中华人民共和国兽药典(2015年版二部)甘草
甘草颗粒中甘草酸含量HPLC测定方法的建立
动物医学进展，２０２０，４１（１２）：７４ ７９ＰｒｏｇｒｅｓｓｉｎＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ甘草颗粒中甘草酸含量ＨＰＬＣ测定方法的建立 收稿日期：２０１９ ０４ １３ 基金项目：２０１８年农业行业（国家）标准项目兽药国家标准制修订计划（２０１８Ｚ０１８） 作者简介：李 军（１９８２－），男，山西浑源人，副教授，硕士，主要从事中药制剂的开发及质量研究。
李 军１，杨 奇２，刘立轩１，李 敏２，冷晓红１，马春芳２，吴春燕２（１．宁夏职业技术学院宁夏中药材开发与利用工程技术研究中心，宁夏银川７５００２１；２．宁夏兽药饲料监察所，宁夏银川７５００１１） 摘 要：为完善甘草颗粒的质量标准，以Ｃ１８（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）柱为色谱柱，甲醇 ０．２ｍｏｌ／Ｌ醋酸铵 冰醋酸（５６∶４４∶０．４）为流动相，流速１．０ｍＬ／ｍｉｎ，检测波长为２５０ｎｍ，进样量为１０μＬ的色谱条件建立了ＨＰＬＣ法测定甘草酸含量，并进行方法学验证。
结果表明，甘草酸色谱峰峰形良好，且与相邻峰良好分离；进样浓度在０．１ｍｇ／ｍＬ～０．５ｍｇ／ｍＬ（０．１μｇ～０．５μｇ）范围内，与峰面积呈良好的线性关系（狉＝０．９９９８）；精密度和稳定性等考察结果的相对标准偏差均小于２．０％；样品平均回收率为９７．９２％（ｎ＝６），ＲＳＤ为１．８７％。
建立的方法可靠，准确度高，重现性好，为完善甘草颗粒的含量测定方法提供了依据。
关键词：甘草颗粒；甘草酸；高效液相色谱；含量测定中图分类号：Ｓ８５３．７２；Ｓ８５９．２文献标识码：Ａ文章编号：１００７ ５０３８（２０２０）１２ ００７４ ０６ 甘草颗粒是由具有清热解毒、祛痰止咳作用的甘草制成的兽用制剂［１］，有良好的免疫调节、抑制病毒、保肝、抗炎及镇咳作用，甘草酸作为其最重要的活性成分之一，其药理作用包括抗炎、抗溃疡、抗肝毒素以及抗癌等［２］。
《中国兽药典》２０１５年版（第二部）中收载甘草颗粒为甘草浸膏经加工制成的颗粒，并收录了甘草颗粒的质量标准［１］。
甘草检验操作规程
【含量测量】 照高效液相色谱法（《中国药典》2000年版一部附录 D）测定。
色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-0.2mol/L醋酸铵溶液-冰醋酸（67:33:1）为流动相；检测波长为250nm。理论板数按甘草酸单铵盐峰计算应不低于2000。
文件名：甘草检验操作规程
制定人：
制定日期：
分发份数：5
审核人：
审核日期：
颁发部门：GMP办
批准人：
批准日期：
生效日期：
分发至：质量保证部、质监科、质量检验中心
[品名]甘 草
[拼音]Gancao
[拉丁文]RADIX GLYCYRRHIZAE
[代号]Y4
[取样方法]（1）中药材总件数n≤5或为贵细药材时，每件取样；n为5～99时，取样数为5；n为100～1000时，按n的5%取样；n＞1000时，超出部分按1%取样。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10µl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品含甘草酸（C42H62O16）不得少于2.0%。
【炮制】 除干燥处，防蛀。
【鉴别】 （1）本品横切面：木栓层为数列棕色细胞。皮层较窄。韧皮部射线宽广，多弯曲，常现裂隙：纤维多成束，非木化或微木化，周围薄壁细胞常含草酸钙方晶；筛管群常因压缩而变形。束内形成层明显。木质部射线3～5列细胞；导管较多，直径约至160µm；木纤维成束，周围薄壁细胞亦含草酸钙方晶。根中心无髓；根茎中心有髓。
对照品溶液的制备取甘草酸单铵盐对照品10mg，精密称定，置50ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml含甘草酸单铵盐对照品0.2mg，折合甘草酸为0.1959mg）。
《中国兽药典》2015年版二部主要增修订内容
拉丁名
Patrinia scabiosaefolia Fisch. Patrinia scabiosaefolia Fisch. Aconitum naviculare Stapf
鉴定人 宋晓娜 宋晓娜 宋晓娜
审查人 刘春生 刘春生 刘春生
6-12
8-11 9-12 12-12 13-12 15-32
指导试验研究工作
样品编号 3-13 3-3 4
药材名 败酱草 败酱草 棒嘎
品种名称 不详 不详 不详
产地 江西 四川 西藏
采购地 樟树 荷花池 荷花池
药材形态
干燥全草 带根茎的干燥地上部分 全草的干燥地上部分
鉴定结果
正品（败酱科植物黄花龙牙） 正品（败酱科植物黄花龙牙） 正品（毛茛科植物船形乌头）
编制过程
2015年版《中国兽药典》编制历程
前期调 研，遴 选委员 委员会 成立， 通过编 制方案 制定工作 方案，落 实任务分 工 试验 阶段 技术 审查 阶段 公示 阶段 审稿 统稿 大会 定稿 审批 出版 正式 实施
2011.9
2011.12 2012.4
2012.5
2014.6 2014.11 2015.9 2015.12 2016.1 ……
落实任务分工
编制过程
中药专业委员会开展工作
开展兽医专用药材资源调查
•
•
分赴安国、亳州、樟树等药材集散市场，调查品种、供给状况 适时调整拟研究品种清单，确定76种兽医专用药材的分工
组织审定实施方案 集中采集、鉴定制修标用药材样品
• • • • •
成立三个采集小组，分赴安国等全国6个主要药材市场，采购 药材样品 对采集的样品归类、编号，共收集到31种56个样品 送北京中医药大学刘春生教授鉴定 经鉴定，获得17种23个样品 样品分发
ZL-01040甘草提取物内控质量标准
目的：建立甘草提取物质量标准，为甘草提取物原料提供检验依据。
范围：甘草提取物责任：物料部采购员、仓库保管员、质量管理部经理、检验员内容：标准依据：《中华人民共和国兽药典》2010年版二部物料名称: 甘草提取物【性状】本品为棕色粉末；有微弱的特殊臭气和持久的特殊甜味。
【鉴别】（1）取本品粉末2~4mg，置白瓷板上，加硫酸溶液（4→5）数滴，即显黄色，渐变为橙黄色至橙红色。
（2）取本品2g，加水40ml，用正丁醇振摇提取3次，每次20ml(必要时离心)，合并正丁醇液，用水洗涤3次，每次20ml，正丁醇液置水浴上蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，作为供试品溶液。
另取甘草酸铵对照品，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。
照薄层色谱法(附录××页)试验，吸取上述二种溶液各5μl，分别点于同一用1％氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15∶1∶1∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯(365nm)下检视。
供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的橙黄色荧光斑点。
【检查】干燥失重取本品1.0g，精密称定，置已干燥至恒重的称量瓶中105℃干燥5小时减失重不得超过8.0%。
【含量测定】照高效液相色谱法（附录36页）测定。
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-0.2mol/L醋酸铵溶液-冰醋酸（67∶33∶1）为流动相；检测波长为250nm。
理论板数按甘草酸峰计算应不低于2000。
甘草酸对照品溶液的制备取甘草酸单铵盐对照品10mg，精密称定，置50ml量瓶中，用流动相45ml，超声处理使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml含甘草酸单铵盐对照品0.2mg，折合甘草酸为0.1959mg）。
供试品溶液的制备取本品中粉约0.5g，精密称定，置50ml量瓶中，加流动相约45ml，超声处理（功率250W，频率20kHz）30分钟，取出，放冷，加流动相至刻度，摇匀，滤过，精密取续滤液10ml，置25ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。
甘草质量标准
甘草质量标准制疋人：日期:审核人：日期:批准人：批准日期:生效日期：________甘草GancaoRADIX GLYCYRRHIZAE本品为豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch. 、胀果甘草Glycyrrhiza inflata Bat. 或光果甘草Glycyrrhiza glabra L. 的干燥根及根茎。
春、秋二季采挖，除去须根，晒干。
［性状］甘草根呈圆柱形，长25〜100cm直径0.6〜3.5cm。
外皮松紧不一。
表面红棕色或灰棕色，具显著的纵皱纹，沟纹、皮孔及稀疏的细根痕。
质坚实，断面略显纤维性，黄白色，粉性，形成层环明显，射线放射状，有的有裂隙。
根茎呈圆柱形，表面有芽痕，断面中部有髓。
气微，味甜而特殊。
胀果甘草根及根茎木质粗壮, 有的分枝, 外皮粗糙, 多灰棕色或灰褐色。
质坚硬，木质纤维多，粉性小。
根茎不定芽多而粗大。
光果甘草根及根茎质地较坚实，有的分枝，外皮不粗糙，多灰棕色，皮孔细而不明显。
［鉴别］(1)本品横切面：木栓层为数列棕色细胞。
栓内层较窄。
韧皮部射线宽广，多弯曲，常现裂隙；纤维多成束，非木化或微木化，周围薄壁细胞常含草酸钙方晶；筛管群常因压缩而变形。
束内形成层明显。
木质部射线宽3〜5列细胞；导管较多，直径约至160 口木纤维成束，周围薄壁细胞亦含草酸钙方晶。
根中心无髓；根茎中心有髓。
粉末淡棕黄色。
纤维成束，直径8〜14卩m壁厚，微木化，周围薄壁细胞含草酸钙方晶，形成晶纤维。
草酸钙方晶多见。
具缘纹孔导管较大，稀有网纹导管。
木栓细胞红棕色，多角形，微木化。
(2)取本品粉末1g，加乙醚40ml，加热回流1小时，滤过，药渣加甲醇30ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水40ml使溶解，用正丁醇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，用水洗涤3次，蒸干，残渣加甲醇5ml 使溶解，作为供试品溶液。
另取甘草对照药材1g，同法制成对照药材溶液。
再取甘草酸铵对照品，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。
农业部公告第2438号中华人民共和国兽药典(2015年版)-国家规范性文件
农业部公告第2438号中华人民共和国兽药典(2015年版)根据《兽药管理条例》规定，我部组织完成《中华人民共和国兽药典（2015年版）》（以下简称《中国兽药典（2015年版）》）一部、二部、三部的编制工作，现予发布，自2016年11月15日起施行。
现就有关事宜公告如下。
一、《中国兽药典（2015年版）》是兽药研制、生产（进口）、经营、使用和监督管理活动应遵循的法定技术标准。
二、《中国兽药典（2015年版）》包括凡例、正文及附录。
自《中国兽药典（2015年版）》施行之日起，原历版兽药典、兽药国家标准（化学药品、中药卷，第一册）及农业部公告等收载、发布的同品种兽药质量标准同时废止。
三、《中国兽药典（2015年版）》收载品种未收载的制剂规格（已废止的除外），质量标准按照《中国兽药典（2015年版）》收载品种相关要求执行，规格项按照原批准证明文件执行。
四、下列标准继续有效，但应执行《中国兽药典（2015年版）》相关通用要求。
（一）《中国兽药典（2015年版）》未收载品种且未公布废止的兽药国家标准；（二）经批准公布的兽药变更注册标准且《中国兽药典（2015年版）》未收载的兽药国家标准。
五、2016年11月15日起申报兽药产品批准文号的企业和兽药检验机构应按照《中国兽药典（2015年版）》要求进行样品检验，并在兽药检验报告上标注《中国兽药典（2015年版）》兽药质量标准。
此前申报的，兽药检验报告标注的执行标准可为原兽药质量标准，也可标注《中国兽药典（2015年版）》兽药质量标准。
六、2016年11月15日（含）前生产的相应兽药产品可按原兽药标准进行检验，并在产品有效期内流通使用。
七、各级兽医管理部门应积极做好《中国兽药典（2015年版）》宣传贯彻和实施工作，及时收集和反馈相关问题和意见。
中国兽药典委员会应及时答复各地反映的有关问题，做好技术指导工作。
八、兽药企业应认真执行《中国兽药典（2015年版）》，不断提高兽药产品质量控制水平。
天然植物饲料原料 甘草粉碎物
天然植物饲料原料甘草粉碎物（草案）1 范围本标准规定了天然植物饲料原料甘草粉碎物的术语和定义，技术要求，试验方法，检验规则，标签、包装、运输、贮存和保质期等。
本标准适用于以豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.、胀果甘草Glycyrrhiza inflata Bat.或洋甘草Glycyrrhiza glabra L.的根和根茎为原料，经干燥、粉碎获得的天然植物饲料原料甘草粉碎物。
2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。
凡是注明日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本标准。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。
GB/T 1.1 标准化工作导则-第1部分：标准化文件的结构和起草规则；GB/T 19424 天然植物饲料原料通用要求；GB/T 10647 饲料工业术语；GB/T 6435 饲料中水分的测定；GB/T 6438 饲料中粗灰分的测定；GB/T 5917.1饲料中粉碎粒度的测定两层筛筛分法；GB 13078 饲料卫生标准；GB/T 14699.1 饲料采样；GB/T 13079 饲料中总砷的测定；GB/T 13080 饲料中铅的测定原子吸收光谱法；GB/T 13081 饲料中汞的测定；GB/T 13082 饲料中镉的测定；GB/T 13088 饲料中铬的测定；GB/T 13083 饲料中氟的测定离子选择性电极法；GB/T 13085 饲料中亚硝酸盐的测定比色法；NY/T 2071 饲料中黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮和T-2毒素的测定液相色谱—串联质谱法；GB/T 30956 饲料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定免疫亲和柱净化-高效液相色谱法；GBT 30957 饲料中赭曲霉毒素A的测定免疫亲和柱净化-高效液相色谱法；NY-T 1970 饲料中伏马毒素的测定；GB/T 13090 饲料中六六六、滴滴涕的测定；GB/T 13092 饲料中霉菌总数测定方法；GB/T 13091 饲料中沙门氏菌的测定；GB/T 6434 饲料中粗纤维的含量测定过滤法；GB/T 6432 饲料中粗蛋白的测定凯氏定氮法；GB 10648 饲料标签；GB 191-2008 包装储运图示标志；《中华人民共和国兽药典》（2015年版二部）。
农业部公告第2438号――中华人民共和国兽药典(2015年版)
农业部公告第2438号――中华人民共和国兽药典(2015年版)【法规类别】兽医兽药【发文字号】农业部公告第2438号【发布部门】农业部【发布日期】2016.08.23【实施日期】2016.11.15【时效性】现行有效【效力级别】部门规范性文件农业部公告（第2438号）根据《兽药管理条例》规定，我部组织完成《中华人民共和国兽药典（2015年版）》（以下简称《中国兽药典（2015年版）》）一部、二部、三部的编制工作，现予发布，自2016年11月15日起施行。
现就有关事宜公告如下。
一、《中国兽药典（2015年版）》是兽药研制、生产（进口）、经营、使用和监督管理活动应遵循的法定技术标准。
二、《中国兽药典（2015年版）》包括凡例、正文及附录。
自《中国兽药典（2015年版）》施行之日起，原历版兽药典、兽药国家标准（化学药品、中药卷，第一册）及农业部公告等收载、发布的同品种兽药质量标准同时废止。
三、《中国兽药典（2015年版）》收载品种未收载的制剂规格（已废止的除外），质量标准按照《中国兽药典（2015年版）》收载品种相关要求执行，规格项按照原批准证明文件执行。
四、下列标准继续有效，但应执行《中国兽药典（2015年版）》相关通用要求。
（一）《中国兽药典（2015年版）》未收载品种且未公布废止的兽药国家标准；（二）经批准公布的兽药变更注册标准且《中国兽药典（2015年版）》未收载的兽药国家标准。
五、2016年11月15日起申报兽药产品批准文号的企业和兽药检验机构应按照《中国兽药典（2015年版）》要求进行样品检验，并在兽药检验报告上标注《中国兽药典（2015年版）》兽药质量标准。
此前申报的，兽药检验报告标注的执行标准可为原兽药质量标准，也可标注《中国兽药典（2015年版）》兽药质量标准。
六、2016年11月15日（含）前生产的相应兽药产品可按原兽药标准进行检验，并在产品有效期内流通使用。
七、各级兽医管理部门应积极做好《中国兽药典（2015年版）》宣传贯彻和实施工作，及时收集和反馈相关问题和意见。
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甘草
Gancao
GLYCYRRHIZAE RADIX ET RHIZOMA
本品为豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.、胀果甘草Glycyrrhiza inflata Bat.或光果甘草Glycyrrhiza glabra L.的干燥根和根茎。
春、秋二季采挖，除去须根，晒干。
【性状】甘草根呈圆柱形，长25～100cm，直径0.6〜3.5cm。
外皮松紧不一。
表面红棕色或灰棕色，具显著的纵皱纹、沟纹、皮孔及稀疏的细根痕。
质坚实，断面略显纤维性，黄白色，粉性，形成层环明显，射线放射状，有的有裂隙。
根茎呈圆柱形，表面有芽痕，断面中部有髓。
气微，味甜而特殊。
胀果甘草根和根茎木质粗壮，有的分枝，外皮粗糙，多灰棕色或灰褐色。
质坚硬，木质纤维多，粉性小。
根茎不定芽多而粗大。
光果甘草根和根茎质地较坚实，有的分枝，外皮不粗糙，多灰棕色，皮孔细而不明显。
【鉴别】（1）本品横切面：木栓层为数列棕色细胞。
栓内层较窄。
韧皮部射线宽广，多弯曲，常现裂隙；纤维多成束，非木化或微木化，周围薄壁细胞常含草酸钙方晶；筛管群常因压缩而变形。
束内形成层明显。
木质部射线宽3～5列细胞；导管较多，直径约至160μm；木纤维成束，周围薄壁细胞亦含草酸钙方晶。
根中心无髓；根茎中心有髓。
粉末淡棕黄色。
纤维成束，直径8～14μm，壁厚，微木化，周围薄壁细胞含草酸钙方晶，形成晶纤维。
草酸钙方晶多见。
具缘纹孔导管较大，稀有网纹导管。
木栓细胞红棕色，多角形，微木化。
（2）取本品粉末1g，加乙醚40ml，加热回流1小时，滤过，弃去醚液，药渣加甲醇30ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残猹加水40ml使溶解，用正丁醇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，用水洗涤3次，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，作为供试品溶液。
另取甘草对照药材1g，同法制成对照药材溶液。
再取甘草酸单铵盐对照品，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。
照薄层色谱法（附录0502）试验，吸取上述三种溶液各1〜2μl，分别点于同一用1%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水（15：1：1：2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯（365nm）下检视。
供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同的橙黄色荧光斑点。
【检査】水分不得过12.0%（附录0832第一法）。
总灰分不得过7.0%（附录2302）。
酸不溶性灰分不得过2.0% （附录2302）。
重金属及有害元素照铅、镉、砷、汞、铜测定法（附录2321）测定，铅不得过5mg/kg，镉不得过0.3mg/kg，砷不得过2mg/kg，汞不得过0.2mg/kg，铜不得过20mg/kg。
有机氯农药残留量照农药残留量测定法（附录2341有机氯类农药残留量测定）测定。
含总六六六（α-BHC，β-BHC，γ-BHC，δ-BHC之和）不得过0.2mg/kg；总滴滴涕（pp＇-DDE、pp＇-DDD、op＇-DDT、pp＇-DDT之和）不得过0.2mg/kg；五氯硝基苯不得过0.1 mg/kg。
【含量测定】照髙效液相色谱法（附录0512）测定。
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以0.05%磷酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为237nm。
理论板数按甘草苷峰计算应不低于5000。
时间（分钟）流动相A（%）流动相B（%）
0～8 19 81
8～35 19→50 81→0
35～36 50→100 50→0
36～40 100→19 0→81
对照品溶液的制备取甘草苷对照品、甘草酸铵对照品适量，精密称定，加70%分别制成每1ml含甘草苷2μg、甘草酸铵0.2mg的溶液，即得（甘草酸重量=甘草酸铵重量/1.0207）。
供试品溶液的制备取本品粉末（过三号筛）约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇100ml，密塞，称定重量，超声处理（功率250W，频率40kHz）30分钟，放冷，再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品按干燥品计算，含甘草苷（C21H22O9）不得少于0.50%，甘草酸（C42H62O16）不得少于2.0%。
饮片
【炮制】除去杂质，洗净，润透，切厚片，干燥。
甘草片本品呈类圆形或椭圆形的厚片。
外表皮红棕色或灰棕色，具纵皱统。
切面略显纤维性，中心黄白色，有明显放射状纹理及形成层环。
质坚实，具粉性。
气微，味甜而特殊。
【检查】总灰分同药材，不得过5.0%。
【含量测定】同药材，含甘草苷（C21H22O9）不得少于0.45%，甘草酸（C42H62O16）不得少于1.8%。
【鉴别】（除横切面外）【检查】（水分、重金属及有害元素）同药材。
【性味与归经】甘，平。
归心、肺、脾、胃经。
【功能】补脾益气，祛痰止咳，和中缓急，解毒，调和诸药，缓解药物毒性、烈性。
【主治】脾胃虚弱，倦怠无力，咳喘，咽喉肿痛，中毒，疮疡。
【用法与用量】马、牛15～60g；驼45～l00g；羊、猪3～10g；犬、猫1～5g；兔、禽0.6～3g。
【注意】不宜与海藻、京大戟、红大戟、甘遂、芫花同用。
【贮藏】置通风干燥处，防蛀。