高通量核酸提取在基因检测的应用案例

合集下载

高通量测序技术在精准医学中的应用

高通量测序技术在精准医学中的应用

高通量测序技术在精准医学中的应用高通量测序技术是指使用先进的测序设备和算法,快速、高效地获取DNA、RNA等核酸序列信息的技术。

这项技术的诞生引领了生物信息学在生命科学领域中迅猛发展。

高通量测序技术的出现不仅使得基因检测的速度加快,精度提高,同时还可以一次性检测多个样本,为精准医学的发展提供了强有力的支持。

本文将从高通量测序技术在精准医学中的应用入手,探讨其在临床诊断、基因组学、肿瘤学等方面的具体应用。

一、高通量测序技术在临床诊断中的应用高通量测序技术在临床诊断中的应用,主要是通过对疾病相关基因进行检测,来实现对疾病的早期诊断、个体化治疗等目的。

比如,在尖锐湿疣、HPV等病原微生物检测方面,高通量测序技术可以实现多个病原体一次检测,提高检测的准确性和灵敏度;在罕见遗传病、家族肿瘤等复杂疾病检测方面,高通量测序技术可以对大量疾病相关基因进行筛查,提高疾病的诊断率和治疗效果。

值得一提的是,高通量测序技术还可以检测出肿瘤相关基因突变、易感基因等与肿瘤相关的疾病,有着重要的临床价值。

二、高通量测序技术在基因组学研究中的应用高通量测序技术在基因组学研究中的应用,主要是通过对个体基因组进行分析,揭示基因功能、突变机制等相关信息。

比如,人类基因组计划中使用的高通量测序技术,可以对数百万个基因进行测序分析,从而揭示出基因在人类进化和疾病发生发展中的作用。

此外,高通量测序技术还可以用于发掘新基因、鉴定后代的遗传疾病风险等方面。

三、高通量测序技术在肿瘤学研究中的应用高通量测序技术在肿瘤学研究中的应用,主要是通过对肿瘤细胞基因组进行测序分析,揭示肿瘤细胞的特殊基因组结构、癌基因、肿瘤抑制基因等相关信息。

比如,在肿瘤标志物检测、肿瘤特异性抗原分析等方面,高通量测序技术都有着不可替代的作用;同时,在个体化肿瘤治疗中,高通量测序技术可以根据患者的基因情况,选择恰当的化疗、免疫疗法等个性化治疗方式。

因此,高通量测序技术在肿瘤学研究中的应用,对于肿瘤的早期诊断、治疗和预后评估等方面都有着十分重要的意义。

NGS高通量基因测序技术原理及应用案例

NGS高通量基因测序技术原理及应用案例

NGS高通量基因测序技术原理及应用案例随着科技的迅猛发展,高通量基因测序技术(Next-Generation Sequencing, NGS)在基因研究领域中扮演着举足轻重的角色。

该技术的出现极大地促进了基因研究的进展,为我们揭示了生命的奥秘。

本文将介绍NGS高通量基因测序技术的原理,并通过应用案例来展示其在不同领域中的重要性和广泛应用。

NGS高通量基因测序技术原理NGS高通量基因测序技术通过在DNA或RNA序列中逐个测定碱基的顺序,从而获得完整的基因组或转录组信息。

它与传统的Sanger测序技术相比,具有高通量、高准确性、高灵敏性和较低成本等优势。

其基本原理可以分为样本制备、测序和数据分析三个步骤。

首先,样本制备是整个测序过程中的关键步骤。

传统的基因测序需要使用大量的DNA或RNA样本,而NGS技术则能够通过PCR扩增或纯化等方法,从少量的样本中获取足够的DNA或RNA。

样本制备的目标是将DNA或RNA片段连接到测序芯片上的适配器,以便在测序过程中进行DNA或RNA的扩增和固定。

接下来是测序过程,NGS技术采用并行测序原理,即通过分割DNA或RNA样本为许多小片段,然后同时生成多个序列。

常见的测序方法有Illumina、Ion Torrent和PacBio等。

其中,Illumina技术是目前应用最广泛的高通量测序技术。

它利用DNA或RNA的片段在特定的适配器上进行扩增,并在测序芯片上进行固定。

然后,测序仪器会逐个测定每个适配器上的碱基,并生成对应的测序图谱。

最后是数据分析。

测序过程中生成的测序图谱需要通过计算机算法进行处理和解读,以获得原始DNA或RNA序列的信息。

数据分析的步骤包括数据过滤、比对、变异检测和注释等。

通过这些步骤,我们可以获得基因组或转录组的重要信息,如基因表达水平、突变检测、表观遗传学修饰和基因功能等。

NGS高通量基因测序技术应用案例NGS高通量基因测序技术在许多领域中都有广泛的应用,并取得了令人瞩目的成果。

高通量宏基因组测序技术检测病原微生物的临床应用

高通量宏基因组测序技术检测病原微生物的临床应用
(一)适应证
注意事项:
1. mNGS检测申请表:mNGS检测实验室应提供适临床使用的申请表。除患 者基本信息外,申请单应包括标本类型、拟诊、现病史、既往史、流行病学 史、关注的病原体、抗菌药物使用史等。另外,申请表中应列出不同测序项 目及适用范围供医生选择。
2.靶向基因测序:基于高通量测序技术的病原微生物检测,除无偏倚的 mNGS外,还包括原核生物的16S rRNA基因、真菌(5S rRNA基因两端的 ITS1、ITS2及25-28S rRNA基因中的D1及D2区等)以及特定病原微生物靶基 因等。如怀疑沙眼衣原体可选momp(主要外膜蛋白基因),怀疑结核分枝 杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)可选rpoB等靶向基因测序。
高通量宏基因组测序技术检测 病原微生物的临床应用
一、概述
快速准确的微生物鉴定技术始终是临床微生物关注的焦点。传统微生物检 验,诸如形态学、培养、抗原抗体及靶向核酸检测等方法在解决疑难及未知 病原微生物上存在局限性。
新型宏基因组下一代测序(metagenomics next-generation sequencing,mNGS) 技术直接针对样本中所有核酸进行无偏性测序,结合病原微生物数据库及特 定算法,检测样本中含有的可能病原微生物序列。
8. 提高测序深度:mNGS常规数据量对耐药和毒力基因检测有局限性,因其 得到的微生物序列数不足样本总序列的5%,特异性序列覆盖度不到微生物 基因组1%,在这种情况下进行耐药基因、毒力岛基因、转录组及代谢通路 分析几乎不可能。目前,有以下几种做法可提高测序深度:(1)在常规测 序深度下已明确了病原微生物,再提高测序数据量至可覆盖该物种基因组 80%,但花费巨大不适合普及。(2)在宏基因组基础上叠加固定的若干种 耐药基因进行靶向测序。(3)研发降低人源核酸比例的创新方法,获得更 多微生物测序数据量。

新一代高通量测序技术在遗传病诊断中的应用

新一代高通量测序技术在遗传病诊断中的应用

新一代高通量测序技术在遗传病诊断中的应用随着科技的不断进步,新一代高通量测序技术被广泛应用于生物学、医学等领域,尤其是在遗传病诊断中,其应用越来越广泛,为医学研究和临床治疗带来了福音。

本文将介绍新一代高通量测序技术在遗传病诊断领域的应用现状、优势和挑战。

一、新一代高通量测序技术的应用现状新一代高通量测序技术的出现,改变了传统的基因检测方法,特别是单一基因检测的局限性。

其应用不仅增加了检测精度和速度,还能快速检测出各种罕见遗传病,从而为个性化诊疗提供了必要的技术支持。

在遗传病的检测中,新一代高通量测序技术不仅可对全基因组进行测序,还可对特定的基因进行深度测序。

这种技术的应用,可以显著提升检测的精确性和准确性,以及提高突变率和靶点选择的灵活性,从而为临床治疗提供了更加有效的参考。

二、新一代高通量测序技术的优势1. 高通量和精确性新一代高通量测序技术的设备不仅能够进行快速的DNA测序,还能够进行高达T的数据存储和处理。

这种设备的出现,在遗传病的检测中可以大幅度提高检测的通量和精确性。

同时,也大幅度缩短了检测的时间,减轻了医护人员的工作负担。

2. 多样性和高效性新一代高通量测序技术的应用,可以突破传统基因检测的局限性,准确的检测出各种遗传病。

其应用不仅包括单一基因和全基因组的检测,还包括特定基因的检测。

这种多样性与高效性的结合,可以大幅度提升遗传病的检测速度和准确率,为个性化医疗提供必要的技术支持。

三、新一代高通量测序技术的挑战1. 数据管理和分析新一代高通量测序技术产生的数据极其巨大,需要通过高效的数据管理和分析系统进行处理。

这需要技术人员具备高技能的实验技术和数据分析技术,以保证数据的准确性和重现性。

同时,还需要配备专业软件、系统和设备,以快速高效地进行数据分析和存储。

2. 数据保护和隐私保护新一代高通量测序技术产生的数据中包含了个人敏感信息,如基因序列和个人身份信息。

因此,在数据管理和分析过程中需要保护数据的安全性和机密性。

高通量测序技术在癌症研究中的应用

高通量测序技术在癌症研究中的应用

高通量测序技术在癌症研究中的应用随着科技的迅速发展,高通量测序技术应用广泛,特别是在癌症研究中。

癌症是一种与基因有关的疾病,而高通量测序技术能够帮助研究人员更深入地了解癌症的基因变异及其影响,从而提高对癌症的治疗和预防水平。

一、高通量测序技术介绍高通量测序技术,又称为下一代测序技术,是近年来一种新型的基因测序技术。

与传统的Sanger测序相比,高通量测序技术更加快速、准确、可靠。

它的主要特点是利用高通量并行测序技术,将待测DNA片段分离出来,通过高通量并行化比对技术,得出测序结果。

二、癌症基因检测高通量测序技术可以用于检测基因及突变,因此在癌症研究中应用得非常广泛。

在过去,通过基因学研究癌症主要是通过单一基因进行研究,但是高通量测序技术的出现使研究人员能够同时针对多个基因进行研究。

这样,研究人员可以从整个基因组层次上了解癌症的基因表达及其突变。

三、个体化癌症治疗通过高通量测序技术在癌症研究中所得到的信息,可以使得癌症治疗能够更加个体化。

针对癌症患者的基因突变情况,研究人员可以根据不同的情况来制定相应的治疗方案。

这样,患者将得到更好的治疗效果,并减少治疗过程中的副作用。

四、基因编辑技术基因编辑技术是近年来发展迅速,是将CRISPR/Cas9等基因修饰工具与高通量测序技术相结合的结果。

基因编辑技术本身可使科学家删除、插入或更改相关基因表达。

这些改变可以帮助我们了解癌症发生的机制,以及如何避免或治疗这种疾病。

五、未来方向未来,随着高通量测序技术的不断进步和发展,我们将能够更加深入地研究癌症。

这些新的发现将不仅有助于改进癌症的诊断和治疗方法,也将有助于将癌症治疗引向更加精准的方向。

总之,随着高通量测序技术的应用,我们能够更加深入地了解癌症的基因变异及其影响,从而针对癌症制定更加个性化和有效的治疗方案。

未来,高通量测序技术将继续在癌症研究中发挥积极的作用,推动癌症治疗技术向前发展。

高通量测序技术及其在基因检测中的应用

高通量测序技术及其在基因检测中的应用

高通量测序技术及其在基因检测中的应用随着科技的不断进步,现代医学的发展日新月异,人们对于基因检测的需求也越来越大。

而高通量测序技术的出现,则让人们更加深入地了解了基因的本质,也让基因检测的精度更加提高。

本文将从高通量测序技术的定义、发展历程以及在基因检测中的应用等方面进行探讨。

高通量测序技术的定义高通量测序技术(High-Throughput Sequencing, HTS),也叫做第二代测序技术,是指使用高效、自动化的方法,快速获取大量DNA或RNA序列的技术。

HTS技术可以同时分析多个样本,产生大量、高质量的序列数据,并快速地鉴定出样本中的基因、SNP、外显子、non-coding RNA等等。

高通量测序技术与第一代测序技术相比,具有数据量大、速度快、准确率高、成本低等特点。

高通量测序技术的发展历程第一代测序技术(Sanger测序技术)是1977年由Frederick Sanger提出的方法,其原理是将DNA链断裂,使用dNTP和ddNTP等试剂进行扩增,最后通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离出目标DNA序列。

这种方法虽然可以获得高质量的序列数据,但操作流程繁琐,需要准确控制反应体系,且不能同时分析多个样本。

第二代测序技术是从2005年开始普及的,其主要特征是高通量,也就是一次可以分析数百万或数十亿个序列,且操作简单、自动化程度高。

目前常见的第二代测序技术有Illumina MiSeq和HiSeq 2500、ION PGM和Proton,以及454、SOLiD等。

第三代测序技术则是在第二代技术的基础上增强了序列单次读取长度和扩增过程,同时数据量大、速度快、准确率高、操作简单等优点也得到了进一步提升。

高通量测序技术在基因检测中的应用高通量测序技术具备高效、自动化的特点,因此广泛应用于各种基因检测的研究中。

其中,基因突变检测是一种重要的检测方法,可以用于诊断遗传性疾病、肿瘤基因筛查、新药研发等领域。

肿瘤基因突变检测是基因检测的一个重要方向。

下一代基因检测技术及其应用

下一代基因检测技术及其应用

下一代基因检测技术及其应用随着科技的发展,人们的生活水平有了巨大提升。

其中,基因检测技术在医疗、环境、农业等领域都有广泛的应用。

目前,基因检测领域正迎来一个重要的突破——下一代基因检测技术。

下一代基因检测技术不仅可以大幅提高基因检测的准确性和速度,还可以更深入地了解人类基因组的结构和功能,预防基因突变相关的疾病,以及探索人类进化的历程。

一、什么是下一代基因检测技术下一代基因检测技术(Next-generation sequencing,NGS),是一种高通量、高效率的基因检测技术。

与传统的Sanger测序技术相比,NGS技术不仅可以同时测序多个DNA分子,而且可以快速生产大量的序列数据。

例如,现在大约1000美元就可以获取人类基因组的完整序列数据,而在过去,完整的人类基因组序列数据的获取可能需要数百万美元的成本。

NGS技术的核心原理是通过并行测序多个DNA分子并在同一时间进行序列化,然后将这些小分子片段拼接起来,以重建原始的DNA序列。

在这个过程中,通过使用计算机算法将重复片段和错误数据进行过滤,以提高数据的准确性。

二、NGS技术在医学中的应用NGS技术在医疗领域中的应用非常广泛,主要有以下几方面:1、疾病诊断和治疗NGS技术可以用于检测基因突变、基因缺失、染色体异常等疾病相关的遗传变异。

例如,NGS技术可以检测癌症患者的肿瘤基因组,以指导个性化治疗。

同时,NGS技术还可以用于筛查新生儿的遗传病和进行基因检测诊断等。

2、药物研发和个性化用药NGS技术可以通过基因组学分析,识别影响药物代谢和疗效的基因变异,以帮助药物研发公司研制更加精准的药物。

而且,NGS技术还可以用于探索药物对不同基因型患者的药效影响,为患者提供更加个性化的用药指导。

三、NGS技术在环境保护中的应用NGS技术不仅可以用于医疗领域,而且可以在环境保护领域中发挥重要作用。

下面是几个有意义的例子:1、环境污染监测NGS技术可以通过分析环境样本中存在的微生物多样性,监测环境污染的程度和种类。

高通量基因测序临床应用

高通量基因测序临床应用

高通量基因测序临床应用高通量基因测序技术作为生命科学领域的一项重要突破,其在基因组学研究、生物医学及临床医学应用领域发挥着越来越重要的作用。

高通量基因测序技术的快速发展为临床医学带来了许多创新,改变了传统医学的治疗方法,成为个性化医疗的重要支撑。

本文将重点探讨高通量基因测序技术在临床应用中的优势和挑战。

一、基因测序技术简介高通量基因测序技术,又称为大规模并行测序技术,是指利用高度自动化和高度并行化的方法,对生物样本进行基因组、转录组、蛋白质组等不同层次的测序。

其主要方法包括Illumina、Ion Torrent、PacBio等不同平台,具有高通量、高灵敏度、高分辨率等特点。

通过基因测序技术,可以更加全面、准确地了解生物体的遗传信息,为疾病诊断、治疗和预防提供重要参考。

二、高通量基因测序在疾病诊断中的应用1. 癌症个性化治疗基因测序技术可以帮助医生识别患者体内的致病基因,从而实现对癌症的个性化治疗。

通过分析肿瘤组织中的突变基因,可以为患者选择更加有效的靶向治疗药物,提高治疗效果,并减少药物的毒副作用。

2. 遗传病筛查与预防通过对新生儿或遗传病家族史患者进行基因测序,可以准确诊断遗传病的类型和患病风险,提前采取干预措施,降低疾病发生的可能性。

此外,对于一些常见遗传病的筛查,基因测序技术也能够提供更为准确的结果。

三、高通量基因测序在药物治疗中的应用1. 药物代谢基因检测某些患者在接受相同药物治疗时,可能出现副作用或治疗效果不佳的情况。

通过基因测序技术可以检测患者的药物代谢基因,了解其对药物的代谢情况,从而选择更合适的药物类型和剂量,提高治疗效果。

2. 药物耐药性检测在临床治疗过程中,部分患者可能会产生药物耐药性,导致治疗失败。

基因测序技术可以帮助医生及时发现患者的耐药基因突变,从而调整治疗方案,提高药物疗效,避免耐药性发生。

四、高通量基因测序在临床应用中的挑战与展望尽管高通量基因测序技术在临床应用中具有巨大潜力,但仍然面临许多挑战。

  1. 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
  2. 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
  3. 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。

/
6
蛋白酶 K
/
/
7
核酸助沉剂
/
/
1、小心撕开 96 孔深孔板的塑封膜,注意保持深孔板的平稳。
2、在深空板的 1、6、7、12 分别加入 350ul 样本和 20ul 蛋白酶 K。
3、将深孔板平稳放入自动核酸提取仪,然后将搅拌套插入到卡槽中。
4、设置核酸提取仪的程序,具体如下,“温度设置”时,裂解温度设为 65℃,洗脱温度设为
容积
700 300 700 650 650 650 200 0
运行 状态
否 否 否 否 否 否 否 否
6、运行结束后关机,从第 6,12 列中吸取 DNA 溶液转移至 EP 管中,DNA 可以存放在 2-8℃,
如果要长时间存放,请放置在-20℃。
(3)实验结果分析
M D1 D2 D3 Z1 Z2 Z3
1.76
17.87
12 0.401 0.229 0.225 1.78
1.75
20.04
单位
ng/ul ng/ul ng/ul ng/ul ng/ul ng/ul ng/ul ng/ul ng/ul ng/ul ng/ul
样品类型
dDNA dDNA dDNA dDNA dDNA dDNA dDNA dDNA dDNA dDNA dDNA
高通量核酸提取在基因检测中的应用案例
1. 引言
1.1 什么是高通量
就是单次即可同时完成几十甚至上百个样品的处理。
1.2 什么是基因
基因是遗传的基本单元,携带有遗传信息的 DNA 或 RNA 序列,通过复制,把遗传信
息传递给下一代,指导蛋白质的合成来表达自己所携带的遗传信息,从而控制生物个体的性
状表达。
不足 200 ul 用 1xPBS 补足,加入 20 uL 蛋白酶 K(20mg/ml)。 3、将深孔板平稳放入自动核酸提取仪,然后将搅拌套插入到卡槽中。 4、设置核酸提取仪的程序,具体如下,“温度设置”时,裂解温度设为 80℃,洗脱温度设为
(2)了解自身是否有家族性疾病的致病基因,预测患病风险:资料证实 10%~15%的 癌症与遗传有关,糖尿病、心脑血管疾病等多种疾病都与遗传因素有关。如具有癌症或多基 因遗传病(如老年痴呆、高血压、糖尿病等)的人可找出致病的遗传基因,就能够有针对性 地调整生活方式,预防或者延缓疾病的发生。例:安吉丽娜·朱莉在基因检测之后,结合自 己的家族病史,为了降低自己患癌的几率,切掉了自己乳腺和卵巢。因此,各大基因检测 公司可能用及核酸提取仪,基因检测公司分析结果主要包括祖源分析,运动基因、营养代 谢、健康风险、遗传性疾病、药物指南、遗传特征七大项。
酶 K,涡旋振荡 1min,65℃水 30min,期间振荡 4-5 次; 2、在深孔板的第 1 列和第 7 列分别加入第一步所得样本,再加入 10ul 核酸助沉剂,300ul 异
丙醇; 3、将深孔板平稳的放置到核酸自动提取仪中,然后将搅拌套插入到卡槽中; 4、设置核酸提取仪的程序,具体如下;“温度设置”时裂解温度设为 80℃,洗脱温度设为 65℃,然后点击“运行”开始实验。 5、程序运行
(1)仪器及试剂盒(品牌:Bioteke; 产地:百泰克生物技术有限公司)
同 2.3.1。
(2)实验步骤
预封装试剂盒组成:
试剂盒组成
预封装板位
容积(ul)
1
裂解液 V
1、6、7、12
350
2
抑制物去除剂 IR
2、3、8、9
900
3
磁珠漂洗液 WB
4、10
900
4
洗脱缓冲液 EB
5、11
80
5
磁珠
/
65℃,然后点击“运行”开始实验。
5、第 2 步运行完成后暂停,深孔板 1、6、7、12 列加入 10ul 核酸助沉剂和 300ul 异丙醇(需
自备),深孔板 6、12 加入 30ul 磁珠,然后继续运行程序。
表 5 核酸提取仪运行程序
步孔 骤位
11 26 36 41 52 63 74 85 91
等待时
北京联创大业基因科技有限公司
北京圣禾基因科技有限公司
中山大学达安基因股份有限公司
广州复能基因有限公司
广东云泽基因科技有限公司
广州
首大干细胞基因工程股份有限公司 广州华大基因科技有限公司
上海 深圳 武汉
广州民康基因科技有限公司 广州英特基因科技有限公司 广东华南生科基因产业有限公司 广州健天基因技术有限公司 上海时代基因医学科技有限公司 联合基因生物科技有限公司 上海中优基因科技有限公司 上海博华基因芯片技术有限公司 上海博道基因技术有限公司 上海飞奈基因科技有限公司 深圳华大基因股份有限公司 深圳华因康基因科技有限公司 深圳乐土生物科技有限公司 深圳市赛百诺基因技术有限公司 恩大细胞基因工程有限公司 深圳市博泰生物基因技术有限公司 深圳基因德信生物科技有限公司 武汉华大基因科技有限公司 武汉汉元基因技术有限公司 武汉华创达基因科技有限公司 武汉华大基因生物医学工程有限公司 美因美康基因技术(武汉)有限公司 武汉光谷中源协和细胞基因科技有限公司 武汉外旋基因科技有限公司
1.82
48.97
7 0.977 0.539 0.526 1.86
1.81
48.86
8 0.384 0.213 0.175 2.19
1.8
19.19
9 0.383 0.213 0.198 1.93
1.79
19.13
10 0.379 0.207 0.228 1.66
1.83
18.93
11 0.357 0.203 0.206 1.73
区域
公司名称
北京健为医学检验实验室有限公司
国立柏林医学检验技术(北京)有限公司
北京金则医学检验实验室有限公司
北京润康医学检验实验室有限公司
北京
北京先声医学检验实验室有限公司 北京华之源医学检验实验室有限公司
北京艾纳医学检验实验室有限公司
广州 上海 武汉
北京精特医学检验中心有限公司 华夏京都人和医学检验有限公司 北京径准医学检验实验室有限公司 广州嘉检医学检测有限公司 深圳南泰医学检验实验室 深圳市怡百世医学检测研究院有限公司 中山二十三密码医学检测有限责任公司 广州呼研所红外医学检验有限公司 上海兰卫医学检验所股份有限公司 上海金卫医学检验所有限公司 力因精准医疗产品(上海)有限公司 上海思路迪医学检验所有限公司 上海康黎医学检验所有限公司 上海华测艾普医学检验所有限公司 上海药明康德医学检验所有限公司 上海索敏医学检验实验室有限公司 上海芯超医学检验所有限公司 上海泰思特医学检验所 武汉华大医学检验所有限公司 武汉光谷联合医学检验所有限公司 武汉同济现代医学检验实验室有限公司 武汉以琳医学检验所有限公司 武汉武生医学检验实验室有限公司 武汉明志医学检验实验室有限公司 武汉德谷医学检验实验室有限公司 武汉苏博医学检验实验室有限公司
1.3 核酸提取在基因检测的应用
(1)用于疾病的诊断:如对结核杆菌感染的诊断,以前主要依靠痰、粪便或血液培养,
整个检验流程需要在两周以上,现在采用基因诊断的方法,不仅敏感性大大提高,而且在短
时间内就能得到结果。因此,各大医院的检验科室或医学检验公司均可能用及核酸提取仪。
表 1 医学检验公司潜在客户(以北京、上海、广州、武汉部分检验公司为例)
蛋白酶 K
预封装孔位 1、7 2、8 2、8 3、9 4、10 5、11 6、12 /
容积(ul) 350 300 20 900 900 900 120 /
1、小心撕开 96 孔深孔板的塑封膜,注意保持深孔板的平稳。 2、在深空板的第 1 列和第 7 列分别加入 200 uL 样本(全血、血细胞、白细胞、白膜层),
分组 D:实验室自配试剂 Z:AU70011-96
图 1 基因组 DNA 电泳结果 D:实验室自配试剂;Z:AU70011-96 表 4 基因组 DNA 浓度纯度分析结果
A260/A230
A260/A280
1.87
1.89
1.76
1.82
样品浓度 27.96 34.33
2.3.2 磁珠法唾液基因组 DNA 提取案例
运行 状态
否 否 否 否 否 否 否 否 否
7、实验结束后,小心取出搅拌套和深孔板,将深孔板 5 列中的核酸溶液转移至 EP 管(若
有少量磁珠残留,可离心去除,少量磁珠不影响 PCR)。
(3)实验结果
表 6 提取后 DNA 浓度及纯度测定结果
编 号
Abs260
Abs280
Abs230
A260/A230
名称 间
(min)
裂解
0
裂解
0
结合
0
结合
0
漂洗
0
漂洗
0
漂洗
0
洗脱
3
洗磁珠
0
混合时 间
(min) 25 25 10 10 5 4 3 12 1
磁吸时 间(s)
0 0 60 60 60 60 60 60 60
混合速 度
中 中 慢 慢 中 中 中 中 慢
容积
500 500 800 800 650 800 800 300 400
A260/A280
样品浓度
1 0.228 0.13 0.136 1.67
1.75
11.39
2 0.44 0.246 0.209 2.11
1.79
22.01
3 0.43 0.246 0.262 1.64
1.75
21.5
4 0.612 0.34 0.357 1.71
1.8
30.59
6 0.979 0.539 0.504 1.94
2.3.3 磁珠法全血基因组 DNA 提取案例 (1)仪器及试剂盒 磁珠法新型全血基因组DNA提取试剂盒(预封装)(AU18012);其余同2.3.1。 (2)操作步骤 深孔板预分装试剂盒组成:
相关文档
最新文档