猪水疱病RT-nPCR方法的建立及初步应用
猪水泡病诊断技术
本标准的附录 Ａ、 附录 Ｂ 附录 Ｃ 附录 Ｄ、 、 、 附录 Ｅ均为规范性附录。附录 Ｆ为资料性附录。 本标准由中华人民共和国农业部提出。 本标准由全国动物检疫标准化技术委员会归口。 本标准起草单位： 中国农业科学院兰州兽医研究所。 本标准主要起草人： 张永光、 牟克斌、 王永录、 刘西兰、 方玉珍。
Ｇ ／ １２ ０ ０ ３ Ｂ Ｔ ０－２ ０ ９
２５３５ 如出现 ２ ．．． 排以上孔的凝集， 以某排孔的凝集效价高于其余排孔的凝集效价 ２ 个对数（ ２ 以 为 底） 浓度以上者即可判为阳性， 其余判为阴性 ２５３６ 操作方法 ２５２２ ．．． ．．． 的结果判定： 稀释液 Ｉ 对照孔不凝集试验方可成立。 ２５３６ １ 若第一排出现 ２ ．．．． 孔以上的凝集（ ‘ 曰＋” 以上）且第二排相对应孔出现 ２ ， 个孔 以上的凝集抑
制， 第三排、 第四排不出现凝集， 判为猪水泡病阳性。若第三排出现 ２ 孔以上的凝集（ ＋” ‘ 以上）且第 日 ，
四排相对应孔出现 ２ 个孔以上的凝集抑制， 第一排、 第二排出现阳性反应 ， 则判为同时感染水泡病与口蹄疫 。
２５３６２ 致红细胞 ５ ０ ．．．． ００ 凝集的被检样品最高稀释度为其凝集效价。
第７ 孔滴加第 ７ 管稀释被检样品 ００ ｍｌ 以此类推至第 １ ； ． ， ５ 孔 ｂ 每排的第 ９ ） 孔滴加稀释液 １００ ｍｌ 作为稀释液对照； ． ， ５
ｃ 第一至第五排的第 １ ） ０孔按顺序分别滴加猪水泡病和口蹄疫 Ａ， ， ａ工型标准抗原 Ｏ， ｓ 一 Ｃ Ａｉ （ ：。 １ ３稀释） ００ ｍ ， 各 ． Ｌ 作为阳性对照 ５ ２５２ １３ 滴加敏化红细胞诊断液： ．．． ． 先将敏化红细胞诊断液摇匀， 于滴定板第一排至第五排的第 １ 一 １ 孔分别滴加猪水泡病和口蹄疫 Ａ Ｏ Ｃ Ａ ｉ Ｉ ０ ， ， － ， ｓ 型敏化红细胞诊断液， ａ 每孔 ００５ ， ． ｍ 置微量振荡器 ２ Ｌ
猪水疱病的诊断与防控对策
作者简介:祁永峰(1974.8-),男,本科,高级兽医师,从事畜牧兽医工作猪水疱病的诊断与防控对策祁永峰(河北省张家口市宣化区农业农村局075100)摘要:猪水疱病是由猪水疱病毒感染后引起的一种传染性疾病。
发病猪主要以蹄部、口腔等部位长出水疱为特征。
其能够引起猪的发病甚至是死亡。
严重影响了猪的生长发育。
给养殖场造成严重的经济损失。
本文通过对猪水疱病进行全面的剖析并总结出其防控策略。
在对本病进行防控时,提供可用参考意见。
关键词:猪水疱病;诊断;防控猪水疱病是生猪养殖过程中比较常见的疾病,其发病率很高,病猪身体的许多部位都会长出水疱[1]。
其又称之为传染性水疱病,是一种急性、热性的接触性疾病。
猪发生水疱病后容易导致生长障碍,甚至会发生死亡。
但猪场对水疱病的关注还是不够,导致常有疫情发生。
应该予以重视。
1流行病学本病的传染源为感染带毒猪和已经发病的猪,本病的传播途径是通过唾液、粪便、乳汁等排出病毒[2]。
另外,还可以通过破溃的水疱液体以及血液等传播,本病的易感动物为猪,各个年龄、品系和性别的猪均可感染发病。
人也可以感染本病。
本病具有一定的季节性,在冬季发病率较高,可导致大量的猪生长发育不良。
本病的发病率有高有低,在20%~100%。
在规模化,集约化养殖场这种养殖密集的区域内发病率较高,在养殖区域较为分散的区域发病率相对较低。
2临床症状本病根据发病情况可以分为三种临床症状,分别是典型性、温和型和隐性型。
通常在经过2~8d 左右的潜伏期后就可以表现出临床症状。
2.1典型性发病初期,病猪体温上升,可以达到42℃左右。
在蹄部出现水疱,尤其是在蹄冠、蹄叉或副蹄有一个或多个黄豆大小水疱,水疱融合增大,充满透明水疱液[3]。
最初的蹄部表现苍白,发病部位出现轻微肿胀,在经过1~2d 后,这些水疱明显突出表面,内部含有大量的水疱液,这些部位的水疱会维持很多天,也可能立即出现破溃情况,形成溃疡,溃疡使猪剧烈疼痛,不能行走,跛行或不愿站立。
猪水疱病的诊断 以及预防猪水疱病的方法 - 养猪技术
猪水疱病的诊断以及预防猪水疱病的方法-养猪技术猪水疱病又称猪传染性水疱病，是由肠道病毒属的病毒引起的一种急性、热性接触性传染病。
临诊的主要特征是猪的蹄部、鼻端、口腔粘膜、甚至乳房皮肤发生水疱。
由于本病传染速度快、发病率高，对养猪业的发展是一严重威胁，必须十分重视本病的预防工作。
下面就具体来了解一下：猪水疱病的诊断以及预防猪水疱病的方法。
1、病因猪水疱病毒为小核糖核酸病毒科肠道病毒属，病毒粒子呈球形，无类脂囊膜。
猪水疱病毒对环境和消毒药物的抵抗力很强，在粪便和腌肉中能存活较长时间，在50℃经30 min仍不失感染力。
1%过氧乙酸60 min可杀死该病毒。
消毒药中以5%氨水、0. 5%菌毒杀、复合酚类及0.5%～1%次氯酸钠消毒效果良好。
常用的消毒剂如70%酒精、3%～5%来苏儿和10%生石灰都不能杀死该病毒。
2、流行情况该病只感染猪，其他家畜不发病，但对人类也有一定的易感性。
猪水疱病一年四季均可发生，在冬、春寒冷季节流行最多。
该病传播速度很快，不同条件的养猪场发病率由10%—100%不等。
病猪和带毒猪是该病的主要传染源，粪尿、鼻液、口腔分泌物、水疱皮、水疱液都含有大量病毒，并可向外界传播病毒。
猪感染该病，首先是由于病猪、带毒猪及其肉制品调入引起；其次，是由于饲喂未煮沸消毒的泔水和屠宰的下脚料；再次，是经污染的车船、用具和饲养人员传播。
病毒可经损伤的皮肤、消化道等途径感染健康猪。
3、临床症状典型水疱病。
其特征性的水疱，常见于主趾和附趾的蹄冠上。
部分猪体温升高至40. 5～42℃，在蹄冠和蹄踵的角质与皮肤结合部苍白肿胀，不久出现一个或多个黄豆至蚕豆大的水疱，继而水疱融合扩大，充满水疱液，1～2天后水疱破裂形成溃疡，露出鲜红的溃疡面，常围绕蹄冠皮肤和蹄壳之间裂开，疼痛加剧，出现跛行，多卧地不起，食欲减退或废绝。
部分猪由于继发细菌感染而局部化脓，造成蹄壳脱落，病猪卧地不起，食欲减退，精神沉郁。
水疱有时也见于鼻盘、舌、唇和母猪乳头上，但出现的水疱较蹄部晚，仔猪发生该病多数是在鼻盘上发生水疱。
一种检测猪水泡病病毒的引物、检测试剂盒和制备方法[发明专利]
![一种检测猪水泡病病毒的引物、检测试剂盒和制备方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/d3edcd27a1c7aa00b42acb7e.png)
专利名称：一种检测猪水泡病病毒的引物、检测试剂盒和制备方法
专利类型：发明专利
发明人：张强,卢昌,赵志荀,吴国华,颜新敏,李应国,岳华,周晓黎,李健,朱海霞,代雪玲,田波,芦晓立,高顺平,王曼
申请号：CN201410465734.7
申请日：20140915
公开号：CN104342501A
公开日：
20150211
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开一种检测猪水泡病病毒的引物、检测试剂盒和制备方法。
本发明用于检测猪水泡病病毒的引物基因序列为SEQIDNo.1（SVDV-F）、SEQIDNo.2（SVDV-R）、
SEQIDNo.3（UWD-F）、和SEQIDNo.4（UEV-R）。
相关的实验表明，本发明的引物序列可特异性快速扩增水疱性口炎病毒的核酸，通过核酸电泳检测到特异性条带，并具有特异性。
本发明可在制备快速鉴别猪水泡病病毒的GeXP诊断中的应用，并在猪水泡病流行病学研究中应用。
申请人：中国农业科学院兰州兽医研究所
地址：730046 甘肃省兰州市盐场堡徐家坪1号
国籍：CN
代理机构：兰州振华专利代理有限责任公司
代理人：张晋
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猪水泡病的诊断与防治研究
猪水泡病的诊断与防治研究猪水泡病是一种由猪水泡病病毒引起的高传染性疾病，主要通过污染的饲料、水源、器械以及病猪间的密切接触传播。
该病主要病变为猪口腔和周围组织的水疱、溃烂等病变，严重的病例甚至可以引起死亡。
猪水泡病的诊断主要依靠病猪的病症和病理学表现。
临床症状包括食欲下降、精神不振、高体温、腿部溃烂等。
病理学表现主要是口腔和周围组织的水疱、溃烂等病变。
还可以通过病理学检查和实时荧光聚合酶链反应（RT-PCR）检测病毒的存在来确诊。
病猪的组织样本（如口腔溃疡、淋巴结等）可以通过病理学检查查看病变组织的特点。
而RT-PCR则是通过检测病原病毒的核酸来确定病毒是否存在。
针对猪水泡病的防治主要包括以下几个方面。
1. 预防措施：及时开展猪群的疫苗接种，并按照疫苗的免疫程序进行免疫。
确保饲料、水源、饮水器等环境干净卫生，定期进行消毒。
2. 隔离治疗：对于已经感染的病猪，应及时隔离，将其与健康的猪隔离开，避免病毒的传播。
3. 对症治疗：对于发病的病猪，可以采用抗生素来预防二次感染，可以使用消毒液清洗病变部位，促进伤口的愈合。
4. 环境管理：保持猪舍的良好通风，加强环境卫生管理，及时清理舍内和周围的污物，控制病媒生物的繁殖。
还可以采用物理和化学手段来控制传染源的扩散。
5. 临床监测：对于已经感染或者疫苗免疫过程中的猪群，可以定期进行临床监测，及时发现疫情变化，采取相应的措施。
猪水泡病的诊断主要依靠临床症状、病理学表现和实验室检测结果，而防治方法主要包括疫苗免疫、隔离治疗、对症治疗、环境管理和临床监测等措施。
只有做好这些工作，才能够有效地控制和预防猪水泡病的传播。
猪水泡病的诊断与防治研究
猪水泡病的诊断与防治研究猪水泡病，又称口蹄疫，是一种高度接触性的病毒性疾病，对猪类动物造成严重危害。
该病主要通过接触受感染动物的分泌物和排泄物传播，引起严重的发热、溃疡和溃疡性病变，严重影响养猪业的发展。
针对猪水泡病的防治，各国都进行了大量的研究和实践，制定了一系列的防控措施，以期减少猪水泡病对猪群的危害。
本文将对猪水泡病的诊断与防治进行研究，为养猪业的发展提供重要参考。
一、猪水泡病的诊断1. 临床表现猪水泡病的临床表现主要包括高烧、溃疡和溃疡性病变。
受感染的猪通常会出现全身不适、食欲减退、发热等症状，随后会出现口腔、蹄部和乳头等处的水泡和溃疡，病变严重时，会导致猪的死亡。
通过观察猪的临床表现可以初步判断是否受感染猪水泡病。
2. 实验室检测为了确诊猪水泡病，通常需要进行实验室的检测。
常用的检测方法包括PCR（聚合酶链式反应）技术和ELISA（酶联免疫吸附试验）技术。
这些方法能够检测出猪水泡病病毒的存在，为病情的诊断提供有力的依据。
3. 病毒分离病毒分离是确定猪水泡病病毒存在的重要手段之一。
通过对猪体内分离出的病毒进行鉴定和检测，可以确定病原体的种类和分布情况，为后续的防治工作提供基础数据。
1. 疫苗接种疫苗接种是预防猪水泡病最常见、也是最有效的方法之一。
猪水泡病疫苗主要分为活疫苗和灭活疫苗两种，通过定期接种疫苗，可以大大减少猪水泡病的发生，降低疾病对猪群的危害。
2. 隔离和消毒在猪水泡病发病期间，需要对受感染的猪进行隔离，并对饲养场进行彻底的消毒。
隔离确保病情不会传播给其他猪，而消毒则能够有效地杀死病毒，减少病毒在饲养场的传播和滋生。
3. 动物检疫严格的动物检疫制度是预防猪水泡病传播的重要手段之一。
通过对进出口动物的检疫，可以有效地杜绝疫情的传播渠道，防止疾病的传播。
对疫区的实施管制也能够有效地控制疫情的蔓延。
4. 加强养殖管理加强养殖管理也是预防猪水泡病的重要措施之一。
包括定期消毒、饲料卫生、卫生隔离等措施都能有效地减少猪水泡病的发生。
猪传染性水疱病诊断方法和防治措施
2021.3作者简介:于富霞(1980.8-),女,山东省沂源县人,大学本科,兽医师,主要从事动物卫生监督检疫工作。
猪传染性水疱病诊断方法和防治措施于富霞(山东省淄博市沂源县农业农村局256100)摘要:随着养猪规模的不断扩大,饲养密度也逐渐增长。
如饲养管理不当、营养失衡和传染病都会严重破坏生猪养殖业的有序发展,其中疾病直接损害生猪的繁殖和生产性能。
猪水疱病是由肠道病毒引起的一种急性、热性高接触性传染疾病,对其蹄部造成较大损伤,影响生猪正常运动。
本文从致病机理、流行病学、临床症状、诊断方法和防治措施对猪水疱病进行概述,以期为相关人员提供理论参考。
关键词:猪传染性水疱病;诊断;防治过程中瘤胃突然臌气,急剧增加的腹腔压力会致使胸腔器官受到严重损伤,尤其是肺脏受到压迫后会发生呼吸困难,甚至引起胸腹隔膜的破裂。
所以,在牛群发病时必须凭借丰富的管理经验,快速做出正确判断,采取有效的抢救治疗方法,促使病牛恢复健康,避免危机健康和生命。
牛瘤胃臌气是生产中经常发生的一种消化道疾病,需要管理者重视起来,每天在饲喂过程中认真观察采食和饮水情况,尤其是饲喂容易发酵饲料和更换饲料时,更应做好积极应对措施。
日常管理中需要妥善保管饲料,防止发生霉烂变质情况,合理搭配饲喂,做好一切预防牛发生瘤胃臌气的措施,避免因饲喂不当引起的瘤胃臌气现象[4]。
因为牛群发生瘤胃臌气后,一般病程短、发病急,一旦发现病情需要立即实施救治,防止病牛倒在地上发生窒息死亡现象。
针对急性瘤胃臌气情况需要立即进行放气,然后再结合具体情况进行药物治疗,否则病牛会因胀气过多而产生呼吸道困难,危及牛的生命健康或影响治疗效果。
5小结虽然在临床方面牛瘤胃臌气分两种,但本病的发病速度加快,一旦牛群发生瘤胃臌气没有进行及时诊治,不仅影响牛群的生长发育和体重增长,严重的还会危及病牛生命,带来无法估量的损失。
所以,在日常管理中应每天认真观察牛群采食和精神状况,及时发现异常情况,确保牛群健康生长。
猪水泡病的诊断与防治研究
猪水泡病的诊断与防治研究【摘要】猪水泡病是一种常见的猪类传染病，引起病变的主要病原体是疱疹病毒。
本文从猪水泡病的病因、流行病学特征和症状表现入手，详细介绍了诊断与防治研究的相关内容。
在介绍了猪水泡病的诊断方法、防治措施、治疗药物选择、预防措施和防控策略。
结论部分探讨了对猪水泡病的诊断与防治研究的重要性，未来研究方向以及防治工作的意义。
这些信息对于加强对猪水泡病的认识、提高防治水平具有重要意义，将帮助控制病情的传播与发展，保障猪类养殖业的健康和稳定发展。
【关键词】关键词：猪水泡病、诊断、防治、病因、流行病学、症状、诊断方法、防治措施、治疗药物、预防措施、防控策略、研究方向、重要性、未来、意义。
1. 引言1.1 猪水泡病的病因猪水泡病（也称为口蹄疫）是一种由口蹄疫病毒引起的高度传染性疾病，主要影响蹄类动物，包括猪、牛、羊和马等。
猪水泡病的主要病因是口蹄疫病毒，属于口蹄疫病毒科。
这种病毒属于一个类似于紫外线辐射的结构，能够在外部环境中长时间存活，对高温和干燥具有一定的抵抗能力。
猪水泡病主要通过病毒的直接接触或者经由空气传播给其他动物，尤其在集约化养殖场中易发生群体性传染。
口蹄疫病毒具有很高的遗传变异性，不同亚型之间的毒力和传染性差别较大，这也是猪水泡病流行的一个主要原因。
猪水泡病的病因还与饲养条件、动物密度、卫生情况等因素息息相关。
在猪水泡病的控制过程中，了解病因对于及时采取有效的预防措施和应对策略至关重要。
通过深入研究猪水泡病的病因，可以更好地了解病毒变异的规律，为制定针对性的防治措施提供科学依据。
1.2 猪水泡病的流行病学特征猪水泡病是一种由猪水泡病毒引起的急性传染病，主要发生在猪群中。
病毒主要通过猪之间的接触和空气传播传播，易在密集的猪场中迅速蔓延。
猪水泡病多发生在春夏季节，高温多湿的环境是其流行的有利条件之一。
猪水泡病的流行还与猪场管理水平、饲养条件、疫苗覆盖率等因素有关。
流行病学调查显示，猪水泡病在全球范围内广泛流行，尤其在亚洲和拉丁美洲地区，猪水泡病的疫情频发。
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在 Ｐ Ｃ Ｒ之 后 ．在 １ ％琼 脂 糖 凝 胶
中电泳进 行检 测 ，将 目的条带使 用 胶
回 收试 剂 盒 回收 ．与 ｐ ＭＤ １ ８ － Ｔ载 体 于
扩增仪 （ Ｂ Ｉ Ｏ — Ｒ Ａ Ｄ公 司 ） ：Ｐ Ｃ Ａ ３ ０ ０型
电泳仪 （ Ｂ ｉ ｏ — Ｒ Ａ Ｄ公 司） 。
１ ． ３ 引物 的设 计 合 成
Ｃ ＡＧＴ ｒ Ａ； Ｉ ） ４－ ＧＡＧＣ ＡＡＣＴＦ ＧＣＣ ＧＴ ＧＴ —
ＧＴ。
Ｄ Ｎ Ａ，测定 其 Ｏ Ｄ值 ，计 算 出 Ｄ Ｎ Ａ浓
度 然 后进 行 １ ０倍倍 比稀 释后 进行
Ｒ Ｔ — Ｐ Ｃ Ｒ扩 增
１ ． １ ０ ＲＴ－ ｎ Ｐ Ｃ Ｒ 的 临床 应 用
疫病 防治
用的 Ｓ Ｖ Ｄ Ｖ实 验 室 诊 断 方 法 无 法 快 速
２ ． ５ ｍｍ ｏ ｌ ／ Ｌ ｄ Ｎ Ｔ Ｐ ２ ｔ ｚ １ ．５ ０ ｐ ｍ ｏ ￣ Ｌ的 Ｐ １ 和 Ｐ ２各 ０ ． ２ １ ｘ ｌ ，１ ０ ０ ｐ ｍｏ ｌ ／ Ｌ的 ｐ ３和 Ｐ ４
各 ３ ，１ ０ ｘ Ｐ Ｃ Ｒ ｂ ｕ ｆ ｆ ｅ ｒ ２ ． ５ １ ｘ ｌ ，Ｅ ｘ Ｔ ａ ｑ聚
４ ￣ Ｃ 连接过夜后 ，然后转 化进感受态 大 肠埃希菌 Ｄ Ｈ ５ ｏ ｔ ．挑取具有 氨苄抗性 的 阳性克隆 ，提取质粒 ，进行测序 。
１ ． ８ 特 异 性 试验
摘 要 ： 为 了建 立猪 水 疱 病 ＲＴ— Ｐ ＣＲ 检
根据 Ｇ ｅ ｎ Ｂ ａ ｎ ｋ上 发 表 的 猪 Ｓ Ｖ Ｄ Ｖ Ｖ Ｐ １基 因序列 ，利 用分 子生 物学 软件 对序列 比对分 析后 ．利 用 Ｐ ｒ ｉ ｍｅ ｒ ５ ． ０设 计 出下列 引物 ，设计 内 、外 ２对 特异 性引物 。能够扩增 出 ６ ８ １ ｂ ｐ基因片段 ： 夕 弓 Ｉ 物 ：Ｐ １ 一 Ｇ Ａ Ｃ Ｔ Ｃ Ｃ Ｇ Ａ Ｔ Ｇ Ｇ Ｃ ．
准确 的对该 病进 行确诊 ．以致 错 过最 佳的 预防治疗 时机 ，造成 严重 的经济
猪水疱病 Ｉ ＝ Ｉ ＿ Ｉ ｌ 。 Ｉ ＿ ｌ ｌ ＝ ： Ｉ ＝ Ｉ 方法
损失 。本研究通过建立 Ｓ Ｖ Ｄ Ｖ反转录一 巢式 Ｐ Ｃ Ｒ（ Ｒ Ｔ — ｎ Ｐ Ｃ Ｒ）方 法 ，开 展对 防治 奠定基础 。
合酶 １ Ｉ ＊ １ ，ｄ ｄ Ｈ ２ ０１ ３ ． ６ ｔ ｘ ｌ 。
反 应 条 件 ：９ ４ ｑ Ｃ预 变 性 ５ ｍｉ ｎ ：
的建立 及初步应 用
１ 材 料 与 方 法
Ｓ Ｖ Ｄ的快速 诊断研 究 ，为猪水 疱 病的
９ ４ ℃变性 ４ ５ ｓ ；５ ８ ℃退火 ４ ５ ｓ ，７ ２ ℃延伸 ４ ５ ｓ ，５个循环 ；９ ４ ￣ ｛ ２ ，５ ｍｉ ｎ ；９ ４ ℃变性
物 ．进 行 ＲＴ— Ｐ ＣＲ 检 测 方 法研 究 结
口炎 、猪水疱性疹的反转 录 Ｄ Ｎ Ａ作 为
模版 ，稀 释至标准浓度 ，按 １ ． ５所述 的 反应体系和条件进行 Ｒ Ｔ — Ｐ Ｃ Ｒ扩增。
１ ． ９ 敏 感性 检 测
果表 明 ．能够 扩增 的基 因片段 大 小为
６ ８ ７ ｂ ｐ ． 与 Ｇｅ ｎ Ｂ ａ ｎ ｋ收 录 的 相 关 序 列 同
石鑫 张 皓 孙颖 朱 文宇 １ ． １ 样品与对照病毒株 一 辽宁 省 医学 院畜 牧兽 医学 院
２ ０ ｓ ；５ ４ ℃退 火 ３ ０ ｓ ，７ ２ ℃延伸 ３ ０ ｓ ，３ ０
个 循环 ；７ ２ ％ ，５ ｍｉ ｎ 。
１ ． ６ 最佳 退 火 温度 的 确 定
采 自辽 宁பைடு நூலகம் 锦州 地 区养猪 户或 养
变 。内外 引 物的最佳 退火 温度 均根 据
目的条 带 的 亮 度 确定 。 １ ． ７ Ｐ Ｃ Ｒ 产 物 的 克 隆 和测 序
Ｔ ａ ｋ ａ ｒ ａ Ｅ ｘ Ｔ ａ ｑ聚合酶 等均 购于 大连宝 生物 公司 、Ｄ Ｎ Ａ纯化 回收试剂 盒购 白
天 根 生 化科 技 （ Ｊ Ｌ 京 ）有 限 公 司 ；Ｐ Ｃ Ｒ
猪场 水疱性疾 病的水疱 液或水 疱皮 ６ ２ 份 ；对 照毒株 为 口蹄 疫病 毒 、水疱性 口炎均 由辽宁 医学 院预防 兽 医实验室
外 引 物 最 佳 退 火 温 度 确 定 ：在 其
他 反应条件 不变 ，对 第一轮 Ｐ Ｃ Ｒ的退 火温度 进行 温度梯 度 Ｐ Ｃ Ｒ．退 火温 度 范围为 ５ ６ — ７ ０ ℃：外 引物最佳退 火温度 确 定 ：在确定外 引物最佳 退火温度后 ， 使 用 内引物进行 温 度梯 度 Ｐ Ｃ Ｒ．退 火
ＧＡＣＡＡＣＴｒ； Ｐ ２－ ｒ 【 ＴＧＣＴＦ ＧＴＣＡＡＡＣＣＴ ＧＧＣ。
测 方 法 并初 步 应 用 于 临 床 检 测 。 根 据
Ｇｅ ｎ Ｂ ａ ｎ ｋ上 发 表 的猪 水疱 病 １ ６ Ｓ ｒ ＲＮＡ
分 别提 取 口蹄 疫病 毒 、猪水 疱 性
基 因序 列 ．设 计 内、外 ２对特 异性 引
温 度 范 围为 ５ １ — ５ ５ ￣ Ｃ．其 他 反 应 条 件 不
保存 ，猪 水疱 性疹病 毒基 因片 段质粒
由辽 宁 医 学 院 实 验 动 物 中心 惠 赠 。
．
王
１ ． ２ 主 要 试 剂 与仪 器
萎 譬
＊ ０
全 血 基 因组 Ｒ Ｎ Ａ提 取 试 剂 盒 ．反
转 录试 剂 盒 。质 粒 小量 制 备 试剂 盒 、 Ｄ Ｈ ５ ￣ ｘ感 受 态 菌 和 ｐ ＭＤ １ ８ 一 Ｔ Ｖ ｅ ｃ ｔ ｏ ｒ 、
源性 高达 ９ ３ ． ２ ％． 对 ６ ２份 样 品 进 行 了 检 测 ． 阳性 率 为 ２ ２ ． ５ ８ ％。 关 键 词 ：猪 水 疱 病 ；ＲＴ－ Ｐ Ｃ Ｒ ；建 立 ；
应 用
提 取 阳 性 猪 水 疱 病 病 毒 反 转 录
内引 物 ：Ｐ ３ ～ ＡＣ Ｔ ｒ Ｇ Ｇ Ｇ Ａ Ｇ Ｃ Ｇ Ｇ Ａ Ｃ