酵母核糖核酸的提取及测定
实验三酵母核糖核酸的提取及测定
实验三酵母核糖核酸的提取及测定
实验三是关于酵母核糖核酸（RNA）的提取和测定的实验。
1. 提取酵母RNA：
a. 取一份含有酵母的培养基培养液，将其转移到离心管中。
b. 将离心管在12000转/分钟的速度下离心5分钟，将沉淀（酵母细胞）收集到离心管底部。
c. 弃去上清液，加入适量的稀释RNA保护剂，如TRIZOL 或RNeasy试剂。
d. 快速颠倒离心管以完全溶解酵母细胞，并使RNA与纯化试剂进行结合。
e. 加入氯仿溶液，再次快速颠倒离心管混合，形成水相和有机相层。
f. 离心管在12000转/分钟的速度下离心15分钟，使两个相分离。
g. 将水相（含有RNA）转移到新的离心管中，并加入同等体积的异丙醇。
h. 用洗涤液和乙醚混合洗涤RNA样品，最后用无水乙醚洗涤RNA。
i. 最后，将RNA用无水乙醚洗涤并直接转移到无附加盐的水中得到纯化的RNA样品。
2. 测定酵母RNA：
a. 使用分光光度计在260nm波长下测量纯化的RNA溶液的吸光度。
b. 根据吸光度读数，用以下公式计算RNA的浓度：浓度（μg/mL）= 吸光度读数 ×稀释倍数 × 50。
c. 可选的是用琼脂糖凝胶电泳分析纯化的RNA样品，以确定RNA的完整性和纯度。
这是一个简单的方法，用于提取和测定酵母中的RNA。
根据需要，还可以使用其他提取试剂和测定方法。
实验三 酵母核糖核酸的提取及测定
实验三酵母核糖核酸的提取及测定—预习报告一、研究背景生物大分子物质通常是指动物植物微生物进行新陈代谢时所产生的蛋白质和核酸等有机化合物。
它不仅是生物科学工作者研究者的重要对象，且与化学、医学和食品等工业部门有密切关系。
在科研和医学方面，探讨结构与功能、防治某些疾病时常需要较纯的生物大分子物质。
然而这类物质往往与自然界存在的各种不同的化合物结合在一起或自身之间相互结合在一起，离体后稳定性较差，含量偏低，且提取的材料复杂，因此纯化的方法也很多。
微生物是工业上大量生产核酸的原料，其中酵母最为理想。
本次实验以干酵母粉为实验材料，提取RNA，并测定其含量。
二、研究目标掌握核酸分离纯化的基本设计思想及主要操作细节和生物制品开发的基本思路。
三、研究策略酵母细胞中RNA通常与蛋白质结合。
要提取RNA就要破细胞壁，让它释放出来。
浓盐法通过改变细胞膜的通透性释放出胞内物质，然后沸水浴使RNA水解酶失活。
再通过调节pH将RNA充分沉淀，洗涤，干燥，测量。
四、研究方案及可行性分析浓盐法是在加热条件下，利用高浓度的盐改变细胞膜的通透性，使RNA释放出来。
提取RNA时需注意掌握温度，直接在90~100℃浸提，避免在20~70℃之间的时间过长，磷酸二酯酶和磷酸单酯酶作用活跃的温度范围，会使RNA因降解而降低提取率。
洗涤沉淀时要反复抽提，离心以纯化RNA。
测定提取的核酸含量，只需测定组成核苷酸的任意一种组分即可。
碱基在260nm有光吸收，采用紫外吸收法可测定核酸含量。
五、具体实验设计1、所需主要材料：食品用干酵母粉；试剂：10%NaCl, 6MHCl , 95%乙醇，2%氨水，RNA沉淀剂（0.5g钼酸铵+193ml水+7ml70%过氯酸）；仪器设备：烘箱，离心机，天平，紫外分光光度计，移液器，恒温水浴锅，玻璃匀浆器，pH计。
主要器皿：研钵，离心管，容量瓶25ml 50ml；具塞试管；三角瓶；小烧杯。
2、具体操作步骤1.提取：称取7g酵母粉，于研钵中小心研磨成面粉状粉末，转移至三角瓶。
实验三 酵母核糖核酸的提取及测定(实验报告)
生物化学实验报告实验三酵母核糖核酸的提取及测定一、研究背景及目的RNA（核糖核酸）属酸性高分子化合物，是遗传信息的载体，由数量不等的核糖核苷酸通过磷酸二酯键连接而成。
由于RNA在细胞内能够行使各种各样的生物功能，参与蛋白质生物合成、调控基因表达、作为核酶催化生化反应活性等，对维持生物体的正常发育有着重要作用。
RNA制剂是以RNA及其衍生物为材料，经加工制成的产品，主要包括从富含RNA 的生物体中的提取物、自溶物或者降解产物加工制成的各种商品。
核糖核苷酸与其衍生物作为一大类RNA制剂，在生物体内有着诸多的功能，例如：ATP是细胞内的能量通用货币，cAMP作为第二信使传递胞外信号，CoⅠ、CoⅡ、CoA、FAD作为酶的辅因子在催化反应中起重要作用，UDP等作为单糖载体在糖代谢中起着重要作用等。
此外，鸟苷酸（GMP）和肌苷酸（IMP）是强力助鲜剂，胞苷酸（CMP）和尿苷酸（UMP）可作为生产治疗癌症、肝炎及冠心病等药物的原料；在化妆品中加入核酸或其水解物，可促进皮肤蛋白合成，达到养护皮肤的作用；在农业上，RNA降解物具有促进作物生长增产的作用，因此RNA制剂被广泛应用于医药、食品、农业、日化、环境保护等各产业，具有广阔的商业前景，形成了一大新兴产业。
[1]可见，无论是科研工作还是商业产品的生产过程，都需要大量的纯品RNA作为原料。
但是RNA的活化能较高，不易直接合成，而天然材料中的RNA往往与细胞内的其他化合物混在一起，故采用廉价、合适的手段分离纯化得到RNA就显得至关重要。
目前，人们已经摸索出来了多种多样的方法，这些方法各有特点，但其基本的思路和程序大致相似，基本战略也是有规律可循的。
本实验中，我们需要了解RNA制剂开发应用的前景和基本思路，掌握RNA分离纯化的设计思想及主要的操作细节，并以酵母为材料学习RNA提取和测定的基本操作方法。
二、原理1.选材即选取富含RNA的生物材料，微生物由于其原料的易获得性被广泛应用于工业上大量生产RNA的原料，本实验中我们以食品用干酵母粉直接作为RNA提取的原料。
酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验报告
酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验报告实验目的，通过实验，掌握酵母核糖核酸的分离及组分鉴定方法，加深对核酸的理解。
实验仪器和试剂，离心机、pH计、琼脂糖凝胶电泳仪、琼脂糖、酵母细胞、蛋白酶K、RNase A、RNase T1、DNase I、酚/氯仿、异丙醇、无水乙醇、三氯乙酸、乙醇、磷酸盐缓冲液、Tris-HCl缓冲液、EDTA、蛋白酶K缓冲液、RNase A 缓冲液、RNase T1缓冲液、DNase I缓冲液。
实验步骤：1. 酵母细胞的裂解。
将酵母细胞加入磷酸盐缓冲液中，加入蛋白酶K，用pH计调节至碱性，加入酚/氯仿混合液，离心分离上清液和沉淀。
2. RNA的提取。
将上清液加入异丙醇，离心，取上清液，加入无水乙醇，沉淀RNA，用乙醇洗涤沉淀物，最后用DEPC水溶解RNA。
3. RNA的纯化。
将RNA加入三氯乙酸和乙醇混合液，沉淀RNA，用乙醇洗涤沉淀物，最后用DEPC水溶解RNA。
4. RNA的酶切。
将RNA加入RNase A缓冲液，RNase T1缓冲液和DNase I缓冲液进行酶切反应。
5. RNA的电泳分析。
将酶切后的RNA样品加入琼脂糖凝胶电泳仪中进行电泳分析，观察RNA的组分鉴定。
实验结果：经过琼脂糖凝胶电泳分析，我们观察到了酵母核糖核酸的分离及组分鉴定结果。
根据不同的迁移率，我们可以清晰地看到RNA在凝胶上的分布情况，从而确定RNA的组成和大小。
实验结论：通过本次实验，我们成功地实现了酵母核糖核酸的分离及组分鉴定。
通过实验，我们加深了对核酸的理解，掌握了相关的实验技术和方法。
实验总结：本次实验不仅是对课堂知识的巩固和实践，也是对科学研究方法的探索和运用。
通过实验，我们不仅学到了理论知识，更加深了对实验技术和方法的理解和掌握。
在今后的学习和科研工作中，我们将继续努力，不断提高实验技术水平，为科学研究做出更大的贡献。
以上就是本次酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验的报告内容，谢谢阅读。
实验三 酵母核糖核酸的提取及测定
实验三酵母核糖核酸的提取及测定一.研究背景及目的核苷酸类物质及其衍生物是遗传工程、医药、食品、农业生产和科研领域十分重要的生化试剂和原料。
其功能有：二.原理微生物是工业上大量生产核酸的主要原料。
采取酵母因为核酸的提取不需要很高活性的菌体，酵母是啤酒厂废弃的原料，从经济角度讲，用来提取核糖核酸最为理想。
提取RNA的方法很多，常见的有如下几种：（本次实验采取浓盐法10%NaCl）核酸是由糖、碱基、磷酸以一定比例构成的，理论上定量核酸只需测定其中一种即可。
定磷法准确、微量、快速，是最好的方法。
紫外吸收法简单快速，但是当体系内有蛋白质及其他含共轭双键物质存在时干扰较大。
本次实验采用紫外吸收法。
基本的提取策略为：我们可以通过使用化学因素破坏细胞膜，使其中的核酸流出来，接着纯化、测定含量即可。
其中影响我们纯度和定量的主要因素就是蛋白质及有共轭双键物质的干扰，所以，我们的主要目标就是排除蛋白质和有共轭双键物质对含量测定的影响。
尽量保持RNA的完整性有利于提取率。
对于RNA酶的干扰，工业生产的流水化作业，使得人员参与较少，而且工业生产并不像实验室对RNA的完整性要求那么高，所以工业生产中RNA酶的存在不是主要矛盾。
三.仪器与试剂试剂：10%NaCl；6MHCl；95%乙醇（分析纯）；2%氨水；RNA沉淀剂仪器：722-分光光度计（上海分析仪器总厂）；微量可调手动移液器(大龙牌)；具塞试管（15ml）;漏斗（25ml一只，50ml两只）；研钵；匀浆器；低速离心机（飞鸽牌，TDL-40B，上海安亭科学仪器厂）；药物天平（HCTP12B1，北京宣武天平厂制）；硫酸纸；烘箱（）四.实验步骤按下表进行操作：五.数据整理与结果计算I.干燥RNA 样品含量：260260280一般RNA 的OD 260/ OD 280>2;DNAOD 260/ OD 280约为1.9；样品中有蛋白质含量较高时比值下降。
因此，可推断，该体系为RNA 且较纯。
酵母核糖核酸的提取及测定
酵母核糖核酸的提取及测定酵母核糖核酸的提取及测定⼀、实验背景及⽬的核糖核酸(RNA)和它的降解物核苷酸、核苷及其衍⽣物在⽣物化学、医药、⾷品添加剂、农业等领域有着⼴泛的应⽤。
⽐如能够促进作物的⽣长，在⽔稻、⼩麦、柑橘及多种蔬菜⽣产中应⽤，取得了明显的增产效果。
像鸟苷酸(GMP)和肌苷酸(IMP)还是强⼒助鲜剂，胞苷酸(CMP)和尿苷酸(UMP)可作为⽣产治疗癌症、肝炎及冠⼼病等药物的原料。
⽽利⽤微⽣物资源提取氨基酸、核苷酸等⽣物⼩分⼦，具有成本低、⾮化学合成、⽆毒、⽆害的特点。
[1] 随着啤酒等发酵⾏业的快速发展，产⽣了相应的⼤量发酵副产物，如何利⽤这些副产物，既做到不污染环境，还能产⽣良好的经济效益，⼀直是研究的热点。
⽽啤酒废酵母中RNA 含量达6%~8%，是⽣产RNA的较好原料，此外，抽提后的菌体蛋⽩质(占⼲菌体的50%)还具有很⾼的利⽤价值。
所以利⽤啤酒废酵母⽣产RNA形成了⾮常有益的产业链。
[2] 本实验⽬的就是学习从酵母中提取RNA的⽅法并掌握其测定⼿段。
⼆、实验原理微⽣物是⼯.业上⼤量⽣产核酸的原料，其中以酵母最为理想，酵母核酸中主要是RMA (2.67~10.0%)，DNA很少(0.03~0.516%)，菌体容易收集，RMA也易于分离。
RMA提制过程是先使RNA从细胞中释放，并使它和蛋⽩质分离，然后将菌体除去，再根据RNA等电点在pH2. 0~2.5的特点，将体系pH调⾄其等电点，使之沉淀，进⾏离⼼收集。
提取RNA的⽅法很多，在⼯业⽣产上常⽤的是稀碱法和浓盐法。
稀碱法利⽤碱使细菌细胞壁⽔解，使RNA释放出来，浓盐法是在加热条件下，利⽤⾼浓度的盐改变细胞膜的通透性，使RNA释放出来，RNA 钠盐易溶于⽔，在含盐的菌体溶液中，RVA 有较⾼的溶解度。
⼆者均通过控制温度使蛋⽩质变性沉淀，通过离⼼将RNA及蛋⽩质和酵母菌体分离，进⽽在等电点沉淀RNA，从⽽达到提取⽬的。
本实验采⽤浓盐法(10% NaCl),是⾷品医药卫⽣领域制备RNA 制剂的经典⽅案。
实验三酵母核糖核酸(RNA)的提取
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12
2.磷酸的鉴定：取试管两只，分别标明测 定管与对照管，然后依次加入下列各试剂：
管号
RNA水解 5％H2SO4 钼酸铵试剂 液
测定管 0.2ml
不加
5滴
VC 5滴
对照管 不加
0.2ml
5滴
5滴
放置数分钟，观察两管颜色有何不同。 磷酸+钼酸铵——磷钼酸+Vc——钼蓝
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实验三 酵母菌RNA的提取、鉴定及
定量测定
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1
一、实验目的
• 掌握稀碱（NaOH）法分离酵母RNA的原理 与方法
• 了解RNA的组分并掌握定性鉴定的具体方法。
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2
二、实验原理
• （一）目前常用的RNA的制备方法 • 浓盐法：是用高浓度盐溶液处理，同时加热，以改变细胞壁
的通透性，使核酸从细胞内释放出来。成本低、适于大规模 操作。
3.核糖的鉴定：取试管两只，分别标明测定管与 对照管，然后依次加入下列各试剂。
管 号 RNA水解液 5％H2SO4 3，5-二羟甲苯
测定管 4滴
不加
6滴
对照管 不加
4滴
6滴
将两试管放入沸水浴内加热10分钟，比较两管之颜色。
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14
4.脱氧核糖的鉴定：取两试管分别标明测定管与 对照管，然后依次加入下列各试剂。
管 号 RNA水解液 5％H2SO4 二苯胺
测定管 4滴
不加
6滴
对照管 不加
4滴
6滴
将两试管同时放入沸水浴内，加热10分钟后，比较两 管之颜色。
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思考题
酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验报告
酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验报告
实验名称：酵母核糖核酸的分离及组分鉴定实验报告
实验目的：通过实验，掌握分离酵母核糖核酸的技术和方法，
了解酵母核糖核酸的结构和组成，为深入研究生物分子提供基础
知识。
实验原理：酵母是常见的单细胞真菌，其细胞内含有多种生物
分子，其中包括核糖核酸，其主要作用是传递遗传信息。
酵母核
糖核酸在组成上分为核糖体RNA和转运RNA两类，其中核糖体RNA分子量较大，可以通过葡萄糖等物质的离心分离、盐析和凝
胶过滤等方法进行纯化。
实验步骤：
1.将酵母菌株培养至对数生长期，并收集其含有核糖核酸的细胞。
2.将酵母菌细胞裂解，并加入一定量的盐，使其发生盐析反应。
3.将含有核糖核酸的盐析液进行凝胶过滤，通过分子量筛选，
分离出核糖体RNA。
4.对分离出的核糖体RNA进行电泳实验，检测该分子的分子量和组成。
实验结果：
1.通过盐析实验，成功从酵母菌细胞中分离出核糖体RNA，依
据电泳图谱，该分子的分子量约为20kD。
2.通过对核糖体RNA的电泳图谱进行分析，可以发现，在核糖体RNA中，存在大约四分之三的核糖核酸分子为16S rRNA，其
它分子为其他转运RNA。
结论：通过本次实验，我们成功地从酵母菌的细胞中分离出核
糖体RNA，掌握了酵母核糖核酸的分离和组分鉴定等技术和方法，为深入研究生物分子提供了基础研究支持。
实验一 酵母核糖核酸的提取及组分鉴定
3
四、【实验方法与步骤】
1. RNA的提取
（1）称取1g酵母粉（或者酵母片）放入研钵中，加入10ml 0.04M NaOH 充分研磨｡ （2）将研磨液加入25ml大试管中，于沸水中加热30min。注意：加热 过程中（7min左右搅拌一次）或摇晃试管充分混匀均可。加热完毕后自 然冷却方可后续试验。 （3）将冷却后的试管内液体用离心机3000r/min离心15min。注意： 离心前务必平衡！ （4）将上清液缓慢倒入10ml的酸性乙醇溶液中。注意：要边到边 搅拌或者摇晃烧杯使之混匀。静置约15min后3000r/min离心5min，弃去 上清液，用10mL 95%乙醇洗涤沉淀1次。（即倒入乙醇后震荡试管，然 后3000r/min离心5min ，弃去上清液。） （5）所得沉淀即为提取的酵母中粗RNA，在空气里干燥后备用。
5
五、【实验结果、计算与分析】
• 说明各试管中现象 • 解释原因 • 得出结论
6
六、【思考题】
RNA组分鉴定的原理是什么？
七、【注意事项】
7
实验一 酵母核糖核酸的分离与组分鉴定
P178页
一、【实验目的】
掌握分离核糖核酸的一般原理及操作方法。
了解核酸的组分，掌握鉴定核酸组分的方法。
1
二、 【实验原理】
酵母核酸中RNA含量较多，RNA可溶于碱性溶液。在碱
性提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀，
由此即得出RNA的粗制品。 核糖核酸含有核糖、碱基（嘌呤碱、嘧啶碱）和磷酸各 组分。加硫酸煮沸可使其水解，从水解液中可以测出上述组 分的存在。
4
【实验方法与步骤】
2. RNA的组分鉴定
建议：可先将除RNA水解液以 外的试剂先混匀，最后加RNA 水解液亦可。定磷试剂除外。
酵母中RNA的提取与含量测定
酵母中RNA的提取与含量测定酵母是一类广泛应用于工业生产中的微生物，具有高温抗性、高碱性和高盐度等特殊环境适应能力，可生产出酵母菌辅酶、乳酸、醋酸、酒精、面包等产品。
酵母的研究也成为生物学、生物技术等领域的重要课题之一。
RNA（核糖核酸）是生命体中发挥重要生物学功能的分子之一，能够参与DNA复制、转录和翻译等生命过程，是研究生物学、分子生物学和基础医学等领域的重要手段之一。
因此，酵母中RNA的提取与含量测定是酵母研究的重要内容之一。
酵母中RNA的提取方法主要包括以下几个步骤：1.预处理样品：将培养的酵母细胞通过离心和去除培养基中的各种杂质，得到净化后的酵母细胞。
2.细胞破碎：通过化学方法或物理方法对细胞膜进行破坏，将细胞内的RNA暴露出来。
3.溶解RNA：加入适量的含有RNA保护剂（如二硫苏糖）的缓冲液，使RNA得到保护，不会受到核酸酶的影响，可以得到RNA溶液。
4.精制RNA：通过酚/氯仿提取及异丙醇沉淀的方法分离出纯化的RNA。
5.分析RNA：通过吸光度测定、电泳或荧光分析等方法检测RNA的纯度和含量。
酵母中RNA的含量测定可通过紫外吸收光度法进行。
该方法利用RNA在260nm处的吸收峰和RNA在280nm处的吸收峰的比值，来计算RNA的浓度。
其计算公式为：RNA浓度 = OD260值× 40 ug/ml × 稀释倍数其中，OD260值为RNA样品的吸光度值；40ug/ml为RNA样品在260nm处的吸收系数；稀释倍数为样品的稀释倍数。
除紫外吸收光度法外，也可以采用其他方法如电泳或荧光分析来测定RNA的含量。
总之，酵母中RNA的提取和含量测定可为酵母研究提供重要的实验基础和理论支持，为探索酵母生物学和基因工程等应用领域提供更为广阔的前景和新的研究突破。
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实验四酵母核糖核酸的提取及测定
一、研究背景
20世纪40年代，人们从细胞化学和紫外光细胞光谱法观察到凡是RNA含量丰富的组织中蛋白质的含量也较多,就推测RNA和蛋白质生物合成有关。
RNA参与蛋白质生物合成过程核糖核酸的有3类：转移核糖核酸(tRNA）、信使核糖核酸(mRNA)和核糖体核糖核酸(rRNA）。
不同的RNA有着不同的功能其中rRNA是核糖体的组成成分，由细胞核中的核仁合成，而mRNA，tRNA在蛋白质合成的不同阶段分别执行着不同功能。
RNA作为细胞中参与基因表达和蛋白质合成的重要物质，在平时学习中多有涉及，因此，建立正确的提取和测定RNA 的实验体系是很重要的。
二、实验原理
本实验采取浓盐法（10%NaCl），在加热条件下，利用高浓度的盐改变细胞膜的通透性，使ＲＮＡ释放出来。
本实验采用紫外吸收法测定核糖核酸含量，因为核酸的组成成分嘌呤及嘧啶碱基具有强烈的紫外吸收，最大吸收在260mm处，利用此特性可以对核酸进行定量测定。
三、仪器与试剂
1、材料：干酵母（安琪牌）
灰绿色pH试纸和黄色pH试纸
2、试剂：（1）10%NaCl
（2）6M HCl
（3）95%乙醇（分析纯）
（4）3%的氨水
（5）RNA沉淀剂（取0.5克钼酸铵，加水193ml，加7ml 70%过氯酸，总体积200ml）。
3、仪器：（1）电热鼓风干燥箱：天津市中环科技开发公司 DL-101-3BS
（2）离心机：上海安亭科学仪器厂飞鸽牌系列Anke 7DL-40B
（3）托盘天平
（4）分析天平：上海精密仪器科技厂 FA1004
（5）紫外分光光度计：北京瑞利分析仪器公司 UV-9600
四、实验步骤
1.提取：称取7g酵母，研钵中研磨成粉末，倒入三角瓶中，然后量取50ml 10%NaCl溶液，倒入三角瓶，是酵母粉充分彻底悬浮，之后小心放入沸水浴中，浸提半小时。
2.分离：将上述提取液取出，于冰浴中彻底冷却，转入离心管，以3500r/min离心30min。
使提取液及菌体残渣等分离。
3.沉淀RNA：将离心得到的上清液，小心倾倒于50ml小烧杯中，并置于冰浴中冷却，待溶液冷却至10℃以下后，于冰浴中在搅拌下（注意不要过分剧烈）小心用6MHCl调节pH至2.0（用灰绿色pH试纸），调好后继续于冰水中放置10min。
4.洗涤纯化：将上述悬浊液小心转入离心管，以3000r/min离心10min，得到RNA沉淀。
小心倾去上清液，直接与离心管中用95%乙醇洗涤RNA沉淀两次，每次用15ml乙醇，充分搅拌洗涤，然后以3000r/min离心7min。
5.干燥：用勺仔细将洗涤后的RNA沉淀从离心管内挖出涂于事先将边缘折起成框的称量纸上（预先用分析天平称重并记录数据），涂布均匀后，小心置于80℃烘箱内5min左右，使沉淀充分干燥。
将干燥后的RNA制品连同称量纸一起准确称重，而后小心将RNA制品的大部分转移至匀浆器中，将称量纸和残余RNA制品再次称重，记录下所有数据。
6.含量测定（紫外分光光度法）：采用比消光系数法，比消光系数本实验中给定A260=0.022。
测定步骤：将第5步中得到的溶液,转入小烧杯中，用3% 氨水小心调pH至
7.0（用黄色pH试纸），最后转入25ml容量瓶，用蒸馏水定容。
取两支试管，按下表操作：
摇匀，冰浴20min，转入离心管3500r/min离心10min，小心取上清液，各取0.5ml至50ml
值。
容量瓶，蒸馏水定容，B管做标准空白液，在紫外分光光度计上测定OD
260
五、数据整理和计算
1.原始数据：称取酵母量（样品重）W=7g
=0.5719g
空白称量纸重 W
1
总制品+纸重 W
=0.7015g
2
=0.5866g
残余制品+纸重 W
3
比消光系数 A
=0.022
260
测定消光值 OD
=0.358
260
2.推衍数据：总制品重：G
=0.1296 g
1
定量样品重：G
2
=0.1149g
3.结果计算：RNA含量（%）=E
260/A
260
*V*D*(1/G
2
)*100%=70.8%
V：被测样品体积 , D：样品测定时的稀释倍数
RNA提取率（%）=RNA含量*G
1
/W*100%=1.31%
六、结果分析
通过实验，我们更充分的理解了浓盐法提取RNA的原理，加深了对RNA相关性质的理解，对其含量有了一定的感性认识。
参考酵母RNA含量（2.67~10.0%），再由实验会出现一些误差，我们的数据还算合理。
实验数据也可以从一方面证明RNA在生物体内含量较多，是重要的组成部分之一。
七、思考题
1、在用紫外法测定RNA含量时，为什么要固定测定液的pH值，若pH值不固定，会影响测
定结果吗？为什么？
RNA中的嘌呤碱基和嘧啶碱基在不同pH条件下异构情况不同，对紫外光的吸收值不同，摩尔消光系数会随之改变。
所以应固定pH值；pH不固定会影响测定结果。
因为pH 不同的条件下，OD值也会随之改变，而实验中所给的比消光系数是在一定pH值下给定的。
所以pH值不固定会影响测定结果。
2、在测定中加钼酸铵—过氯酸沉淀剂的作用是什么？离心除去沉淀后，其上清液为什么要
稀释100倍？
①加钼酸铵—过氯酸沉淀剂是为了沉淀RNA，然后用得到的上清液做空白对照，以
减少定量样品重的蛋白质、糖类等物质对RNA含量测定的干扰；
②由朗博—比尔定律A=εbc，当吸光度在0.2~0.8时，测量误差最小，本实验中ε、
b都已固定，只能改变浓度c，是A在上述范围内，所以要稀释。
3、物质分离纯化的总体策略是什么？而分离纯化生命大分子是否有特别要注意的事项？为
什么？
①总体策略：保持物质活性，结构完整，纯化到所需浓度，能够大量提纯（量产）；
②分离纯化生命大分子时要注意：保持所提取物质活性；抑制或避免接触所能分解被
提纯物质的酶，以免物质被酶分解；反应条件应温和，避免能破坏生命大分子的因素。
八、参考文献
1.田宝勇赵星洁，《啤酒酵母RNA降解产物5′-核苷酸的高效液相色谱分析》，《酿
酒科技》,2008年第3期
2．李珊吴振强，《盐法提取啤酒废酵母RNA的研究》，《酿酒科技》2005年第7期
3.朱俊东黄国荣糜漫天郎海滨，《啤酒酵母中提取核糖核酸的研究》，《食品科学》
160 2006, Vol. 27, No. 02
4.廖鲜艳，李永仙等，《啤酒酵母胞内RNA提取的研究》，《酿酒》2002年第29卷第2
期
5.李志东邱峰张洪林，《影响浓盐法提取啤酒酵母RNA的工艺参数研究》，《化工技
术与开发》2007年第36卷第2期
九、实验小结
实验中，有如下几处可能产生误差，1、研磨时的充分程度，研磨的充分程度的不同，将直接影响最后所能提取到的RNA含量的多少。
2、本实验过程中，多次涉及到样品转移、离心、洗涤过程中，将不可避免的造成样品的损失，直接造成最终RNA提取率的下降。
3、实验操作过程中，实验人员并未佩戴手套，人体附带的RNase一类的酶可能会造成一定量的RNA分解。
4、烘干后的RNA样品很轻，在称量、转移过程中很容易造成损失。
本次试验较为成功，学会了紫外分光光度计，离心机等的使用，与搭档的配合也更加默契了。