solution 常见实验用溶液的配制方法
试验室常用溶液配制

实验室常用溶液的配置Amp+/Kan+:贮存液浓度为50mg/mL称取500mg于10mL超纯水中溶解,抽滤后1mL分装到离心管中,于-30℃ 冻存X-gal:贮存浓度为20mg/mL称取20mg X-gal溶于1mL二甲基甲酰胺中,-30℃中用锡箔纸包裹后避光保存,不需要过滤除菌IPTG:贮存浓度为0.84mol/L称取2g IPTG溶于8mL超纯水中,用水定容到10mL,用0.22um的一次性滤过器过滤除菌,1mL分装到离心管中并于-30℃保存CaCl2:贮存浓度为1mol/L称取1.11g CaCl (或者CaCl:2H2O 1.4698g)溶于8mL超纯水中,定容到10mL,用0,22um的一次性滤过器过滤除菌,1mL分装到离心管中,并于-30℃ 保存LB培养基:胰蛋白胨(Tyrtone) 10g/L酵母提取物(Yeast Extraction) 5g/L氯化钠10/L根据经验用NaOH调节PH为7.2-7.6,然后高压蒸汽灭菌,注意及时从灭菌锅中取出无DNA酶的RNA酶:将胰RNA 酶(RNA 酶A)溶于10mmol/L Tris-Cl (PH7.5)、15mmol/L NaCl 中,配成10mg/mL的浓度,于100℃加热15min,缓慢冷却至室温,分装成小份保存于-20℃Bradford 贮存液95%乙醇100mL88%磷酸200mLG 250 0.35g室温下可储存,一般4℃Bradford 工作液Bradford 贮存液30mL双蒸水425mL95%乙醇15mL88%磷酸30mL储存于4℃超声破碎缓冲液KCl 300 mM 22.37 gKH2PO4 50 mM 6.81 gEDTA 1 mM 0.292 g (EDTA-2Na-2H2O) 0.372 g定容至1 L,调pH至8.0包涵体洗涤液KCl 300 mM 22.37 gKH2PO4 50 mM 6.81 gEDTA 5 mM 1.46 g (EDTA-2Na-2H2O) 1.86 g尿素 2 M 120 gTriton X-100 0.5% 5 ml脱氧胆酸钠盐0.1% 1 g定容到1 L调pH至8.0匀浆缓冲液(pH=7.5)成分:20mM HEPES 0.002mol=0.476g 力口入0.952g1.5mM MgCl2 0.00015mol=0.0036g 力口入0.0072g0.2mM EDTA 0.00002mol=0.00584g 力口入0.01168g0.1M NaCl 0.01mol=0. 58g 力口入1.16g0.5mM 钒酸钠0.00005mol=0.0092g 力口入0.0184g加100mL水进行溶解,NaOH调pH至7.50.2mM DTT 总体积500R L加入0.1R L0.4mM PMSF 总体积500R L力口入20R L1%SDS 力口入50|iL 10% SDS其中DTT和PMSF匀浆之前加入,SDS匀浆之后离心之前加入DTT配成1M母液,溶于0.01M乙酸钠(pH=5.2)中,过滤除菌PMSF配成10mM母液,溶于异丙醇10*PBSNaCl 80.0669 gKCl 2.0129 gNa2HPO4 14.1960 gKH2PO4 2.4496 g水定容至1L,使用时稀释10倍,用NaOH调pH至7.4Start with 800 mL of distilled water to dissolve all salts. Adjust the pH to 7.4 with HCl. Add distilled water to a total volume of 1 liter. The resultant 1x PBS should have a final concentration of 10 mM PO43-, 137 mM NaCl, and 2.7 mM KClIf used in cell culturing, the solution can be dispensed into aliquots and sterilized byautoclaving (20 min, 121°C, liquid cycle). Sterilization may not be necessary depending on its use. PBS can be stored at room temperature or in the fridge. However, concentrated stock solutions may precipitate when cooled and should be kept at room temperature until precipitate has completely dissolved before use.转膜缓冲液(含有SDS)1L剂量甘氨酸 2.9gTris 5.8gSDS 0.37g甲醇200mL水800mL10*蛋白电泳缓冲液1L剂量Tris 碱(Mr 121.14) 30.2g甘氨酸(Mr 75.07) 188gSDS (Mr 288.38) 10 g加水至1L用时稀释10倍即可30%丙稀酰胺1L剂量丙烯酰胺290gN,N'-亚甲基双丙稀酰胺10g溶于600ml蒸馏水中,加热至37℃溶解,补足体积至1L,过滤,且pH不大于7.01 M Tris-Cl(pH6.8)60.55 g Tris碱溶解于400ml蒸馏水,溶解后调pH值,总体积为500ml1.5 M Tris-Cl(pH8.8)90.83g Tris碱溶解于400ml蒸馏水,溶解后调pH值,总体积为500ml。
标准溶液的配置

标准溶液的配置标准溶液是化学分析中常用的一种重要溶液类型,它的准确配制对于实验结果的准确性和可靠性具有至关重要的影响。
本文将介绍标准溶液的配制方法及注意事项,希望能对大家有所帮助。
首先,配制标准溶液需要准备好所需的药品和试剂,包括纯净的溶剂、准确称量的标准品和必要的玻璃仪器。
在进行配制前,需要确保实验室的仪器设备干净整洁,并且标准品的纯度和浓度信息是准确无误的。
其次,配制标准溶液的过程中需要严格按照配制方案和操作规程进行,确保每一步操作都准确无误。
在称量标准品时,需要使用精密的天平,并严格控制称量误差,以确保标准品的浓度精确到达到实验要求。
在溶解标准品的过程中,需要充分搅拌使其充分溶解,避免出现局部浓度不均匀的情况。
另外,配制标准溶液的过程中需要注意避光、保持温度稳定等操作,以确保标准品不受外界环境的影响。
在配制完成后,需要使用适当的容器将标准溶液储存妥善,避免受到污染或挥发,从而影响其浓度和准确性。
此外,配制标准溶液的实验操作人员需要具有一定的化学实验操作经验和技能,严格按照操作规程进行操作,确保实验过程的安全和准确性。
在实验过程中,需要随时注意观察实验现象,并及时调整操作方法,确保实验的顺利进行。
最后,配制标准溶液后需要进行浓度的确认和校准,以确保标准溶液的浓度符合实验要求。
在实际使用中,还需要注意标准溶液的保存和使用方法,避免受到外界环境的影响,从而影响实验结果的准确性。
总之,配制标准溶液是一项需要严格操作和高度注意的实验工作,只有在严格按照操作规程进行操作,并且具有一定的化学实验技能和经验的情况下,才能保证标准溶液的准确性和可靠性。
希望本文能对大家在实验工作中的标准溶液配制有所帮助。
溶液配制

实验室常用缓冲液配置方案1×TE Buffer组成浓度:10mM Tris-HCl 1mM EDTA PH=8.0配制量:500ml配制方法:量取下列溶液于500ml烧杯中1M Tris-HCl Buffer PH=8.0 5ml0.5M EDTA PH=8.0 1ml向烧杯中加入约400mldd H2O均匀混合;将溶液定容到500ml后,高温高压灭菌;室温保存.1)1 M Tris-HCl (pH 8.0)组份浓度:1 M Tris-HCl配制量:1 L配制方法:1. 称量121.1 g Tris置于1 L烧杯中。
2. 加入约800 ml的去离子水,充分搅拌溶解。
3. 加入42ml浓盐酸调节所需要的pH值。
4. 将溶液定容至1 L。
5. 高温高压灭菌后,室温保存。
15)0.5 M EDTA(pH8.0)组份浓度:0.5 M EDTA配制量:1 L配制方法:称取186.1 g Na2EDTA·2H2O,置于1 L烧杯中。
2. 加入约800 ml的去离子水,充分搅拌。
3. 用NaOH调节pH值至8.0(约20 g NaOH)。
注意:pH值至8.0时,EDTA才能完全溶解。
4. 加去离子水将溶液定容至1 L。
5. 适量分成小份后,高温高压灭菌。
6. 室温保存。
实验室常用缓冲液配置方案1)1 M Tris-HCl (pH7.4, 7.6, 8.0)组份浓度:1 M Tris-HCl配制量:1 L配制方法:1. 称量121.1 g Tris置于1 L烧杯中。
2. 加入约800 ml的去离子水,充分搅拌溶解。
4. 将溶液定容至1 L。
5. 高温高压灭菌后,室温保存。
注意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大,温度每升高1℃,溶液的pH值大约降低0.03个单位。
2)10×TE Buffer (pH7.4, 7.6, 8.0)组份浓度:100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA配制量:1 L配制方法:3. 将溶液定容至1 L后,高温高压灭菌。
实验室常用试剂和缓冲液配方

实验室常用试剂和缓冲液配方实验室中常用的试剂和缓冲液配方有很多种,下面将介绍一些常用的试剂和缓冲液的配方:一、试剂的配方1. Tris缓冲液:- 3 M Tris-Cl,pH 7.4(准备方法:将121.1 g Tris粉末溶解在800 mL去离子水中,使用HCl调节pH值至7.4,并将溶液体积加至1 L)2.NaCl溶液:-5MNaCl(准备方法:将287.7gNaCl溶解在800mL去离子水中,并将溶液体积加至1L)3.验血试剂:-4%NaOH溶液(准备方法:将40gNaOH溶解在900mL去离子水中,并将溶液体积加至1L)-5%CuSO4溶液(准备方法:将50gCuSO4溶解在900mL去离子水中,并将溶液体积加至1L)-2%K4[Fe(CN)6]溶液(准备方法:将20gK4[Fe(CN)6]溶解在900mL去离子水中,并将溶液体积加至1L)4.PBS缓冲液(磷酸盐缓冲液):-10×PBS缓冲液(准备方法:将80gNaCl,2gKCl,11.5gNa2HPO4,2gKH2PO4溶解在800mL去离子水中,并将溶液体积加至1L。
pH值可以调节至7.4左右)5. Tris-EDTA缓冲液(TE缓冲液):- 10 mM Tris-HCl,1 mM EDTA,pH 8.0(准备方法:将12.1 gTris溶解在800 mL去离子水中,然后加入0.37 g EDTA,使用HCl调节pH值至8.0,并将溶液体积加至1 L)二、缓冲液的配方1. Tris-HCl缓冲液:- 50 mM Tris-HCl,100 mM NaCl,1% Triton X-100,pH 7.4(准备方法:将6.05 g Tris,5.8 g NaCl,0.1 g Triton X-100溶解在800mL去离子水中,使用HCl调节pH值至7.4,并将溶液体积加至1 L)2. Tris-Borate缓冲液(TBE缓冲液):- 89 mM Tris,89 mM boric acid,2 mM EDTA,pH 8.3(准备方法:将10.81 g Tris,5.49 g boric acid,3.72 g EDTA溶解在800 mL去离子水中,使用NaOH或HCl调节pH值至8.3,并将溶液体积加至1 L)3. Tris-Glycine缓冲液:- 25 mM Tris,192 mM glycine,0.1% SDS,pH 8.3(准备方法:将3.03 g Tris,14.35 g glycine溶解在800 mL去离子水中,使用HCl调节pH值至8.3,并将溶液体积加至1 L)4. Tris-Acetate缓冲液(TAE缓冲液):- 40 mM Tris,20 mM acetic acid,1 mM EDTA,pH 8.3(准备方法:将4.84 g Tris,1.86 g acetic acid,0.37 g EDTA溶解在800 mL去离子水中,使用NaOH或HCl调节pH值至8.3,并将溶液体积加至1 L)5. Phosphate缓冲液:- 100 mM sodium phosphate,pH 7.0(准备方法:根据目标pH值使用磷酸二氢钠和磷酸氢二钠调节溶液pH至7.0,并将溶液体积加至1 L)以上只是一些常用的试剂和缓冲液的配方,并不是全部。
实验室常用试剂和缓冲液配方

实验室常用试剂和缓冲液配方实验室中常用的试剂和缓冲液种类繁多,根据实验需求,可以根据不同的试剂和缓冲液配方来满足实验要求。
以下是一些常见的试剂和缓冲液配方,以及其用途和制备方法。
1. 磷酸缓冲液(Phosphate buffer)磷酸缓冲液常用于生化和分子生物学实验中,用于控制溶液的pH值,适用于酸性和碱性条件下。
常见的配方包括0.1M磷酸盐缓冲液(pH7.2-7.4),需要用磷酸盐和盐酸或氢氧化钠来制备。
2. 氯化钠溶液(Sodium chloride solution)氯化钠溶液是实验室中常见的缓冲液配方之一,通常用于调节生物样品的渗透压和离子浓度。
可以制备不同浓度的氯化钠溶液,常见的配方为0.9%氯化钠溶液(生理盐水)。
3. 碳酸氢盐缓冲液(Bicarbonate buffer)碳酸氢盐缓冲液常用于细胞培养和生理实验中,用于维持细胞培养基或实验液的pH稳定。
一种常见的配方为10mM碳酸氢盐缓冲液(pH7.2-7.4),需要用碳酸氢钠和盐酸来制备。
4. Tris缓冲液(Tris buffer)Tris缓冲液是一种常见的生化实验缓冲液,可以调节到不同的pH值。
常见的配方为50 mM Tris缓冲液(pH 7.4),需要用Tris(三氯甲烷磺酸,Tris-HCl)和盐酸来制备。
5. PBS缓冲液(Phosphate-buffered saline)PBS缓冲液是一种用于细胞和组织处理的常见缓冲液,具有稳定pH值和离子浓度的特点。
常见的配方为10mMPBS缓冲液(pH7.4),需要用磷酸盐和盐酸或氢氧化钠来制备。
6. 甘氨酸缓冲液(Glycine buffer)甘氨酸缓冲液常用于蛋白质电泳实验中,用作电泳缓冲液和传递缓冲液。
常见的配方为25mM甘氨酸缓冲液(pH8.3),需要用甘氨酸和盐酸来制备。
7. BSA溶液(Bovine serum albumin solution)BSA溶液是实验室中常见的蛋白质标准物质,用于测定蛋白质浓度和酶活性等实验。
实验室溶液配制技巧

实验室溶液配制技巧-标准化文件发布号:(9556-EUATWK-MWUB-WUNN-INNUL-DDQTY-KII实验室溶液配制技巧液体溶液配制可以说是实验室分析人员最基础的一门技术,也是每天工作中的必选项。
液体溶液的配置包括溶质的计算、移液、定容等基础操作,还包括一些混合溶液的前后加入顺序及利用一些试剂自身的化学性质,掌握了溶液配制的技巧,可以大大缩短配置时间,提高实验效率。
我们都知道,溶液是由至少两种物质组成的均一、稳定的混合物,被分散的物质(溶质)以分子或更小的质点分散于另一物质(溶剂)中。
溶液是混合物。
种类分为:一般溶液和标准溶液。
一般溶液只是专指液体溶液。
一般溶液的配制过程1.计算:计算配制所需固体溶质的质量或液体浓溶液的体积。
2.称量:用托盘天平称量固体质量或用量筒或移液管量取液体体积。
3.溶解:在烧杯中溶解或稀释溶质,恢复至室温(如不能完全溶解可适当加热)。
检查容量瓶是否漏水。
4.转移:将烧杯内冷却后的溶液沿玻璃棒小心转入一定体积的容量瓶中(玻璃棒下端应靠在容量瓶刻度线以下)。
5.洗涤:用蒸馏水洗涤烧杯和玻璃棒2~3次,并将洗涤液转入容器中,振荡,使溶液混合均匀。
6.定容:向容量瓶中加水至刻度线以下1~2cm处时,改用胶头滴管加水,使溶液凹面恰好与刻度线相切。
7.摇匀:盖好瓶塞,用食指顶住瓶塞,另一只手的手指托住瓶底,反复上下颠倒,使溶液混合均匀。
8.装瓶,贴签。
举例:配制500mL,L碳酸钠溶液步骤及注意事项所需的仪器:烧杯、容量瓶、玻璃棒、胶头滴管、分析天平、药匙、量筒步骤:第一步:计算:所需碳酸钠的质量=**106=克;第二步:称量:在天平上称量克碳酸钠固体,并将它倒入小烧杯中;第三步:溶解:在盛有碳酸钠固体的小烧杯中加入适量蒸馏水,用玻璃棒搅拌,使其溶解;第四步:移液:将溶液沿玻璃棒注入500mL容量瓶中;第五步:洗涤:用蒸馏水洗烧杯2~3次,并倒入容量瓶中;第六步:定容:倒水至刻度线1~2cm处改用胶头滴管滴到与凹液面平直;第七步:摇匀:盖好瓶塞,上下颠倒、摇匀;第八步:装瓶、贴签;误差分析:固体药品的称量与液体药品的量取是否准确;把溶液向容量瓶中转移,溶液洒了;未洗涤烧杯和玻璃棒;用待配液润洗了容量瓶;定容时水加多了或加少了;定容时未平视刻度线。
常用缓冲溶液配制方法

常用缓冲溶液的配制方法1.甘氨酸–盐酸缓冲液(0.05mol/L)X毫升0.2 mol/L甘氨酸+Y毫升0.2 mol/L HCI,再加水稀释至200毫升2.邻苯二甲酸–盐酸缓冲液(0.05 mol/L)X毫升0.2 mol/L邻苯二甲酸氢钾 + 0.2 mol/L HCl,再加水稀释到20毫升邻苯二甲酸氢钾分子量 = 204.23,0.2 mol/L邻苯二甲酸氢溶液含40.85克/升3.磷酸氢二钠–柠檬酸缓冲液24Na2HPO4·2H2O分子量 = 178.05,0.2 mol/L溶液含35.01克/升。
C4H2O7·H2O分子量 = 210.14,0.1 mol/L溶液为21.01克/升。
4.柠檬酸–氢氧化钠-盐酸缓冲液溶液或浓盐酸调节,冰箱保存。
5.柠檬酸–柠檬酸钠缓冲液(0.1 mol/L)柠檬酸C6H8O7·H2O:分子量210.14,0.1 mol/L溶液为21.01克/升。
柠檬酸钠Na3 C6H5O7·2H2O:分子量294.12,0.1 mol/L溶液为29.41克/毫升。
7.磷酸盐缓冲液Na 2HPO 4·2H 2O 分子量 = 178.05,0.2 mol/L 溶液为85.61克/升。
Na 2HPO 4·12H 2O 分子量 = 358.14,0.2 mol/L 溶液为71.628克/升。
NaH 2PO 4·2H 2O 分子量 = 156.01,0.2 mol/L 溶液为31.202克/升。
磷酸盐是生物化学研究中使用最广泛的一种缓冲剂,由于它们是二级解离,有二个pKa 值,所以用它们配制的缓冲液,pH 范围最宽:NaH 2PO 4: pKa1=2.12,pKa2=7.21; Na 2HPO 4:pKa1=7.21,pKa2=12.32配酸性缓冲液:用NaH 2PO 4,pH =1~4,配中性缓冲液:用混合的两种磷酸盐,pH =6~8, 配碱性缓冲液:用Na 2HPO 4,pH =10~12。
实验室常用缓冲液、试剂的配制方法

实验室常用缓冲液、试剂的配制方法#1 M Tris-HCl (pH7.4, 7.6, 8.0)# 组份浓度:1 M Tris-HCl 配制量:1 L配制方法:1. 称量121.1 g Tris置于1 L烧杯中。
2. 加入约800 ml的去离子水,充分搅拌溶解。
3. 按下表量加入浓盐酸调整所需要的pH值。
4. 将溶液定容至1 L。
5. 高温高压灭菌后,室温保存。
留意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,由于Tris溶液的pH 值随温度的变化差异很大,温度每上升1℃,溶液的pH值大约降低0.03个单位。
#10timeTE Buffer (pH7.4, 7.6, 8.0)#组份浓度:100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA配制量:1 L配制方法:1. 量取下列溶液,置于1 L烧杯中。
2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水,匀称混合。
3. 将溶液定容至1 L后,高温高压灭菌。
4. 室温保存。
#1.5 M Tris-HCl (pH8.8)#组份浓度:1.5 M Tris-HCl配制量:1 L配制方法:1. 称量181.7 g Tris置于1 L烧杯中。
2. 加入约800 ml的去离子水,充分搅拌溶解。
3. 用浓盐酸调整pH值至8.8。
4. 将溶液定容至1 L。
5. 高温高压灭菌后,室温保存。
留意:应使溶液冷却至室温后再调定pH值,由于Tris溶液的pH 值随温度的变化差异很大,温度每上升1℃,溶液的pH值大约降低0.03个单位。
#3 M 醋酸钠(pH5.2)#组份浓度:3M 醋酸钠配制量:100ml配制方法:1.称量40.8g NaAc3H2O置于100-200ml烧杯中,加入月40ml的去离子水搅拌溶解2.加入冰醋酸调整pH值至5.23.加去离子水将溶液定容至100ml4高温高压灭菌后,室温保存。
#Buffer#组份浓度:137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4配制量:1 L配制方法:1. 称量下列试剂,置于1 L烧杯中。
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一.常用贮液与溶液1mol/L亚精胺(Spermidine): 溶解2.55g亚精胺于足量的水中,使终体积为10ml。
分装成小份贮存于-20℃。
1mol/L精胺(Spermine):溶解3.48g精胺于足量的水中,使终体积为10ml。
分装成小份贮存于-20℃。
10mol/L乙酸胺(ammonium acetate):将77.1g乙酸胺溶解于水中,加水定容至1L后,用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。
10mg/ml牛血清蛋白(BSA):加100mg的牛血清蛋白(组分V或分子生物学试剂级,无D NA酶)于9.5ml水中(为减少变性,须将蛋白加入水中,而不是将水加入蛋白),盖好盖后,轻轻摇动,直至牛血清蛋白完全溶解为止。
不要涡旋混合。
加水定容到10ml,然后分装成小份贮存于-20℃。
1mol/L二硫苏糖醇(DTT):在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水,分成小份贮存于-20℃。
或转移100mg的二硫苏糖醇至微量离心管,加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。
8mol/L乙酸钾(potassium acetate):溶解78.5g乙酸钾于足量的水中,加水定容到100 ml。
1mol/L氯化钾(KCl):溶解7.46g氯化钾于足量的水中,加水定容到100ml。
3mol/L乙酸钠(sodium acetate):溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中,用冰乙酸调溶液的pH至5.2,再加水定容到100ml。
0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液(0.5mol/L),混合后形成EDTA 的三钠盐。
或称取186.1g的Na2EDTA·2H2O和20g的NaOH,并溶于水中,定容至1L。
1mol/L HEPES:将23.8gHEPES溶于约90ml的水中,用NaOH调pH(6.8-8.2),然后用水定容至100ml。
1mol/L HCl:加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。
25mg/ml IPGT:溶解250mg的IPGT(异丙基硫代-β-D-半乳糖苷)于10ml水中,分成小份贮存于-20℃。
1mol/LMgCl2:溶解20.3g MgCl2·6H2O于足量的水中,定容到100ml。
100mmol/L PMSF:溶解174mg的PMSF(苯甲基磺酰氟)于足量的异丙醇中,定容到1 0ml。
分成小份并用铝箔将装液管包裹或贮存于-20℃。
20mg/ml蛋白酶K(proteinase K):将200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中,轻轻摇动,直至蛋白酶K完全溶解。
不要涡旋混合。
加水定容到10ml,然后分装成小份贮存于-20℃。
10mg/mlRnase(无DNase)(DNase-free RNase):溶解10mg的胰蛋白RNA酶于1 ml的10mmol/L的乙酸钠水溶液中(pH 5.0)。
溶解后于水浴中煮沸15min,使DNA酶失活。
用1mol/L的Tris-HCl调pH至7.5,于-20℃贮存。
(配制过程中要戴手套)5mol/L氯化钠(NaCl):溶解29.2g氯化钠于足量的水中,定容至100ml。
10N氢氧化钠(NaOH):溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水的烧杯中(磁力搅拌器搅拌),氢氧化钠完全溶解后用水定容至1L。
10%SDS(十二烷基硫酸钠):称取100gSDS慢慢转移到约含0.9L的水的烧杯中,用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。
用水定容至1L。
2mol/L山梨(糖)醇(Sorbitol):溶解36.4g山梨(糖)醇于足量水中使终体积为100ml。
100%三氯乙酸(TCA):在装有500gTCA的试剂瓶中加入100ml水,用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。
(稀释液应在临用前配制)2.5% X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-半乳糖苷):溶解25mg的X-gal于1ml的二甲基甲酰胺(DMF),用铝箔包裹装液管,贮存于-20℃。
100×Denhardt试剂(Denhardt’s regent)成分及终浓度配制100ml溶液各成分的用量2%聚蔗糖(Ficoll,400型)2%聚乙烯吡咯烷酮(PVP-40)2%BSA(组分V)水 2g2g2g加水至总体积为100ml依照上表称取各组分,溶于水中定容。
过滤除菌及杂质,分装成小份于-20℃贮存。
10×标准DNA连接酶缓冲液(standard DNA ligase buffer)(粘端、平端连接)成分及终浓度配制10ml溶液各成分的用量0.5mol/L Tris-HCl100mmol/L MgCl2100mmol/L DTT2mmol/L ATP5mmol/L 盐酸亚精胺(可选)0.5mg/ml BSA(组分V)(可选)水 5ml 1mol/L 贮液1ml 1mol/L 贮液1ml 1mol/L 贮液200ul 100 mmol/L 贮液50ul 1 mmol/L 贮液0.5ml 10 mg/mL 贮液2.25ml将配制好的缓冲液分装成小份,贮存于-20℃。
100 mmol/L dNTP 溶液(dNTP solutions)可以购买到100mmol/L纯dNTPs贮液,-80℃可贮存至少6个月。
10mmol/L dNTP混合液成分及终浓度配制20ul溶液各成分的用量10mmol/L dATP10mmol/L dCTP10mmol/L dGTP10mmol/L dTTP水 2ul 100 mmol/L dATP 贮液2ul 100 mmol/L dCTP 贮液2ul 100 mmol/L dGTP 贮液2ul 100 mmol/L dTTP 贮液12ul20%PEG 8000/2.5M NaCl成分及终浓度配制10ml溶液各成分的用量质量浓度为20%聚乙二醇2.5mol/L 氯化钠水 20g50ml 5 mol/L 氯化钠或 14.6g 固体氯化钠补足100ml加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中,加水至终体积100ml,用磁力搅拌器搅拌溶解。
20×SSC成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量300mmol/L 柠檬酸三钠(二水)3mol/L 氯化钠水 88.2g175.3g补足1L溶解柠檬酸三钠(二水)和氯化钠于约0.9L水中,加几滴10N NaOH溶液调pH为7.0,用水补足体积至1L。
DEPC(焦碳酸二乙酯)处理水加100ul DEPC 于 100ml 水中,使DEPC的体积分数为0.1%。
在37℃温浴至少12h,然后在15 psi 条件下高压灭菌20min,以使残余的DEPC失活。
DEPC会与胺起反应,不可用DEPC处理Tris缓冲液。
甲酰胺(deionized formamide)直接购买或加Dowex XG8 混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中,用磁力搅拌器轻轻搅拌1 h,可去除甲酰胺中的离子。
经Whatman 1号滤纸过滤除去树脂后分成小份,充氮气于-80℃贮存(防止氧化)。
磷酸缓冲液(phosphate buffer)按照下表所给定的体积,混合1 mol/L 的磷酸二氢钠(单碱)和1mol/L 磷酸氢二钠(双碱)贮液,获得所需pH的磷酸缓冲液。
配制1 mol/L 的磷酸二氢钠(NaH2PO4·H2O)贮液:溶解138g于足量水中,使终体积为1L;1mol/L 磷酸氢二钠(Na2HPO4)贮液:溶解142g于足量水中使终体积为1L。
1mol/L 磷酸二氢钠(ml) 1mol/L 磷酸氢二钠(ml)最终pH值877850775735685625565510450390330280 123 150185225265315375435490550610670720 6.0 6.16.26.36.46.56.66.76.86.97.17.2TE(用于悬浮和贮存DNA)成分及终浓度配制100ml溶液各成分的用量10mmol/L Tris-HCl1mmol/L EDTA水 1ml 1mol/L Tris-HCl(pH7.4-8.0,25℃)200ul 0.5 mol/L EDTA(pH 8.0)98.8mlTris缓冲液(Tris-HCl buffer)将121g的Tris碱溶解于约0.9L水中,再根据所要求的pH(25℃下)加一定量的浓盐酸(1 1.6N),用水调整终体积至1L。
浓盐酸的体积(ml) pH8.6142128.53846566671.376 9.08.88.68.48.28.07.87.47.2二.电泳缓冲液、染料和凝胶加样液电泳缓冲液50×Tris-乙酸(TAE)缓冲液成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量2mol/L Tris碱1mol/L 乙酸100 mmol/L EDTA水 242g57.1 ml的冰乙酸(17.4 mol/L)200ml的0.5 mol/L EDTA(pH 8.0)补足1L5×Tris-硼酸(TBE)缓冲液成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量445 mmol/L Tris碱445 mmol/L 硼酸盐10 mmol/L EDTA水 54g27.5g 硼酸20 ml的0.5 mol/L EDTA(pH 8.0)补足1L染料1%溴酚蓝(bromophenol blue)加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中,搅拌或涡旋混合直到完全溶解。
1%二甲苯青FF(xylene cyanole FF)溶解1g二甲苯青FF于足量水中,定容到100ml。
10mg/ml的溴化乙锭(ethidium bromide)小心称取1g溴化乙锭,转移到广口瓶中,加100ml水,用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。
用铝箔包裹装液管,于4℃贮存。
凝胶上样液(gel loading solutions)6×碱性凝胶上样液(室温贮存)成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.3 N 氢氧化钠6 mmol/L EDTA18%聚蔗糖(400型)0.15%溴甲酚绿0.25%二甲苯青FF水 300ul 10N 氢氧化钠120ul 0.5mol/L EDTA(pH8.0)1.8g15mg25mg补足到10ml6×聚蔗糖凝胶上样液(室温贮存)成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.15%溴酚蓝0.15%二甲苯青FF5 mmol/L EDTA15%聚蔗糖(400型)水 1.5ml 1%溴酚蓝1.5ml 1%二甲苯青FF100ul 0.5mol/L EDTA(pH8.0)1.5g补足到10ml6×溴酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液(室温贮存)成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.25%溴酚蓝0.25%二甲苯青FF15%聚蔗糖(400型)水 2.5ml 1%溴酚蓝2.5ml 1%二甲苯青FF1.5g补足到10ml6×甘油凝胶上样液(4℃贮存)成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.15%溴酚蓝0.15%二甲苯青FF5 mmol/L EDTA50%甘油水 1.5ml 1%溴酚蓝1.5ml 1%二甲苯青FF100ul 0.5mol/L EDTA(pH8.0)3ml3.9ml6×蔗糖凝胶上样液(室温贮存)成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.15%溴酚蓝0.15%二甲苯青FF5 mmol/L EDTA40%聚蔗糖水 1.5ml 1%溴酚蓝1.5ml 1%二甲苯青FF100ul 0.5mol/L EDTA(pH8.0)4g补足到10ml10×十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液(室温贮存)成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.2%溴酚蓝0.2%二甲苯青FF200 mmol/L EDTA0.1%SDS50%甘油水 20mg20mg4ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)100ul 10% SDS5ml补足到10ml三.常用培养基LB培养基将下列组分溶解在0.9L水中:蛋白胨 10g酵母提取物 5g氯化钠 10g如果需要用1N NaOH(~1ml)调整pH至7.0,再补足水至1L。