标准曲线及回收实验 Nelson—Somogyi法测定血糖
蒽酮比色法快速测定葡萄糖
蒽酮比色法快速测定葡萄糖、果糖、蔗糖及可溶性总糖含量一、分析原理蒽酮试剂与碳水化合物生成一种蓝绿色物质，是糖类特有的反应。
不经分离而进行系统测定葡萄糖、果糖、蔗糖和可溶性总糖含量基于以下三点：1、室温下葡萄糖与蒽酮试剂不显色，此温度下果糖显色5分钟的吸收值与果糖在100℃下显色5分钟的吸收值几乎相等。
2、稀碱与糖溶液共热时，可以破坏葡萄糖、果糖而蔗糖不被破坏。
3、在浓硫酸的脱水作用下，蒽酮与糖类（包括多糖在内）作用。
二、仪器设备分析天平（万分之一）、分光光度计、水浴锅炉、离心机、试管三、试剂1、蒽酮试剂：0.4g蒽酮溶于100ml 88%的硫酸中（约84份体积97%的浓硫酸与16份体积水混合，密封在磨口瓶中）。
溶解后置水中冷却备用。
此液当天配制。
2、2N KOH溶液 3N HCL溶液 3N NaOH溶液3、标准糖储备液：精确称取250mg干燥的分析纯的糖（葡萄糖、果糖、蔗糖），分别移至250ml容量瓶中，溶剂可用蒸馏水。
4、标准糖工作液：用移液管吸取10ml标准糖储备液于100ml容量瓶中，用蒸馏水定容。
5、蒽酮-醋酸乙酯：1g蒽酮溶解于50ml醋酸乙酯中，可微加热（该试剂只可用一天，若储于棕色瓶中，暗中可保存数星期）四、测定步骤1、工作曲线绘制：用2ml移液管按表取标准糖工作液（葡萄糖不多于160µg,果糖不多于80µg，蔗糖不多于100µg）于干洁的试管中，用蒸馏水分别调整体积为2.00ml。
各管中分别加入蒽酮试剂6.00ml。
摇匀并立即置于沸水浴中加热5分钟，取出立即在冷水中迅速冷却并不断摇动。
用2.00ml蒸馏水重复上述操作，作为空白。
在分光光度计上以640nm波长测消光度，以消光度为纵坐标，以糖含量为横坐标，绘制标准工作曲线。
馏水补充至2ml，加0.5ml蒽酮-醋酸乙酯试剂，加5ml浓硫酸，摇匀，立即放入沸水浴中保温1分钟，取出冷却后在620nm下比色，做标准曲线。
蒽酮比色法葡萄糖标准曲线操作方法(一)
蒽酮比色法葡萄糖标准曲线操作方法(一)
蒽酮比色法葡萄糖标准曲线操作
引言
蒽酮比色法是一种常用的测定葡萄糖含量的方法，它通过测量葡
萄糖溶液与蒽酮反应产生的紫色溶液的吸光度，来推断葡萄糖的浓度。
本文将介绍如何操作蒽酮比色法来绘制葡萄糖的标准曲线。
实验材料准备
•蒽酮溶液
•mol/L 磷酸二氢钾溶液
•磷酸(pH=)
•葡萄糖溶液 (不同浓度)
•分光光度计
•塑料比色皿
•移液器
•艾氏试管 (10 mL)
实验步骤
1.准备一组葡萄糖标准溶液，包括不同浓度的葡萄糖溶液和纯磷酸
二氢钾溶液。
葡萄糖的浓度可选取为、、、、和 mg/mL，磷酸二氢钾的浓度为 mol/L。
2.取一定体积的葡萄糖标准溶液，加入到不同的艾氏试管中。
3.分别加入相同体积的磷酸，混合均匀。
4.将每个试管内的溶液均匀地倒入塑料比色皿中。
5.使用分光光度计，在波长为540 nm 处进行初始的零值调整。
6.依次测量每个标准溶液的吸光度，并记录数据。
7.将吸光度数据与标准溶液浓度建立线性回归，绘制葡萄糖的标准
曲线。
数据处理与分析
通过将吸光度数据与标准溶液浓度进行线性回归，可以得到葡萄糖标准曲线的方程式，并利用该方程式可以预测未知葡萄糖样品的浓度。
结论
蒽酮比色法是一种简单、快速而准确的测定葡萄糖含量的方法。
通过制备葡萄糖标准曲线，我们能够利用吸光度测量的数据推断未知葡萄糖样品的浓度。
这项实验不仅可用于葡萄糖测定，也可用于其他具有还原性的物质的测定。
生化实验(五)-----(综合性实验一) 血糖的测定 - (葡萄糖氧化酶法)(对比法、标准曲线法)
β-D葡萄糖+O2 +H2O
葡萄糖氧化酶(GOD)
β-D葡萄酸+H2O2
H2O2 +4-氨基安替吡啉+苯酚
过氧化物酶(POD)
H2O+红色醌式物质
原理
505nm有最大吸收峰
正常血糖水平为80—120毫克／100ml，
在糖尿病及肾上腺皮质机能亢进和脑下垂体
机能亢进的患者血中葡萄糖含量可显著升高，
（综合性实验一）
实验五
血糖的测定
(葡萄糖氧化酶法)
一、实验目的和要求：
1. 掌握酶联法测定血糖含量的基本原理。 2. 熟悉分光光度计的操作。 3. 掌握血糖正常水平及其测定的临床意义。 4. 复习血糖的来源、去路及其调节的有关理 论知识。
二、基本原理：
葡萄糖为一含醛基的已糖，在pH7.0条件， 葡萄糖氧化酶（glucose oxidase, GOD）可催化 血样中葡萄糖氧化生成葡萄糖酸及过氧化氢。 后者在过氧化物酶（peroxidase, POD）的 作用下与苯酚，4-氨基安替毗啉氧化缩合成红 色醌式物质，在505nm处有最大吸收峰。 标本中葡萄糖含量与吸光度成正比，可求 得血样中葡萄糖的含量。
饥饿时，血糖水平可下降。
三、实验器材与试剂：
【器 材】 1. 硬质中试管 2. 容量瓶、烧杯、玻璃棒 3. 电子天平 4. 微量移液器 【试 剂】 1. 工作液（酶酚混合试剂） 2. 葡萄糖 3. 双蒸水 4. 待测样品
四、实验操作：
1. 取硬质中试管三支，分别标以1、2、3 号，
2. 按下表操作：混匀后同时将三支试管 置于37℃水浴中，保温10分钟， 3. 在波长505nm处比色。以空白管调零， 读取标准管及测定管吸光度。（即测 得A样和A标）
血糖浓度测量实验报告
一、实验目的1. 掌握血糖测量的原理和方法。
2. 了解血糖浓度的正常范围及其临床意义。
3. 通过实验操作，提高实验技能和数据分析能力。
二、实验原理血糖浓度是指血液中葡萄糖的含量，是人体能量代谢的重要指标。
血糖浓度的测定方法主要有氧化还原法、葡萄糖氧化酶法、己糖激酶法等。
本实验采用葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度，该方法具有特异性强、操作简便、准确性高等优点。
三、实验器材与试剂1. 仪器：血糖仪、血糖试纸、微量移液器、试管、离心机、恒温箱等。
2. 试剂：葡萄糖标准溶液、葡萄糖氧化酶试剂、磷酸盐缓冲液、硫酸铜溶液等。
四、实验步骤1. 标准曲线绘制（1）将葡萄糖标准溶液按照不同浓度进行稀释，得到一系列浓度梯度。
（2）取试管，分别加入磷酸盐缓冲液、葡萄糖标准溶液和葡萄糖氧化酶试剂，混匀。
（3）将试管放入恒温箱中反应一定时间。
（4）取出试管，加入硫酸铜溶液，混匀。
（5）使用血糖仪测定各试管中葡萄糖氧化酶反应后的吸光度值。
（6）以葡萄糖浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 血糖浓度测定（1）取待测血液样本，按照微量移液器的要求，准确移取一定量的血液。
（2）将血液样本与血糖试纸接触，等待试纸变色。
（3）使用血糖仪测定试纸变色后的吸光度值。
（4）根据标准曲线，计算出血液样本中的血糖浓度。
五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制通过绘制标准曲线，得到葡萄糖浓度与吸光度值之间的关系，可以用于后续血液样本的血糖浓度测定。
2. 血糖浓度测定根据实验操作，测定血液样本的血糖浓度，并与正常范围进行比较。
若血糖浓度超过正常范围，提示可能存在糖尿病等疾病。
六、实验讨论1. 本实验采用葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度，具有特异性强、操作简便、准确性高等优点。
2. 实验过程中，应注意温度、时间等条件的控制，以保证实验结果的准确性。
3. 血糖浓度的测定对于糖尿病等疾病的诊断和病情监测具有重要意义。
七、实验总结通过本次实验，我们掌握了血糖测量的原理和方法，了解了血糖浓度的正常范围及其临床意义。
血糖的测定(2021精选文档)
• 加完实验试剂后混匀，37°C水浴20分钟，在520nm波长 下比色，制作标准曲线，计算血糖浓度。
标准曲线的绘制
• 标准曲线（英文为 standard curve）是指通过测定一系列 已知组分的标准物质的某理化性质，而得到的性质的数值 曲线。
• 标准曲线是标准物质的物理/化学属性跟仪器响应之间的 函数关系。建立标准曲线的目的是推导待测物质的理化属 性。
• 变量
• 适用范围
• 相关系数
• 实验重复
有效数字的处理
• • 坐标 • 字体 • 大小 • 公式、相关系数 • 单位
分光光度计的使用
• 分光光度法则是通过测定被测物质在特定波长处或一定波 长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析。
• 单色光辐射穿过被测物质溶液时，被该物质吸收的量与该 物质的浓度和液层的厚度（光路长度）成正比。
血糖的测定
血糖的生理生化意义
• 血糖的功能
• 临床意义
实验目的
• 了解血糖测定的实验原理与操作； • 标准曲线制作及其意义； • 熟练掌握分光光度计的使用。
实验原理
• 本实验中XH2为4-氨基安替比林。其产物颜色与 一定范围内葡萄糖浓度成正比，与实验对比葡萄 糖溶液相比较，可以求得血糖的含量。
血糖仪的使用
思考题
• 临床上在什么情况下医生需要对病人血糖进行定量？医院 如何进行血糖定量？
• 你还知道临床上在哪些情况下需要对其他一些指标进行定 量？试举1到2例并说明其临床意义。
57.至今没有一个女人因为打扮自己而倾家荡产，却有很多女人因为自己的不装扮而人财两空！女人，请护理好你的容颜,管理好你的身材，修养好你的內涵，这样才能活得精彩！ 4.征服畏惧建立自信的最快最确实的方法，就是去做你害怕的事，直到你获得成功的经验。 9.梦想不是梦与想。 98.心存希望，幸福就会降临你；心存梦想，机遇就会笼罩你。 72.乐观者在困难中看到机会；悲观者在机会中看到苦难。理想的路总是为有信心的人预备着。 82.生命对于每个人来说都只有仅仅的一次，我们没有理由不珍爱自己的生命。 98.人有悲欢离合；月有阴晴圆缺；天有不测风云；人有祸福旦夕；凡事看开点，换一种角度去想就不一样，换一种心理态度去对待某些人和事。你回发现更多的好处，对自己或是他人更有益。 8.生命之舟面对险滩，面对激流，弱者会选择逃避和放弃，而强者则会选择面对和挑战。人生中无限的乐趣都在于对人生的挑战之中迸出不衰的光芒。 78.只有舍，才有得。 37.人生最困难的事情是认识自己。 23.伟大的事业不是靠力气速度和身体的敏捷完成的，而是靠性格意志和知识的力量完成的。 74.乐观者看到条条都是康庄大道，悲观者看到条条都是此路不通。 8.“不可能”只存在于蠢人的字典里。 100.生命之灯因热情而点燃，生命之舟因拼搏而前行。 32.莫为一身之谋，而有天下之志。 89.你有多努力，就有多幸运。
蒽酮葡萄糖标准曲线
蒽酮葡萄糖标准曲线蒽酮葡萄糖是一种常用于生物化学实验的试剂，它可以用来检测葡萄糖的含量。
在实验过程中，我们通常需要绘制蒽酮葡萄糖标准曲线来帮助我们准确测定待测样品中葡萄糖的浓度。
本文将介绍如何制备蒽酮葡萄糖标准曲线以及如何使用它来测定葡萄糖含量。
首先，我们需要准备一定浓度的葡萄糖标准溶液。
可以根据实验需要选择不同的浓度，一般来说，我们至少需要准备五个不同浓度的标准溶液。
将这些标准溶液分别加入到含有蒽酮试剂的试管中，然后在沸水中加热反应。
反应完成后，待溶液冷却至室温后，使用分光光度计分别测定各标准溶液的吸光度值，并记录下来。
接下来，我们需要绘制蒽酮葡萄糖标准曲线。
将吸光度值作为纵坐标，葡萄糖浓度作为横坐标，根据测得的吸光度值和葡萄糖浓度值绘制散点图，然后利用拟合直线法或者拟合曲线法得到标准曲线方程。
标准曲线的方程可以用来计算待测样品中葡萄糖的浓度，从而实现定量分析的目的。
在实际测定中，我们只需要将待测样品的吸光度值代入标准曲线方程中，就可以得到样品中葡萄糖的浓度。
需要注意的是，为了准确测定样品中葡萄糖的浓度，我们通常会对样品进行稀释处理，以确保其吸光度值在标准曲线范围内。
蒽酮葡萄糖标准曲线的制备和应用在生物化学实验中具有重要意义。
它不仅可以帮助我们准确测定葡萄糖的含量，还可以在一定程度上反映待测样品中其他还原性物质的含量。
因此，在实验中，我们需要严格按照标准曲线的制备方法进行操作，确保实验结果的准确性和可靠性。
总之，蒽酮葡萄糖标准曲线是生物化学实验中常用的重要工具，它为我们提供了一种简单而有效的方法来测定葡萄糖含量，同时也为其他相关物质的定量分析提供了参考。
希望本文的介绍能够帮助读者更好地理解蒽酮葡萄糖标准曲线的制备和应用，从而在实验中取得准确可靠的实验结果。
蒽酮比色法测总糖
实验五总糖的测定——蒽酮比色法一、目的：1.掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和方法。
2.学习植物可溶性糖的一种提取方法。
二、原理：糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后，与蒽酮(C14H10O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色。
该物质在620 nm处有最大吸收，在150 µg/ml范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
这一方法有很高的灵敏度，糖含量在30 µg左右就能进行测定，所以可做为微量测糖之用。
一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适。
三、仪器、试剂和材料1.仪器：电热恒温水浴锅，分光光度计，电子天平，容量瓶，刻度吸管等2.试剂：(1)葡萄糖标准液：l00 µg/ml(2)浓硫酸(3)蒽酮试剂：0.2 g蒽酮溶于100 ml浓 H2SO4中。
当日配制使用。
3.材料：甜糜秸秆四、操作步骤1.葡萄糖标准曲线的制作取7支大试管，按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液：在每支试管中立即加入蒽酮试剂4.0m1，迅速浸于冰水浴中冷却，各管加完后一起浸于沸水浴中，管口加盖，以防蒸发。
自水浴重新煮沸起，准确煮沸l0 min 取出，用冰浴冷却至室温，在620 nm波长下以第一管为空白，迅速测其余各管吸光值。
以标准葡萄糖含量（µg）为横坐标，以吸光值为纵坐标，作出标准曲线。
2.植物样品中可溶性糖的提取：将样品剪碎至2 mm以下，105 ºC烘干至恒重，精确称取1~5 g，置于50 ml 三角瓶中，加沸水25 m1，加盖，超声提取10 min，冷却后过滤（抽滤），残渣用沸蒸馏水反复洗涤并过滤（抽滤），滤液收集在50 m1容量瓶中，定容至刻度，得提取液。
3.稀释：吸取提取液2 m1，置于另一50 m1容量瓶中，以蒸馏水稀释定容，摇匀。
4.测定吸取1 ml已稀释的提取液于试管中，加入4.O ml蒽酮试剂，平行三份；空平均值在标白管以等量蒸馏水取代提取液。
实验一可溶性糖含量的测定——蒽酮法
实验十二胰岛素、肾上腺素对血糖浓度的影响血糖是指血液中糖，由于正常人血液中糖主要是葡萄糖，所以一般认为，血糖是指血液中的葡萄糖。
正常人空腹血糖浓度为4.4～6.7mmol/L（80～120mg/100ml）。
血糖是糖在体内的运输形式。
全身各组织都从血液中摄取葡萄糖以氧化供能，特别是脑、肾、红细胞、视网膜等组织合成糖原能力极低，几乎没有糖原贮存，必须不断由血液供应葡萄糖。
当血糖下降到一定程度时，就会严重妨碍脑等组织的能量代射，从而影响它们的功能。
所以维持血糖浓度的相对恒定有着重要的临床意义。
血糖浓度的调节血糖浓度能维持相对恒定是由于机体内存在一整套高效率的调节机制，精细地控制着血糖的来源与去路，使之达到动态平衡。
神经系统的调节作用神经系统对血糖浓度的调节作用主要通过下丘脑和自主神经系统对所控制激素的分泌，后者再通过影响血糖来源与去路关键酶的活性来实现。
神经系统的调节最终通过细胞水平的调节来达到目的。
下丘脑一方面通过内脏神经作用于肾上腺髓质，刺激肾上腺素的分泌；另一方面也作用于胰岛α-细胞，使其分泌胰高血糖素；同时还可以直接作用于肝。
三方面共同作用的结果是使肝细胞的磷酸化酶活化，使糖原分解加速；糖异生关键酶的活性增加，糖异生作用增加，从而使血糖浓度升高。
下丘脑还可通过兴奋迷走神经，使胰腺β-细胞分泌胰岛素，同时还可直接作用于肝，使肝细胞内糖原合成酶活化，促进肝糖原的合成；此外还抑制糖异生途径，促进糖的氧化和转化，总体上使血糖的去路增加，来源减少，最终达到使血糖浓度降低的目的。
激素使血糖浓度降低的激素 :胰岛素使血糖浓度升高的激素:胰高血糖素、肾上腺素、肾上腺皮质激素、生长素、甲状腺素它们对血糖的调节主要是通过对糖代谢各主要途径的影响来实现的。
在激素发挥调节血糖浓度的作用中，最重要的是胰岛素和胰高血糖素。
肾上腺素在应激时发挥作用，而肾上腺皮质激素、生长激素、甲状腺素等都可影响血糖水平，但在生理性调节中仅居次要地位。
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1、找出该方法的可测范围
2、标准曲线又叫工作曲线，当用同一方法，同一光度计 及波长时可用标准曲线直接求出末知样品的含量
回收实验
在对一未知样品测定时，设两个管 未知管：未知样品 回收管：未知样品＋已知标准样品
标准曲线及回收实验 Nelson—Somogyi法测定血糖
注意事项：
1、加入少量液体，要垂直送至管底。 2、取混浊液体，先混匀。
制备血滤液
未知管 回收管
H2O 1.5
1.0
全血 0.1
0.1
标准糖 ---
0.5
枪式移液器的使用！
1、混匀！加入4.5%Ba(OH)2 0.2ml，充分混匀！ 静置至变褐色（至少15分钟）。
一、 测定血糖值接近真实值
去除了血液中的其他还原物质，Folin－吴法用钨酸法沉淀血样 中的蛋白质，不能去除这些还原物质，比真正的还原糖值高。
正常值：Folin－吴法 ：80～120mg/dl， Nelson—Somogyi法 ：65～110mg/dl
二、最后获得的比色物较为稳定
采用砷钼酸代替 Folin－吴法的磷钼酸，使， 可放置较长时间（24小时以上）而不影响 测定结果。
2、加入5%ZnSO4 0.2ml，混匀！静止5分钟。
3、离心，3000ｒｐｍ，10分钟。
按顺序加试剂，立即混匀，试管要干净、 干燥！！！
目的要求
1 了解标准曲线及回收实验的作法及意义。
2 3 掌握测定血糖的方法——Nelson-
Somogyi二氏法。
血液中的糖主要是葡萄糖，即血糖
测定血糖含量是判断糖代谢正常与否的一 项重要指标，为临床化验常作的分析。
三、可不用血糖管
Nelson—Somogyi法所用碱性铜溶液中含有大量的NaSO4 产生大量离子对溶入的气体产生盐析效应，以减少溶液 中溶解的空气中的氧，从而减少了生成的Cu2O的再氧化。 血糖管的目的：缩小与空气接触的面积，防止了空气中 的氧对生成的Cu2影响回收率的因素有哪些？
其余步骤
见讲义。
各管中分别加入砷钼酸试剂1ml，轻轻混匀 至无气泡(CO2)产生，将各管分别加蒸馏水 7.0ml，小心的吹打混匀。
结果处理
回收率=
（ M回-M未） ×2/0.5 0.1 ×0.5
血糖浓度mmol/L =
M未 ×2/0.5 0.1
×100% 1000
× 180
血糖含量（ M未） =
A标2 ×0.5 × 0.1 A未
mg
真值=测值÷回收率
血糖浓度标准曲线 5.55 11.11 16.67 22.22 mmol/L
标准曲线查得结果
结果要求
1、用座标纸绘制血糖的标准曲线 2、计算血糖测定方法的回收率 3、根据公式求出血糖浓度(mmol/L)，并根据回
收率求出血糖浓度的真值。（公式） 4、利用标准曲线求出血糖浓度(mmol/L)。
本法是基于葡萄糖的还原性。 由于血液中存在的大量蛋白质对测定有干
扰，必需先去除蛋白质，制备无蛋白血滤 液。
全血+Ba(OH)2+ZnSO4 蛋白质 + 非糖还原物 +上清液（G）
G
Cu(OH)2
Cu2O
砷钼酸
钼兰
颜色深浅与葡萄糖含量成正比
其他还原性物质(主要是谷胱甘肽、葡萄糖醛酸、尿酸等)
与Folin－吴法比较优点：
制备血滤液
未知管 回收管
H2O 1.5
1.0
全血 0.1
0.1
标准糖 ---
0.5
1、混匀！加入4.5%Ba(OH)2 0.2ml，充分混匀！ 静置至变褐色（至少15分钟）。
2、加入5%ZnSO4 0.2ml，混匀！静止5分钟。
3、离心，3000ｒｐｍ，10分钟。
按顺序加试剂，立即混匀，试管要干净、 干燥！！！
回收率＝M回-M未/已知标准样品量×100% 理论值为100％，由于实验方法，操作等因素100±10％
回收实验的目的
1、验证方法的可靠性，在操作过程中样品是否有 丢失，破坏，其他成分是否有干扰。
2、校正测得值：若采用此方法，可用回收率校正 测得值，使之接近真值。 校正值（真值）＝测得值 ÷ 回收率