艾滋病抗体检测技术介绍(免疫印迹法)及质量控制(黎俊宏)
HIV抗体检测与质量控制培训课件
04
免疫荧光法（IFA）：利用荧光标记的抗体检测复合物
05
快速检测法（RDT）：利用试纸条检测复合物，操作简便，快速得出结果
检测方法
2
1
酶联免疫吸附试验（ELISA）：利用抗原抗体反应进行检测
快速检测试剂（RDT）：利用试纸条进行快速检测
化学发光免疫分析（CLIA）：利用化学发光反应进行检测
免疫荧光法（IFA）：利用荧光标记的抗体进行检测
3
结果评估：检测结果恢复正常，质量控制得到加强
4
培训目标
4
提高检测能力
03
提高HIV抗体检测的准确性和灵敏度
02
熟悉HIV抗体检测的质量控制标准和流程
01
掌握HIV抗体检测的基本原理和方法
04
学会分析和解决HIV抗体检测过程中遇到的问题
确保检测质量
培训目标：提高HIV抗体检测的准确性和可靠性
培训内容：包括检测原理、操作流程、质量控制方法等
02
评估频率：定期评估，确保检测质量稳定
03
评估结果：根据评估结果，调整检测方法和流程，提高检测质量
04
培训内容
3
理论知识
HIV抗体检测原理
检测方法及步骤
质量控制标准及方法
结果判读及报告撰写
常见问题及解决方案
法律法规及伦理要求
实际操作
试剂准备：选择合适的试剂，按照说明书进行配制
1
样本处理：采集样本，进行预处理，如离心、稀释等
检测试剂的选择：选择经过认证的检测试剂，确保检测结果的准确性
1
检测方法的选择：选择合适的检测方法，确保检测结果的可靠性
2
检测结果的判定：根据检测结果，判断是否感染HIV病毒
全国艾滋病检测技术规范解读
样品的保存
1 用于抗体和抗原检测的血清或血浆样品，短期（1周） 内进行检测的可存放于2～8℃， 一周以上应存放于-20℃ 以下。 2 用于核酸检测的血浆和血细胞样品4天内进行检测的可 存放于4℃，3个月以内应存放于-20℃以下。3个月以上 应置于-70℃以下。 3 艾滋病检测筛查实验室检测的筛查阳性样品应及时送 确证实验室，筛查阴性样品，可根据具体需要决定保存时 间，建议至少保存1～2个月。特殊用途或专项项目的样 品根据具体要求确定保存时间。 4 艾滋病检测确证实验室收到的筛查阳性样品，无论确 证结果如何，均应将剩余的样品保存至少10年，特殊用 途或专项项目的样品根据具体要求确定保存时间。
筛查检测方法
酶联免疫吸附试验（ELISA）
ELISA多为单纯HIV抗体检测试剂。HIV抗原 抗体联合检测试剂可同时检测血液中HIV-1P24抗 原和HIV-1/2抗体。HIV抗原或抗体包被于固相载 体，加入待检样品和酶标记的HIV抗原或抗体， 加底物显色，用酶标仪测定结果。有效试验的阴 性和阳性对照必须符合试剂盒规定。
确证试验（WB试验）
HIV抗原多为全病毒裂解抗原，用SDS-PAGE（SDS-聚丙烯 酰胺凝胶）按其分子大小进行电泳分离，然后通过电转移法 将凝胶中的HIV蛋白转移至硝酸纤维薄膜上。这类试剂的 抗原条带全，包括膜区抗原gp160、gp120和gp41，核 心抗原p55、p24和p17，聚合酶抗原p66、p51和p31， 另外还有HIV-2型特异性抗原。当NC膜上的抗原与血清 中的HIV抗体反应，在酶结合物的作用下显色，就显示了 不同的抗体条带
明胶颗粒凝集试验（PA）
将提纯后的HIV抗原连接到有色明胶颗 粒上，制成致敏颗粒。当加入的检测标本 中有HIV抗体存在时，即可使致敏颗粒凝集， 出现肉眼可见的浅色凝集环（斑）；而若 标本中无HIV抗体，致敏颗粒即在重力作用 下沉人U型板底，形成一个深色红点
测hiv有哪些方法
测hiv有哪些方法
HIV检测是通过检测的人体中是否存在艾滋病病毒来判断是否感染HIV。
以下是常用的HIV检测方法：
1. ELISA检测：ELISA（酶联免疫吸附试验）是目前最常用和普及的HIV检测方法之一。
它能够检测到人体血液中的抗体反应，确定是否感染HIV。
2. 免疫印迹法（Western Blot）：这种方法用于确认ELISA检测结果的，通过对阳性ELISA结果进行进一步的确认。
它可以检测血液中的有关艾滋病病毒的蛋白质。
3. 抗原检测：抗原检测可以直接检测体内的艾滋病病毒抗原，而不是检测人体的免疫反应。
抗原检测方法通常用于早期HIV感染的检测，因为在感染后早期，抗原会很快出现在血液中。
4. 核酸检测（PCR）：核酸检测是一种能够检测到DNA或RNA的方法。
它可以通过检测血液中的病毒核酸来确认是否感染HIV。
PCR方法可以在感染后的早期就能够检测到病毒存在。
需要注意的是，这些方法都需要在专业的医疗机构进行操作，不能在家中进行。
如果有HIV感染的疑虑，请及时咨询医生或到专业机构进行测试和咨询。
艾滋病医院检查方法
艾滋病医院检查方法艾滋病检查是通过多种方法进行的，包括实验室检测和临床检查。
下面将详细介绍常见的艾滋病检查方法。
1. HIV抗体检测：这是最常用的艾滋病检测方法。
它通过检测人体内是否存在针对艾滋病毒的抗体来确定感染情况。
常见的抗体检测方法有酶联免疫吸附试验（ELISA）和免疫层析试验（IC）等。
如果初步检测结果呈阳性，需要进行确认性检测。
2. 确认性检测：当抗体检测结果呈阳性时，需要进行确认性检测以确定是否真正感染了艾滋病病毒。
确认性检测常用的方法是免疫印迹法（Western Blot）和免疫荧光抗体试验（IFA）等。
这些方法能够检测到特定的抗体，以确保诊断的准确性。
3. HIV核酸检测：这是一种直接检测艾滋病病毒核酸的方法。
常见的核酸检测方法有聚合酶链反应（PCR）和核糖核酸杂交（Southern Blot）等。
这些方法能够检测到病毒的基因物质，可以在感染初期就进行检测，提高检测的敏感性和准确性。
4. 蛋白质检测：这是一种间接检测方法，通过检测艾滋病病毒蛋白质的存在来判断是否感染了病毒。
常用的蛋白质检测方法有抗体捕获试验（Antibody Capture Assay）和抗原检测试验（Antigen Assay）等。
这些方法可以检测到病毒的抗原或抗体，从而确认感染情况。
5. T淋巴细胞计数：艾滋病病毒会攻击人体的免疫系统，主要作用于T淋巴细胞。
因此，T淋巴细胞计数对于艾滋病的诊断和疾病进展的监测非常重要。
常见的计数方法有流式细胞仪（Flow Cytometry）和细胞自动分析仪（Cell Analyzer）等。
6. 临床症状检查：除了实验室检查，临床医生还会根据患者的症状进行检查。
艾滋病常见的症状包括发热、体重减轻、乏力、盗汗、反复感染等。
医生会进行详细的询问和体格检查，以了解患者的症状情况。
总结起来，艾滋病的检查方法主要包括HIV抗体检测、确认性检测、HIV核酸检测、蛋白质检测、T淋巴细胞计数和临床症状检查。
艾滋病的病检测技术有哪些
艾滋病的病检测技术有哪些艾滋病的检测技术有哪些艾滋病，一个令人闻之色变的名词。
它是一种严重威胁人类健康的传染病，由人类免疫缺陷病毒（HIV）引起。
及时准确的检测对于艾滋病的诊断、治疗和预防至关重要。
那么，目前都有哪些艾滋病的检测技术呢？首先，我们来了解一下酶联免疫吸附试验（ELISA）。
这是一种常见的血清学检测方法。
它的原理是利用酶标记的抗体与待检测样品中的 HIV 抗原或抗体发生特异性结合，然后通过检测酶的活性来判断结果。
ELISA 检测方法具有较高的敏感性和特异性，能够大规模筛查艾滋病病毒感染。
接着是免疫印迹试验（Western Blot，WB）。
它被认为是艾滋病检测的“金标准”。
在这个检测中，通过电泳将 HIV 蛋白分离，然后将其转移到膜上，再与患者的血清进行反应。
如果血清中存在 HIV 抗体，就会在膜上形成特定的条带。
WB 检测能够准确地确认 HIV 抗体的存在，但操作相对复杂，成本也较高。
快速检测试剂也是常用的检测手段之一。
这种检测方法操作简便、快捷，通常在 15 到 30 分钟内就能得出结果。
常见的有胶体金法和免疫层析法。
快速检测试剂适用于现场检测和初步筛查，比如在一些不具备复杂检测条件的基层医疗机构或紧急情况下使用。
核酸检测技术在艾滋病的诊断中也发挥着重要作用。
核酸检测主要是检测 HIV 的 RNA 或 DNA。
这种检测方法能够在感染后的早期就检测出病毒，大大缩短了检测的“窗口期”。
对于急性期感染、晚期艾滋病患者、婴儿感染诊断以及监测治疗效果等方面具有重要意义。
病毒培养法是一种直接检测病毒的方法，但由于其操作难度大、成本高、对实验条件要求苛刻，一般不作为常规的检测手段。
不过，在一些特殊的研究和疑难病例的诊断中，病毒培养法仍有其不可替代的作用。
除了以上这些实验室检测技术，还有一些基于唾液、尿液等样本的检测方法正在不断发展和完善。
唾液检测相对方便，患者的接受度较高。
尿液检测则具有无创、易于采集的优点。
HIV抗体ELISA检测质量控制
HIV抗体ELISA检测质量控制摘要】目的：对HIV抗体检测ELISA法的各个环节和影响因素进行质量控制，保证检验结果的准确无误。
方法：采用ELISA法，对2018年1月—2019年6月HIV 抗体检测,用上海科华试剂，设内部和外部质控、洗板和水浴厢、酶标仪，以s/co 计算统计均值，标准差画Levy-Jennings质控图，采用Westbard多规则技术质控规则，1－2S为警告，1-3S为失控限。
以S/CO的变异系数CV来判断控制检验结果的质量。
每月、每季度、半年、1年对结果分析，并对失控进行原因分析、处理和整改。
结果：空白OD值全部小于0.08，阴性全部小于0.04OD，两个阳性1大于0.81OD,阳2大于0.35。
CUT—off在0.085—0.115，实验有效，设置的外部质控5Ncu/mL与标本同时测定，s/co的总CV20内.2018年1月—2019年6月共做28050例，阳性197例送疾控检测完全符合，阴性抽检50例完全符合，参与云南省的HIV质控完全符合达100分。
结论：做好HIV抗体ELISA法的室内室间评是保证HIV抗体检测结果准确无误的唯一保障，是每一个初筛实验室严格操作和执行的行业要求标准。
【关键词】HIV抗体 ELISA S/CO【中图分类号】R446.6 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2020）08-0237-02严格按照标准操作规程S0P文件，做好HIV抗体检测ELISA法的质量控制，是每个初筛实验必须遵循的风险规则要求[1]。
现对我院2018年1月起的HIV抗体检测的ELISA法，室内质控报告如下：1.资料与方法1.1 采用科华试剂外部质控品5Ncu/ML，在试剂2～3倍（Cut-off）左右，加样枪每年自己校准符合要求，水浴厢、洗板机、酶标仪、温湿度计完全按标准正常，在生物安全柜里面加样，加试剂。
1.2 内外部质控血清设置孔1空、孔2为阴，孔3、孔4为阳1，孔5为阳2、孔6为外部质控血清。
HIV抗体检测工作中的质量控制
HIV抗体检测工作中的质量控制为实现《中国遏制与防治艾滋病“十三五”行动计划》“三个90%”的防治目标，扩大检测也成为我国长期实施的艾滋病防治策略，HIV抗体检测已经广泛深入基层。
作为一名从事HIV抗体检测工作人员，在工作中应注意些什么呢？现就血液作为检测样本总结如下：一、采血前准备按照临床采血技术要求操作。
准备好采血所需物品，注意受检者信息与样本容器表面的标记一致，并注明样本采集时间及唯一编码，使用专门的登记表记录样本信息，同时录入电脑保存。
二、样本的采集和处理1、抗凝全血：消毒局部皮肤，用加有抗凝剂（EDTA钠盐或钾盐、枸橼酸钠、肝素钠）的真空塑料采血管抽取适量静脉血，轻轻颠倒混匀10-15次，备用。
2、血浆：根据检测需要，选择含适宜抗凝剂的塑料采血管，按照采血管说明采集静脉血，分离血浆；或将采集的抗凝全血1500～3000r /min离心15分钟，上层即为血浆，吸出置于合适的容器中，备用。
3、血清：根据检测需要，按照采血管说明书采集静脉血，分离血清；或用不含抗凝剂的真空塑料采血管抽取适量静脉血放置1～2小时，待血液凝固、血块收缩后再用1500～3000r/min离心15分钟，吸出血清，置于合适的容器中，备用。
4、采血完成后的穿刺针头必须丢弃于专用锐器盒内，妥善处理，防止发生职业暴露。
三、HIV抗体检测1、检测人员必须具备上岗资格证。
2、选择试剂必须是经国家药品监督管理局注册、在有效期的试剂。
推荐使用临床指令评估灵敏性和特异性高的方法和试剂。
3、在进行抗体检测之前，认真仔细阅读试剂说明书，熟悉操作流程及注意事项。
4、检测过程中做好个人防护，严格按照操作技术规范和试剂说明书进行检测，注意环境温度的控制、试剂的平衡、外部对照的使用，反应时间等。
5、实验结束后做好实验室消毒和废弃物的处理工作。
四、样本的保存1、用于抗体和抗原检测的血清或血浆样本，短期（1周）内进行检测的可存放于2～8℃，一周以上应存放于-20℃以下。
艾滋病实验室的质量管理
室内质控品的保存
（1）按一周实验用量分装、分类、标记、封 口、-20℃冻存。 （2）外部对照血清不可反复冻融，一旦融化 后应该存放2-8℃，一周内使用。
3、室内质控品的使用
每一次实验必须使用室内质控品，以便监 控实验的重复性。同时可以了解各批试剂盒 的批间差异或孔间差异，绘制质量控制图。
统计室内质控的主要方法---建立质控图
4、绘制和分析质控图的要点
（1）要在最佳条件下建立质控图参 数。 （2）用S/CO比值绘制质控图。 （3）由专人负责建立质控图，每月 定期召开质控分析会，讨论本月的质量 控制情况。每次检测之前都应了解质控 结果。 （4）建议长期和稳定地使用一种质 量好的试剂盒。
（5）更换不同厂家的试剂盒后，必须重 新绘制质控图。改用新批号试剂盒如结果偏 离较大也应重新制作质控图。使用新批号或 不同厂家的试剂盒必须在质控图上注明使用 日期。 （6）如发现质控值剧烈位移或失控，应 填写报告单，上交质量负责人，分析原因并 决定是否发出检测报告。 （7）使用新批次的外部对照质控血清时， 必须重新绘制质控图。 （8）及时发现质控结果失控
需提供人员保护
等级而定)
二级生物安全柜
生物安全柜的维护
每年检定一次安全柜 保持所有操作在窗扇4英寸以内 清洁物质和污染物隔离开，减少相
互干扰
使用后及时清理
柜内不宜放太多的物品，不能储藏
化学物质
离心机的维护
转头、套桶
使用离心机的注意事项
离心力、离心速度 平稳的仪器台 不用时，松转头；使用时，拧紧
2、实验原始记录表
应按实验要求，设计操作的原始记录表， 标明空白对照、阳性对照、阴性对照、外部 对照以及待检样品的位置，便于指导实验人 员加样。要注明试剂厂家、测定方法、批号、 有效期、操作人员和复核人员姓名及检测日 期。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
HIV模型图
脂双层膜 gp120 包膜糖蛋白 gp41 p24衣壳蛋白
p17内膜蛋白
p7核衣壳蛋白 逆转录酶 整合酶 蛋白酶
env基因的结构及env蛋白
env编码 外膜蛋白gp120 跨膜蛋白gp41 （包膜蛋白前体gp160为 gp41聚合体）
gag基因的结构及gag蛋白功能
gag基因编码病毒核心蛋白 前体蛋白p55（p39为p55的 碎片）、衣壳蛋白p24、内 膜蛋白p17
实验蓝图
实验原始记录
结果的判定
首先要确定可见到标本质控带.如果标本质 控带是阴性,则检测无效;因为这表示技术上有 错误,如未加样本,酶结合物或底物液。
与强和/或弱阳性对照试剂膜对照,确定检测 试剂膜上每一条带的分子量。 按照试剂盒说明书判定标准，判断待测样 品为阳性、阴性或不确定。
试剂盒说明书
7.2.1 试剂内对照 7.2.2 室内质控品对照 7.2.3 开展抗体相关检测的实验室须参加有 资质机构组织的能力验证，或室间比对。
出现以下问题，提示存在质量隐患，应引起重视：运输包装、内盒或试剂盒的物理损 伤；在单包装内存在混杂物质；标签出现错误、缺失或字迹模糊 （特别是产品名称 或出产厂家名称，批号和货号，失效期或/和生产日期）；缺失目录；泄漏或污染； 不适宜的存放条件；保护包装纸破损或污染；未达到质量控制标准 （阳性/阴性控制 结果以及质控条带出现与否等标志）；试剂质量问题须报告省确证中心实验室。
7.1.3 Levey-Jennings质控图
7.1.3.2 质控规则 实验室在报告结果之前必须评价质控数据，可通过图形记录的检查或由 计算机审核结果来决定。目前有许多质控规则，常用的是12S和13S规则。 （1）告警（12S）：当外部质控品的S/CO值超出 +2s范围时，系统处于告警 状态，应予注意，是否可以继续检测需要进一步观察。若将12S做失控标 准，有较高的假失控概率，所以一般不采用。 （2）失控（13S）：当外部质控品的S/CO值超出 +3s范围时，系统处于失控 状态，本次实验结果不能被接受，可能是系统误差、随机误差或外部质 控品 稳定性下降所致。 7.1.3.3 质控图的分析及失控处理 实验室应建立质控图分析及失控情况处理的程序。当出现失控时，必须 找出发生问题的原因，找出解除问题的方法，并消除原因。
WB法HIV抗体确证实验质控
第二章 HIV抗体检测 7.1
试剂盒内提供的阳性和阴性对照：判 断每次实验的有效性，不能作为室内 质控品使用；每次须有，且只能同批 号试剂盒用；如无效，须重做。 非试剂盒组份的外部质控品：监控 酶免或发光法抗体检测的室内质量控制 检测的重复性，且须为弱阳性；判 断该批临床样品检测的可信性；每 次须有；失控须重做。可买或自制： 稳定、无菌、不含影响试剂反应的 防腐剂。
外部质控品？实验操作？不同人员？仪器？（如加样枪？洗板 机堵孔？酶标仪未每年校准？）绘制质控图错误？……
7.1.4
室内质控其他方式—“即刻法”质控
7.1.4
室内质控其他方式—“即刻法”质控
（1）当SI上限和SI下限 <n2s时表示处于控制范围 内，可以继续测定。继续 重复以上各项计算。 （2）当SI上限和SI下限 有一值处于n2s～n3s值之间 时说明该值在2s～3s范围 ，处于“告警”状态。 （3）当SI上限和SI下限 有一值> n3s值时说明该值 已在3s范围之外，属“失 控”。 “即刻法”只能在前 20次内使用，超出即可采 用L-J质控图方法。
WB法HIV抗体确证实验质控
一、室内质控: 仪器质控：仪器是否运转正常，管路是否堵塞； 过程质控： 1、试剂质控，强阳、弱阳、阴性对照； 2、样品质控，有无交叉污染，相邻的槽道是否 出现完全一样的条带； 3、数据质控，室温25±3℃（ ＜20 ℃ 需开空调 ），结果判读需两名判读人和一名审核人。 二、外部质控：参加有资质机构组织的能力验证，即室 间比对，如全国艾滋病检测实验室HIV抗体血清学能力验 证。
HIV基因组
条带
ENV区 gp160:gp41的聚合体 gp120:外膜蛋白 gp41:跨膜蛋白 POL区 p66:逆转录酶 p51:逆转录酶 p31:核酸内切酶 GAG区 p55:前体蛋白 p39:p55的碎片 p24:核心蛋白 p17:核心蛋白 宽的扩散糖蛋白带 扩散糖蛋白带 扩散糖蛋白带 细窄条带 细窄条带 双重条带 细窄条定
孕妇第一次确证
MSM第一次确证
再次确证阴性
孕妇4周后随访确证结果
MSM4周后随访确证结果
From不确定to阳性
送检时间：2011年1月
送检时间：2011年2月
质量控制
第二章 HIV抗体检测
7 7.1 7.2 质量控制 酶免或发光法抗体检测的室内质量控制 快速法抗体检测质控
常 州 市 疾 病 预 防 控 制 中 心 南华大学附属南华医院
Changzhou Center for Disease Control and Prevention
艾滋病抗体检测技术（免 疫印迹法）及质量控制
黎俊宏 检测检验中心 艾滋病确证实验室
全国艾滋病检测技术规范（2015年修订版） 第六章 艾滋病病毒感染实验室检测策略
条带位置
试剂批号不同甚至同一批号不同盒子，同一条带 的位置并不是相同的
早期感染带型？（疑似）
Gp160+p24 gp120很弱或者没有或还有其他
早期感染带型？（疑似）
早期感染带型？（疑似）
进展带型？
AIDS（晚）期带型？
ENV带强度保持恒定，p24缺失或强度明显降低
在HIV颗粒中，外膜蛋白（env）基因编码的 一个蛋白经糖基化后形成包膜蛋白前体（ gp160），其在蛋白酶作用下裂解成外膜蛋白 （gp120）和跨膜蛋白（gp41）；核心蛋白（ gag）基因编码的前体蛋白（p55）被蛋白酶裂 解为衣壳蛋白（p24）和内膜蛋白（p17）， p39为p55的碎片；逆转录酶蛋白（pol）基因 编码的逆转录酶（p66、p51）和核酸内切酶（ p31），而机体对上述HIV蛋白产生相应的抗体 ，又在WB中出现相应的不同组合的带型。 这既是确证HIV抗体阳性的条件，又能作为 HIV感染期和AIDS期的参考依据。
7.1.1 7.1.2 7.1.3 7.1.4
试剂盒内部对照 室内质控品 Levey-Jennings质控图 室内质控其他方式—“即刻法”质控
7.1.3 Levey-Jennings质控图
7.1.3.1 质控图参数 外部质控品的均值和标准差应建立在实验室常规使用方法对外部质控 品重复测定的基础上。一般采用在不同批次检测取得至少20个数据； 如果仅做少量批次的检测，也至少做5个批次的检测，每个批次中不少 于4个质控血清测定结果，以建立一个临时性的均值和标准差，当达到 20批次数据后，替代临时性的均值和标准差。 （1）算术平均值（ ）：代表一组质控品测定S/CO值的均值。为了统计 学上有显著性意义，应该采用至少20次（天）测得的外部对照质控品 的S/CO值计算平均值。 （2）标准差（s）：是描述样品与均数之间离散程度的一个指标，是与 质控品S/CO值均值有关的预期范围。一组S/CO值的标准差以s表示。 （3）变异系数（cv）：是反映各次S/CO值相对于均值离散程度的一个 指标，可以用来衡量检测的重复性或精密度。 （4）控制限：由实验室根据对外部质控品检测结果的均值和标准差来 确定。例如，按照12S质控规则，控制限为外部质控品S/CO均值加减2 个标准差；按照13S质控规则，控制限为外部质控品S/CO均值加减3个 标准差。
WB检测HIV抗体的原理
全病毒裂解液电泳得到的膜条
硝酸纤维试剂膜条上结合了天然灭活的HIV-1型病 毒蛋白的分离颗粒和特异性的HIV-2型合成多肽。 在膜条分别加入稀释的血清或血浆样本或对照， 孵育。如果样本中含有HIV-1和HIV-2型的特异性 抗体，则抗体会与试剂膜条上的HIV-1蛋白和HIV2多肽结合，通过清洗去除试剂膜条上的未结合物 ，与HIV蛋白特异性结合的抗体再通过与带有碱 性磷酸酶的羊抗人IgG抗体结合，加入BCIP/NBT 底物等一系列反应即可显色。
pol基因的结构及pol蛋白
pol基因编码的酶类 p66和p51蛋白为逆转录酶 p32蛋白则为整合酶 P11蛋白为蛋白酶
确证试验的要点
严格遵守实验室标准操作程序(SOP) 严格按照试剂盒说明书操作 严格控制防止样品间的交叉污染
试剂
MP生物医学亚太私人有限公司（MP） HIV-1/2混合型试剂（MP HIV BLOT 2.2） 上海英旻泰生物技术有限公司（IMT） HIV-1/2混合型试剂（IMT HIV-1/2 Blot）
RIBA/LIA 条线/线性免疫试验 LIA 条带免疫试验 RIPA 放射免疫沉淀试验
IFA
免疫荧光试验
WB的原理
Western Blot与Southern或Northern杂交方法 类似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶 电泳 ，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“ 显色”用标记的二抗。经过PAGE分离的蛋白质 样品，转移到固相载体（例如NC膜）上，固相载 体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分 离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体 上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免 疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应 ，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的 特异性目的基因表达的蛋白成分。
HIV-1抗体阳性 检测出2条env带（gp160/gp41和gp120）及gag （p17，p24，p55）或pol（p31，p51，p66） HIV抗体阴性 没有病毒的特异性条带或只检测出p17抗体 HIV抗体不确定 出现任何病毒特异条带，但不足以判断为阳性
技术规范（2009版）
HIV-1抗体阳性 至少有2条env带（gp41和gp160/gp120）出现，或至少1 条env带和p24带同时出现。 HIV抗体阴性 无HIV抗体特异带出现。 HIV抗体不确定 出现HIV抗体特异带，但不足以判定阳性。 HIV-2抗体血清学阳性 出现HIV-2型特异性指示带的样品：如果同时呈HIV-1 抗体 阳性反应，只需报告HIV-1 抗体阳性，不推荐进一步做 HIV-2 抗体确证试验；如果同时呈HIV-1抗体不确定或阴性 反应，需用HIV-2型确证试剂再做HIV-2的抗体确证试验。 同时符合以下二条标准，即出现至少2条env 带（gp36和 gp140/ gp105），和试剂盒提供的阳性判定标准，可判为 HIV-2抗体阳性。