大量全血基因组DNA提取试剂盒操作方法及步骤说明书
基因组DNA提取试剂盒 说明书
基因组DNA 提取试剂盒使用说明书此说明书仅适用于此说明书仅适用于基因组基因组DNA 提取试剂盒提取试剂盒，，使用前请务必仔细阅读说明书有关内容使用前请务必仔细阅读说明书有关内容，，若有任何疑问若有任何疑问，，欢迎致电厦门欢迎致电厦门致致善生物科技有限公司生物科技有限公司（（4006618810*************）进行咨询进行咨询，，您也可以登录我们公司的网站您也可以登录我们公司的网站（（ ）了解相关信息或者通过E-mail ( ****************) 与我们进行沟通与我们进行沟通。
一 产品简介基因组DNA 提取试剂盒采用本公司自行研制的磁珠，用于从抗凝全血、新鲜或冻存组织、培养细胞、石蜡包埋组织、唾液、培养细菌等一系列不同样品中分离、纯化高质量的基因组DNA。
我们根据磁珠的独特分离作用，提供了一个极其简便的操作程序：样品裂解、磁珠吸附、洗涤以及洗脱。
在最适的试剂及操作条件下，可获得高质量DNA。
该方法具有简便、快捷、高效等特点，整个提取过程无须使用苯酚、氯仿等有机溶剂。
品名规格 货号 基因组DNA 提取试剂盒100T 4hk001裂解液DL 120ml ×2 磁粒 40ml 洗涤液 50ml ×5 洗脱液 45ml 缓冲液HTL 20ml ×1 二硫苏糖醇（DTT ） 10管，0.18g/管 说明书 1份储存条件储存条件：：本试剂盒所有试剂（除DTT 外）均可以室温保存,应避免阳光直射。
当室温低于15℃时，裂解液中可能有结晶析出，38℃水浴加热几分钟，恢复澄清后即可使用，提取效率不受影响。
DTT 需要于冰箱4℃保存。
本试剂盒有效期为12个月， 请于有效期内使用。
安全信息：试剂中含刺激性化合物，操作时应小心，避免沾染皮肤，眼睛和衣服，若沾染皮肤、眼睛时，要立即用大量清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医疗咨询。
三 使用者自配试剂DTT 溶液使用浓度为1mol/L 。
全血基因组DNA提取试剂盒使用说明
全血基因组DNA提取试剂盒使用说明一、试剂盒组成及存储条件：1.试剂盒包括蛋白酶K、缓冲液、洗涤缓冲液、脱水溶液等。
2.试剂盒应存放在4℃以下避光干燥处，避免冻结。
二、实验前准备：1.准备所需的实验耗材和设备，如离心管、恒温振荡器、离心机等。
2.取出全血样品，可以是新鲜全血或已离心制备的全血细胞。
三、DNA提取步骤：1.取出全血样品，用洗涤液洗涤细胞沉淀并离心收集，去除红细胞。
2.加入蛋白酶K将细胞裂解，释放DNA。
3.加入缓冲液和脱水溶液，沉淀DNA并洗涤。
4.最终稀释DNA并保存在适当的条件下。
四、实验注意事项：1.操作过程中需注意无菌操作，避免污染。
2.加入蛋白酶K的量应准确控制，不要过多或过少。
3.混合溶液时需轻轻摇匀，避免气泡的产生。
4.稀释保存DNA时，需使用无核酸酶的载体溶液，如TE缓冲液。
五、质控及结果分析：1.可以通过琼脂糖凝胶电泳或比色法检测提取的DNA质量。
2.检测DNA浓度和纯度，确保提取的DNA适用于后续实验。
3.可以保存提取好的DNA样品，以备后续实验使用。
六、应用领域：1.该试剂盒适用于从全血样品中提取DNA，可用于基因分析、疾病诊断、遗传研究等领域。
2.可以用于个体基因检测、种群遗传学研究、药物反应性研究等。
总结：全血基因组DNA提取试剂盒是用于从全血样品中提取DNA的重要工具，操作简便、提取效率高。
在实验中需注意操作规范，保证提取的DNA质量和纯度。
该试剂盒广泛应用于科研领域，为基因研究和临床诊断提供了有力支持。
希望上述使用说明能够帮助用户正确、高效地使用全血基因组DNA提取试剂盒。
实验二 全血基因组DNA的提取
实验二：全血基因组DNA的提取一实验目的：1．学习并掌握动物全血提取DNA的方法2．从全血中提取到一定量的纯净的DNA样品二实验原理DNA存在于细胞核中，用细胞裂解液除取红细胞，核裂解液破坏白细胞，氯仿使蛋白质变性，用无水乙醇洗涤DNA，从而得到纯净的DNA分子。
三、实验仪器、材料、试剂（一）仪器1．高速离心机 2．烘箱 3．冰箱4．水浴锅5．微量移液器6．高压灭菌锅（二）材料1．鸡血、2．细胞裂解液3．核裂解液、4．饱和NaCl、5．氯仿、6．无水乙醇、7．ddHO、8.滤纸、9．微量取液器、10.1.5mL/2mL 离心管、11.一次性2手套、12.离心管架、13.记号笔等（三）试剂配制细胞裂解液:10mm/l Tris-Hcl(1mol/L) ,11%w/l蔗糖,5 mmol/L Mgcl2,1%v/vEDTA, 10mm/L Triton 核裂解液：10mm/l Tris-Hcl, 1%w/v SDS, 10mm/L Na2柠檬酸三钠四、实验步骤1．吸取500ul血液至2ml离心管，加入1000ul的细胞裂解液，上下颠倒2-3min。
2．在4°C，6000rpm转速离心3min,弃上清液。
3．重复1-2步（1-3次），直至洗净红细胞，颜色变白为止。
4.加入300ul核裂解液，上下颠倒2min,室温静置2min。
5.加入100ul饱和NaCl和600ul氯仿，轻轻上下颠倒2min, 4°C，6000rpm 转速离心5min。
6.小心吸取上清液（不能吸入下层液体），移至新的1.5ml的离心管。
7.加入600ul冷藏无水乙醇，轻轻摇动，观察有无絮状物质。
8. 4°C，13000rpm转速离心3min，小心倒掉上清液，用滤纸吸取管壁周围的液体，室温下是离心管完全干燥。
（1h左右）9.沿管壁慢慢加入50ul ddHO，然后轻轻吹打均匀。
210.-20°C的冰箱保存。
promega公司全血DNA提取试剂盒说明书
CTM050 修改于 5/09
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Wizard®基因组 DNA 纯化试剂盒简明操作步骤
1. 10ml 全血样品：向无菌 50ml 离心管内加入 30ml 细 注释：若在步骤 6 中另加了核裂解液，那么应加入 4ml 蛋
胞裂解液。
白沉淀液（而不是 3.3ml）。
重要：血样样品必须使用 EDTA、肝素或柠檬酸的 9. 2,000 x g 室温离心 10 分钟。
彻底重悬才能有效裂解白细胞。
普洛麦格（北京）生物技术有限公司 电话：800 810 8133，010 58256268 网址：;
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Wizard®基因组 DNA 纯化试剂盒简明操作步骤
6．向重悬细胞溶液中加入核裂解液（300ul 血样的加 12．300ul 血样的于 13,000-16,000 x g 室温离心 1 分钟；3ml
仅供实验室使用。每个试剂盒包含的试剂，足够进行 100 次从 300ul 全血中提取基因组 DNA 的实验：
z 500ml z 250ml
Cell Lysis Solution Nuclei Lysis Solution
z 100ml z 50ml z 25ml
Cell Lysis Solution Nuclei Lysis Solution Protein Precipitation Solution
Solution）（300ul 血样的加 100ul；3ml 血样的加 250ul），
65oC 孵育 1 小时溶解 DNA。期间可轻弹管壁混匀溶液。 8．向核裂解物中加入蛋白沉淀液（300ul 血样的加 100ul； 也可以室温或 4oC 孵育过夜。
3ml 血样的加 1.0ml；见下列注释），用涡旋振荡器剧 16. 2-8oC 保存 DNA。
血液、细胞、组织基因组DNA提取试剂盒步骤
血液、细胞、组织基因组DNA提取试剂盒步骤使用前请先在缓冲液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。
1. 处理材料a. 如提取材料为血液，可直接使用200ul新鲜、冷冻或加入各种抗凝剂的血液，不足200ul可加入缓冲液GA补足；注意：如需处理更大体积血液，如300ul-1ml，可按以下步骤操作：在样品中加入3倍体积红细胞裂解液（例如300ul血液加入900ul红细胞裂解液），颠倒混匀，室温放置5min，期间再颠倒混匀几次。
10000rpm(~11500×g)离心1min（若离心机最高转数不允许，可3000rpm(~3400×g)离心5min），吸去上清，留下白细胞沉淀，加200ul缓冲液GA，振荡至彻底混匀。
b. 如果处理血样为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的抗凝血液，其红细胞为有核红细胞，因此处理量5-20ul，可加入缓冲液GA补足200ul后进行下面的裂解步骤；c. 贴壁培养的细胞应先处理为细胞悬液，然后10000rpm(~11200×g)离心1min，倒尽上清，加200ul缓冲液GA，振荡至彻底悬浮；d．动物组织（脾组织用量应少于10mg）应先打碎处理为细胞悬液，然后10000rpm(~11200×g)离心1min，倒尽上清，加200ul缓冲液GA，振荡至彻底悬浮；注意：如果需要去除RNA，可加入4ul RNase A(100mg/ml)溶液（客户自备，目录号：RT405-12），振荡15s，室温放置5min。
2. 加入20ul Proteinase K，混匀。
a. 提取血液基因组时，只需加入Proteinase K混匀，即可继续进行下一步。
b. 提取细胞基因组时，只需加入Proteinase K混匀，即可继续进行下一步。
d. 提取组织基因组时，加入Proteinase K混匀后，在56℃放置，直至组织溶解，简短离心以去除管盖内壁的水珠，再进行下一步骤。
血液基因组DNA 提取试剂盒 说明书
广州东盛生物科技有限公司 电话：020-87791356
传真：020-87791381 网址：
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核酸纯化系列
操作步骤-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------1 取血液样本，每 400 μl 血液加入到一只 1.5 ml 离心管中。加入 2 倍体积的红细胞裂解液 RS。漩涡振荡或上下来回颠倒混匀。 5,000 rpm 离心 3min，弃上清，收集白色或淡红色沉淀。
血液基因组 DNA 提取试剂盒（硅胶膜离心柱法）
核酸纯化系列
产品组分
组分
红细胞裂解液 RS 消化缓冲液 DS 裂解液 MS 蛋白酶 K 去蛋白液 PS 漂洗液 PE 纯化液 TE DNA 纯化柱 说明书
N1121
80 ml 15 ml 20 ml 1 ml 30 ml 15 ml 5 ml 50 个 1份
液氮，并在样品未完全解冻前加入含有抑制核酸酶作用的螯合剂的裂解液。
问：提取的基因组 DNA 生物活性差，为什么？
答：1 提取的基因组 DNA 盐浓度过高，沿管壁四周加入漂洗液 PE，这样有利于提高清洗效果；
2 DNA 中含有乙醇，严格按第 8 步的离心速度和时间操作；
3 进行 DNA 洗脱时请一定在膜的中央加入纯化液，尽量不要沾染管壁。
广州东盛生物科技有限公司 电话：020-87791356
全血 DNA 抽提(QIAGEN,德国)
全血DNA 抽提(QIAGEN，德国)
采用血液基因组DNA 提取试剂盒按说明书进行操作，简述如下：
(1)先将无水乙醇加到漂洗液PW 和缓冲液GD 中，并将血液标本置于室温下平衡至标本完全溶解。
(2)取经RNaseA 酶处理过的离心管，按顺序编号后加入500μl 混匀的标本，随后
加入细胞裂解液CL lml，充分混匀后10000rpm 离心1min。
弃去上清，留下细胞
核沉淀。
(3)加入200μ1 缓冲液GS，振荡混匀。
随后加入20μ1 蛋白酶K 溶液，充分混匀。
加缓冲液GB 200μ1，充分混匀后，56℃水浴10min 至溶液变清亮。
取出后，加
无水乙醇200μl，混匀。
(4)上部物质转移到吸附柱内，12000rpm 离心30s。
弃去液体，并将吸附柱CB3 套在收集管上。
(5)加入500 μl 缓冲液GD，12000rpm 离心30s，弃去液体，将吸附柱CB3 放入收集管中。
(6)加入700μl 漂洗液PW，12000rpm 离心30s，弃去液体，将吸附柱CB3 放入收集管中。
(7)加入500μl 漂洗液PW，12000rpm 离心30s，弃去液体。
12000rpm 继续离心2min，弃去液体。
并把吸附柱置于室温数分钟，彻底晾干吸附材料中的漂洗液。
(8)将吸附柱套上一个干净的离心管中。
向吸附膜中间位置悬空滴加80μl 洗脱缓冲液TB，室温放置5min，12000rpm 离心2min。
将溶液收集到离心管中并标号，置于-20℃冰箱中冻存备用。
DNA提取-SOP
全血DNA提取操作规程一．生物安全要求：DNA提取应在生物安全二级实验室的生物安全柜里完成。
二．试剂盒组分及规格：DNA提取液（含chelex-100等）三．其它实验设备及耗材双蒸水；1.5 mL无菌离心管；0.5-10 μL、20-200 μL、100-1000 μL加样器及枪头；PCR反应管；可调14K微型离心机；漩涡振荡仪四．样本要求1．1 mL EDTA抗凝外周血，采集后轻轻混匀。
样本应尽快送检，保存运输温度为2-8 ℃。
建议2-8℃保存不超过24小时；-20 ℃保存不超过1个月；-70 ℃保存不超过2个月。
避免反复冻融（仅限1次）；如长期保存，建议提取样本DNA后-80 ℃保存。
2.样本中存在的干扰物质在一定范围内不影响检测，当干扰物质超出以下范围时不能保证检测结果的准确性：胆红素480 μmol/L，甘油三酯30 mmol/L，血红蛋白≤600 g/L，抗凝剂浓度0.1875-3 mg/mL。
五．核酸提取操作步骤：1.采集EDTA抗凝全血2.取200 μL EDTA抗凝血至1.5 mL新的无菌EP管中。
3.加入600 μL双蒸水，漩涡振荡混匀，室温放置10 min，期间漩涡振荡混匀2-3次，12000 rpm离心5 min，弃上清。
4.加入200 μL DNA提取液（使用前充分混匀，使颗粒悬浮），100 ℃水浴8 min。
5.12000 rpm离心5 min，取上清用于检测。
血片DNA提取操作规程一．生物安全要求：DNA提取在生物安全二级实验室的生物安全柜里完成。
二．试剂盒组分及规格：DNA提取液（含chelex-100等）三．其它实验设备及耗材双蒸水；1.5 mL 无菌离心管；0.5-10 μL、20-200 μL、100-1000 μL加样器及枪头；PCR反应管；可调14K微型离心机；漩涡振荡仪；打孔器四．样本要求1.每个样本至少3个血斑，且每个血斑直径大于8 mm。
2.血滴自然渗透，滤纸正反面血斑一致。
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大量全血基因组DNA提取试剂盒
目录号：DN04
DN0401 16次×10ml
DN0402 32次×10ml
DN0403 96次×10ml
适用范围：
适用于快速提取各种动物全血基因组DNA
试剂盒组成、储存、稳定性：
试剂盒组成保存16次×10ml 32次×10ml 96次×10ml
10x红细胞裂解液室温50 ml 100 ml 300 ml
细胞核裂解液室温180 ml 180×2 ml 250 m l×4
蛋白沉淀液室温55 ml 110 ml 330 ml
DNA溶解液室温15 ml 30 ml 90 ml 本试剂盒在室温储存18个月不影响使用效果。
储存事项:
1.环境温度低时细胞核裂解液中某些去污剂成份会析出出现浑浊或者沉淀，可在
37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清，不要剧烈摇晃，以免形成过量的泡沫。
2.蛋白沉淀液可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，如果不
能完全溶解，也不影响使用效果，直接取用上层溶液即可。
3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时
盖紧盖子。
产品介绍：
本试剂盒根据全血特点采用几个快速步骤提取基因组DNA。
首先红细胞裂解液裂解去除不含DNA的红细胞，细胞核裂解液裂解白细胞释放出基因组DNA，然后蛋白沉淀液选择性沉淀去除蛋白，最后纯净的基因组DNA通过异丙醇沉淀并重溶解于DNA 溶解液。
产品特点：
1.从十几个配方中优选出的红细胞裂解液配方，裂解快速完全。
2.不需要使用有毒的苯酚等试剂。
3.快速，简捷，单个样品操作一般可在1小时内完成。
4.结果稳定，产量高（典型的产量10ml全血可提取出150-500µg），OD260/OD280
典型的比值达 1.7～1.9，长度可达50kb-150kb，可直接用于构建文库、PCR、Southern-blot和各种酶切反应。
注意事项
1.所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到2,500 x g，并配备容纳50ml心
管转头的传统台式离心机。
2.用户需自备异丙醇和70％乙醇。
3.典型的产量10ml全血可提取出150-500µg基因组DNA（不同样品尤其疾病样品中
中白细胞数量差异可能非常大，因此产量的个体差异也可能非常大）。
4.本试剂盒为溶液型，可以很容易的按照比例扩大或者缩小每次处理的全血量
（20µl-10ml），请联系我们索取其它处理量的操作手册。
5.本试剂盒可运用于多种抗凝剂的全血，如EDTA、柠檬酸、肝素抗凝血。
其中由
于肝素抗凝血的白细胞沉淀团很难打散重悬，影响裂解效果，建议选用非肝素的抗凝剂收集血液标本。
6.为了最佳效果，最好使用新鲜血液标本或者4℃存放小于3天的标本，不要使用反
复冻融超过3次的标本，否则会严重降低产量。
操作步骤：（实验前请先阅读注意事项）
1.吸取30ml 1x红细胞裂解液到一个50ml离心管。
使用前应该用去离子水将10x红细胞裂解液稀释10倍到1x。
2.将抗凝全血（使用前回复到室温）颠倒混匀后，吸取10ml加到上步装有红细胞
裂解液离心管中，颠倒6-8次，并倒置轻弹管壁，确保充分混匀。
3.室温放置10分钟（期间应该颠倒轻弹混匀数次帮助裂解红细胞）。
4.2,500 x g离心2分钟，倒弃红色上清，并小心的尽可能多的吸弃上清（注意不要
吸到管底的细胞团），留下完整的管底白细胞团和大约100μl的残留上清。
离心后在管底应该见到白色的白细胞团，也可能有一些红细胞残片和白细胞团在一起，但是如果看到的是大部分的红色细胞团，说明红细胞裂解很不充分，应该再加入适量红细胞裂解液重悬细胞团后重复步骤3，4。
5.涡旋振荡直到白细胞团充分重悬、分散。
白细胞的重悬分散对下一步裂解非常重要，白细胞未打散就加入裂解液，会导致白细胞不能充分裂解，形成肉眼可见团块。
6.加入10ml细胞核裂解液到重悬的白细胞，上下吹打裂解白细胞，或者剧烈涡旋
10秒帮助裂解白细胞。
7.可选步骤: 在裂解物中加入RNase A（10mg/ml）至终浓度30μg/ml，颠倒25次混
匀，37℃温育15分钟去除残留RNA，然后冷却回室温。
8.加入3.33ml蛋白沉淀液后，在涡旋振荡器上高速连续振荡混匀25秒。
混匀后可
能见到一些小的蛋白团块。
9.2,500 x g(可根据需要调整加大离心力)离心5分钟。
这时候应该可以见到管底暗褐
色的蛋白沉淀，也可能见到一些蛋白沉淀漂浮在液体表面。
10.小心吸取上清（大约10ml）到一个新的50ml离心管中。
吸取上清时，注意不要吸到管底的和漂浮在液体表面的蛋白沉淀。
如果不小心将蛋白沉淀转入新的离心管中，可再次离心2分钟后取上清。
11.加入等体积的室温异丙醇（约10ml），轻柔颠倒30次混匀或者直到出现棉絮状（丝
状）白色DNA沉淀。
12.2,000 x g离心3分钟，在管底可以见到白色的DNA沉淀块，倒弃上清。
13.加入10ml 70％乙醇，颠倒几次漂洗DNA沉淀，2,000 x g离心1分钟, 倒去上清
（沉淀很松，注意不要把DNA沉淀倒掉了），倒置后在吸水纸上轻敲几下以控干残留乙醇，还可以用枪头小心吸掉管底沉淀周围和管壁的残留乙醇，空气晾干沉淀几分钟。
注意不要干燥过头，否则DNA极其难溶；也不能残留太多乙醇，否则乙醇可能抑制下游如酶切反应。
14.加入600μlDNA溶解液（如果需要浓度高，可根据需要减少DNA溶解液用量）
重新水化溶解DNA沉淀，轻弹管壁混匀，可以放置在65℃温育30-60分钟（不要超过一小时），也可以在室温或者4℃放置过夜来重新水化DNA，中间不时的轻弹管壁帮助重新水化DNA。
15.DNA可以存放在2-8℃,如果要长时间存放，可以放置在－20℃。
问题与解决方法。