第二章 紫外-可见分光光度法在食品检测中的应用
紫外可见分光光度计在食品检测中的应用研究
食品科技紫外可见分光光度计在食品检测中的应用研究刘羿希(贵州省检测技术研究应用中心，贵州贵阳 550014)摘 要：随着社会的发展和科技的进步，食品安全问题已经成为人们关注的焦点。
为了确保食品的安全性，需要采取一系列的检测措施，以保障公众的健康。
紫外可见分光光度计作为一种高效的分析工具，近年来在食品检测中得到了广泛的应用。
基于此，本文阐述紫外可见分光光度计的组成及其特点、紫外可见分光光度计在食品检测中的作用及其在食品检测中的应用。
关键词：紫外可见分光光度计；食品；检测；应用Study on the Application of Ultraviolet VisibleSpectrophotometer in Food DetectionLIU Yixi(Guizhou Testing Technology Research and Application Center, Guiyang 550014, China) Abstract: With the development of society and the progress of science and technology, food safety has become the focus of attention. In order to ensure the safety of food, a series of testing measures need to be taken to protect public health. Ultraviolet-visible(UV-VIS) spectrophotometer, as an efficient analytical tool, has been widely used in food detection in recent years. Based on this, this paper describes the composition and characteristics of UV-VIS spectrophotometer, the role of UV-VIS spectrophotometer in food detection and its application in food detection.Keywords: ultraviolet visible spectrophotometer; food; detection; application食品安全问题一直是备受公众关注的焦点问题。
紫外-可见分光光度法在食品分析中的应用
紫外-可见分光光度法在食品分析中的应用摘要：文章综述了紫外可见分光光度计工作原理、特点及在食品检测中的应用。
关键词：紫外-可见分光光度法；紫外分光光度计；食品检测引言：紫外可见分光光度计对于分析人员来说是最有用的分析工具之一，几乎每一个分析实验室都离不开紫外可见分光光度计，在食品检测中同样也是如此，它可以用来进行食品的多种成分分析和检测，应用十分广泛。
1．1 紫外可见分光光度法紫外可见分光光度法是利用物质分子对紫外可见光谱区的辐射的吸收来进行分析的一种仪器分析方法。
这种分子吸收光谱产生于价电子和分子轨道上的电子在电子能级间的跃迁，它广泛用于无机和有机物质的定性和定量分析。
朗伯一比耳定律是光吸收的基本定律，俗称光吸收定律，是分光光度法定量分析的依据和基础。
当一束平行单色光通过单一均匀的、非散射的吸光物质溶液时，溶液的吸光度与溶液的浓度c和液层厚度b的乘机成正比：A=a×b×c(式中，a为吸光系数)1．2 紫外可见分光光度计紫外可见分光光度计是基于紫外可见分光光度法的原理工作的常规分析仪器。
根据光路设计的不同，紫外可见分光光度计可以分为单光束分光光度计、双光束分光光度计和双波长分光光度计。
各种型号的紫外可见分光光度计，就其基本结构来说，都是由5个基本部分组成，即光源、单色器、吸收池、检测器及信号指示系统。
1.2.1. 光源：提供入射光的装置；（1）钨灯或碘钨灯：发射光 范围宽，但紫外区很弱， 通常取此 >350nm 光为可见区光源灯或氘灯：气体放电发光光源，发射150~400nm的连续光谱，区，同时配有：稳压电源（稳定 I0 ）；光强补偿装置；聚1.2.2. 单色器：将来自光源的光按波长的长短顺序分散为单色光并能随意调节所需波长光的一种装置。
（1）色散元件——把混合光分散为单色光的元件是单色器的关键部分！）常用的元件有：棱镜——由玻璃或石英制成，它对不同 的光有不同的折射率，将复合光分开但：光谱疏密不均 长 区密，短 区疏光栅——由抛光表面密刻许多平行条痕（槽）而制成，利用光的衍射作用和干扰作用使不同 的光有不同的方向，起到色散作用。
紫外可见分光光度计在食品检测中的应用
紫外可见分光光度计在食品检测中的应用摘要：紫外可见分光光度计是食品检测中常用的测量仪器，仪器的本身特性以及工作性能直接决定了食品检测的质量，所以，如何有效利用光度计对食品进行检查对于食品安全以及食品行业的可持续发展具有重要意义。
本文结合紫外可见分光光度计的工作原理和特点，分析了其在食品检测中的应用。
关键词：紫外可见分光光度计；食品检测；应用分析人力社会的快速发展以及人口的极速膨胀使得食品安全已经成为影响人类发展的重要问题，如何在食品生产过程中，严格检查食品质量，从而分析食品成分成为关键。
紫外可见分光光度计是检测食品成分的仪器之一，它不仅可以清楚检测出食品的结构组成，而且没有污染，不会对食品本身造成影响，是食品检测应用最为广泛的仪器。
1仪器概述紫外可见风光光度计是食品检测分析人员最为常用的仪器之一，大部分的分析实验室所使用的都是这种仪器，在食品检测中具有良好的应用效果，它能够测量和分析食品的内在成分，从而检测出食品的生产是否符合卫生规范，是否会对人们身体造成有害的影响。
紫外可见分光光度计的合理应用对于食品行业的进步和发展具有现实作用。
1.1紫外可见分光光度法的应用不同物质分子对于紫外可见光谱的辐射和吸收程度不同，利用这一特点，就可以参考相应的光谱表进行物质成分的测量，紫外可见分光光度法就是利用这一原理进行物质成分的分析。
物质分子外的电子会吸收光谱产生的电子，然后发生阶跃，不同分子的电子价位不同，所产生的阶跃也不同，所以可以用来进行无机物与有机物的测定，对其进行定量和定性的分析。
分光光度法的理论依据是比耳定律，也被称为光吸收定律，当入射光源的光波长一定时，溶液吸光度与吸光物质浓度和介质厚度存在函数关系，利用这种关系，只要测出其中两个物理量，便可以求出另外的物理量。
1.2紫外可见分光光度计紫外可见分光光度计所应用的原理就是紫外可见分光光度法，是物质分析的常用仪器。
根据光度计光路设计的不同可以将其分为三类，分别是单光束分光光度计、双光束分光光度计以及双波长分光光度计。
紫外可见分光光度法在食品包装材料检测中的应用
紫外可见分光光度法在食品包装材料检测中的应用紫外可见分光光度法在食品包装材料检测中的应用1. 紫外分光光度法简介紫外可见分光光度（UV-vis）是一种物质吸收到紫外及可见光的能量的光谱分析技术，是一种非破坏性检测方法，是进行食品中污染物、报警物质和有机物含量等快速检测的常用技术。
2. 紫外分光光度法在食品包装材料检测中的应用（1）检测含有机物的含量：紫外分光光度法可以有效检测食品包装材料中石油类、香精、活性剂等有机物的含量，可有效控制污染物和有害物质的增加，维护食品安全。
（2）检测染料的残留：紫外分光光度法可以有效检测食品包装材料中的各种染料和可以能有毒的残留物，这样可以有效控制这些有害物质影响食品的安全性。
3. 紫外分光光度法的优势（1）精度高：紫外可见分光光度分析仪操作简单，自动化程度高，可获得高精度、高灵敏度的试验结果。
（2）操作快速：紫外分光光度法操作简单速度快，检测时间短，可以快速获得检测数据，大大减少了研究时间和成本。
（3）检测范围广泛：紫外分光光度法可以用于检测各种类的物质，具有检测范围广泛的优势。
4. 紫外分光光度法的局限（1）分析精度受材料影响大：不同的包装材料会影响分析仪的检测准确性，所以检测的精度不可避免的会受影响。
（2）结果不易定量：由于紫外分光光度技术提供的检测结果更多是定性的，而不是定量的，所以不容易用定量来说明检测结果。
（3）测量结果受抗干扰性影响：受外部干扰比较大，结果可能不稳定，容易造成出现偏差。
5. 结论紫外可见技术是一种快速、高效、准确、准确、无需特殊处理的物质分析技术，在食品包装材料检测中具有重要的作用。
尽管存在抗干扰性等操作难度的问题，但只要正确操作，紫外可见分光光度法仍然可以提供准确可靠的检测结果，为食品包装材料检测提供了一种新的可能。
紫外可见分光光度计在食品检验中的应用研究
紫外可见分光光度计在食品检验中的应用研究摘要：随着人们生活水平的逐渐提升，对食品安全越来越关注。
在这种背景下，充分发挥现代化科学技术在食品质量检验中的优势作用，逐渐引起业界的广泛关注和应用。
其中，紫外可见分光光度计的有效应用，不仅降低了食品检验的资金消耗，而且检验速度以及精准度都比较高，能够灵敏检测出食品中的有害成分。
因此加强对技术的深度分析和研究，掌握更加科学完善的应用策略，具有重要的现实意义。
本文主要讲述了紫外可见分光光度计的特点，并重点探究其在食品检验中的应用策略，旨在进一步提升检验效果，为人们提供更加安全的食品供应。
关键词：紫外可见分光光度计；食品检验；应用在市场经济发展背景下，食品安全问题引起了全社会的关注。
加强对食品的质量检验，促进检验技术的创新和优化逐渐提上日程。
其中紫外可见分光光度计的应用最为广泛。
该种方式主要是采用定性、定量以及结构分析等方式开展食品的物质构成检验。
一、特点分析（一）应用广泛只要检测物质能够对紫外光进行吸收，就可以使用这种检测方式进行食品检测。
利用这种方式，可以对化学元素周期表中的任何一种元素进行检测。
【1】其主要的检测内容包括：物质分子构成，有机物含量，从而检验食品的质量。
开展食品实验，研发食品新型生产工艺。
（二）成本较少该种检测方式使用的仪器设备价格不高，检测过程中资金应用较少，对仪器的耗损较低，对总体的检测成本占用较少。
（三）效率高这种检测方式对具体的实施操作流程和条件要求较低，方便进行操作，并且流程较为简单，且耗费时间较少，在对保质期时间较短的食品检测中应用最多。
此外，该种检测方式促进了食品检测的机械化和智能化，进一步提升了检测准确率和检测效率。
【2】（四）精准度高相较于传统的光度检测方式，可见分光光度法极大程度上提升了检验准确度，将检测误差控制在了合理的范围之内。
（五）灵敏度高在科学技术迅猛的发展背景下，研究出了很多新显色剂。
在此基础上进一步提升了元素测定实验的灵敏度。
紫外可见分光光度计在食品检测中的应用
Jun. 2020 CHINA FOOD SAFETY145食品科技目前，在我国紫外可见分光度计法应用在很多的行业中，比如医疗行业、环境科学行业、材料科学行业等等，其中在食品行业也有着很重要的作用，其主要表现在食品检测中。
随着经济水平的飞速提高，人们对生活质量的要求越来越高，相应的对食品质量的要求也越来越高。
近些年来，接连不断的食品安全事故的发生使人们越来越注重食品质量，因此严格的食品检测是十分重要的，本文对食品检测中紫外可见分光度计法的应用做了简要介绍。
1 紫外可见分光光度计在食品检测中的应用1.1 检测食品中的重金属含量目前，食品重金属的问题是世界上各个国家都很重视的一个问题，在我国亦是如此，我国对食品添加剂中重金属的含量有着严格的测定。
紫外可见分光光度计可以测量食品添加剂中砷、铅、铜的含量。
比如，利用紫外可见分光光度计，采用碘、四氯化碳萃取光度法间接测定食品中的痕量铜方法，在酸性介质中，Cu 2+氧化I -定量析出I 2，碘-四氯化碳经萃取后用分光光度法进行测定，即可间接测定出食品中的痕量铜[1]。
1.2 检测食品中农药等的含量农药是很多农产品生产中会使用的一种药品，他可以保障农作物的质量促进其生产，农药具有高效的特点，且被广泛应用在食品领域，因此检测食品中农药等的含量是十分重要的。
紫外可见分光光度计法是测量食品中农药含量的方法之一，这种方法操作简单，灵敏度高。
通过紫外可见分光光度计方法检测食品中的农药含量的具体方法为选取样品，然后提取样品中的成分，净化、显色反应、测定。
这种方法现在普遍应用在食品的农药检测中。
1.3 检测食品中的硝酸盐紫外可见分光光度计是我国食品行业中检测硝酸盐的最普遍方法之一，检测过程简便且准确。
目前很多的食品企业选用紫外可见分光光度计法来检测食品中的硝酸盐含量[2]。
1.4 检测食品中的甜蜜素目前，在食品领域中可检测食品中甜蜜素的方法有很多，但有很多方法在应用过程中还存在着一定的缺陷，比如红外分光光度计法，这种方法在检测食品的甜蜜素的时候操作十分复杂，需要耗费一定的时间才能完成。
紫外可见分光光度计在食品检测中的应用
紫外可见分光光度计在食品检测中的应用作者：蔡方浩来源：《名城绘》2019年第03期摘要：民以食为天，食以安为先。
这就要求有关部门采用适宜的方法检测食品成分，确保食品质量和食品安全。
紫外可见分光光度计对于分析人员来说是最有用的分析工具之一，几乎每一个分析实验室都离不开紫外可见分光光度计，在食品检测中亦是如此，可以用来进行食品的多種成分分析和检测，应用十分广泛。
本文主要就紫外可见分光光度计在食品检测中的应用进行了研究。
关键词：紫外可见分光光度计；食品检测；应用1、紫外可见分光光度法与紫外可见分光光度计紫外可见分光光度法，是按照物质分子对波长为200-760nm这一范围的电磁波的吸收特性所建立起来的一种定性、定量的分析方法，并且还可以用来进行结构分析。
光吸收定律，即朗伯-比耳定律。
一束平行单色光通过均匀、非散射的吸光物质溶液时，在入射光波、强度以及溶液温度等保持不变的时候，该溶液的吸光度A与其浓度C及液层厚度L的乘积成正比。
紫外可见分光光度计是基于紫外可见分光光度法的原理工作的常规分析仪器。
根据光路设计的不同，紫外可见分光光度计可以分为单光束分光光度计、双光束分光光度计和双波长分光光度计。
各种型号的紫外可见分光光度计，就其基本结构来说，都是由5个基本部分组成，即光源、单色器、吸收池、检测器及信号指示系统。
2、紫外可见分光光度计的特点（1）应用广泛。
无机物和有机物在紫外可见区都有吸收，均可借此法加以测定。
除少数放射性元素和惰性元素外，几乎化学元素周期表中的所有元素均可采用此法测定。
在食品检验中，利用紫外可见分光光度法能分类绝大部分的食品：可检测出食品的分子构成、其中有机物含量，借此判断食品质量；可应用于食品实验，创新食品生产技术。
（2）仪器价格相对低廉且分析成本低。
我国的食品企业基本上都属于中小型企业，这些企业的规模小、利润低，企业可以通过降低食品的检测费来增加盈利。
紫外可见分光光度计在使用过程中仪器几乎没有大的耗损，此外仪器的价格也不是很贵，分析成本较低，适合像食品企业的中小企业使用。
紫外分光光度法在食品检测及食品安全分析中的应用
紫外分光光度法在食品检测及食品安全分析中的应用作者：董静吕肖楠来源：《食品安全导刊·中旬刊》2022年第01期摘要：紫外可见光分光光度法是利用物质对不同波长范围内紫外可见光的吸收能力不同对物质进行定性和定量分析。
食品是人们生活必需的物质，对其成分进行检测和安全分析具有重要的意义。
紫外可见光分光光度法由于具有操作简单、灵敏度高、适用范围广等优点被广泛应用于食品检测和安全分析中。
关键词：紫外可见光分光光度法;食品检测;食品安全Abstract： UV-Vis spectrophotometry can be used for qualitative and quantitative analysis of substances because of their different absorbability to UV-Vis light in different wavelengths. Food is a kind of necessary substance for human life， and it is of great significance for the analysis of its composition and food safety. UV-Vis spectrophotometry is widely used in food detection and safety analysis because of its simple operation， high sensitivity and wide range of application.Keywords： ultraviolet and visible spectrophotometry; food testing; food safety紫外-可見光分光光度法被广泛应用于生命科学、环境科学、农业科学、食品安全、医疗卫生以及化工等领域。
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a）接通电源、打开开关，打开 样品室，预热10min b）打开软件
c）选择测试模式，设置波长
d）空白液调零
TU-1901紫外可见分光光度计
e）测试样品
ห้องสมุดไป่ตู้
3). 双波长分光光度计： 通过切光器使两束不同波长的光交替通过 吸收池，测得吸光度差ΔA。
a）可测多组份试样、混浊试样； b）不需参比液(消除了由于参比池的不同和制备空 白溶液等产生的误差)； c）通过波长的选择方便地校正背景吸收，消除吸 收光谱重叠的干扰； d）克服了电源不稳而产生的误差，灵敏度高。
2950
型
4).多通道分光光度计
光源 透镜 吸收池 光栅 光电二极管阵列 检测器
可光谱扫描、光度测量、 定量测量、时间扫描； 扫描速度快；
TU-1800SPC 紫外-可见分光光度计
5)新型分光光度计展示
适于多种形状 吸收池
光度计PhotoLab Spektral 便携性
DR2700型便携式分光光度计
2）标准对比法： 该法是标准曲线法的简化，即只配制一个 浓度为cs的标准溶液，并测量其吸光度， 求出吸收系数k，然后由Ax=kcx求出cx 该法只有在测定浓度范围内遵守L-B定律， 且cx与cs大致相当时，才可得到准确结果。
b. 多组分定量方法 由于吸光度具有加和性，因此可以在同一试样中 测定多个组份。 设试样中有两组份X 和Y，将其显色后，分别绘 制吸收曲线，会出现如图所示的三种情况：
（2）定性分析方法： ♥与标准品、标准谱图对比 ♥对比吸收光谱特征数据 ♥对比吸收度的比值
（3）紫外-可见光谱定性分析的局限？
有机化合物紫外吸收光谱反映结构中生色团和助 色团的特性，不完全反映分子特性：紫外吸收光 谱只有2～3个较宽的吸收峰，具有相同生色团的 不同分子结构，有时在较大分子中不影响生色团 的紫外吸收峰，导致不同分子结构产生相同的紫 外吸收光谱——紫外吸收光谱相同，两种化合物 有时不一定相同。 例如：甲苯与乙苯：谱图基本相同
（4）紫外光谱用于有机化合物结构辅助解析
a.可获得的结构信息 1）200～800nm 无吸收峰。脂肪族碳氢化合物、胺、醇、 卤代烃等，不含双键或环状共轭体系，且无醛、酮或溴、 碘等基团。 2） 270～350 nm有弱吸收峰（ε=10～100）而无其它强吸 收峰则说明仅含非共轭的具有n 电子的生色团发生的 n→π* 跃迁（R带） 3） 250～300 nm 有中等强度的吸收峰（ε=200～2000）, 芳环的特征吸收（具有精细结构的B带）。 4） 210～350 nm有强吸收峰（ε≥104），表明含有两个双 键的共轭体系（K）带。共轭二烯：K带（∼230 nm）； α,β-不饱和醛酮：K带∼230 nm，260nm～350 nm有强 吸收峰——3～5个双键的共轭体系。
2、蛋白酶活力测定 中性蛋白酶、酸性蛋白酶、碱性蛋白酶 制备粗酶液时所用缓冲液的pH值不同 常用方法：福林-酚法
福林-酚法
原理:福林-酚试剂(磷钨酸和磷钼酸混合试 剂)在碱性条件下极不稳定，易被酚类化合 物还原而呈蓝色反应（钨兰和钨兰混合 物）。由于蛋白质中含有具有酚基的氨基 酸（酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸），因此， 蛋白质及其水解产物也呈此反应。利用蛋 白酶分解酪素（底物）生成含酚基氨基酸 的呈色反应，来间接测定蛋白酶的活力。
=ε 1bc+ ε 2bc+……+ ε ibc
(9)定量分析方法：
a、单组分定量方法 1）标准曲线法 ������ 先通过全波段扫描，根据吸收曲线特 征选择入射波长； ������ 配制该物质不同浓度的标准溶液，测 定其在入射波长处对应吸光值； ������ 得到标准曲线后，通过标准曲线法测 定待测试样的浓度。
(6)朗伯-比尔定律中需注意的几个问题： K称为吸收系数，在单色光波长、浓度、溶 剂、温度一定时，K为常数，K常用摩尔吸 收系数ε 表示； 朗伯-比尔定律只适用于单色光、溶液，仪 器分光系统和待测液状态都会影响定量准 确性；
(7)朗伯-比尔定律的偏离及其原因？ 根据朗伯-比尔定律，在同一条件下进行测 定，A-c曲线应为通过原点的直线，但实际 工作中直线常常发生弯曲，这称为朗伯-比 尔定律的偏离。 原因： 吸光物质浓度较高；非单色光引起；介质 不均匀引起；吸光物质不稳定引起。
（3）参比溶液的选择
1）. 溶剂参比：试样组成简单、共存组份少（基体 干扰少）、显色剂不吸收时，直接采用溶剂（多 为蒸馏水）为参比； 2）. 试剂参比：当显色剂或其它试剂在测定波长处 有吸收时，采用试剂作参比（不加待测物）； 3）. 试样参比：如在测定波长处显色剂无吸收而试 样基体有吸收，且试样基体不与显色剂反应时， 可以试样作参比（不能加显色剂）； 4）.褪色参比：显色剂和被测试样均有颜色，则在 一份试液中先加掩蔽剂，再按测定方法加入显色 剂等其它试剂作为参比。
标准曲线的绘制
L-酪氨酸标准溶液按下表配制。
试管号
摩尔吸收系数ε ： 1mol/L浓度的溶液，液层厚度为1cm时的吸 收度。 强吸收：ε ＞104； 中等强度吸收：102 ＜ ε ＜ 104； 弱吸收： ε ＜102； 摩尔吸收系数不能直接测得？
(8)吸光度加和性：
在多组分共存的溶液体系中，体系的总吸 收度等于各组分吸收度之和，在任意波长 下，共存的多组分中各组分遵守朗伯-比尔 定律。这是多组分定量的基础。 A总=A1+A2+……+Ai
c.
4、紫外-可见分光光度计的构成、类型和使用
（1）构成：光源、单色器、吸收池、检测器、 信号处理器、显示器
可见光源：碘钨灯、钨灯：320-2500nm 紫外光源：氢灯、氘灯、汞灯：150-400nm
玻璃吸收池：仅用于可见光区 石英池：可用于紫外光区和可见光区
短光程微量比色皿
标准比色皿
3、吸收曲线对物质定性、定量的基础及方法？ （1）定性基础：吸收曲线上的λ max、λ min、 肩峰以及整个吸收光谱的形状，决定于物质的性 质，其特征随物质结构而异，所以它是物质定性 的依据。（P171） 不同物质为什么会在特定的波长产生吸收峰？
——不同物质的结构不同或者说其 分子能级的能量(各种能级能量总和) 或能量间隔各异，因此不同物质将 选择性地吸收不同波长或能量的外来 辐射，这是UV-Vis定性分析的基础。 （P164-166:电子跃迁的种类）
注意事项：
粗酶液制备时根据目标酶的性质选择缓冲液、温度、 时间等条件； 酶和底物的反应条件也要恰当； 一般以检测产物变化量居多。
二、紫外-可见分光光度法 在食品检测中的应用
（一）、食品酶分析 1、-半乳糖苷酶（乳糖酶） 以ONPG（邻硝基苯β-D-半乳吡喃糖苷）为 底物测定-半乳糖苷酶活力。
通用型微量池
遮光板
专用超微量比色皿
微量池架
玻璃吸收池和石英池的辨别？
吸收池的配对？
（2）紫外可见分光光度计的类型和使用： a）开机预热 1）. 单光束分光光度计：
可定量分析； 不能自动扫描吸收曲线。
b）波长设置 c）设置测试模式 d）调零 e）测样品，读数
752型紫外-可见分光光度计
2). 双光束分光光度计：
邻-硝基苯酚（ONP）： 黄色，420nm有特异吸 收
“不同豆类乳糖酶活力的研究”
样品处理：红豆、绿豆、花生、黄豆→发芽→取10g →加 20mL预冷的缓冲液A（0.1mol/L磷酸缓冲液，pH为7.0、内 含5%甘油和1mmol/L EDTA），冰浴研磨，5000r/min冷冻 离心10min，收集上清液待测。 反应：0.2mL 5mmol/L ONPG、0.2mL pH4.0的0.1mol/L NaAc-HAc缓冲液和0.1mL稀释25倍的各种粗酶液，在50℃ 水浴中准确反应15min后加1.0mL 0.2mol/L碳酸钠溶液终止 反应。 测定：紫外分光光度计420nm测反应液的吸光度。 计算：根据产生的ONP的量计算酶活力。酶活力单位定义为： 在规定条件下，每分钟在420nm波长下每增加0.001个吸光 度单位所需的酶量。
试剂和溶液
乳酸缓冲液（pH=3.0）适用于酸性蛋白酶 磷酸缓冲液的制备（pH=7.5）适用于中性蛋白酶 硼酸缓冲液(pH=10.5) 适用于碱性蛋白酶 0.4mol/L碳酸钠溶液 0.4mol/L的三氯醋酸液 10.00mg/ml酪素溶液 100μ g/ml酪氨酸标准溶液 福林-酚试剂
粗酶液制备：
称取经研磨的样品5g，置于100 mL容量瓶中。 测中性蛋白酶则加pH7.5的磷酸盐缓冲液50 mL 在25℃浸提1h, 测酸性蛋白酶则加pH 3. 0的乳酸 -乳酸钠缓冲液50 mL在25℃浸提1h, 测碱性蛋白 酶则加pH10.5的硼砂氢氧化钠缓冲液50mL在 25℃浸提1h，浸提完成后用相应的缓冲液定容 至100mL，然后取滤液进行酶活力测定。
操作过程：即先将酶和底物（酪蛋白）在 一定条件下反应一段时间，然后终止反应， 再取一定量的反应液和福林酚试剂发生显 色反应，最后用分光光度法检测生成的呈 色物质的量。
GB/T23527-2009 ：蛋白酶活性的测定
所需仪器和设备
分析天平：精度0.0001g 恒温水浴：精度±0.2℃ 计时表 分光光度计 沸水浴器 振荡混合器 pH计: 精度0.01pH单位
第二章 紫外-可见分光光度法 在食品检测中的应用
一、紫外-可见分光光度法简介
1、什么是紫外-可见分光光度法？ 根据物质分子对波长为200-760nm这一范 围的电磁波的吸收特性所建立起来的一种 定性、定量和结构分析方法。
2、什么是吸收曲线（吸收光谱）？ 描述物质分子对辐射吸收的程度随波长而 变的函数关系曲线。 具体做法：让不同波长的光通过待测物， 经待测物吸收后，测量其对不同波长光的 吸收程度(吸光度A)，以吸光度A为纵坐标， 辐射波长为横坐标作图，得到该物质的吸 收光谱或吸收曲线。 吸收光谱的产生：运动的分子外层电子→ 吸收外来辐射→产生电子能级跃迁→分子 吸收谱