木麻黄小枝总RNA提取方法的比较与优化
云南栘[木衣]叶片总rna提取方法的比较与改进
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西北林学院学报2020!35)3*+95-99JournalofNorth=estForestry?niversitydoi+103969,jissn1001-746120200315云南栘［木衣&十片总RNA提取方法的比较与改进慈晓彤12!石辰12!王大玮12%!沈莲文12!何承忠12!蔡年辉12!段安安12)1西南林业大学!云南省高校林木遗传改良与繁育重点实验室!云南昆明650224#2西南林业大学!西南山地森林保育与利用省部共建教育部重点实验室!云南昆明650224*摘要：高质量RNA的提取是开展云南栘+木衣］分子生物学研究的前提$采用OMEGA(Plant RNA Kit50)试剂盒、TIANGEN(TRNzo-A+Reagent)试剂盒、CTAB法、Trizol法、SDS法及其改良法6种方法提取云南栘+木衣，叶片的RNA#并用琼脂糖凝胶电泳、核酸蛋白检测仪及RT-PCR技术比较了6种不同方法提取的总RNA样品的质量$结果表明，2种试剂盒法和trizol 法不适合云南栘+木衣］RNA提取，无法得到28S、18SrRNA条带，CTAB法和SDS法虽能得到RNA的3条带，但拖带现象严重,A260(A230的比值较低，对SDS法进行改进，提高.-巯基乙醇的量，在缓冲液中增加PLP，使用HiBind RNA Mini柱，有效地抑制多酚多糖的污染，得到了较高质量、可用于RT-PCR扩增的云南栘+木衣］的RNA$对其开展分子生物学研究提供技术支撑$关键词：云南栘+木衣,；叶片；RNA；比较与改进中图分类号:S722.39文献标志码:A文章编号：1001-7461(2020)03-0095-05ComparisonandImprovementofTotalRNA E xtraction MethodsfromA)0=n/a;ela?a=/Leaves=*X-7G.AG0112!+3*=,E012!O4:;V7.FE-12%!+3L:)-70.FE012!3L=,E01.\,G0112!=4*:-70.,9-12!V>4:40.7012(19Qe=7a2)rat)r=3)r<)re t Genet/0an;TreeR4pr)?e4entL(r)pagat/)n/n>n/?er/t/e)3M+nnan(r)?/n0e!#)+t-Ce t<)re t r=>n/?er/t=!Q+n4/ng650224!M+nnan!C-/na#29Qe=7a2)rat)r=3)r<)re t Ge)+r0eC)n e r?at/)nan;>t/l/Pat/)n/nt-e#)+t-Ce t I)+nta/n)3C-/na!#)+t-Ce t<)re t r=>n/?er/t=!Q+n4/ng650224!M+nnan!C-/na)4?@AB7CA+RNAextractionisaprerequisitefor molecularbiologyresearchof A)0=n/a;ela?a=/!aprecious treespeciesoccurringinsouth=esternChinaInthisstudy!OMEGA(PlantRNA Kit50)kit!TIANGEN (TRNzol-A+Reagent)kit!andthemethodsofCTAB!Trizol!SDS!andimprovedSDS=ereusedtoextract totalRNAfrom A9;ela?a=/leaves The amounts of total RNA extracted by di f erent methods=ere com-paredbygelelectrophoresis!nucleicacidprotein meterandRT-PCR Theresultssho=edthatthet=okits andtrizolmethod=erenotsuitableforRNAextractionbecause28Sand18SrRNAbandscouldnotbeob-tained CTABandSDSmethodscouldobtainthreebandsofRNA!butthetailingphenomenon=asserious! theratioofA260,A230=aslo=er SDS methodcouldbeimprovedbyincreasingtheadditionof.-mercapto-ethanol!addingPLPinthebu f er!andusingHiBindRNAMinicolumn!=hiche f ectivelyinhibitedthecon-tamination of polyphenol polysaccharide!and a higherquality RNA to be used for RT-PCR amplification couldbeobtainedItlaidthefoundationforitsmolecularbiologyresearchDE/FGBH@+A)0=n/a;ela?a=/#leaf#RNA#comparisonandimprovement云南栘［木衣%(Aoc=nia；elava=i)为蔷薇科(RosBceeie)栘［木衣］属(Doc=nia)植物，主要分布于收稿日期2019-08-17修回日期2019-11-27基金项目：国家林业和草原局林业科技发展项目（KJZXSA2019036*云南森林资源培育与利用协同创新中心开放基金。
不同温度处理对两种木麻黄单宁提取的影响
关 键词 ： 温度 ； 黄 ； 宁 木麻 单
中图分 类号 ： ４．４ Ｑ９６８
文 献标 识码 ： Ａ
文章编 号 ：４８ ４９２０）４０８—４ ０３— ７ （存在 于植 物 中 的水 溶性 多 酚类物 质 ， 是
１ １ 材 料 ．
维普资讯
第４ ６卷
第 ４ 期
厦 门大 学 学报 （ 自然科 学版 ）
Ｊ ｕ ｎ ｌｏ ａ ｅ ｉｅ ｓｔ （ ｔ ｒ ｌＳ ｉｎ ｅ ｏ ｒ ａ ｆＸｉｍ ｎ Ｕｎ ｖ ｒｉｙ Ｎａ ｕ ａ ｃｅ ｃ ）
Ｖｏ ． ６ ＮＯ ４ １４ ．
摘要 ： 研究 了在不 同的烘 干温度 （０６ 、０ １５ ） 件下 ， 木麻黄 （ ａｕｒ ａｇａｃ ） ４ 、 ８ 、０￣ 条 ０ Ｃ 粗枝 Ｃ ｓａｉ ｌｕａ 和细枝木 麻黄 （ ．ｕｎｎ — ｎ ｃ ｃｎｉ ｇ
ｈ ｍｉｒ ） 可 提 取 的 总 酚 、 溶 态 缩 合 单 宁 、 维 素 结 合 态 缩合 单 宁 、 白质 结 合 态 缩 合 单 宁含 量 的 变 化 ． 果 表 明 ： ａ ａａ 中 ｉ 可 纤 蛋 结 粗 枝 木 麻 黄 在 ６ ＂ 可 提 取 的 总 酚 含 量 最 多 ； 枝 木 麻 黄 在 ８ ￣ 提 取 的 总 酚 含 量 最 多 ． 枝 木 麻 黄 中 的 可 溶 态 缩合 单 ０Ｃ时 细 ０ Ｃ可 粗
量 １ ０ ． １ 购 自中 国医药 （ 团 ） 海化 学试剂 公 司． ７ １８ ， 集 上
ＵＶ－１ ０紫外 可 见分 光光 度计 ． ２０
１ ２ 样 品前 处 理 ．
将样 品清洗 干 净 ， 放 人 １ ５ 中杀 青 ５ｍｉ ， 先 ０℃ ｎ 分 别置 于 ４ 、Ｏ ８ 、 ０ ℃ 的烘箱 中烘 干 ， Ｏ ６ 、０ １ ５ 然后 将样 品随 机称 取 ０ １ｇ左 右 ， 入 ５ｍＬ丙 酮提 取液 研磨 ， ． 加 浸提
植物组织RNA提取的难点及对策
植物组织RNA提取的难点及对策从植物组织中提取RNA是进行植物分子生物学方面研究的必要前提。
要进行Northern 杂交分析，纯化mRNA以用于体外翻译或建立cDNA文库，RT-PCR及差示分析等分子生物学研究，都需要高质量的RNA。
因此，从植物组织中提取纯度高、完整性好的RNA是顺利进行上述研究的关键所在。
从文献报道上看，有许多植物就是由于未能有效地分离纯化其组织中的RNA，而阻碍了其分子生物学方面研究的进展。
一般认为在这些植物组织中，或富含酚类化合物，或富含多糖，或含有某些尚无法确定的次级代谢产物，或RNase的活性较高。
在完整的细胞内这些物质在空间上与核酸是分离的，但当组织被研磨，细胞破碎后，这些物质就会与RNA 相互作用。
酚类化合物被氧化后会与RNA不可逆地结合，导致RNA活性丧失及在用苯酚、氯仿抽提时RNA的丢失，或形成不溶性复合物；而多糖会形成难溶的胶状物，与RNA共沉淀下来；萜类化合物和RNase会分别造成RNA的化学降解和酶解。
对于这些植物材料，用常规的RNA提取方法（如胍法、苯酚法和十六烷基三甲基溴化胺法等）难以提取出其RNA。
如Lбpez-Gбmez等在用常规的方法提取芒果果实的RNA时未能成功，他们的结果分为三种情况：提出的RNA已被降解；RNA的得率很低；得到的RNA不能进行体外翻译。
他们认为在果实成熟时各种酶的活性增强，其中也包含RNase，不溶性的淀粉转化为可溶性的多糖，芒果果实细胞壁中特殊的成份，以及果实中高含量的多酚化合物都是干扰RNA 提取的因素。
Tesniere等在用苯酚法和胍法提取葡萄果实的RNA时，发现RNA与某种未知化合物凝聚成不溶性的复合物，并且这种未知化合物在230nm和270nm处有强的光吸收，从而干扰了RNA紫外吸收的测定。
因此能否有效地去除多糖、酚类化合物、RNase和干扰RNA提取的其它代谢产物是提取高质量植物RNA成败的关键。
本文根据文献综述了解决上述植物RNA提取过程中难点的相应对策。
木麻黄树皮中活性成分的分离与鉴定
木麻黄树皮中活性成分的分离与鉴定木麻黄树（学名Ephedra sinica Stapf）是一种常见的藤本灌木，广泛分布于中国北方地区和我国西北地区。
其树皮一直以来被广泛应用于民间药物，并且在现代医药领域中也有一定的应用。
木麻黄树皮作为中药材，被广泛用于治疗哮喘、感冒、咳嗽等呼吸系统疾病。
其药理作用主要归功于其活性成分，因此分离和鉴定木麻黄树皮中的活性成分对于深入了解其药理作用以及开发具有更好疗效的药物具有重要意义。
首先，对于木麻黄树皮中活性成分的分离，研究者可以采用以下方法。
传统的方法是采用溶剂提取、分液和纯化分离等方法，然后通过色谱技术（如薄层色谱、柱层析等）进一步纯化。
同时，也可以借助现代方法如液相色谱技术、气相色谱技术等进行分离和纯化。
这些分离技术可以帮助研究者将混合物中的活性成分逐步分离出来，便于进一步研究其结构和药理作用。
在分离得到木麻黄树皮中的活性成分后，下一步是鉴定这些活性成分的化学结构。
针对不同类型的物质，可以采用不同的鉴定方法。
对于有机化合物，常用的鉴定方法包括核磁共振（NMR）技术、红外光谱（IR）技术、质谱（MS）技术等。
通过这些技术的综合应用，可以确定木麻黄树皮中活性成分的化学结构。
此外，为了进一步了解木麻黄树皮中活性成分的药理作用，可以进行一系列的活性测试。
常用的活性测试包括体外抗氧化活性测试、抗炎活性测试、抗菌活性测试等。
这些活性测试可以帮助研究者评估木麻黄树皮中活性成分的生物活性，并为进一步药物开发和临床应用提供科学依据。
总之，木麻黄树皮中的活性成分分离与鉴定是对其药理作用进行深入研究的重要步骤。
通过分离出活性成分并鉴定其化学结构，可以为进一步了解木麻黄树皮的药理作用、开发新药物等提供重要的理论基础。
同时，通过活性测试评估其生物活性，也可以为临床应用提供参考依据。
Wooden Ephedra bark acts as a widely usedtraditional Chinese medicine and has also found applications in modern medicine for various respiratory ailments such as asthma, cold, and cough.To isolate the active components present in Wooden Ephedra bark, researchers can utilize various methods. Traditional methods involve solvent extraction, partitioning, and purification techniques, followed by chromatographic techniques such as thin-layer chromatography and column chromatography to obtain purified compounds. Modern techniques like liquid chromatography and gas chromatography can also be employed for separation and purification. These techniques aid in separating the active components from the mixture, facilitating further investigation into their structure and pharmacological properties.Once the active components are isolated from Wooden Ephedra bark, the next step is to identify their chemical structure. Different identification methods can be employed depending on the type of compound. Common identification methods for organic compounds include nuclear magnetic resonance (NMR) spectroscopy, infrared spectroscopy (IR), and mass spectrometry (MS). Through the integrated application of these techniques, the chemical structures of the active components in Wooden Ephedra bark can be determined.Furthermore, to further understand the pharmacological properties of the active components in Wooden Ephedra bark, a series of bioactivity tests can be conducted. Common bioactivity tests include in vitro antioxidant activity tests, anti-inflammatory activity tests, and antimicrobial activity tests. These tests help assess the biological activities of the active components in Wooden Ephedra bark and provide scientific evidence for further drug development and clinical applications.In conclusion, the isolation and identification of active components in Wooden Ephedra bark is an essential step in understanding its pharmacological properties. By isolating and identifying the active components and determining their chemical structures, it lays a theoretical foundation for the further exploration of the pharmacological effects of Wooden Ephedra bark and the development of novel drugs. Additionally, evaluatingtheir biological activities through bioactivity tests provides a reference for clinical application.。
一种适用于木本植物RNA提取的方法
作者简介:李晓毓(1979-),女,硕士,山西大同人,从事植物分子生物学研究。
3通讯作者 收稿日期:2007-12-06一种适用于木本植物RNA 提取的方法李晓毓1,2 赵德刚13 李丰伯2(1贵州大学农业生物工程省级重点实验室,贵州贵阳 550025;2黄山学院生命与环境科学学院,安徽黄山 245041)摘 要:木本植物富含酚类、多糖等代谢物质,用普通方法提取RNA 时很难将其除去。
选取杜仲叶片做材料,通过比较研究Trizol 、改良CT AB 法和热硼酸盐法三种RNA 提取方法,发现改良CT AB 法提取效果好且简单易行,单位鲜重材料获得的RNA 产量高,电泳条带清晰完整,OD 260/OD 280=1184,是一种适于木本植物RNA 提取的方法。
关键词:木本植物;杜仲;RNA 提取中图分类号 O657 文献标识码 B 文章编号 1007-7731(2007)23-42-01 高质量RNA 的获得是开展分子生物学研究的必要前提,由于RNA 不稳定、易降解,提取的RNA 质量不好,在反转录时往往无法合成c DNA 或是合成的c DNA 链长短不一,给研究带来很多的不便。
因此从植物组织中提取纯度高、完整性好的RNA 尤为重要。
一般来说,草本植物细胞内成分简单,较易提取纯度高的RNA;而有些木本植物富含酚类、多糖等次生代谢物质,这些物质在提取RNA 时很难将其去除,所得的RNA 往往纯度很低,严重影响后续的操作。
杜仲(Euco mm ia ul m oides O live )是一种名贵的经济植物,其细胞内成分复杂,不仅含有酚类、多糖等次生代谢物质,整个植株还布满胶丝———杜仲胶,这些物质的存在给提取纯度高、完整性好的RNA 带来许多不便。
酚类物质在细胞破碎后很容易被氧化为棕红的醌,然后和核酸不可逆的结合,从而引起核酸的降解或形成较难溶于水的沉淀。
多糖的很多理化性质也和核酸相似,往往在去除多糖时也会带走部分的RNA,造成产量的减少。
木本植物老根老叶总RNA的提取方法
Ｅｘｒ ｃｉｎ ｏ ｔａ ｔｏ ｆＲＮＡ ｒｍｌＯｌｅ 【 ｓａ ｄ ｏｓｏ ｆｔ ｄ ｒＬ ｖ ｎ Ｒｏ ｔ ｆＷ ｏ ｄ ａ ｔ ｅ ｏ ｙ Ｐｌｎ
中， 加入 ６ ｌ 提取缓冲液 ， ｍ 振荡 ２ｍｎ充分混匀 ， ｉ， 使细胞充分
裂解 。然后 把样 品管放入 ６ ｏ的水浴 中保 温 ２ ｉ， 不时 ５ｃ ０ ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱｎ并
择分离 ｍ Ｎ 、 Ｎ Ｒ Ａ ｃ Ａ合成及体外翻译等试验的成败 ， Ｄ 在很大 程度上取决于 Ｒ Ａ的质量。常用 Ｒ Ａ的提取方法大多适用 Ｎ Ｎ
沉淀 ，Ｎ Ｒ Ａ则 留在 上清 中 ， 出上清 液放入 另一 离心 管 中 ， 取 加 入２ 体积 乙醇 和 １１ 体 积 ＮＡ ， 分混 匀 ， ／０ ａ ｃ充 混匀后 放 人 一２ ０ ｏ保温 １ ｃ ｈ或更 长时 间 ， 降 Ｒ Ａ 沉 Ｎ 。取 出样 品管 ， １ ３ 以 ２ ０ ０ ｒｍｎ ４℃离心 １ｍｎ去 除上清液 ，Ｎ ／ ｉ， ５ ｉ， Ｒ Ａ沉淀滞 留管底 。加 入 ７％的冷 乙醇 （ ２ ０ 一 ０℃ ） ｌ清洗 管 底 的 Ｒ Ａ 以 １ ００ ２ｍ ， Ｎ， ２ ３ ｒｒｎ ４ｏ ／ ｉ， ａ Ｃ离心 ５ｍｎ去 除上清液 ，Ｎ ｉ， Ｒ Ａ留在 管底 。Ｒ Ａ沉 Ｎ 淀 于室温下 干燥 ２ ｍｎ Ｒ Ａ为半 干状态 ， 印 Ｄ Ｐ ０ ｉ到 Ｎ 用 Ｅ Ｃ处 理过 的 Ｔ Ｅ溶解 Ｒ Ａ沉 淀 ， 要时 可在 印 ｏ水 浴 中助 溶 ， Ｎ 必 ｃ 然 后把 Ｒ Ａ放入 一８ 条 件下可 长期保存 或用 于分析 。 Ｎ ｏｏ ｃ １２３ 电泳分 析 。２ Ｒ Ａ样品 ， ．． Ｎ 点样 于 ０８ ＿％琼 脂 糖凝胶 上 ， １ ｌ 胶含 有 ２ 溴 化 乙啶 ， Ｖ恒 压 电泳 ２ ， 每 ０ 凝 ０ｍ ５ ８ ０ 在 ｈ 紫外灯 下观测 Ｒ Ａ条带 ， 相记 录。 Ｎ 并照 １２４ 分光光 度计定 量测 定 和统 一纯 度分 析 。取 １ Ｒ Ａ ．． Ｎ 样品， 测定 ２０Ｄ ６ ｉ ２０Ｄ 波 长 的 Ｏ 值 。Ｒ Ａ含 量 用 公 ｎ和 ８ ｎ ｉ Ｄ Ｎ 式 Ｄ ２ × ０计算 ， Ｄ６ Ｄ ２用 于 纯 度 分 析 ， 种 重 复 多 Ｄ６ ４ ｏ Ｄ ２／ Ｄ８ ｏ ０ 每 次 。纯 的 Ｒ Ａ 样 品 其 Ｄ ２／ Ｄ ８ 在 １ ７～２ ０ 若 Ｎ Ｄ６ Ｄ ２ 应 ｏ ０ ． ．， Ｄ ２／ Ｄ８ 于 １７ 说 明 样 品 中 有 蛋 白 质 或 酚 杂 质 ； Ｄ６ Ｄ ２小 ｏ ０ ．，
木本植物组织总RNA提取的要点与原理_王玉成
木本植物组织总RNA提取的要点与原理1)王玉成杨传平姜静(东北林业大学,哈尔滨,150040)摘要根据提取木本植物组织RNA时所获得的知识和经验,对木本植物组织总RNA提取时所遇到的提取产量低、RNA降解、多酚物质干扰、DNA干扰、多糖干扰、蛋白质干扰及杂质干扰等问题进行了探讨,并提出了具体的解决方法。
同时,对各种常用的RNA提取方法进行了分类,并对它们的原理及优劣进行了论述与评价。
关键词木本植物;RNA提取;总RNA分类号Q522The M ain Points and Principles of Isolating Total RNA from Ligneous Plant Tissues/Wang Yucheng,Yang Chuanping, Jiang Jing(Northeast Forestry University,Harbin150040,P.R.China)//Journal of Northeast Forestry University.-2002,30 (2).-1~4According to the knowledge and experiences acquired in isolating total RNA from ligneous plan t tissues,the authors probe in and discuss the problems that often occur in i solating total RNA from ligneous plant tissues,such as low RNA ou tput,RNA de-grading,the interference of hydroxybenzenes,DNA,amylose,protein and other i mpuri ties,then bring forward the resolvable ways of these problems in particular.Meanwhile,sort the RNA isolating ways in common use into some categories,and also di s-cuss their principles and evaluate their strongpoints and inferiors.Key words Ligneous plant;RNA isolation;Total RNA提取木本植物完整的总RNA,是对其进行分子水平遗传分析及基因克隆的重要一环。
植物组织RNA提取的难点及对策
植物组织RNA提取的难点及对策植物组织RNA提取是分子生物学实验的关键步骤之一，它的准确性和高质量对于后续的研究非常重要。
然而，植物组织RNA提取也存在一些难点，如RNA的完整性、污染物的干扰和样品数量的限制等。
本文将对这些难点进行详细讨论，并提出相应的对策。
首先，植物组织RNA提取的难点之一是RNA的完整性。
RNA易于降解，在提取过程中容易受到外界因素的影响而失去完整性。
为了解决这个问题，可以在提取过程中采取一系列的措施。
首先，应在低温环境下进行样品处理和提取操作，以减缓RNA的降解速度。
其次，应使用含有RNase抑制剂的试剂，如Trizol试剂或RNA保护剂，以防止RNA在提取过程中受到RNase的降解。
此外，还可以尽量缩短提取过程的时间，避免反复冻融和机械破碎等操作，以保持RNA的完整性。
其次，污染物的干扰也是植物组织RNA提取的难点之一、植物组织中含有丰富的多酚类物质、多糖和多样的宿主RNA，它们可能会干扰RNA的提取和纯化。
为了减少这些污染物的干扰，可以采取一些对策。
首先，可以在提取过程中添加含有高浓度盐的试剂，如高盐缓冲液，以帮助沉淀多酚类物质和多糖。
其次，可以使用热酚酸法，将RNA溶液与酚酸混合，使RNA与多样的宿主RNA形成沉淀，并将混合物中的杂质去除。
此外，还可以使用DNA消化酶或RNase去除宿主RNA和DNA的污染。
第三，由于植物组织通常具有较高的纤维素含量和丰富的抗氧化物质，样品量的限制也是植物组织RNA提取的难点之一、为了克服这个问题，可以采取一些策略。
首先，可以选择合适的提取试剂和方法，如使用高盐浓缩法或硅胶膜柱纯化法，以增加RNA的提取效率。
其次，可以将不同的组织样品混合提取，以增加RNA的总量。
此外，还可以通过PCR扩增技术，对RNA提取后的样品进行增幅，以获得足够的RNA量进行后续实验。
除了上述难点外，植物组织RNA提取还存在其他一些问题，如低RNA 浓度、RNA的质量不佳或存在一些强烈的抑制剂等。
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Ｔｒ ｉ ｚ ｏ ｌ 法： 具 体操 作参 考说 明书进行 。 异硫 氰 酸 胍 法 ： 参考 Ｐ ｉ ｏ ｔ ｒ 等［ 和 李 志 能 等 。 ］
的方法 进 行 。
已知木 麻 黄含 有 极 丰 富 的次 生 代 谢 物 质 ］ ， 这
Ｃ ＴＡＢ法 ： 参 考 张燕 梅 等 ［ ］ 和王 蔚 等 ［ 的方 法
德国 Ｉ ｍｐ ｌ ｅ ｎ公 司 ） 测定供试 Ｒ ＮＡ 的 质 量 浓 除 次生 代谢 物 质 的手 段 ， 探 索 了一 种 简 便 有 效 的提 析仪 （ ／ ￣ ｇ ／ ｍＬ ） 及 光 密 度 比 值 Ｄ 。 。 ／ Ｄ： 。 和 Ｄ 。 ／ 取木 麻 黄小 枝 总 Ｒ ＮＡ 的方 法 ， 旨在 为 相 关 的分 子 度 值 （
第 ３ ３卷 第 １ 期 ２ ０ １ ４年 １ 月
华
中
农
业
大
学
学
报
Ｖｏ １ ． ３ ３ Ｎｏ ． １
Ｊ ｏ ｕ ｒ ｎ ａ ｌ ｏ ｆ Ｈｕ ａ ｚ ｈ ｏ ｎ ｇ Ａｇ ｒ ｉ ｃ ｕ ｌ ｔ ｕ ｒ ａ ｌ Ｕｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ
Ｊ ａ ｎ ．２ ０ １ ４ ， ５供试 短 枝木麻 黄 （ Ｃ ． ｅ ｑ ｕ ｉ ｓ ｅ ｔ ｉ Ｊ ｏ ｌ ｉ ａ ） 品系 Ｆ Ｊ ５由 ８ ０℃ 保 存备 用 。
能 与作 用 尚无 别 的树 种可 以代 替 。因木麻 黄具 有特 １ ． １ 供试 材料 研究 较 多 ， 但 关 于木 麻 黄 小 枝 上 基 因表 达 的研 究 较 福 建省林 业科 学研 究 院赠送 。取供试 木麻 黄小 枝 经 少［ ＿ １ ］ 。 目前 ， 仅有 Ｌ ａ ｕ ｒ ｅ ｎ ｔ 等［ ］ 研究了 ｃ ｇ ＭＴ１ 基 因 液 氮速冻 后 置于
总 ＲＮ Ａ。结 果 表 明 ： 用 Ｔｒ ｉ ｚ ｏ ｌ 法 和异 硫 氰 酸胍 法 没 有 提 取 到 木 麻 黄 总 ＲＮ Ａ；用 Ｃ ＴＡ Ｂ法 提 取 的 ＲＮ Ａ 发 生 了
降解 ；只有 Ｓ Ｄ Ｓ法和 Ｏ ｍｅ ｇ ａ 试 剂盒法成功提取到木麻黄小枝 Ｒ ＮＡ， 但质量均没有达到试验 要求 。对提取 效果 相对较好 的 Ｓ ＤＳ法进行改进 ， 主要是加入去除次生代谢物质 的步骤 。经检测 ， 改进后 的 Ｓ Ｄ Ｓ法 提取 的木麻黄小 枝总 ＲＮ Ａ纯 度高 、 完整性 好 ， 能够满 足 Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ分析等分子生物学研究 的要求 。
些 次 生代 谢 物 质 对 Ｒ ＮＡ 的提 取 和 纯 化 有 不 利 影 进行 。 Ｓ ＤＳ法 ： 参考 Ｋａ ｍ— Ｌ ｏ ｃ ｋ等 ［ ９ 的方法 进行 。 响 。因此 ， 笔者 以含 有 几 种 提 取 植 物 ＲＮＡ 的 主 流
． ４ Ｒ Ｎ Ａ检测 变性 剂 Ｓ ＤＳ法 、 Ｃ ＴＡＢ法 、 异 硫 氰 酸 胍 法 和 Ｔｒ ｉ ｚ ｏ ｌ １ 使 用 Ｉ ｍｐ ｌ ｅ ｎ Ｎａ ｎ ｏ Ｐ ｈ ｏ ｔ ｏ ｍｅ ｔ ｅ ｒ 微 量核 酸蛋 白分 法 为基 础 ， 参考 近 年来 新 研 究 的各 种 提 取 方 法 中去
木 麻 黄小 枝 总 Ｒ Ｎ Ａ提 取 方 法 的 比较 与 优 化
孙 思 陈洁 玲 舒灿 伟 王 军 王 新 荣 周 而 勋
１ ． 华南农业大 学资 源环境 学院， 广州 ５ １ ０ ６ ４ ２ ； ２ ． 华南农 业大学林学院 ， 广州 ５ １ ０ ６ ４ ２
摘要 分别采用 Ｔ ｒ ｉ ｚ ｏ ｌ 法、 Ｃ ＴＡ Ｂ法 、 异硫氰 酸胍法 、 Ｓ Ｄ Ｓ法 和 Ｏｍｅ ｇ ａ 试剂 盒法从 短枝木麻 黄小枝 中提取
关键词 木麻 黄 ； 小枝 ； 总 ＲＮ Ａ；提 取 方 法 Ｓ ７ ６ ３ ；Ｓ ７ ９ ２ ． ９ ３ 文献标识码 Ａ 文 章 编 号 ｉ ０ ０ ０ ２ ４ ２ １ （ ２ ０ １ ４ ） Ｏ １ ０ ０ ５ １ — ０ ５ 中 图分 类 号
木麻 黄 （ Ｃ ａ ｓ ｕ ａ ｒ ｉ ｎ ａ ｓ ｐ ｐ ． ） 是世 界 上 许 多 热带 和 亚热 带 地 区广泛 引 种 栽 培 的 防 护林 树 种 ， 其 防护 功 殊功 能 和实用 价 值 ， 故 与 其 相 关 的生 物技 术 与应 用
－ ２ 主 要 试 剂 在粗 枝木 麻 黄 （ Ｃ ａ ｓ ｕ ａ ｒ ｉ ｎ ａ ｇ ｌ ａ ｕ ｃ ａ） 地 下部 分 的表 达 １
时， 同时 测定 了该 基 因在 地 上 部 小枝 上 的表 达 以作
为对 照 。
试剂 盒 为 Ｏ ｍｅ ｇ ａ公 司 的 植 物 Ｒ ＮＡ 提 取 试 剂
生物 学研 究 提供 科学 依 据 。
收 稿 日期 ：２ ０ １ ３ ０ ４ ２ ５
Ｄｚ 以检 测 Ｒ ＮＡ 的 纯 度 ， Ｄ２ 。 。 ／ Ｄ 。 低于 １ ． ７表 示
盒， Ｔ ｒ ｉ ｚ ｏ ｌ 试剂购 自Ｉ ｎ ｖ ｉ ｔ ｒ ｏ ｇ ｅ ｎ公 司 。
从木 麻黄 小枝 中提取 高 质 量 的 ＲＮ Ａ 是探 索 其 １ ． ３ Ｒ Ｎ Ａ提 取 方法 基 因表达 的前 提 。 由于 Ｌ ａ ｕ ｒ ｅ ｎ ｔ 等［ ２ 使用的 Ｂ ｕ ｇ ｏ ｓ 采用 Ｏｍｅ ｇ ａ 试 剂盒 提取 ， 具体 操作 按试 剂盒 说 并根 据试 验情 况 和观察 结 果 ， 在 操作 过程 等¨ ３ ］ 的方法 时 间较 早 ， 试 验 存 在过 夜 沉 淀 等 烦 琐 的 明书进行 ， 过 程 和全 程低 温 离 心等 严 谨 的要 求 ， 且 因为 其 主 要 中对 提取 方法 不断 加 以改进 和优 化 。 研 究 对象 不 是 小 枝 ， 也没有讨论 所提取总 Ｒ ＮＡ 的 质量 ， 所 以不 能 明确产 物是 否适 合 于进 行 今 后 的 分