谈向国外教授索要质粒的来往信件及经验
质粒提取与分析 Protocol
质粒提取与分析是分子生物学实验中的基本技术之一，它是从细菌中提取和纯化质粒DNA，并对质粒DNA进行相关的分析和检测。
下面是质粒提取与分析的实验原理、所需试剂和耗材、实验仪器、准备工作、实验方法、注意事项、常见问题及解决方法。
一、实验原理质粒是一种独立于细菌染色体之外的DNA分子，它不参与细胞的染色体复制，而是在细胞分裂时进行自我复制。
质粒提取的原理是通过物理和化学方法裂解细菌，释放出质粒DNA，然后通过离心、沉淀和洗涤等步骤将质粒DNA与细菌其他成分分离，最终得到纯化的质粒DNA。
二、所需试剂和耗材1.试剂：o溶液Ⅰ：10mmol/L Tris-HCl（pH=8.0）、1mmol/L EDTA （pH=8.0）、50mmol/L葡萄糖。
o溶液Ⅱ：0.1mol/L NaOH、1% SDS。
o溶液Ⅲ：3mol/L醋酸钾、20mmol/L Tris-HCl（pH=8.0）。
o70%乙醇。
o TE缓冲液：10mmol/L Tris-HCl（pH=8.0）、1mmol/L EDTA （pH=8.0）。
2.耗材：o移液器。
o离心管和离心管盖。
o 1.5ml微量移液器。
o无菌水。
o0.22μm滤膜。
o培养板和涂布器。
o细菌培养液（如LB液体培养基）。
o氯仿。
o异戊醇。
三、实验仪器1.实验室搅拌器。
2.高速冷冻离心机。
3.水浴锅。
4.无菌工作台或超净工作台。
5.紫外线分光光度计。
6.电泳仪和电泳槽。
7.显微镜。
8.恒温摇床或振荡器。
9.烘箱或微波炉。
10.量筒和烧杯。
11.计时器。
12.手套和实验服。
四、准备工作1.阅读实验步骤和注意事项，了解所需的试剂和耗材及其使用方法。
2.准备好所需的试剂和耗材，并确保它们处于保质期内。
3.检查实验室内是否具备上述实验仪器，并确保其正常运行。
4.用70%乙醇擦拭实验台面，以确保无菌环境。
5.用高压蒸汽灭菌法灭菌所有的实验器具，包括离心管、移液器等。
6.设置离心机的高速和低速离心参数，以及水浴锅的温度等参数。
中山大学课件--质粒提取技巧及常见问题分析
提质粒方法的选择
从经济的角度讲，碱裂解法是首选，一般不建议用煮沸法， 除非获得质粒的目的仅仅是初步的鉴定，而不是用于构建载 体。 碱裂解法所获得的质粒经酚：氯仿纯化后可满足绝大多数的 分子生物学实验要求。 试剂盒提取的质粒在纯度上比碱法更好，但比较昂贵。 我们实验室建立的超。 结合碱裂解法和试剂盒法，我发展出一种大量制备高纯度质 粒的方法，将在本次课的后面介绍。
分子生物学实验所需基本工具
高效菌株（E.Coli）：DH10B，Top10, DH5,XL-1 blue,HB101等。 各种基因（载体，质粒） 超纯水（三蒸水） 高效酶类（限制酶，连接酶，Taq酶，pfu等） 分析纯（或化学纯）生化试剂。 经典的分子生物学工具书：分子克隆（目前出到第 三版），精编分子生物学实验指南（目前出到第四 版）等。 各种仪器设备：离心机、培养箱、PCR仪、灭菌锅
基因（质粒）的获取
1、从其它实验室获得；（首选） 2、从商业公司购买；（次选） 3、自己克隆；（末选） （1）RT-PCR 克隆；（有原始材料） （2）合成全长基因；（无原始材料） （3）合成片段、拼接； （无原始材料）
什么是质粒？
质粒是独立于染色体外的DNA分子，其大小 范围在１KB至２００KB以上不等。大多数 来自细菌细胞的质粒是双链、共价闭合的环 状分子，以超螺旋形式存在。 至少在实验室，大多数质粒是通过写信获取 而并不需要自己动手构建。所有的质粒，无 论来自于商家还是科技工作者，在用于实验 以前一定要进行验证！
开课老师：李刚
质粒提取技巧及常见问题分析
碱裂解法从大肠杆菌制备质粒，是从事分子 生物学研究的实验室每天都要用的常规技术。 可是许多人却对碱法质粒抽提的原理知之甚 少。追其原因，大概是因为《分子克隆》里 面只讲实验操作步骤，而没有对原理进行详 细的论述。本次课将告诉大家常见的几种质 粒提取的方法、原理、步骤及其技巧，并对 质粒提取过程中遇到的常见问题进行分析。
质粒抽提原理及详细操作步骤
质粒抽提,实验室必备技能之一质粒质粒存在于许多细菌以及酵母菌等生物中，是细胞染色体外能够自主复制的很小的环状DNA分子。
质粒抽提从细菌中分离质粒DNA的方法包括3个基本步骤：培养细菌使质粒扩增；收集和裂解细菌；分离和纯化质粒DNA。
采用强碱液、加热或溶菌酶（主要针对革兰氏阳性细菌）可以破坏菌体细胞壁，十二烷基磺酸钠（SDS）和TritonX-100（一般很少使用）可使细胞膜裂解。
经溶菌酶和SDS或Triton X-100处理后，细菌染色体DNA会缠绕附着在细胞碎片上，同时由于细菌染色体DNA比质粒大得多，易受机械力和核酸酶等的作用而被切断成不同大小的线性片段。
当用强热或酸、碱处理时，细菌的线性染色体DNA变性，而共价闭合环状DNA(Covalently closed circular DNA，简称cccDNA）的两条链不会相互分开。
当外界条件恢复正常时，线状染色体DNA片段难以复性，而是与变性的蛋白质和细胞碎片缠绕在一起，而质粒DNA双链又恢复原状，重新形成天然的超螺旋分子，并以溶解状态存在于液相中。
质粒抽提最常用的方法是碱裂解法，它具有得率高、适用面广、快速和纯度高等特点。
当然，碱裂解法也有缺陷：容易导致不可逆的变性。
要降低不可逆的变性，就要控制好碱裂解的时间。
碱裂解法抽提质粒需要用到以下三种溶液溶液Ⅰ50 mmol/L 葡萄糖，25 mmol/L Tris-Cl（pH 8.0），10 mmol/L EDTA（pH 8.0），在15 psi 压力下蒸汽灭菌15 min，4℃保存。
溶液Ⅱ0.2 mmol/L NaOH（从10 mmol/L 贮存液中现用现稀释），10 g/L SDS（室温保存）。
溶液Ⅲ5 mol/L乙酸钾60.0 mL，冰乙酸11.5 mL，无菌水28.5 mL， 4℃保存，使用时置于冰浴中。
下面介绍一下碱裂解法小提质粒的具体操作：01柱平衡：向吸附柱中加入500 μl平衡Buffer，12000 rpm离心30-60 s，倒掉收集管中的废液；注意：吸附柱平衡后可最大限度激活硅基质膜，提高质粒的得率；吸附柱平衡后应立即使用，长时间放置会影响其吸附效果。
要质粒模版
I look forward to your plasmid, so your early response will be greatly appreciated.
Sincerely yours,
blueviolin5
结果他转发来了给他实验室另一个员工发的信：**, Did you send? （大叔还是保持着惜字如金的传统作风嘿嘿）
然后我收到了他实验室那个员工给我的信：
Hi, blueviolin5
,
我一共给三个实验室发信索要了质粒，而且发第一封的时候还傻傻的忘了写主题了又重新加上主题发了一遍。其中两个实验室都没搭理我，只有一个实验室给我回了信。
后来我总结了一下，这个给我回信的实验室是自己构建的质粒。没给我回信的两个实验室：其中一个实验室，那个质粒也是他们根据别人赠与的质粒改造的，所以估计不是自己的版权自己不敢乱给嘿嘿。而另一个实验室就是那个赠与他们质粒的实验室，但是也没有给我回信，我查了一下，觉得可能是据他们构建那个质粒的时间太久了，好几十年了所以，我觉得大家尽量找原版的质粒索要，就是最初构建质粒的实验室，可能会更容易获得一些。
I am so sorry I forgot this issue after Dr.**told me one month ago. It is my fault. I apologize for that. I am going to send out today.
最近我们收到3封老外索要质粒和全文的EMAIL,简约直接,现转贴出来,希望对部分园友有参考价值.
1. Dear Dr Liu,
I am a post-doctoral researcher in David Botstein's lab at Princeton University.
如何向国外的实验室讨要质粒或者病毒？
如何向国外的实验室讨要质粒或者病毒？先去PUBMED上检索近期发表的与你研究相关的文献，越近越好，看看是否作了相关实验，如果有，记下通讯作者的邮箱。
第二步：求助信Dear Dr or Prof :I am working on the tumorigenesis and progression of ****** cancer from******University.(先介绍自己的研究方向并自曝家门)And one of my projects focuses on the******.(更细致的研究方向，一般与收件人研究方向相关，不相关你发啥)****** seems to be a problem hard to get over for us. One of my graduates has been working on it for a couple of months, but no progress.(介绍一下你们遇到的困难)We are happy to find that your laboratory was the major source of the ****** in many publications. （怎么找到您这位大神的）Therefore,I am writing to explore the possibility of getting ****** from your laboratory. (说明自己想要啥，病毒、质粒、细胞啥的)If you were kindly offering us the ******, it would be veryhelpful for us. (进一步跪求)Of course, the ****** will never be used for commercial purpose. （声明不用于商业用途，仅用于科研）We will acknowledge the ****** resource and cite your papers in all our publications based on the ******. （并要注明实验物品来源及引用对方文章，外国人很喜欢被引的）We are also willing to put you into the author list that’s necessary. （可以再给人家一个作者的位置）Sure, We would like tobear all the costs and sign any contract for ****** transfer.（可以支付一定费用并承担运费，有需要可以签合同，要是对方很有钱可能帮你直接把邮费给付了。
质粒抽提常见问题与解答
质粒抽提常见问题与解答第一篇：质粒抽提常见问题与解答1.没有提出质粒或者质粒收获量很低A菌种老化建议：对于甘油保存的菌种，需要先进行活化，涂布或者划线菌种，重新挑选单菌落进行液体培养，并对菌种进行初摇活化，按照1:500的比例进行菌种培养。
二次培养时间最好不要超出16小时(或者OD600不超过3.0)。
B低拷贝质粒建议：如果是由于低拷贝质粒引起的质粒收获量低，可以采用两倍的菌体量，并相应增加各种Buffer的用量。
C质粒丢失建议：某些质粒在次继代培养的过程中会出现丢失的想象，另外检查筛选抗生素的浓度是否正确。
D裂解不充分建议：如果采用超过推荐量的菌体进行质粒制备，会导致菌体裂解不充分。
可适当减少菌体的用量或者相应增大各种Buffer的用量。
并确保细菌混悬均匀。
EBuffer中有沉淀未溶解建议：BufferB1和BufferN1，BufferC1在温度较低时会出现沉淀，使用前请检查是否有沉淀生成，如果有沉淀生成，请置于37℃温育片刻，待溶液澄清后使用。
FDNAWashBuffer中未加入要求量的乙醇建议：按照说明书要求加入要求量的无水乙醇，使用后旋紧瓶盖，防止乙醇挥发。
另外对于质粒中提，大提等，要求用70%乙醇洗涤，请确保乙醇的体积不小于70%。
G离心柱中乙醇残留建议：漂洗后，可适当延长离心时间，尽量去除残留的乙醇。
另外对于质粒中提，大提和朝大量提取，建议离心后，将柱子或大漏斗用吹风机冷风吹片刻(或置于65℃烘箱)，以彻底去除残留的乙醇，便于洗脱和后续实验操作。
H洗脱液加入位置不正确建议：洗脱液应加在膜中央，已取得最好的洗脱效果。
I洗脱液pH值不正确建议：将DNA从柱子上洗脱下来的最适pH值在7.0-8.5之间，如果洗脱液的pH超出此范围将会显著影响洗脱效果，请使用试剂盒配套的ElutionBuffer(pH8.5，10mMTris-HCl)进行洗脱，如果用ddH2O进行洗脱，请确保pH在7.0-8.5之间。
植物细胞生物质粒法
植物细胞生物质粒法植物细胞生物质粒法是一种用于转化植物细胞的重要方法。
本文将介绍植物细胞生物质粒法的原理、步骤和应用，以及该方法在遗传工程和植物转基因领域的重要性。
一、原理植物细胞生物质粒法是一种将外源基因导入植物细胞的方法。
其原理是利用植物细胞自身的生物质粒（也称质粒）来携带和传递外源基因。
生物质粒是植物细胞质中的一个细胞器，其主要功能是储存和传递基因信息。
通过将外源基因插入到生物质粒中，并利用再生植株的能力，可以将外源基因稳定地引入到整个植物体内。
二、步骤植物细胞生物质粒法主要包括以下几个步骤：1. 构建载体：将外源基因插入到适当的载体中，常用的载体包括质粒、噬菌体等。
2. 质粒介导：将构建好的载体通过化学方法或生物物理方法导入到植物细胞中。
常用的方法包括化学法、电穿孔法和基因枪法等。
3. 选择培养基：选择含有适当抗性选择标记的培养基，使只有携带了外源基因的细胞能够生长和繁殖。
4. 再生植株：将培养基中被转化的细胞培养至成熟植株，即可获得转基因植物。
三、应用植物细胞生物质粒法在遗传工程和植物转基因领域具有广泛的应用价值。
1. 基因功能研究：通过转入特定基因，可以研究该基因在植物生长发育、代谢途径、抗病性等方面的功能。
2. 优质高产育种：通过转入相关基因，可以提高植物的产量和品质，如提高作物的抗逆性、耐病性、耐盐碱性等。
3. 药物生产：通过转入合成特定药物的基因，可以利用植物细胞来生产药物，如转基因植物生产重要药物或疫苗。
4. 脱毒治理：通过转入特定基因，可以提高植物对毒素的抗性，用于脱毒治理，如转基因作物对重金属和农药的吸收和积累能力。
总结植物细胞生物质粒法是一种重要的植物细胞转化方法，通过利用植物细胞自身的生物质粒来携带和传递外源基因。
该方法在遗传工程和植物转基因领域有着广泛的应用，可以用于基因功能研究、育种改良、药物生产和脱毒治理等方面。
随着技术的不断发展和创新，植物细胞生物质粒法在植物科学研究和农业生产中的作用将越来越重要。
给外国人写信要质粒和文章的模板
给外国人写信要文章和质粒的模板螺旋网的一位朋友收集整理的，我来转帖O(∩_∩)O哈哈~模板一：Dear P rof. XXX:I am in ............... P.R. China.I am w riting to request your assista nce. I searchone of your papers:“.......................”ispublish ed at ................., Volume.., Issue .. 年, Pages ..............but I can not read full-text content, w ould you mind sending your papersby E-mail? Thank you for your assista nce.Best w ishes!模板二：Dear ×××,I'm a researc her in ________（国家或大学） and just read an abstrac t of your paper XXXXXXX XXXXXI'm ver y interes ted to know________（对方文章内容）. It w ould be much appreci ated if you can reply me about this. Also, could you pleasesend me the copy of your full paper. Thanksin advance.Best regards,XXXXXXXXXXXX模板三：Dear Mr./Mrs.: ________（作者名）I am a graduat e student of Xx Univers ity （大学名） in China. I major in __E duca tional Technol ogy______（您的专业）. Recentl y, I found one of your article s, titled__________ （文章名）in ---------(杂志名). I found it ma y help me achieve my goals in this researc h field. This w ould make a reallypositiv e contrib utionto my w ork. I w ould like to be able to read the full text of this article. The abstrac t makes the article sound very interes ting. I know there is usually a fee require d to obtainthe full article from --------（杂志名）; how ever, as a student, my only incomeis a small scholar ship w hich is about U S $30.00 per month. I w onderif you w ould conside r sen ding me the full text by E mail. P erhaps you w ould conside r this as an act of friends hip betw een our tw o countri es.Thank you for your kind conside ration of this request.Sincere ly: ___________（您的名字）模板四：Dear ... (authorname):I am interes ted in your paper titled... publish ed in ...I w ould appreci ate it if you could send me a soft copy of this paper.Thank you.Kind regards,... (your name)模板五：（索要质粒）Dear Dr XXX,I am a post-doctora l researc her at XX Univers ity.I have recentl y read your paper __________ （文章名）. I am interes ted in tryingyour approac h for detecti ng mutatio ns in yeast.I w as w onderi ng if you w ould be kind enoughto send me the pE TTthM utS plasmid reporte d in your paper. My mailing address is:David GreshamXX Univers ityBeijing, 100101ChinaKind regards,模板六：I'd appreci ate a file (pdf) contain ing yourr article: Mutat Res. 2004 Mar 22;547(1-2):41-7. Directl y fishing out su btlemutatio ns in genomic DNA w ith histidi ne-taggedThermus thermop hilusMutS. Wang J, Liu J.Thank you in advanceBest w ishesLiu模板七：Dear Dr. XXX,I read w ith interes t the abstrac t of your article in ---------(杂志名), __________ （文章名） Unfortu nately, our li brary does not subscri be to ---------(杂志名). I w ould be most appreci ativeif you could pleasesend me a .doc or .pdf file of the article by e-mail.Thank you,___________（你的名字）P HD candida te___________（你的单位）China模板八：我最喜欢这个…Dear ....,I am w orking on ......(工作背景). And one of my project s focuses on........(工作内容)Isolati ng ROG cDNA see ms to be a problem hard to get over for us（为什么要要）. One of my graduat es has been w orking on it for a coupleof months, but no progres s（一定以导师和教授口气写，学生写人家可能不愿意给）. We are happy t o find that your laborat ory w as the major sourceof the ROG cDNA in many publica tions. Therefo re, I am w rit ing to explore the possibi lity of getting ROG cDNA from your laborat ory. If you w ere kindlyofferin g us the DNA (pCI-ROG), it w ould be very helpful for us. Of course, the DNA w ill never be used for commerc ial purpose.W e w ill acknowl edge the DNA resourc e and cite your papersin all our publica tionsbased on the DNA. We are al so w illing to put you into the authorlistthat’snecessa ry. Sure, We w ould like to sign any contrac t for the DN A transfe r.One of my graduat es is w aiting for the DNA to set up his experim ent, so your early respons e w ill be greatly ap preci ated.Sincere ly yours,。
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谈向国外教授索要质粒的来往信件及经验
转载请注明来自丁香园
发布日期: 2007-06-07 09:51 文章来源: 丁香园 - 核酸基因技术讨论版
关键词: 质粒馈赠信函经验
我索要质粒前也是参考了很多丁香园的帖子，所以有些语句可能和以往的范本雷同。
2007年3月20日
主题：explore the possibility of getting *** from your laboratory
信件：
Dear Dr. **,
I am a post graduate student in ***Institute, Chinese Academy of Sciences. And one of my projects focuses on ***. It seemed that the mechanism you indicated in the paper (***, published in ***, Vol ** (200*):27-35) showed great similarity with my current issue, and it could be very useful for us. I think that your construct *** in that paper was a deliberate design.
If I could get the construct from kindly, it would be very helpful for us. We will acknowledge the plasmid resource and cite your papers in all our future publications based on the plasmid. Sure, we would like to sign a Construct Transfer Agreement.
Thank you in advance for your attention.
I look forward to your plasmid, so your early response will be greatly appreciated.
Sincerely yours,
blueviolin5
我总共给三个实验室发信索要质粒。
发第一封的时候忘记写主题，添加主题重新发送。
其中两个实验室都没搭理我，只有一个实验室给我回了信。
后来我总结了一下，回信的实验室是自己构建的质粒。
没回信的两个实验室：其中一个实验室，质粒也是他们根据别人赠与的质粒改造的，所以估计不是自己的版权自己不敢乱给。
而另一个实验室就是那个赠与他们质粒的实验室，但是也没有给我回信，我查了一下，觉得可能是据他们构建那个质粒的时间太久了。
我觉得大家尽量找原版的质粒索要，就是最初构建质粒的实验室，可能会更容易获得一些。
老外给我回信很简单：Sure. I will try to dig it out. The postdoc has since left the lab.
这dig out一等就是半个多月也没动静，我又发信询问。
2007年4月9日
Dear Dr. **,
I have been sent mail to you for exploring the possibility of getting *** from your laboratory, have you found it out? Thank you in advance for your kindness. I look forward to your plasmid, and your early response will be greatly appreciated.
Sincerely yours,
blueviolin5
老外立刻回信：
should be on its way to you this week
（这位外国大叔惜字如金，看来真是个大忙人）
I would like to convey my heartfelt thanks to you for your promise of my demand. I am looking forward to your construct ***.
这下我踏实了，等吧……结果，又一个多月过去了，啥都没收到。
再问吧：
2007年5月23日
Dear Dr. **,
Thank you very much for your generous help. But I haven’t received your construct ***yet for more than 1 month. Which manner you use for mail? Is ordinary mail or express delivery? I’m worry about there is something wrong of the transport.
Thank you in advance for your attention.
I look forward to your plasmid, so your early response will be greatly appreciated.
Sincerely yours,
blueviolin5
结果他转发来了给他实验室另一个员工发的信：**, Did you send? （大叔还是保持着惜字如金的传统作风）
然后我收到了他实验室那个员工的回信：
Hi, blueviolin5,
I am so sorry I forgot this issue after Dr.**told me one month ago. It is my fault. I apologize for that. I am going to send out today. Best,
***
这位大哥给我忘寄了，我这翘首以盼的一个多月啊……不过还是要回信表示感谢，而且这次想让他寄给我实验室的主管，这样更保险，等得这么久真是把我等
怕了！
It does not matter, Thank you very much for your help! If you didn’t delivery yet, can you write the received person name of ***. Of course, he or I all can receive international letter. But he is our leader, I think that will be more safety for received your construct.
Thank you again for your kindness.
第二天收到那位实验室员工的回信：
Hi, blueviolin5,
The stuff had been sent out yesterday by our secretary to blueviolin5 while I emailed to you yesterday. Please pay attention to your mail box. Thanks, ***.
OK！这下子踏实等吧，昨天收到，快递寄来！总算拿到手了，虽然一波三折，但最终成功获取质粒，高兴之余也要记得发信再次感谢！
I have received your construct. It would be very helpful for us. I would like to convey my heartfelt thanks to you for your generous help.
I will acknowledge the plasmid resource and cite your papers in all our future publications based on the plasmid. Thank you again for your kindness.
Sincerely yours,
最后我收到了外国简练大叔的简短回信：Good Luck!
对了，还要提醒大家，我每次发信后面都有附详细的地址，格式是参考导师给外面发信的格式：
Department of ***
******** Institute
*******(Address)
Beijing, P.R.China
Zip 10****
Tel: 86-010-********
Fax: 86-010-********
E-mail: blueviolin5@***
这是我第一次索要质粒，还算顺利，把自己的经验贴出来和大家分享，祝大家科研顺利！
编辑：ache
编辑: ache 作者: blueviolin5 相关文章:
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