泽兰及其精制提取物HPLC特征图谱的相关性研究

泽兰及其精制提取物HPLC特征图谱的相关性研究*黄月纯1，张子龙2，魏刚2＊＊，刘东辉2（1．广州中医药大学第一附属医院，广州510405；2．广州中医药大学，广州510405）摘要目的：建立泽兰及其S－8型大孔树脂精制提取物的HPLC特征图谱，研究饮片与提取物特征图谱的相关性。

方法：采用Zorbax SB C18色谱柱；流动相为乙腈－体积分数为0.1%的磷酸溶液（梯度洗脱）；流速为1.0mL·min－1；检测波长为330 nm；柱温为40ħ。

结果：泽兰饮片及其提取物均标示出20个共有峰，峰2，6，7，13，17为五强峰，峰2为咖啡酸。

10批泽兰饮片的相似度为0.961 0.998；10批泽兰提取物的相似度为0.963 0.998；同批次饮片与提取物之间的相似度为0.988 0.998。

结论：方法准确可靠，重复性好，为泽兰及其提取物的质量控制提供了方法依据，同时为含泽兰复方制剂的质量控制提供了参考。

关键词：泽兰；饮片；提取物；特征图谱；相关性；高效液相色谱中图分类号：R917文献标识码：A文章编号：0254－1793（2011）08－1506－05Analysis on correlation of HPLC specific chromatogram ofLycopi Herba and its purification position*HUANG Yue－chun1，ZHANG Zi－long2，WEI Gang2＊＊，LIU Dong－hui2（1．The First Affiliated Hospital of Guangzhou University of TCM，Guangzhou510405，China；2．Guangzhou University of TCM，Guangzhou510405，China）Abstract Objective：To establish the method of specific chromatogram analysis on Lycopi Herba by HPLC，and studythe correlation of specific chromatogram on the decoction pieces and purification position of Lycopi Herba．Methods：HPLC was used with the Zorbax SB C18column，the acetonitrile－phosphoric acid solution（φ=0.1%）（gradient elution）was employed as a mobile phase，flow rate was1.0mL·min－1，detection wavelength was330nm，and column tempera-ture was40ħ．Results：20common peaks were separated in the decoction pieces and purification position of Lycopi Her-ba，the main five peaks were peak2，6，7，13，17，peak2was caffeic acid．The similarities of10batches of the decoction pieces of Lycopi Herba were0.961－0.998，the similarities of purification position of Lycopi Herba were0.963－0.998，the similarities between the decoction pieces and purification position of Lycopi Herba were0.988－0.998．Conclusion：The method is accurate and reliable，has a better reproducibility，and provides a reference for the quality control of Lycopi Herba and its purification position and compound preparation containing Lycopi Herba．Key words：Lycopi Herba；prepared drug in pieces；extract；specific chromatogram；correlation；HPLC泽兰为唇形科植物毛叶地瓜儿苗Lycopus lucidus Turcz．var．hirtus Regel的干燥地上部分。

功能活血调经，袪瘀消痈，利水消肿。

用于月经不调，经闭，痛经，产后瘀血腹痛，痈肿疮毒，水肿腹水［1］。

泽兰出自《神农本草经》，被列为中品。

泽兰作为外用药使用时间已很长，如治疗产后阴翻（《濒湖集简方》），小儿褥疮（《子母秘录》），痈肿初起、损伤瘀滞（《濒湖集简方》），痈疽发背及蛇咬伤（《福建民间草药》）［2］。

现代泽兰作为外用中药也应用广泛，是外治验方双柏散的组方之一［3］。

化学研究表明泽兰含挥发油、熊果酸、齐墩果酸、咖啡酸、木犀草素－7－O－葡萄糖醛苷等成分［4］。

药理研究表明泽兰具有显著的改善血液流变性质，同时还具备抗凝血、抑制血小板聚集、改善微循环、保护修复人微血管内皮细胞抑制氧化损伤等作用［4］。

其中咖啡酸具有抗菌、抗炎、止痛等作用［5］。

为进一步研究开发双柏新剂型，课题组采用S－8型大孔树脂精制法＊＊＊国家“十一五”科技支撑计划项目（2008BA153B074）通讯作者Tel：（020）39358166；E－mail：weigang021@163．com获得了泽兰精制提取物［6］。

目前，泽兰的质量控制相对较薄弱［1，7，8］。

本研究拟采用HPLC 法建立泽兰及其精制提取物的指纹图谱，并研究其相关性，为泽兰及其提取物的质量控制指标提供方法依据，同时为含泽兰复方制剂的质量控制提供参考。

1仪器与试药高效液相色谱仪（Agilent ，HP －1200），光二极管阵列检测器（Agilent ）；10批泽兰饮片为市售样品（见表1），经广州中医药大学第一附属医院黄月纯主任中药师鉴定系泽兰Lycopus lucidus Turcz．var．hirtus Regel 的干燥地上部分；10批泽兰精制提取物，自制；咖啡酸对照品（批号110885－200102，含量测定用），中国药品生物制品检定所提供；乙腈为色谱纯，其他试剂为分析纯，水为纯化水。

表1泽兰饮片来源Tab 1The sources of Lycopi Herba编号（number ）批号（lot number ）供货单位（the sources ）产地（place of production ）s1080525广东天诚药业有限公司（Guangdong Tiancheng Pharmaceutical Company Limited ）湖南（Hunan ）s2080701广东省药材公司（Guangdong Traditional Chinese Medicinal Materials Company ）广东（Guangdong ）s3080701广州致信药业有限公司（Guangzhou Zhixin Pharmaceutical Company Limited ）江苏（Jiangsu ）s4080607广东康美药业有限公司（Guangdong Kangmei Pharmaceutical Company Limited ）湖北（Hubei ）s5080520广州致信药业有限公司（Guangzhou Zhixin Pharmaceutical Company Limited ）江苏（Jiangsu ）s6080401广州市药材公司（Guangzhou Traditional Chinese Medicinal Materials Company ）江苏（Jiangsu ）s7080814广东康美药业有限公司（Guangdong Kangmei Pharmaceutical Company Limited ）湖北（Hubei ）s8080829广州中医药大学大药房公司（Pharmaceutical Company of Guangzhou University of TCM ）江苏（Jiangsu ）s9081110广州致信药业有限公司（Guangzhou Zhixin Pharmaceutical Company Limited ）湖北（Hubei ）s10100601广东紫和堂大药房有限公司（Guangdong Zihetang Pharmaceutical Company Limited ）安徽（Anhui ）2方法与结果2.1色谱条件流动相为乙腈（A ）－体积分数为0.1%的磷酸溶液（B ），梯度洗脱：0 20min 乙腈由10%→20%，20 30min 乙腈由20%→25%，30 40min 乙腈由25%→35%，40 50min 乙腈由35%→50%，50 55min 乙腈由50%→60%；流速为1.0mL ·min －1；检测波长为330nm ；柱温为40ħ。

选择不同型号的C 18柱进行试验，结果大部分色谱柱对峰6、峰7的分离度较差，而Zorbax SB C 18分离效果最好，确定采用Zorbax SB C 18（250mm ˑ4.6mm ，5μm ）色谱柱。

不同型号C 18柱的HPLC 叠加图见图1，S1为Zorbax SB C 18（250mm ˑ4.6mm ，5μm ），S2为Zorbax Extend C 18（250mm ˑ4.6mm ，5μm ），S3为Kromasil 100－5C 18（250mm ˑ4.6mm ，5μm ），S4为TSK －GEL ODS －80TS （150mm ˑ4.6mm ，5μm ），S5为Synergi 4μ，Hydro －RP 80A （250mm ˑ4.6mm ，4μm ），S6为Zorbax SB －Aq （250mm ˑ4.6mm ，5μm ），S7为Hypersil ODS （250mm ˑ4.0mm ，5μm ）。

图1不同型号色谱柱分析的HPLC 图谱Fig 1HPLC chromatography of different chromatogram pillar2.2供试品溶液的制备2.2.1饮片供试品溶液的制备取泽兰粉末（过4号筛），精密称取1g ，加入体积分数为80%甲醇溶液40mL ，水浴回流1.5h ，取出，放冷，滤过，药渣及滤纸剪碎同置于烧瓶中，加体积分数为40%甲醇溶液40mL ，水浴回流1.5h ，取出，放冷，滤过，用体积分数为40%的甲醇溶液洗涤药渣及滤纸，合并两次滤液和洗液，蒸干，加体积分数为50%的甲醇溶液使溶解，离心（4000r·min－1，5min），取上清液于10mL量瓶中，沉淀加体积分数为50%甲醇洗涤，取上清液并入量瓶中，加体积分数为50%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。