免疫学检测技术基本原理.
免疫学检测原理及临床应用
免疫学检测原理及临床应用免疫学检测是一种通过检测体内免疫系统的反应来确定疾病状态或病原体存在的诊断技术。
其基本原理是利用体内自身的免疫系统对外来物质（如细菌、病毒或人工合成物质）做出特异性反应，产生特异性抗体或细胞免疫反应，并将其检测出来。
免疫学检测可分为血清学检测和细胞免疫学检测两种。
血清学检测是指通过检测血清中特异性抗体的存在来确定疾病状态或病原体存在的诊断方法。
主要有ELISA、免疫荧光、免疫印迹等方法。
其基本原理是将目标抗原或建立细胞突变株制备成特异性抗原，与患者血清中的特异性抗体结合，用酶、荧光或其他标记物检测出来。
例如，ELISA是一种广泛应用的免疫学检测技术，用于检测抗体和抗原的相互作用。
它的原理是将抗原吸附到多孔板上，在体外将待测样本加入其中，样品中如有特异性抗体，则与抗原结合，未结合的抗体被洗掉，再加入标记抗体，标记物与抗原相互结合形成复合物，可以根据标记物的性质来检测复合物的形成。
细胞免疫学检测是指通过检测免疫细胞的反应来确定疾病状态或病原体存在的诊断方法。
主要有淋巴细胞转化试验（LTT）、流式细胞术等方法。
其基本原理是将血液或其他体液样本中的免疫细胞与特异性抗原共同孵育，在体外激活免疫细胞产生抗体或细胞反应，使用流式细胞术分离、检测不同类型的免疫细胞。
例如，LTT可用于检测细菌或病毒等病原体感染及免疫功能异常等疾病。
其原理是将血液或其他体液样本加入培养基中，与特定抗原刺激后，在体外培养一段时间，测定培养物中的淋巴细胞增殖情况，反映细胞免疫应答功能的多样性和复杂性。
免疫学检测在临床实践中的应用非常广泛。
它被用来诊断多种感染性疾病，例如乙型肝炎、艾滋病、结核病等。
通过检测患者体内是否存在相应的抗体或细胞反应，可以确定疾病病原体是否存在以及疾病的严重程度。
此外，免疫学检测还被用于诊断自身免疫性疾病，例如狼疮、风湿性关节炎等。
通过检测患者体内是否存在特定的自身抗体，可以确定患者的疾病类型和严重程度。
免疫检测原理
免疫检测原理免疫检测是一种常用的生物学实验技术，通过检测抗体与抗原之间的相互作用来确定特定物质的存在。
这种检测方法通常用于诊断疾病、监测生物分子的表达水平以及研究生物分子相互作用等领域。
免疫检测的原理主要基于免疫学中的抗体-抗原相互作用原理，下面将详细介绍免疫检测的原理及其应用。
1. 免疫检测的原理免疫检测的原理基于抗体与抗原之间的特异性相互作用。
抗体是免疫系统产生的一种蛋白质，可以识别并结合特定的抗原分子。
当抗体与抗原结合时，会发生特定的免疫反应，形成抗原-抗体复合物。
免疫检测利用这种抗原-抗体相互作用来检测特定的生物分子。
常见的免疫检测方法包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、免疫印迹（Western blot）、免疫荧光等。
2. ELISA检测原理ELISA是一种常用的免疫检测方法，其原理基于酶与底物之间的特异性相互作用。
在ELISA实验中，首先将待检测的抗原或抗体吸附在微孔板上，然后加入特异性抗体或抗原，使其与待检测物相结合。
接着加入与特异性抗体结合的酶标记二抗，形成抗原-抗体-酶标记二抗复合物。
最后加入底物，酶与底物发生反应产生可测量的信号，通过测量信号强度来确定待检测物的存在量。
3. Western blot检测原理Western blot是一种用于检测蛋白质的免疫检测方法，其原理基于蛋白质的分子量和特异性抗体的结合。
在Western blot实验中，首先将待检测的蛋白质经电泳分离并转移到膜上，然后将膜与特异性抗体结合，形成蛋白质-抗体复合物。
接着加入与特异性抗体结合的辅助抗体，再加入底物产生可视化的信号，通过检测信号强度来确定待检测蛋白质的存在量。
4. 免疫检测的应用免疫检测在医学诊断、生物学研究和生物工程等领域有着广泛的应用。
在医学诊断中，免疫检测可以用于检测病毒、细菌和肿瘤标志物等，帮助医生诊断疾病。
在生物学研究中，免疫检测可以用于检测蛋白质表达水平、研究蛋白质相互作用等。
在生物工程中，免疫检测可以用于检测重组蛋白质的纯度和活性等。
免疫检测技术的基本原理
免疫检测技术的基本原理1.抗原与抗体的特异性结合：免疫检测首先需要获得特定的抗体，该抗体与特定的抗原结合。
抗原可以是病原体的蛋白质或其他特定分子，也可以是细胞表面的标记分子。
抗体与抗原结合时形成免疫复合物，这种结合是高度特异性的，可以通过这种复合物实现对抗原的检测。
2.标记物的选择：在免疫检测中，通常需要选择一种标记物来标记抗体或抗原。
常用的标记物包括放射性同位素、荧光染料、酶和金纳米颗粒等。
标记物的选择需要考虑到标记物的稳定性、灵敏度和安全性等因素。
3.免疫反应的检测方法：免疫检测方法包括放射免疫测定法（RIA）、酶联免疫吸附测定法（ELISA）、荧光免疫测定法和免疫组化等。
不同的检测方法适用于不同的实验需求，选择适当的方法可以提高检测的灵敏度和特异性。
4.检测结果的定量或定性分析：通过检测生成的信号，可以对抗原或抗体进行定量或定性分析。
定量分析通常测定免疫反应的信号强度来判断抗原或抗体的浓度，定性分析则仅判断免疫反应是否发生。
免疫检测技术在临床诊断、疫苗研发、药物研发等领域有着广泛的应用。
例如，在临床上，免疫检测技术可以用于检测病毒感染、细胞因子水平、肿瘤标志物等，为疾病的早期诊断和治疗提供依据。
在疫苗研发中，免疫检测可以评估疫苗的免疫原性和免疫保护效果。
在药物研发中，免疫检测可以用于评估药物对免疫系统的影响。
总而言之，免疫检测技术是一种基于免疫学原理的生物学技术，基于抗原与抗体之间的高度特异性和亲和性进行定量或定性检测。
通过选择合适的抗体和标记物，并使用适当的检测方法，可以实现对抗原或抗体的准确检测和分析，为生物学研究和临床诊断提供有力的工具。
免疫学检测技术基本原理及其应用课件
探讨免疫学检测技术在环境污染监测中的应 用，如检测水中的污染物。
生物医学研究
了解免疫学检测技术在研究领域的应用，如 免疫组织化学和流式细胞术。
食品安全监测
介绍免疫学检测技术在食品安全监测中的作 用，如快速检测食品中的有害物质。
免疫学检测技术的前景展望
展望免疫学检测技术未来的发展方向和应用 前景。
述
3 免疫学检测技术分
类
介绍免疫学检测的基本 原理，如抗原-抗体相互 作用和信号放大。
探讨不同类型的免疫学 检测技术，如免疫层析、 免疫荧光和酶联免疫吸 附实验。
免疫学检测技术的应用
临床诊断
探索免疫学检测技术在疾病诊断和监测中的 广泛应用，如病毒检测和肿瘤标志物。
生物工业
探索免疫学检测技术在生物工业中的应用， 如生物制药和工业发酵。
免疫学检测技术基本原理 及其应用课件
欢迎来到免疫学检测技术基本原理及其应用的课件！本课程将带您深入了解 免疫学检测技术的基本原理以及广泛的应用领域。让我们开始这段令人兴奋 的学习旅程吧！
免疫学检测技术基本原理1 来自疫学基础知识回顾回顾免疫学的基本概念 和原理，为后续的技术 解释提供基础。
2 免疫学检测原理概
免疫学检测技术的挑战与改进
1 技术难点
探讨当前免疫学检测技术所面临的挑战，如灵敏度、特异性和自动化。
2 改进方向
讨论改进免疫学检测技术的可能方向，如新的标记方法和数据分析技术。
免疫学检测方法及其原理
原理：利用抗原抗体特异性结合 的原理，通过酶催化底物产生颜 色反应，检测抗原或抗体的存在。
步骤：将抗原或抗体固定在固相 载体上，加入待测样品，再加入 酶标记的抗体或抗原，最后加入
底物，产生颜色反应。
优点：灵敏度高，特异性强，操 作简便，可定量检测。
应用：广泛应用于免疫学检测、 疾病诊断、药物研发等领域。
评估药物的疗效和安全性
03
检测方法：使用免疫细胞进 04
筛选结果：根据检测结果，
行药物筛选，如ELISA、流
选择具有治疗效果的药物进
式细胞术等
行进一步研究
科学研究
01
免疫学检测在科学
研究中的应用
02 免疫学检测在生物
医学研究中的应用
03
免疫学检测在生物
技术研究中的应用
04 免疫学检测在生物
制药研究中的应用
2 免疫学检测原理
抗原抗体特异性结合
抗原：能够引起免疫反应的物质，如病毒、细菌 等
抗体：由B细胞产生的，能够识别并结合抗原的 蛋白质
特异性结合：抗原与抗体之间具有高度特异性， 即一种抗原只能与一种抗体结合
结合原理：抗原与抗体结合后，形成抗原抗体复 合物，从而激活免疫系统，产生免疫反应
信号放大技术
免疫学检测方法及其 原理
演讲人
目录
01. 免疫学检测方法 02. 免疫学检测原理 03. 免疫学检测应用
1 免疫学检测方法
抗原抗体反应
01
抗原：能够引起 免疫反应的物质， 如病毒、细菌等
02
抗体：由免疫系 统产生的，能够 识别和结合抗原 的蛋白质
03
反应原理：抗原 与抗体结合，形 成抗原抗体复合 物，引发免疫反 应
免疫学检测技术基本原理
1:8
1:16
Ag
Ab
扩散
免疫学检测技术基本原理
15
免疫学检测技术基本原理
16
３、免疫电泳 （immuno electrophoresis)
+
-
标本先电泳
**** **** ****** **** ***** ***
两侧挖槽加Ab孵 育后出现肉眼可
见沉淀
免疫学检测技术基本原理
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免疫学检测技术基本原理
抗体直接结合所出现的凝集现象 ：
（1）玻片法—定性试验：已知 Ab 未知 Ag(?) ABO血型鉴定， 细菌种属抗原型别的鉴定
+
免疫学检测技术基本原理
10
（2）试管法—半定量试验： 诊断伤寒副伤寒的“肥达氏反应”
病人血清 倍比稀释
伤寒细菌悬液
1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 对照
1、免疫荧光技术
（immunofluorescence techniques）
利用荧光素标记抗体或抗抗体以检测细胞表面或 细胞内抗原的技术。
免疫学检测技术基本原理
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1、免疫荧光技术 （immunofluorescence techniques）
直接法
间接法
免疫学检测技术基本原理
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免疫学检测技术基本原理
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间接免疫荧光检测自身抗核抗体
免疫学检测技术基本原理
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2、免疫酶标技术： 免疫酶标技术：酶联免疫吸附试验 （enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）
用酶标记Ab(或Ag)与标本中的Ag(或Ab)发生 特异性结合
加入酶的底物，在酶作用下产生有色物质 根据颜色可作出判断或测量光密度值
免疫学检测方法与操作规范
免疫学检测方法与操作规范免疫学检测方法一直是生物医学领域中的重要技术之一，广泛应用于免疫学研究、临床诊断和治疗监测等方面。
本文将介绍免疫学检测方法的基本原理、常用实验步骤以及操作规范，旨在为科研人员和实验室从业人员提供参考。
一、免疫学检测方法简介免疫学检测方法是通过检测人体免疫系统特异性抗原与抗体之间的相互作用来实现。
其原理基于人体免疫系统对外界病原体的免疫应答，通过检测抗原-抗体反应可以确定某种特定的抗原或抗体是否存在于样本中。
免疫学检测方法常见的类型包括ELISA（酶联免疫吸附测定法）、免疫印迹、流式细胞术等。
每种方法都有其特定的优势和适用范围，具体选择方法要根据实验目的和样本特点来确定。
二、常用免疫学检测方法及操作步骤1. ELISA方法ELISA是一种定性和定量检测抗原或抗体的常用方法。
其操作步骤包括：（1）涂底板：将包含目标抗原的溶液加入微孔板中，并在相应孔中加入阴性对照和阳性对照，孵育后洗涤；（2）加入特异性抗体：将标记有酶的特异性抗体加入孔中，并进行孵育和洗涤；（3）底物反应：加入酶底物，允许产生显色反应；（4）终止反应：加入终止液停止底物反应；（5）测定吸光度：使用酶标仪测定吸光值，计算样品中目标抗原或抗体的浓度。
2. 免疫印迹方法免疫印迹是一种用于检测特异性抗原和抗体的方法，常用于蛋白质的鉴定和定量。
操作步骤包括：（1）蛋白质分离：将待测蛋白经SDS-PAGE电泳分离；（2）膜转移：将分离后的蛋白转移到膜上，如PVDF或NC膜；（3）阻断：用蛋白阻断剂阻断膜上非特异性结合位点；（4）孵育抗体：使用特异性抗体孵育膜，结合目标蛋白；（5）洗涤：洗去未结合的抗体；（6）显色：加入特定底物进行显色反应；（7）图像分析：使用成像系统记录和分析显色结果。
3. 流式细胞术流式细胞术常用于分析和鉴定细胞表面标记物的表达情况，以及细胞在不同状态下的功能。
操作步骤包括：（1）细胞准备：对待测细胞进行处理，包括细胞培养、致死和洗涤等步骤；（2）标记抗体：使用荧光标记的特异性抗体孵育待测细胞，与目标表面标记物结合；（3）洗涤：洗涤去除未结合的抗体；（4）流式细胞仪分析：将标记后的细胞放入流式细胞仪中进行荧光检测和数据分析。
免疫学检验的基本原理与方法
免疫学检验的基本原理与方法免疫学检验是一种常见的实验室技术，在医学、生物学等领域具有广泛的应用。
本文将介绍免疫学检验的基本原理和常用的方法，并探讨其在疾病诊断、病毒检测和药物研发中的应用。
一、免疫学检验的基本原理免疫学检验基于机体免疫系统的特性，利用抗原与抗体之间的特异性结合反应来检测和定量分析抗原或抗体的存在。
其基本原理如下：1. 特异性识别：抗体可以识别并结合与之对应的抗原，形成特异性的抗原-抗体复合物。
2. 高度敏感性：免疫学检验可以检测极低浓度的抗原或抗体，提供高度敏感的结果。
3. 双重验证：通过采用一对互补的抗原和抗体，可以用于验证检测结果的准确性。
二、常见的免疫学检验方法在免疫学检验中，常用的方法包括酶联免疫吸附实验（ELISA）、免疫印迹（Western Blotting）、免疫荧光等。
下面将对这些方法进行具体介绍：1. 酶联免疫吸附实验（ELISA）ELISA是一种常见且广泛应用的免疫学检验技术。
它利用酶标记的抗体与待检测样品中的抗原结合，形成抗原-抗体-酶标记物复合物。
通过添加底物，酶标记物能够催化底物的反应，产生可测量的信号。
ELISA可用于定量或半定量测定目标物的浓度，并可应用于多种领域，如感染性疾病的诊断、蛋白质的定量等。
2. 免疫印迹（Western Blotting）免疫印迹是一种常用于检测特定蛋白质的免疫学技术。
该方法通过将复杂的蛋白质混合物经SDS-PAGE电泳分离后，将之转移到固体载体上。
然后，用特异性抗体与目标蛋白质结合，并通过酶标记的二抗与一抗结合，产生可见的信号。
免疫印迹可用于诊断疾病、检测蛋白质相对分子质量和检测表达水平等。
3. 免疫荧光免疫荧光是一种利用抗体对荧光染料标记的抗原进行特异性识别的免疫学技术。
该技术通过与荧光探针结合并激发荧光信号，来检测细胞或组织中特定抗原的定位和表达。
免疫荧光广泛应用于免疫组织化学、细胞信号转导、病毒感染等领域，可用于研究细胞和组织的结构、功能以及疾病的发生机制。
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单向免疫扩散
(single immunodiffusion)
2018/10/5
电子科技大学 生命科学与技术学院
7
双向免疫扩散
(double immunodiffusion)
2018/10/5
电子科技大学 生命科学与技术学院
8
免疫电泳
(immunoelectrophoresis)
2018/10/5
免疫磁珠分离技术
将特异性抗体与磁性微粒交联，称为免 疫磁珠（immune magnetic bead,IMB）。 IMB可与表达相应膜抗原的细胞结合， 应用强磁场分离IMB及其所吸附的细胞， 从而对特定的细胞进行分选，此为直接 分离法。亦可用二抗包被磁性微珠，与 任何已结合鼠源性一抗的细胞进行反应， 从而对细胞进行分离，此为间接分离法.
2018/10/5 电子科技大学 生命科学与技术学院 11
补体参与的反应
应用抗体与红细胞表面的抗原 结合，激活反应体系中的补体 成份，能导致红细胞溶解，则 可根据溶血现象判定试验结果。 如溶血空斑试验、HLA的血清 学分型等
2018/10/5
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采用标记物的抗原抗体反应
2018/10/5
电子科技大学 生命科学与技术学院
21
流式细胞术
流式细胞术escence-activated cell sorter, FACS) 对细胞进行快速、准确鉴定和分类的技术。流式细 胞仪集光学、流体力学、电子学和计算机技术于一 体，可对细胞作多参数定量测定和综合分析。样品 经多种荧光素标记的抗体染色，因荧光素发射光谱 的波长不同，信号能同时被接收，故能同时分析细 胞表面多个分子的表达及其水平。该法可检测T细胞、 B细胞、NK细胞、单核/巨噬细胞、树突状细胞等及 其比率，以及CD4/CD8阳性T细胞比值等。此外，借 助光电效应，微滴通过电场时出现不同偏向，从而 可分类收集所需细胞。
2018/10/5 电子科技大学 生命科学与技术学院 19
SDS-PAGE
C E M
M
C
Addition E of SDS Protein becomes rodshaped with uniform charge distribution
免疫细胞的检测
免疫细胞的鉴定分离 免疫细胞功能的测定
2018/10/5 电子科技大学 生命科学与技术学院 17
A\B分别粘贴吸水材料，免疫金复合物干片粘 贴在近下端C处，紧贴其上为硝酸纤维素膜条
免疫印迹法(Western blot)
将凝胶电泳与固相免疫结合，将通过电 泳所区分的蛋白质转移至固相载体，再 借助酶免疫、放射免疫等技术进行测定。 第一步，SDS-PAGE 第二步，将通过电泳而分离的蛋白质转 印至硝酸纤维膜上（电转印法） 第三步，类似ELISA
3
抗原-抗体反应的基本检测方法
根据抗原的性质、结合反应的现象、参与 反应的成分因素，可将抗原抗体反应分为 凝集反应(agglutination) 沉淀反应(precipitation) 补体参与的反应 采用标记物的抗原抗体反应等
2018/10/5 电子科技大学 生命科学与技术学院 4
凝集反应
2018/10/5
电子科技大学 生命科学与技术学院
14
酶免疫测定(enzyme immunoassay, EIA)
将抗原-抗体反应的特异性与酶催化作用 的高效性相结合，通过酶作用于底物后的 显色反应判定结果。可用目测定性，也可 用酶标测定仪测定光密度（OD）值以反映 抗原含量，灵敏度可达每毫升ng甚至pg水 平。常用于标记的酶有辣根过氧化物酶 (horseradish peroxidase, HRP)、碱性磷酸 酶(alkaline phosphatase, AP)等。
免疫诊断
抗原或抗体的检测 免疫细胞的检测 免疫检测方法的应用
2018/10/5
电子科技大学 生命科学与技术学院
1
抗原抗体反应的特点
特异性 可见性 可逆性
2018/10/5 电子科技大学 生命科学与技术学院 2
影响抗原抗体反应的其它因素
电解质 酸碱度 温度
2018/10/5
电子科技大学 生命科学与技术学院
2018/10/5 电子科技大学 生命科学与技术学院 15
酶联免疫吸附试验
(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)
2018/10/5
电子科技大学 生命科学与技术学院
16
其它常用标记方法
放射免疫测定法(radioimmunoassay, RIA) 化学发光免疫分析：将发光物质（如吖啶 酯、鲁米诺等）标记抗原或抗体进行反应， 发光物质在反应剂（如过氧化阴离子）激 发下生成激发态中间体，当激发态中间体 回到稳定的基态时发射出光子，用自动发 光分析仪接收光信号，测定光子产量，以 反映待检样品中抗体或抗原含量。 免疫胶体金法
2018/10/5
电子科技大学 生命科学与技术学院
5
沉淀反应
可溶性抗原与相应抗体结合后 出现沉淀物，此类反应称为沉 淀反应；多用半固体琼脂凝胶 作为介质进行琼脂扩散或免疫 扩散。即可溶性抗原与抗体在 凝胶中扩散，在比例合适处相 遇时形成可见的白色沉淀
2018/10/5 电子科技大学 生命科学与技术学院 6
免疫标记技术指用荧光素、酶或放 射性核素、胶体金等标记抗体或抗 原，进行抗原-抗体反应，是目前应 用最为广泛的免疫学检测技术。标 记物与抗体或抗原连接后并不改变 后者的免疫特性，具有灵敏度高、 快速、可定性、定量、定位等优点
2018/10/5 电子科技大学 生命科学与技术学院 13
免疫荧光法
(immunofluorescence, IF)
电子科技大学 生命科学与技术学院
9
对流免疫电泳
2018/10/5
电子科技大学 生命科学与技术学院
10
免疫比浊
(immunonephelometry)
在一定量抗体中分别加入递增量的 抗原，经一定时间形成免疫复合物， 液体混浊。用浊度计测量反应液体 的浊度，复合物形成越多则浊度越 高，可绘制标准曲线并依据反应液 体的浊度推算样品中抗原含量。