6 11.60 8.402.83.17 16.83 5.8 12.09 7.913.04.11 15.896.0 12.637.373.24.94 15.066.2 13.22 6.78 3.4 5.70 14.30 6.4 13.85 6.153.6 6.44 13.56 6.6 14.555.453.8 7.10 12.90 6.8 15.454.554.0 7.71 12.29 7.0 16.47 3.53 4.2 8.28 11.72 7.2 17.39 2.61 4.4 8.82 11.18 7.4 18.17 1.83 4.6 9.35 10.65 7.6 18.73 1.274.8 9.86 10.14 7.8 19.15 0.85Na2HPO4分子量=141.98,0.2mol/L溶液为28.40g/L。
Na2HPO4・2H2O分子量=178.05,0.2mol/L溶液含35.61g/L。
C6H8O7•H2O分子量=210.14,0.1mol/L溶液为21.01g/L。
5.使用时可以向每升混合液中加入1g酚，若最后p H值有变化，再用少量50%氢氧化钠溶液或浓盐酸调节,冰箱保存。
6•柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液(0・1mol/L)柠檬酸C6H8O7・H2O：分子量210.14,0.1mol/L溶液为21.01g/L。
常用缓冲溶液的配制方法
常用缓冲溶液的配制方法磷酸氢二钠–柠檬酸缓冲液24Na 2HPO 4·2H 2O 分子量 = 178.05，0.2 mol/L 溶液含35.01克/升。
C 4H 2O 7·H 2O 分子量 = 210.14，0.1 mol/L 溶液为21.01克/升。
pH 4.0 20mL ：Na2HPO4 0.219g + C4H2O7·H2O 0.258g柠檬酸–柠檬酸钠缓冲液（0.1 mol/L ）6872柠檬酸钠Na 3 C 6H 5O 7·2H 2O ：分子量294.12，0.1 mol/L 溶液为29.41克/毫升。
pH 4.0 20mL ： C4H2O7·H2O 0.275g + Na3 C6H5O7·2H2O 0.203g乙酸–乙酸钠缓冲液（0.2 mol/L ）Na 2Ac·3H 2O 分子量= 136.09，0.2 mol/L 溶液为27.22克/升。
pH 4.0 20mL ：NaAc 0.098g + HAc 0.282mL甘氨酸–氢氧化钠缓冲液（0.05M ）甘氨酸分子量=75.07; 0.2M溶液含15.01克/升。
pH 10.0 20mL ：甘氨酸0.075g + NaOH 0.013g碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液（0.1M ） 2+2+ 无水Na 2CO 2分子量=105.99;0.1M 溶液为10.60克/升。
Na 2CO 2·10H 2O 分子量=286.2;0.1M 溶液为28.62克/升。
Na 2HCO 3分子量=84.0;0.1M 溶液为8.40克/升。
pH 10.0 20mL ：无水碳酸钠 0.127g +碳酸氢钠0.067g补注：pH 4.0 EDTA2-McIlvaine2O0. 05 mol/L EDTA（372.2）+ 0. 06 mol/L Na2HPO4·12HO（358.14）+ 0. 08 mol/L 柠檬酸（210.14）18. 61g/L EDTA + 21. 4884 g/L Na2HPO4·12HO + 16.8112 g/L 柠檬酸20mL 0. 372g EDTA + 0. 430 g Na2HPO4 ·12HO + 0.336 g 柠檬酸。
常用缓冲液的配制
常用缓冲溶液的配制（一）甘氨酸-盐酸缓冲液（0.05 mol/L）X毫升0.2 mol/L甘氨酸＋ Y毫升0.2 mol/L HCl，再加水稀释至200毫升。
pH X Y2.2 50 44.02.4 50 32.42.6 50 24.22.8 50 16.83.0 50 11.43.2 50 8.23.4 50 6.43.6 50 5.0甘氨酸分子量＝75.07，0.2 mol/L甘氨酸溶液含15.01 g/L。
（二）邻苯二甲酸-盐酸缓冲液（0.05 mol/L）X毫升0.2 mol/L邻苯二甲酸氢钾＋Y毫升0.2 mol/L HCl，再加水稀释至20毫升。
pH(20℃) X Y2.2 5 4.6702.4 53.9602.6 53.2952.8 5 2.6423.0 5 2.0323.2 5 1.4703.4 5 0.9902.6 5 0.5973.8 5 0.263邻苯二甲酸氢钾分子量＝204.23，0.2 mol/L邻苯二甲酸氢钾溶液含40.85 g/L。
（三）磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液pH 0.2 mol/LNa2HPO4 (mL) 0.1 mol/L柠檬酸 (mL)2.2 0.40 19.602.4 1.24 18.762.6 2.18 17.822.83.17 16.833.04.11 15.893.24.94 15.063.4 5.70 14.303.6 6.44 13.563.8 7.10 12.904.0 7.71 12.294.2 8.28 11.724.4 8.82 11.184.6 9.35 10.654.8 9.86 10.145.0 10.30 9.705.2 10.72 9.285.4 11.15 8.855.6 11.60 8.405.8 12.09 7.916.0 12.637.376.2 13.22 6.786.4 13.85 6.156.6 14.55 5.456.8 15.45 4.557.0 16.47 3.537.2 17.39 2.617.4 18.17 1.837.6 18.73 1.277.8 19.15 0.858.0 19.45 0.55Na2HPO4分子量＝141.98；0.2 mol/L溶液为28.40 g/L。
常用缓冲溶液的配制
常用缓冲溶液的配制方法1．甘氨酸–盐酸缓冲液（0.05mol/L ）X 毫升0.2 mol/L 甘氨酸+Y 毫升0.2 mol/L HCI ，再加水稀释至200毫升 甘氨酸分子量 = 75.07，0.2 mol/L 甘氨酸溶液含15.01克/升。
2．邻苯二甲酸–盐酸缓冲液（0.05 mol/L ）X 毫升0.2 mol/L 邻苯二甲酸氢钾 + 0.2 mol/L HCl ，再加水稀释到20毫升 邻苯二甲酸氢钾分子量 = 204.23，0.2 mol/L 邻苯二甲酸氢溶液含40.85克/升3．乙酸–乙酸钠缓冲液（0.2 mol/L ）Na2Ac·3H2O 分子量 = 136.09，0.2 mol/L 溶液为27.22克/升。
pHXYpHXY2.0 2.4 2.6 2.8 50 50 50 50 44.0 32.4 24.2 16.83.0 3.2 3.4 3.6 50 50 50 50 11.4 8.2 6.4 5.0 pH(20℃) X Y pH(20℃) X Y 2.2 2.4 2.6 2.8 3.05 5 5 5 54.0703.9603.2952.6422.0223.2 3.4 3.6 3.85 5 5 51.4700.9900.5970.263pH(18℃) 0.2 mol/L NaAc (毫升) 0.3 mol/L HAc(毫升)pH(18℃) 0.2 mol/L NaAc (毫升) 0.3 mol/LHAc(毫升)2.63.84.0 4.2 4.4 4.6 0.75 1.20 1.80 2.65 3.70 4.90 9.25 8.80 8.20 7.35 6.305.10 4.8 5.0 5.2 5.4 5.6 5.8 5.90 7.00 7.90 8.60 9.10 9.40 4.10 3.00 2.10 1.40 0.90 0.604. 磷酸盐缓冲液（1）磷酸氢二钠–磷酸二氢钠缓冲液（0.2）Na2HPO4·2H2O 分子量 = 178.05，0.2 mol/L 溶液为85.61克/升。
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碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液(0.05mol/L,pH9.6)
简介：
Leagene 碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液(0.05mol/L,pH9.6)主要由碳酸钠、碳酸氢钠、防腐 剂等组成，pH 值为 9.6，主要用于 ELISA 实验中包被 96 孔板的孔，与 ELISA 包被缓冲液(1 ×)极其相似。该试剂为 1×工作液，直接使用，仅用于科研领域，不用于临床诊断或治疗
名称 磷酸缓冲盐溶液(1×PBS,无钙镁) ACK 红细胞裂解液(ACK Lysis Buffer) 中性福尔马林固定液(10%) 瑞氏-姬姆萨复合染色液 葡植物总糖和还原糖检测试剂盒(硝基水杨酸法) 尿素(Urea)检测试剂盒(脲酶波氏比色法)
2、 注意不要包被用作空白对照的孔，用塑料膜包裹平板，4℃温育过夜。
注意事项：
1、 注意密闭保存，避免挥发。一旦开封，保质期就会大大缩短。 2、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：12 个月有效。亦可短期内 CS0001 DF0111 DM0007 TC0699 TC1167
组成：
编号 名称 碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液(0.05mol/L,pH9.6) 使用说明书
IT0243 Storage
500ml
4℃
1份
操作步骤(仅供参考)：
1、 在 实 验 前 一 天 ， 用 BSA 或 其 他 包 被 用 物 质 溶 解 于 碳 酸 钠 - 碳 酸 氢 钠 缓 冲 液 (0.05mol/L,pH9.6)，包被 96 孔板。