培养基的制备与灭菌
实验三：培养基的制备与灭菌
实验三：培养基的制备与灭菌一、实验目的与要求：（1）熟悉玻璃器皿的洗涤包装和灭菌前的准备工作。
（2）学习微生物培养基和无菌水的制备，了解培养基配方中各成分的作用、制备流程及各环节的操作技术与应用。
（3）学习并掌握培养基的高压蒸气灭菌原理、操作关键技术和灭菌技术。
二、实验原理培养基的制备原理培养基是按照微生物生长发育的需要，用不同组分的营养物质调制而成的营养基质。
人工制备培养基的目的，在于给微生物创造一个良好的营养条件。
把一定的培养基放入一定的器皿中，就提供了人工繁殖微生物的环境和场所。
自然界中，微生物种类繁多，由于微生物具有不同的营养类型，对营养物质的要求也各不相同，加之实验和研究上的目的不同，所以培养基在组成原料上也各有差异。
但是，不同种类和不同组成的培养基中，均应含有满足微生物生长发育的水分、碳源、氮源、无机盐和生长素以及某些特需的微量元素等。
此外，培养基还应具有适宜的酸碱度(pH值)和一定缓冲能力及一定的氧化还原电位和合适的渗透压。
根据制备培养基对所选用的营养物质的来源，可将培养基分为天然培养基、半合成培养基和合成培养基三类。
按照培养基的形态可将培养基分为液体培养基和固体培养基。
根据培养基使用目的，可将培养基分为选择培养基、加富培养基及鉴别培养基等。
培养基的类型和种类是多种多样的，必须根据不同的微生物和不同的目的进行选择配制，本实验分别配制常用培养细菌、放线菌和真菌的牛肉膏蛋白胨培养基、高氏一号合成培养基和马铃薯蔗糖培养基等固体培养基。
固体培养基是在液体培养基中添加凝固剂制成的，常用的凝固剂有琼脂、明胶和硅酸钠，其中以琼脂最为常用，其主要成份为多糖类物质，性质较稳定，一般微生物不能分解，故用凝固剂而不致引起化学成份变化。
琼脂在95℃的热水中才开始融化，融化后的琼脂冷却到45℃才重新凝固。
因此用琼脂制成的固体培养基在一般微生物的培养温度范围内(25℃-37℃)不会融化而保持固体状态。
高压蒸气灭菌原理高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。
培养基的制备与灭菌
培养基的制备与灭菌培养基的制备与灭菌实验⼋培养基的制备与灭菌⼀、⽬的要求1.掌握微⽣物实验室常⽤玻璃器⽫的清洗及包扎⽅法。
2.掌握培养基的配置⽅法。
3.掌握⼲热灭菌和⾼压蒸汽灭菌的操作⽅法。
⼆、基本原理正确掌握培养基的配制⽅法是从事微⽣物学实验⼯作的重要基础。
由于微⽣物种类及代谢类型的多样性．因⽽⽤于培养微⽣物的培养基的种类也很多，它们的配⽅及配制⽅法虽各有差异。
但⼀般培养基的配制程序却⼤致相同．例如器⽫的准备，培养基的配制与分装，棉塞的制作，培养基的灭菌，斜⾯与平板的制作以及培养基的⽆菌检查等基本环节⼤致相同。
三、实验材料1.药品：待配各种培养基的组成成分、琼脂、1mol/L 的NaOH 和HCl 溶液。
2.仪器及玻璃器⽫：天平、⾼压蒸汽灭菌锅、移液管、试管、烧杯、量筒、三⾓瓶、培养⽫、玻璃漏⽃等。
3.其他物品：药匙、称量纸、pH试纸、记号笔、棉花等。
四、操作步骤(⼀)玻璃器⽫的洗涤和包装1.玻璃器⽫的洗涤玻璃器⽫在使⽤前必须洗刷⼲净。
将三⾓瓶、试管、培养⽫、量筒等浸⼊含有洗涤剂的⽔中.⽤⽑刷刷洗，然后⽤⾃来⽔及蒸馏⽔冲净。
移液管先⽤含有洗涤剂的⽔浸泡，再⽤⾃来⽔及蒸馏⽔冲洗。
洗刷⼲净的玻璃器⽫置于烘箱中烘⼲后备⽤。
2 ?灭菌前玻璃器⽫的包装(1)培养⽫的包扎：培养⽫由⼀盖⼀底组成⼀套，可⽤报纸将⼏套培养⽫包成⼀包，或者将⼏套培养⽫直接置于特制的铁⽪圆筒内，加盖灭菌。
包装后的培养⽫须经灭菌之后才能使⽤(2)移液管的包扎：在移液管的上端塞⼊⼀⼩段棉花(勿图8-1移液管的包扎⽤脱脂棉），它的作⽤是避免外界及⼝中杂菌进⼊管内，并防⽌菌液等吸⼊⼝中。
塞⼊此⼩段棉花应距管⼝约0.5cm 左右，棉花⾃⾝长度纟勺1~1.5cm。
塞棉花时.可⽤⼀外围拉直的曲别针、将少许棉花塞⼊管⼝内。
棉花要塞得松紧适宜，吹时以能通⽓⽽⼜不使棉花滑下为准。
先将报纸裁成宽勺5cm 左右的长纸条，然后将已塞好棉花的移液管尖端放在长条报纸的⼀端，约成45C⾓，折叠纸条包住尖端，⽤左⼿握住移液管⾝，有⼿将移液管压紧.在桌⾯上向前搓转，以螺旋式包扎起来。
细菌培养基的制备、灭菌及接种、培养技术ppt课件
目的要求
掌握从环境中分离培养细菌的方法，从 而获得若干种细菌纯培养技能。 掌握几种接种技术。
21
实验材料
无菌培养皿(直径90mm)10套、无菌移液管1mL2
支、10mL1支。
营养琼脂培养基1瓶，活性污泥或土壤或湖水1瓶， 无菌稀释水90mL1瓶、9mL5管。 其它：接种环、酒精灯、恒温箱。
22
c. 第三次蒸煮之后基本无菌，但为了确保无菌仍要放 在37℃恒温条件下培养24h，确定无菌才能使用。
18
实验程序4
（培养基和玻璃器材的灭菌方法）
过滤除菌法： 不能用加热灭菌的 液体物质（如维生 素、血清），一般 可用细菌过滤器进 行除菌。
19
第二部分 细菌纯种分离、培养和接
种技术
目的要求 实验材料 实验程序
9
实 验 程 序2
（培养基的配制方法和步骤） 3. 调pH值：用10％ NaOH调pH至7.6，用精 密pH试纸对照。 4. 分装：将培养基分装于5支试管，其余全部 倒入250mL锥形瓶中，分别塞上棉塞。注意 不要污染棉塞和瓶口。 5. 包扎成捆，挂上标签，注明何种培养基。 6. 灭菌备用：培养基灭菌后必须在37℃下恒 温培养24h，确定无菌生长，方可使用。
实验二
细菌培养基的配制、灭 菌及接种、培养技术
1
第一部分 细菌培养基的制备、灭菌
目的要求 实验材料 实验程序
2
目的要求
熟悉玻璃器皿的洗涤和灭菌前的准备。 掌握培养基和无菌水的制备方法。 掌握高压蒸气灭菌技术。
3
实验材料
药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、蒸馏水等。
高压蒸气灭菌锅、烘箱、细菌过滤器、酒精灯。 其它：培养皿、试管、移液管、锥形瓶、烧杯、玻 璃珠等。
培养基的制备与灭菌
18
a
二）、配置培养基的方法
1、生态模拟 2、查阅文献 3、借助优选法或正交试验法精心设计培养基配方 4、实验比较 实验的规模一般由定性到定量，由小到大。 发酵培养基的用途与要求、成分、配比经实验确定，配制时兼顾
原料来源、成本及工艺管理；
19
a
培养基配方举例
牛肉膏蛋白胨培养基(常用的细菌培养基)
例如：微生物发酵生产甘油中，例如亚硫酸氢钠， 它与代谢过程中的乙醛生成加成物。
11
a
7.水分 功能：生化反应均在水溶液中进行
12
a
二、培养基的类型
1.依营养物质的来源分类 天然培养基； 合成培养基，也称组合培养基（多用于定量研究）； 半合成培养基，（用的最多，在部分天然有机碳源、
氮源、生长因子的基础上，适当加入一些化学药品）；
1）、孢子培养基
2）、种子培养基
3) 、 发酵培养基
4）、补料培养基
5）、加富培养基
6）、选择培养基
7）、鉴别培养基
8）、增殖和保存培养基
9）、富集培养基
17 10）、测定培养基
a
三、发酵培养基的选择
一）、配置培养基的原则 1、根据不同微生物的营养需要配置不同的培养基 2、注意各营养物质的浓度和配比 3、调节适宜的物理化学条件 4、根据培养微生物的目的配置 5、尽量使用廉价易得的原料
缺点：高温高压下进行，设备要求耐腐蚀、耐高温、
耐高压，副反应多，对原料要求严格，淀粉颗粒不宜
23 过大，淀粉乳浓度不能过高。
a
2、酶解法：（双酶水解法） 定义：用淀粉酶将淀粉水解为葡萄糖的过程。一般
伊红-美蓝培养基(检查肠道细菌用)
蛋白胨 10克 K2HPO42克乳糖10克琼脂25克，水1000毫升，pH7.6 2％伊红水溶液2毫升0.5％美蓝水溶液2毫升将乳糖、伊红、美蓝分别
实训五培养基的制备与灭菌
棉塞制作
五、实验内容
目前，有条件的实验室已使用.塑料试 管帽、金属试管帽、硅胶泡沫塞替代棉塞， 此处介绍棉塞的制作，以备不时之需。
五、实验内容
（四）灭菌
1.培养基的高压蒸汽灭菌 ①需灭菌的物品(分装在试管、三角烧瓶中的
固、液体培养基)，棉塞、硅胶泡沫塞等用防潮 纸包好(防止锅内水汽把棉塞淋湿)，放人灭菌锅 内的套筒中。摆放要疏松，不可太挤，否则阻碍 蒸汽流通，影响灭菌效果。
一、实验目的
1.学会一般培养基的制备原理、方法。 2.掌握培养基及器皿的灭菌方法。
二、实验原理
培养基是根据微生物生长繁殖的营养需要，用 人工方法配制而成的基质,其中含有水、碳源、 氮源、无机盐及各种生长因子。培养基可为微生 物的生长提供能源、组成菌体的原料，调节代谢 活动。
二、实验原理
不同微生物对营养物质的要求各不相同。 因此，配制培养基要根据微生物的营养特点。 一般，培养细菌常用牛肉膏蛋白胨培养基， 培养放线菌常用淀粉培养基，培养霉菌常用 马铃薯培养基，培养酵母菌常用麦芽汁培养 基(或麦芽糖、蛋白胨培养基)。
培养基的分装
四、实验方法
①液体培养基：分装高度以试管高度的1/4左右为 宜。
②固体培养基：分装试管，每管装液量为管高的 1/5，灭菌后制成斜面。分装三角烧瓶的量以不超过 1/2为宜；倒平板的培养基每管装15～20mL。
③半固体培养基：分装试管一般以管高度1/3为宜， 灭菌后制成斜面或垂直待凝成半固体深层琼脂。
3.每一小组准备lmL塑料吸嘴5支(湿热蒸汽灭
菌)，培养皿12套(干热灭菌）。
六、实验报告
写出你所制备的培养基的配方，并 分析其中所含物质对微生物生命活动所 起的作用。
⑤灭菌完毕，待压力自然降至“0”时，打开放气 阀，注意不能打开过早，否则突然降压致使培养基冲 腾，使棉塞、硅胶泡沫塞沾污，甚至冲出容器以外。
实验一 培养基的制备与灭菌
实验一培养基的制备与灭菌一、实验目的1. 了解配制培养基的一般方法和步骤;掌握牛肉膏蛋白胨培养基、马铃薯葡萄糖(蔗糖)培养基的制备方法。
2. 了解灭菌的原理，掌握高压蒸气灭菌的操作方法。
二、实验器材1. 药品:牛肉膏;蛋白胨;氯化钠;葡萄糖(蔗糖);琼脂;1N NaOH;1N HCl等。
2. 仪器及其他:试管;锥形瓶;量杯;玻璃棒;漏斗;纱布;棉花;报纸;天平或台秤;马铃薯;电炉;铝锅;灭菌锅等。
三、实验方法(一)配制培养基的基本过程:(1)称量:按照培养基配方，称取各种原料放于锅中;(2)溶解:锅中加入所需水量(自来水)，加热溶解。
要不断搅拌，以免糊底烧焦，最后加水补足失去的水分;(3)调pH值:按配方要求调节;(4)过滤:用过滤纸或多层纱布过滤，一般无特殊要求，此步可以省去。
(5)分装:按实验要求，可将配制的培养基分装入试管或三角瓶内。
分装时可用漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上而造成污染。
分装量:斜面培养基装入的培养基约为试管高度的l/5,1/4，灭菌后制成斜面。
分装入三角瓶内以不超过其容积的一半为宜。
(6)加棉塞:试管口和三角瓶口塞上用普通棉花(非脱脂棉)制作的棉塞。
制作棉塞时，应选用大小、厚薄适中的普通棉花一块，铺展于左手拇指和食指扣成的圆孔上，用右手食指将棉花从中央压入圆孔中制成棉塞，然后直接压入试管或锥形瓶口。
也可借用玻璃棒塞入，也可以用折叠卷塞法制作棉塞(见图)。
棉塞的形状、大小和松紧度要合适，四周紧贴管壁，不留缝隙，才能起到防止杂菌侵入和有利通气的作用。
棉塞不宜过紧或过松，塞好后以手提棉塞，以瓶、管不下落为准。
棉塞的2/3应在管内，上端露出1/3，便于提拔。
如制作时不慎沾上培养基则不可再用。
(7)包扎:加塞后，将三角瓶的棉塞外包一层牛皮纸或双层报纸，以防灭菌时冷凝水沾湿棉塞。
若培养基分装于试管中，则应以7支在一起，再于棉塞外包一层牛皮纸，用绳扎好。
然后用笔注明培养基名称、组别、日期。
实验七 培养基的配制和灭菌
（二）培养基灭菌
培养基分装好后，塞上棉塞，外面再包一牛皮纸，便 可灭菌。灭菌的时间和温度按各培养基规定进行，以保证 灭菌效果和不损坏培养基的必要成分。培养基经灭菌后， 可放在37恒温箱培养24小时，无菌者方可使用。 在实验室里用得最多的加热灭菌法是高压蒸汽灭菌 和干热灭菌。一般培养基和水等用高压蒸汽灭菌，而玻璃 器皿常用干热灭菌。蒸汽灭菌为105-121℃，15-20分钟， 干热灭菌为160-170℃，1-2小时。目的都是使细菌体内蛋 白质凝固变性而达到灭菌的目的。 在同一温度下，湿热杀菌效力比干热大，因为在湿 热情况下，菌体吸收水分，使蛋白质易于凝固，同时湿热 穿透力强，而且当蒸汽与被灭菌物体接触凝成水分时，又 可放出热量，使温度迅速增高，从而增加灭菌效力。
高压蒸汽灭菌步骤如下： 高压蒸汽灭菌步骤如下：
灭菌器内加入一定量的水，将包扎好的物品放入其中。 1. 灭菌器内加入一定量的水，将包扎好的物品放入其中。 接通电源， 2. 接通电源，进行加热 排除高压锅内的空气，可将排气阀打开， 3. 排除高压锅内的空气，可将排气阀打开，待排出大气后 关闭排气阀；或关闭排气阀，待压力上升到0.5kg/cm2 0.5kg/cm2时再 关闭排气阀；或关闭排气阀，待压力上升到0.5kg/cm2时再 打开排气阀，待压力回复到0时再关闭排气阀。 打开排气阀，待压力回复到0时再关闭排气阀。 当压力达1.05kg/cm2 1.05kg/cm2时 此时灭菌器内的温度为121℃ 121℃， 4. 当压力达1.05kg/cm2时，此时灭菌器内的温度为121℃， 维持20min 对热不稳定的培养基如含有葡萄糖、 20min。 维持20min。对热不稳定的培养基如含有葡萄糖、氨基酸等 物时，应适当降低压力，延长时间。 物时，应适当降低压力，延长时间。 灭菌时间一到，切断电源，待压力降至零时， 5. 灭菌时间一到，切断电源，待压力降至零时，才能打开 排气阀，然后打开灭菌器盖， 排气阀，然后打开灭菌器盖，取出物品
培养基的制备与灭菌实验报告
培养基的制备与灭菌实验报告一、引言在微生物学研究中，培养基的制备与灭菌是非常重要的步骤。
培养基是供养微生物生长和繁殖所必需的营养物质的混合物，而灭菌则是为了消除其中的有害微生物，保证培养基的纯净度。
本实验旨在探讨培养基的制备与灭菌的方法与步骤，以及其对微生物培养的影响。
二、培养基的制备2.1 选择培养基成分培养基的成分根据所需培养的微生物种类和目的而定，常见的成分包括碳源、氮源、无机盐、生长因子等。
在制备培养基之前，需要明确所需微生物的营养需求，选择合适的成分。
2.2 配制培养基根据所选的成分和配方，按照一定比例将各种成分溶解在适当的溶剂中，常见的溶剂包括蒸馏水和生理盐水。
注意溶解顺序和温度，保证各种成分充分溶解。
2.3 调节pH值微生物对pH值的要求各不相同，因此在制备培养基时需要调节pH值。
使用酸碱溶液逐滴加入培养基中，同时使用pH试纸或pH计检测pH值，直到达到所需的范围。
2.4 灭菌前的处理在灭菌之前，需要对培养基进行一些处理，包括过滤、加热和冷却等。
过滤可以去除其中的固体杂质和大颗粒微生物。
加热可以杀灭其中的有害微生物，常用的方法包括高温灭菌和压力灭菌。
冷却后的培养基可以用于微生物的培养。
三、灭菌实验3.1 高温灭菌高温灭菌是常用的灭菌方法之一，其原理是利用高温杀灭微生物。
将配制好的培养基倒入培养瓶中，盖上瓶盖，放入高温灭菌器中。
设置合适的温度和时间，一般为121℃，15-20分钟。
高温灭菌后的培养基可以用于无菌条件下的微生物培养。
3.2 压力灭菌压力灭菌是一种利用高温和高压杀灭微生物的方法。
将配制好的培养基倒入培养瓶中，盖上瓶盖，放入压力灭菌器中。
设置合适的温度和压力，一般为121℃，15-20分钟。
压力灭菌后的培养基可以用于无菌条件下的微生物培养。
3.3 灭菌效果验证灭菌后的培养基需要进行灭菌效果验证，以确保其中没有活菌存在。
常用的方法包括接种试验和平板计数法。
接种试验是将灭菌后的培养基接种到无菌平板上，观察是否有菌落生长。
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2）半固体培养基 再配置号的液体培养基中加入0.5%左右的琼 脂作为凝固剂，形成的培养基称之微半固体培 养基。 主要用于菌种鉴定，观察细菌运动特征及噬菌 体的效价测定等
3）液体培养基； 培养基中80～90%是水。
3.依培养基的用途来分 1）、孢子培养基 2）、种子培养基 3) 、 发酵培养基 4）、补料培养基 5）、加富培养基 6）、选择培养基 7）、鉴别培养基 8）、增殖和保存培养基 9）、富集培养基 10）、测定培养基
焦碳酸二乙酯、酚类
（2）第二大类：抗代谢药物 化学结构与微生物必须的代谢物类似 例如：磺胺类化合物取代氨基苯甲酸
（3）第三大类：抗生素
三、加热灭菌的原理
1.、微生物的热阻：微生物对热的抵抗力；
致死温度、致死时间
2、微生物的热致死动力学：对数残留定律
一级反应： 用N表示残留活菌个数，则活菌的减少率（死亡 率），与N呈线性关系，即：
酰胺（PAM），搅拌均匀 上清液。
三、谷氨酸发酵糖蜜前处理
1.糖蜜预处理法 活性炭处理法
树脂处理法
亚硝酸处理法 2.添加化学药剂处理法
添加青霉素法
添加表面活性剂 添加抗氧剂法 3.追加糖蜜法 4. 营养缺陷型变异株法
第四节 其他原料的处理
一、纤维素及发酵废液的处理 （一）、利用纤维素废料生产SCP 稻草、麦秆、玉米的茎和叶、甘蔗渣、废 纸等 流程如下：
三、发酵培养基的选择
一）、配置培养基的原则 1、根据不同微生物的营养需要配置不同的培养基 2、注意各营养物质的浓度和配比 3、调节适宜的物理化学条件
4、根据培养微生物的目的配置
5、尽量使用廉价易得的原料
二）、配置培养基的方法
1、生态模拟 2、查阅文献
3、借助优选法或正交试验法精心设计培养基配方
7.水分 功能：生化反应均在水溶液中进行
二、培养基的类型
1.依营养物质的来源分类 天然培养基； 合成培养基，也称组合培养基（多用于定量研究）； 半合成培养基，（用的最多，在部分天然有机碳源、 氮源、生长因子的基础上，适当加入一些化学药品）；
2.依培养基的物理状态来分： 1）固体培养基 A、凝固培养基 ：即遇热可融化，冷却后则凝固的固 体培养基 B、非可逆性凝固培养基：指有血清凝固成的固体培 养基或由无机硅胶配成的凝固后即不能再融化的固体 培养基 C、天然固体培养基：由天然固体状基质直接制成的 培养基，如麸皮，米糠，木屑等 D、滤膜：是一种坚韧且带有无数微孔的醋酸纤维薄 膜，把它制成圆片状覆盖再营养琼脂或浸有培养液的 纤维衬垫上，就形成了具有固体培养基性质的培养条
2、酶解法：（双酶水解法） 定义：用淀粉酶将淀粉水解为葡萄糖的过程。一般 分为两步：第一步是利用α－淀粉酶将淀粉液化转为 糊精及低聚糖，使淀粉的可溶性增加，这个过程称为
液化。第二步是利用糖化酶将糊精或低聚糖进一步水
解，转变为葡萄糖的过程，称为糖化。也称双酶法
（二）、葡萄糖的复合反应及其影响因素
复合反应：在淀粉的酸糖化过程中，水解生成
的葡萄糖受酸和热的影响，葡萄糖分子之间通
过糖苷键相聚合，生成二糖、三糖及其他低聚
糖。
影响复合反应的因素： 1、淀粉浓度的影响（用DE值表示葡萄糖纯度）： DE值＝还原糖/干物质×100％
2.、酸的影响：
优点：1）蒸汽来源容易，操作费用低廉，本身无毒 2)蒸汽具有很强的穿透力，灭菌易于彻底 3）蒸汽均有很大的潜热，冷凝后的水分有利于湿热灭菌 4）蒸汽输送可借助本身的压强，调节方便，技术管理容易 缺点：1)设备费用高 2）不能用于怕受潮的物料灭菌
3、射线灭菌 紫外线、高速电子流的阴极射线、X射线和Y射线 化学药品灭菌法 （1）第一大类：表面消毒剂 高锰酸钾溶液：0.1～0.25%、漂白粉 、75％的酒精、 新洁尔灭和杜灭芬、甲醛 37％、戊二醛、过氧乙酸、
纤维原料
粉碎
水解
中和
澄清
过滤
发酵罐培养
分离
废液
种子
营养盐
菌体
浓缩
干燥
磨碎
成品
（二）利用柠檬酸中和滤液生产酵母
酵母菌种
中和废液
斜面
盐酸调pH3.5
一级种子
发酵 用于发酵培养基 的配置等 包装
二级种子
离心分离
二次废液
干燥
粉碎
二、亚硫酸盐废液的处理 （一）亚硫酸盐制浆废液生产酒精和蛋白质 1、亚硫酸盐纸浆废液生产酒精 2、亚硫酸盐纸浆废液发酵生产蛋白质 3、亚硫酸铵法非木材制浆废液培养SCP （二）亚硫酸盐废液发酵生产乳酸
第二章 培养基的制备与灭菌
第一节 培养基的原材料
一、培养基的营养成分及用途
1.能源 光 光能自养 自养菌 氢、硫、氨 化能自养 亚硝酸盐、亚铁盐 碳水化合物等有机物 石油天然气和石油化工产品（如醋酸） 异养菌
功能：生长、繁殖需要；
碳酸气 2.碳源 淀粉水解糖、糖蜜、亚硫酸盐纸浆废液等 石油、正构石蜡、天然气 醋酸、甲醇、乙醇等石油化工产品
伊红-美蓝培养基(检查肠道细菌用)
蛋白胨 10克 K2HPO42克乳糖10克琼脂25克，水1000毫升，pH7.6 2％伊红水溶液2毫升0.5％美蓝水溶液2毫升将乳糖、伊红、美蓝分别 灭菌后，加入灭菌的培养基中摇匀，倒平板。
四、原料转换及意义 1、节约原料，减低单耗，提高发酵单位和总 收率； 2、开拓新的原料资源和微生物资源：野生植 物淀粉、植物纤维、木屑水解物、石蜡、醋酸、 乙醇
4、实验比较 实验的规模一般由定性到定量，由小到大。 发酵培养基的用途与要求、成分、配比经实验确定，配制时兼顾 原料来源、成本及工艺管理；
培养基配方举例
牛肉膏蛋白胨培养基(常用的细菌培养基)
牛肉膏5克 蛋白胨10克 NaCl5克 水1000毫升 pH7.2～7.4 (琼脂15～20克)
高氏一号培养基(常用的放线菌培养基)
H H O 进攻糖苷键的O 形成共轭酸 糖苷键断裂
颜色变化：蓝色 红 浅红
暗紫
紫
红褐 暗红
2、淀粉酸水解反应动力学
属于单分子一级反应 类型： K：反应速度常数， 由反应条件（如温度、 酸度等）而定 C：淀粉浓度
dc k c dt
3、影响酸水解的因素 酸的种类 主要因素 浓度（酸的浓度、淀粉的浓度） 水解温度
5.特殊生长因子：硫胺素、生物素、对氨基苯
甲酸、肌醇等
功能：酶的辅助部分，维持生命活动；
6．发酵的促进剂与抑制剂 发酵培养基中某些成分的加入有利于调节产物 的形成，而并不促进微生物的生长，这些物质 包括前体、促进剂和抑制剂
1）、前体：指某些化合物加入到发酵培养基中， 能直接被微生物在生物合成过程中结合到产物
淀粉水解成葡萄糖的反应过程中同时发生这：水解反 应、复合反应、分解反应；其中水解反应是主要的。
复合反应：葡萄糖分子间经1-6糖苷键结合成龙胆二糖 （有苦味）、异麦芽糖和其他低聚糖（合称复合低聚 糖）。
分解反应：葡萄糖
羟甲基糠醛
有机酸、色素
等
㈠淀粉的水解反应 1.淀粉水解过程
3
α-淀粉酶（液化） 葡萄糖淀粉酶（糖化） 优点：1、反应条件温和。 2、酶的专一性强，副反应少 3、可在较高的淀粉乳浓度下水解 4、糖液的营养物质丰富 5、糖液色泽浅，无苦味，有利于糖液的精制 缺点：时间长（2～3）天，要求的设备多，糖液过滤 困难。
3、酸酶结合法 酸酶法 酶酸法
二、淀粉酸水解理论基础
可溶性淀粉20克 KNO31克 K2HPO40.5克 MgSO40.5克 NaCl 0.5克 FeSO40.01克水1000毫升琼 脂15～20克pH7.4～7.6
察氏培养基(培养霉菌用) 蔗糖 20克 NaNO33克 K2HPO41克 KCl1克 MgSO40.5克 FeSO40.01 克 琼脂20克 水1000毫升自然pH 无氮培养基(培养自生固氮菌用) 葡萄糖 10克 NaCl0.2克 KH2PO40.2克 CaSO4· 2H2O0.1克 MgSO40.2 克 CaCO35克 琼脂 20克水1000毫升自然pH
三、木屑水解液发酵生产衣康酸
第五节 培养基灭菌
一、消毒与灭菌在发酵工业中的应用 消毒：指用物理和化学方法杀死物料、容器、器具内 外的病源微生物。一般只能杀死营养细胞而不能杀死 细菌芽孢。
灭菌：用物理或化学方法杀死或除去环境中所有微生 物，包括营养细胞、细菌芽孢和孢子。 消灭杂菌和防止杂菌污染
功能：提供能量、构成ຫໍສະໝຸດ 体、代谢产物的物 质基础；
有机氮：黄豆饼粉、花生饼粉、玉米浆、蛋白胨、 3.氮源 酵母粉、鱼粉、发酵菌丝体、酒糟水等
无机氮： 尿素、硫酸铵、氨水、硝酸盐
功能：构成菌体、含氮代谢物；
磷酸盐、钾盐、钙盐等矿物盐 4.无机盐
铁、锰、钴等微量元素
功能：构成菌体，参与酶的组成，维持酶活 性，调节渗透压，调节pH值，维持氧化还原 电位；
分子中去，而其自身的结构没有多大的变化，
但产物的产量却因加入前体而有较大的提高。