酵母基因组DNA快速提取试剂盒(离心柱型)操作方法及步骤说明书
生工基因组提取试剂盒说明书
Ezup柱式细菌基因组DNA抽提试剂盒产品编号：SK8255/SK8256包装规格：50次/100次试剂盒组成组分 SK8255，50次 SK8256，100次纯化套件（吸附柱+收集管） 50套 100套Buffer Digestion 10 ml 20 mlBuffer BD 12 ml 24 mlPW Solution (concentrate) 18 ml 36 mlWash Solution (concentrate)7.5 ml 15 mlCE Buffer (pH 9.0) 15 ml 30 mlProteinase K 1.2 ml 2.4 mlEnzymatic lysis buffer 10 ml 20 ml操作手册1份1份保存方法及注意事项试剂盒于常温运输，室温（15~25°C）保存，有效期见包装，4°C保存时间更长。
该试剂盒中提供的Proteinase K溶液为特别优化的配方，方便使用，而且非常稳定，可以在室温保存半年以上而活性不受明显影响，如需进一步延长保存期限，请置4°C保存。
Buffer Digestion中含有刺激性的化合物，操作过程中应穿上实验服，戴好乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服，防止吸入口鼻。
沾染皮肤或眼睛后，请立即用清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医生的帮助。
产品介绍本试剂盒是生工生物工程（上海）有限公司最新研制成功的一种细菌基因组DNA抽提试剂盒。
本产品对经典的SDS裂解液进行了改良，并使用高浓度的蛋白变性剂，大大提高了裂解的效率，缩短了裂解的时间。
无需使用苯酚、氯仿等有毒试剂。
从1 ml过夜培养的细菌菌液可以获得10~20 µg DNA，OD260/OD280比值一般为1.7~1.9。
抽提出的DNA可用于酶切、PCR、文库构建、Southern blot等相关实验。
标准抽提步骤自备材料：水浴锅、小型高速离心机（最大离心力≥ 12,000 × g）、1.5 ml离心管、无水乙醇、异丙醇、RNase A溶液（20 mg/ml）等。
高纯度质粒大量快速提取试剂盒(离心柱型)操作方法及步骤说明书
杭州昊鑫生物科技股份有限公司 htpp://HighPure Plasmid Maxi Kit高纯度质粒大量快速提取试剂盒目录号：PL12试剂盒组成、储存、稳定性：试剂盒组成保存10次(PL1201)RNaseA（10mg/ml）－20℃750µl溶液P1 4℃77 ml溶液P2 室温77 ml溶液N3 室温77 ml去蛋白液PE 室温63 ml第一次使用前按说明加指定量乙醇漂洗液WB 室温25 ml X 2第一次使用前按说明加指定量乙醇洗脱缓冲液EB 室温20 ml吸附柱DC 室温10个收集管（50ml）室温10个本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。
储存事项:1.第一次使用时，将试剂盒所带全部的RNase A加入溶液P1后（终浓度100μg/ml）置于4℃保存。
如果溶液P1中RNase A失活，提取的质粒可能会有微量RNA残留，在溶液P1中补加RNase A即可。
2.环境温度低时溶液P2中SDS可能会析出出现浑浊或者沉淀，可在37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清，不要剧烈摇晃，以免形成过量的泡沫。
3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
产品介绍：本试剂盒采用改进SDS-碱裂解法裂解细胞，离心吸附柱内的硅基质膜在高盐、低pH值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA，再通过去蛋白液和漂洗液将杂质和其它细菌成分去除，最后低盐、高pH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅基质膜上洗脱。
产品特点：1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。
克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.独有的去蛋白液配方，可以高效去除残留的核酸酶，即使是核酸酶含量丰富的菌株如JM系列、HB101也可以轻松去除。
有效防止了质粒被核酸酶降解。
3.不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀。
快速、方便，从150-300ml大肠杆菌LB((Luria-Bertani)培养液中，可快速提取0.2-1.5mg纯净的高拷贝质粒DNA，提取率达80 %左右。
酵母的dna提取实验报告
酵母的dna提取实验报告
（最新版）
目录
一、实验目的
二、实验材料
三、实验步骤
四、实验结果
五、实验讨论
六、实验结论
正文
一、实验目的
本实验旨在通过提取酵母的 DNA，研究酵母的基因组成，并为后续的基因工程实验提供 DNA 样本。
二、实验材料
1.酵母菌种
2.蒸馏水
3.乙醇
4.氯化钠
5.滤纸
6.蒸馏器
7.离心机
三、实验步骤
1.酵母菌种的准备：选用新鲜的酵母菌种，将其放入蒸馏水中，保持适当的浓度。
2.提取 DNA：将酵母菌种放入离心机中，离心一定时间后，取出上清液。
向上清液中加入适量的氯化钠，使 DNA 逐渐析出。
3.滤过：将析出的 DNA 溶液倒入装有滤纸的漏斗中，通过滤纸将杂质滤除。
4.洗涤：将滤纸放入蒸馏水中，反复洗涤，直至滤纸上的 DNA 纯净。
5.乙醇沉淀：将洗涤后的滤纸放入乙醇中，静置一段时间，DNA 会逐渐沉淀。
6.收集 DNA：将沉淀后的 DNA 收集起来，即为提取的酵母 DNA。
四、实验结果
通过实验，成功提取到了酵母的 DNA，实验结果符合预期。
五、实验讨论
在实验过程中，我们发现在加入氯化钠后，DNA 的析出速度较快，说明氯化钠对 DNA 的析出有一定的促进作用。
此外，通过多次洗涤和乙醇沉淀，我们成功地提取到了纯净的酵母 DNA。
六、实验结论
通过本实验，我们成功地提取了酵母的 DNA，为后续的基因工程实验提供了必要的材料。
酵母蛋白快速提取试剂盒使用说明
酵⺟母蛋⽩白质快速微量提取试剂盒Yeast Protein Miniprep Kit常温运输、4℃保存（溶液B成分二需-20℃保存），有效一年。
自备酵母培养基产品及特点 本产品用于快速提取微量酵母蛋白用于SDS-PAGE凝胶电泳和Western印迹分析。
本产品结合玻璃珠破壁和化学法破壁两种方法，适合于各种形态的各种酵母材料。
本产品的其主要特点是：1.破壁效率高，能达到80-90%。
2.可以处理各种酵母样品。
3.操作简单，得到的裂解液可以直接用于SDS-PAGE和Western印迹分析。
规格及成分成份 50次包装溶液A 100 mL溶液B成分一 50 mL溶液B成分二 1.5 g玻璃珠，400μL 5 g使用方法准备工作：将溶液B成分二（干粉）全部加到50mL溶液B成分一中，充分摇晃使之全部溶解，成为溶液B，然后分装成小分（体积根据每次实验的样品数决定）并放-20℃长期保存。
1、 将酵母细胞接种到5mL YPD 培养基中，30℃摇晃（250rpm/分钟）过夜培养使其OD600达到0.5～2.0。
2、 把酵母细胞培养物转到装有2mL 预冷溶液A 的10-15 mL 离心管中，混匀。
3、 4℃ 5000g 离心5分钟沉淀酵母细胞，吸出上清液。
4、 用30μL 溶液B 悬浮酵母细胞，并快速转移到1.5mL 塑料离心管中。
5、 100℃下保温3分钟，使蛋白酶失活，样品存放于-20℃。
6、 加入0.1g 的玻璃珠。
7、 在旋涡振荡器上剧烈振荡混合2-10分钟。
8、 加入70 μl 溶液B，稍加振荡，置100℃保温1分钟。
9、 取5-20μl 抽提液上样直接进行SDS-PAGE 凝胶电泳。
关联推荐 4X 蛋白上样缓冲液BCA 蛋白检测试剂盒蛋白markerECL 发光检测液。
酵母基因组DNA快速提取试剂盒
本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统，用于 提取酵母细胞中的基因组DNA。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新 型材料，高效、专一吸附DNA，可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合 物。提取的基因组DNA片段大，纯度高，质量稳定可靠。
使用本试剂盒回收的 DNA 可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、构 建、Southern 杂交等实验。
10. 向吸附柱中加入 500 µl 漂洗液 W2，12,000 rpm(~13,400×g )离心 30 秒， 倒掉废液。
11. 将吸附柱放回收集管中，12,000 rpm(~13,400×g)离心 2 分钟，倒掉废液。将 吸附柱置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。 注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的残留 会影响后续的酶反应（酶切、PCR 等）实验。
12. 将吸附柱转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加 50-200 µl 洗脱缓冲液 TE，室温放置 2-5 分钟，12,000 rpm(~13,400×g )离心 2 分钟， 将溶液收集到离心管中。 注意：为增加基因组 DNA 的得率，可将离心得到的溶液再加入吸附柱中，室 温放置 2 分钟，12,000 rpm (~13,400×g )离心 2 分钟。 洗脱缓冲液体积不应少于 50 µl，体积过小影响回收效率。 洗脱液的 pH 值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其 pH 值在 7.0-8.5 范围内(可以用 NaOH 将水的 pH 值调到此范围)，pH 值低于 7.0 会降 低洗脱效率；且 DNA 产物应保存在-20℃，以防 DNA 降解。
操作步骤：
使用前请先在漂洗液 W2 中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。 1. 取酵母细胞（最多不超过 5×107cells），12,000 rpm(~13,400×g )离心 1 分钟，
SUNBIO 植物基因组DNA提取试剂盒（离心柱型） 说明书
植物基因组DNA提取试剂盒（离心柱型）试剂盒组成：2-ml 收集管 50 100PCL 溶液(a) 25ml 50ml PP 溶液 4ml 8ml PB 溶液 40ml 80ml 去蛋白洗液DR 30ml 60ml 漂洗液DW (b) 12ml 24ml 洗脱液DE (c) 5ml 10ml Protocol11试剂盒说明：本产品可以简单快速的从各种新鲜、冻存的植物组织材料中小量制备基因组DNA。
一小时内即可获得超纯的基因组DNA。
吸附柱的内装有一层惰性大分子材料，它可以选择性吸附核酸物质，但不吸附蛋白质、多糖和其它非核酸类物质。
通过PCL 溶液 裂解释放出基因组DNA，然后通过吸附来吸附基因组DNA，经简单的洗涤步骤除去非特异性结合的杂质, 然后用洗脱液DE、TE或者水洗脱。
获得的DNA 纯度高，可直接用于PCR、酶切、杂交等分子生物学实验。
(a) PCL 溶液低温时可能出现结晶，请于37℃温育溶解后使用，不会影响产率。
(b) 首次使用前，必须在漂洗液DW瓶中加入4倍体积的无水乙醇，充分混匀后使用。
每次使用后将瓶盖盖紧，以保持漂洗液DW中的乙醇含量。
如果发现漂洗液DW由于运输或保管不当造成体积严重不准，请用量筒定容后再加入4倍体积的无水乙醇。
(c)洗脱液DE为2.5mMTris-HCl, pH8.5，请4℃保存。
TE（pH8.0）或者水（pH>7.0）均可以使用，但是DNA的洗脱效率通常要低20%左右。
本产品收到后按照上面指示温度存放各成份，12个月内有效。
（未特别标明的室温存放）注意事项：请在使用本试剂盒前仔细阅读。
小变会也段片A N D ，率得A N D 组因基响影会则否，容冻复反品样对免避量尽 .12. 实验中的离心步骤都为室温下进行，可采用台式离心机。
提取的率：使用本试剂盒可以从100mg样品中提取3~30μg高纯DNA。
不同来源的植物组织材料提取的DNA的量会有所不同。
本产品仅供科研使用，请勿用于医药，临床治疗、食品及化妆品等用途。
试剂盒DNA提取详细操作步骤
一、试剂盒打开后需要准备的工作1、ProteinaseK（蛋白酶K）的溶解①取4.5ml双蒸水加入蛋白酶K粉中使其充分溶解②将溶解好的蛋白酶K溶液分装进小离心管，每管100u l〜200ul③将分装好的ProteinaseK放入-20°C冰箱中保存，使用期限为12个月2、组织抑制剂（InhibitorRemovalbfer）的调配加入20ml无水乙醇（absoluteethanol）颠倒混匀并在空白方框处打钩3、洗液（washbuffer）的调配加入80ml无水乙醇（absoluteethanol）颠倒混匀并在空白方框处打钩二、组织DNA提取（试剂盒）1、组织样品处理与消化①将采集来的样品剪碎（WO.lcm）洗净保存液。
②加入组织破解液Tissue-lysis200ul蛋白酶K40ul然后放入55C水浴锅内3个小时使其充分消化。
2、DNA提取①在消化好的组织样品中加入结合液bindingbuffer200ul然后放入70°水浴锅中10分钟。
②再加异丙醇lOOul混合均匀吸取上清液放入柱体中，然后离心8000g—分钟。
③倒掉底液，加500ul组织抑制剂InhibitorRemoval然后离心倒掉底液④加洗液washingbuffer500ul离心（洗液加两次）⑤在70C预热ElutionBuffer，然后将洗好的柱体下部分丢掉，换新的离心管加入ElutionBuffer200ul溶解10分钟离心保留底液放-20C保存。
三、细胞DNA的提取（试剂盒）1、组织样品处理与消化①将带有培养基的样品用PBS清洗干净8000rpm/1min离心，倒掉上清②加PBS200ul振荡摇匀使之样品成为单个细胞的悬浊液③加200ulBindingBuffer，40ul蛋白酶K混合均匀放入70C水浴锅内消化10分钟。
2、DNA提取①加异丙醇lOOul混合均匀吸取上清液放入柱体中，然后离心8000g—分钟。
λ噬菌体基因组DNA快速提取试剂盒操作方法及步骤说明书
λ噬菌体基因组DNA快速提取试剂盒目录号：DN22目录编号包装单位DN2201 50次DN2202 100次❖适用范围：适用于快速λ噬菌体DNA❖试剂盒组成、储存、稳定性：试剂盒组成保存50次100次RNase A -20℃20 mg 20 mg X 2 DNase I -20℃50 mg50 mg X 2 噬菌体沉淀液室温100 ml 100ml X 2 裂解缓冲液室温30 ml 60 ml杂质沉淀液室温 5 ml 10 ml结合液LB 室温20 ml 40 ml漂洗液WB 室温15 ml 25 ml第一次使用前按说明加指定量乙醇洗脱缓冲液EB 室温10 ml 15 ml 吸附柱AC 室温50个100个收集管（2ml）室温50个100个本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。
储存事项:1.在RNase A管和DNase I管分别加入1毫升的裂解缓冲液吹打，颠倒混匀，充分溶解RNase A和DNase I后，按照每次使用量分装－20℃冻存，有效期6个月。
2.结合液LB低温时可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
❖产品介绍：λ噬菌体载体广泛用于文库筛选，目的克隆培养获得大量的噬菌体颗粒需要提取λ噬菌体DNA来开展测序等后续工作。
λ噬菌体裂解培养物离心后的上清，首先用RNase A /DNase I混合酶消化去除残留的宿主菌DNA/RNA，沉淀收集噬菌体，噬菌体被SDS 裂解，残留碎片通过沉淀离心去除掉。
裂解物上清中的λ噬菌体DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤，将盐、细胞代谢物、蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将λ噬菌体DNA从硅基质膜上洗脱。
❖产品特点：1.不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。
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酵母基因组DNA 快速提取试剂盒目录号：DN20适用范围：适用于快速提取各种酵母基因组DNA试剂盒组成、储存、稳定性：试剂盒组成 保存50次 平衡液 室温 5 ml 缓冲液YB 室温20 ml 结合液CB 室温11 ml 抑制物去除液IR 室温25 ml 漂洗液WB 室温15 ml 第一次使用前按说明加指定量乙醇 洗脱缓冲液EB 室温 15 ml Lytic Enzyme -20℃2.5 ml 蛋白酶K 粉（可选）20mg/ml -20℃20mg 吸附柱AC 室温50个 收集管（2ml ） 室温 50个本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。
储存事项:目录编号包装单位 DN200150次 DN2031 50次（带蛋白酶K ，带Lytic Enzyme ）1.结合液CB或者抑制物去除液IR低温时可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
2.为避免降低活性，方便运输，提供蛋白酶K为冻干粉状（20mg），收到后，可短暂离心后，加入1毫升灭菌水溶解配制成20mg/ml溶液，因为反复冻融可能会降低酶活性，因此溶解后立即按照每次使用量分装冻存，－20℃保存。
3.Lytic Enzyme为蜗牛酶甘油储液，因此比较粘稠，请小心取用，－20℃保存。
蜗牛酶是从蜗牛的嗦囊和消化道中制备的混合酶，它含有纤维素酶，果胶酶，淀粉酶，蛋白酶等20多种酶。
适合破碎溶解各种酵母的细胞壁。
4.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
产品介绍：该试剂盒采用DNA吸附柱和独有的溶液系统，适合于从多种来源的酵母培养物中快速简单地提取基因组DNA。
约3ml处于指数生长期的酵母培养液一般一次抽提可纯化出10-15μg的高质量的基因组DNA。
纯化DNA产物可直接用于PCR、酶切和杂交等实验。
酵母细胞经lytic Enzyme处理去除细胞壁后，独特的结合液/蛋白酶K迅速裂解细胞和灭活细胞内核酸酶，然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤，抑制物去除液和漂洗液将细胞代谢物，蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。
产品特点：1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。
克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。
3.快速，简捷，单个样品裂解后操作一般可在30分钟内完成。
4.多次柱漂洗确保高纯度，OD260/OD280典型的比值达1.7～1.9，可直接用于PCR，Southern-blot和各种酶切反应。
关于平衡液的使用1.介绍：核酸吸附硅胶膜柱子长期放置过程中会同空气中的电荷/尘埃发生反应而影响其核酸的结合能力。
硅胶柱经平衡液预处理后可大大减少柱子中硅胶膜的憎水基团，提高核酸的结合能力。
从而提高硅胶柱子回收效率或者产量。
平衡液是强碱性溶液，若不小心碰到，请用大量自来水清洗。
用完后需盖紧瓶盖，以免接触空气。
室温保存。
在保存过程中可能有沉淀生成，请加热至37℃使沉淀完全消失。
2.使用方法：取一个新的硅胶膜吸附柱子装在收集管中，吸取100μl的平衡液至柱子中。
13000 rpm离心1分钟，倒掉收集管中废液，将吸附柱子重新放回收集管。
此时平衡液预处理柱子完毕。
接后续的操作步骤。
注意事项1.所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
2.需要自备乙醇、异丙醇、β-巯基乙醇。
3.开始实验前将需要的水浴先预热到37℃和70℃备用。
4.结合液CB 和抑制物去除液IR中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。
若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。
5.用户需要自备Sorbitol buffer( 1M 山梨醇，0.1M Na2EDTA，14 mMβ-巯基乙醇)。
配制方法：在600 ml 去离子水里面溶解182.2克山梨醇，加入200 ml 0.5 M Na2EDTA (pH 8.0) ，不需要调节PH值，定容到1L，4℃保存。
临用前加0.2%β-巯基乙醇(商品化的β-巯基乙醇摩尔浓度一般为14M)。
6.菌体浓度检测一般OD600值为1的时候,酿酒酵母细胞是1-2x107cells/ml，由于菌种和分光度计不同即使同样细胞数量OD值变化也很大，以上仅供参考。
7.洗脱液EB不含有螯合剂EDTA，不影响下游酶切、连接等反应。
也可以使用水洗脱，但应该确保批pH大于7.5，pH过低影响洗脱效率。
用水洗脱DNA应该保存在－20℃。
DNA如果需要长期保存，可以用TE缓冲液洗脱（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH 8.0），但是EDTA可能影响下游酶切反应，使用时可以适当稀释。
操作步骤：（实验前请先阅读注意事项）提示：⇨第一次使用前请先在15ml漂洗液WB中加入60ml无水乙醇，充分混匀，加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!⇨吸取使用量的Sorbitol buffer加入0.2%β-巯基乙醇，回复到室温备用。
1.取1-3毫升酵母培养物(不超过3X107 cells，最好是早对数生长期)，12,000rpm离心30秒，尽可能的吸弃上清，收集菌体。
收集超过1.5毫升菌液，可以离心弃上清后，在同一个1.5ml管内加入更多的菌液，重复步骤1，直到收集到足够的菌体。
2.加入300μl Sorbitol buffer，轻柔吹打充分重悬细胞；再加入50μl Lytic Enzyme储液，充分颠倒混匀，37℃温育1-3小时消化细胞壁，中间可颠倒数次帮助消化。
如果破壁效果不好导致产量低，可以加大lytic Enzyme 用量来提高酶工作浓度，还可以延长消化时间或者提高温度到45℃来提高效果，不适合Lytic Enzyme消化的酵母可选用其它方法如0.5mm玻璃珠涡旋击打，反复冻融等。
玻璃珠法：向菌体中加入180μl缓冲液YB彻底悬浮菌体，加入0.1g直径为0.45-0.55mm的酸洗玻璃珠，涡旋振荡10分钟，静置几分钟让玻璃珠沉淀，小心吸取上清到一个新管后接后续步骤4。
3.13,000rpm离心1分钟，尽可能吸弃上清，加180μl缓冲液YB充分重悬细胞团。
4.加入20μl的蛋白酶K溶液(20mg/ml)，立刻涡旋振荡充分混匀。
5.将混合物放置在55℃水浴消化直到消化完全，期间轻柔的振荡几次帮助裂解。
所需消化时间和酵母数量、种类和生长状态有关，一般15分钟即可，但是如果方便的话消化过夜也无不良影响。
可选步骤，一般不需要: 如果RNA残留较多，需要去除RNA，可在完成操作步骤5后加20μl RNase A(25mg/ml)溶液，振荡混匀，室温放置5-10分钟。
6.加入200μl结合液CB，立刻涡旋振荡充分混匀，70℃放置10分钟。
平衡液预处理吸附柱备用：使用平衡液预处理硅胶膜吸附柱为必做步骤，具体方法参见前文“关于平衡液的使用”7.冷却后加入100μl 异丙醇，立刻涡旋振荡充分混匀，此时可能会出现絮状沉淀。
8.将上一步混合物（包括可能有的沉淀）加入一个吸附柱AC中，（吸附柱放入收集管中）13,000rpm离心30-60秒，倒掉收集管中的废液。
9.加入500μl抑制物去除液IR，12,000rpm 离心30秒，弃废液。
10.加入600μl漂洗液WB（请先检查是否已加入无水乙醇!），12,000rpm 离心30秒，弃掉废液。
11.加入600μl漂洗液WB，12,000rpm 离心30秒，弃掉废液。
12.将吸附柱AC放回空收集管中，13,000rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液，以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
13.取出吸附柱AC，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加100μl洗脱缓冲液EB（洗脱缓冲液事先在65-70℃水浴中预热效果更好），室温放置3-5分钟，12,000rpm 离心1分钟。
将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，室温放置2分钟，12,000rpm离心1分钟。
洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果需要DNA浓度较高，可以适当减少洗脱体积，但是最小体积不应少于50μl，体积过小降低DNA洗脱效率，减少DNA产量。
14.DNA可以存放在2-8℃，如果要长时间存放，可以放置在－20℃。
问题与解决方法问题评论与建议DNA产量低*某些种类酵母裂解困难-建议：仔细阅读步骤2，确认处理的酵母种类可以用lytic Enzyme裂解，还可以考虑选用其它裂解方法如玻璃珠涡旋击打、煮沸、反复冻融等，使用早对数生长期酵母。
*蛋白酶K失效了-建议：按照每次使用量分装冻存，避免反复冻融，延长处理时间。
*裂解不完全或者和异丙醇没有充分混匀-建议：加入结合液后，和加入蛋白酶K后立即吹打或者涡旋混匀；加入异丙醇后立即吹打或者涡旋混匀才加入吸附柱，如果太粘稠必须涡旋振荡15秒充分混匀。
DNA降解了*组织中核酸酶活性导致降解-建议：样品处理前妥善保存在－20℃，处理量不要过量。
未提取到DNA *漂洗液WB中忘记加无水乙醇-建议：第一次实验时，在漂洗液WB中加入指定量无水乙醇。
洗脱下来的DNA产量低*离心柱残留有较多乙醇或者底部不慎沾有乙醇-建议：确保做了步骤12，否则残留乙醇会影响洗脱效率。
*使用了水或者其它非最佳液体代替洗脱缓冲液-建议：仔细阅读注意事项7和步骤13和只使用洗脱缓冲液EB洗脱。
A260吸光值异常偏高*一些硅基质膜成分一起洗脱下来，干扰了吸光值-建议：将洗脱的基因组DNA溶液13,000rpm再离心一分钟，小心取上清使用。
DNA下游酶切不能切开或者酶切不完全*一些硅基质膜成分一起洗脱下来，抑制了酶切反应-建议：将洗脱的基因组DNA溶液13,000rpm再离心一分钟，小心取上清使用。
*离心柱残留有较多乙醇或者底部不慎沾有乙醇抑制了酶切反应-建议：确保做了步骤12，然后空气中晾几分钟，让残留乙醇挥发。