细胞培养实验指导
细胞培养实验步骤大全(精华版)
细胞培养实验步骤大全(精华版)细胞培养是生物学研究中常用的技术，在许多实验室中都扮演着重要角色。
下面是细胞培养的一般步骤，供参考。
材料准备1. 细胞培养基：根据实验需求选择适当的培养基，如DMEM、RPMI 1640等。
2. 细胞培养器具：培养皿、离心管、移液器等。
3. 细胞培养室：确保环境清洁、无菌。
细胞准备1. 细胞来源：选择要培养的细胞系或原代细胞。
2. 细胞传代：如果使用的是细胞系，根据需要进行传代，确保细胞状态良好。
细胞培养1. 细胞计数：使用显微镜和细胞计数仪等工具，准确计算细胞数目。
2. 细胞接种：按照实验要求，在含有培养基的培养皿中接种适量的细胞。
根据细胞类型的不同，可能需要预先涂覆培养皿。
3. 细胞培养条件：根据细胞类型的要求，提供适宜的培养条件，如温度、湿度和CO2浓度等。
4. 培养培养：定期更换培养基，保持细胞处于良好的生长状态。
5. 细胞观察：使用显微镜观察细胞形态和生长情况，检测是否存在异常。
细胞处理1. 细胞传代：根据细胞数量和状态，决定是否进行细胞传代。
传代可以延续细胞的寿命和维持细胞应答。
2. 细胞刺激：根据实验设计，给予细胞适当的刺激，如添加药物、因子或介质等。
3. 细胞采集：当需要获取细胞样本时，使用细胞剥离剂或胰蛋白酶等方法将细胞从培养皿中采集。
4. 细胞冻存：如果需要长期保存细胞，可以使用液氮冷冻保存的方法。
先加入冻存液，然后将细胞在适当条件下冷冻保存。
以上是细胞培养的一般步骤，根据具体实验和细胞类型，步骤可能会有所调整和细化。
在进行细胞培养实验时，请始终注意无菌操作和合理使用实验工具，以确保实验结果的准确性和可靠性。
细胞培养的实验步骤
细胞培养的实验步骤细胞培养的实验步骤如下：1、细胞复苏：细胞培养条件2、复苏流程：（1）确认水浴锅的水清洁可用，方可提前打开37度预热。
（2）确认好复苏细胞的液氮罐中具体位置，并做好复苏登记。
（3）提前做好复苏准备，预热培养基。
（4）悬浮和贴壁细胞复苏参数：（5）将细胞快速放入37度水浴锅中迅速溶解，1.8ml时间大概1分30秒，1ml大概1min左右，需计时，其间不要老是拿起来观察，需要快速复溶，避免细胞受到损伤。
（6）贴壁细胞需离心，1000rpm，5min。
悬浮细胞直接加入预热的培养基中然后放入培养箱中（7）贴壁细胞离心后去除上清，用预热的培养基重悬细胞后加入T25方瓶，蕞后放入培养箱中培养。
（8）取小样计数观察，细胞活力在70%以上算正常。
低于70%活力可能细胞状态不太好，需要培养和恢复。
3、细胞传代培养1．悬浮细胞传代流程：（1）先将装有细胞的摇瓶从培养箱拿出，用酒精喷洒瓶身后将摇瓶拿进超净台。
（2）打开摇瓶瓶盖，用200ul移液器取100~200ul细胞放入1.5mlEP管中，瓶盖过火，拧紧，将培养瓶放回摇床。
（3）将200ul细胞混匀，取10ul细胞加入10ul台盼蓝，显微镜下计数。
根据细胞数决定下游实验。
（4）细胞需计数两次求平均值。
（5）悬浮细胞生长参数（6）根据不同细胞的生长曲线在合适的时间和密度给细胞接种传代。
以sf9细胞为例：细胞接种密度0.4x10^6个/ml,24h密度1x10^6个/ml,48h密度2.4x10^6个/ml,72h密度6x10^6个/ml，此时需要传代细胞。
要求留样100ml0.4x10^6个/ml具体操作如下：计算：需要母细胞体积=100*0.4/6=6.6ml需要培养基体积=100-6.6=93.4ml将上面体积的细胞和培养基加入摇瓶中，放回27度培养箱培养即可2.贴壁细胞传代流程：（1）显微镜下观察细胞状态和密度，80%汇合率以上需要传代。
（2）T25方瓶中加入0.5ml~1ml0.25%胰酶溶液（需37度预热），使瓶底细胞都浸入溶液中。
细胞培养实验报告
细胞培养实验报告一、实验目的细胞培养是一种在体外模拟体内环境，使细胞生长、分裂和分化的技术。
本次实验的目的是通过细胞培养技术，掌握细胞的培养方法和操作技巧，观察细胞的生长状态和形态变化，为后续的细胞生物学研究和应用奠定基础。
二、实验材料1、细胞株：选用人肝癌细胞株 HepG2。
2、培养基：DMEM 高糖培养基（含 10%胎牛血清、1%双抗）。
3、实验器具：超净工作台、CO2 培养箱、倒置显微镜、移液器、离心管、培养瓶、培养皿等。
4、试剂：胰蛋白酶、PBS 缓冲液等。
三、实验步骤1、细胞复苏从液氮罐中取出冻存的 HepG2 细胞，迅速放入 37℃水浴锅中，轻轻摇动使其快速融化。
将融化后的细胞悬液转移至 15ml 离心管中，加入 5ml 含血清的培养基，轻轻吹打混匀，1000rpm 离心 5min。
弃去上清液，加入 5ml 新鲜培养基重悬细胞，将细胞悬液转移至培养瓶中，置于 37℃、5% CO2 培养箱中培养。
2、细胞传代当细胞生长至 80%－90%汇合时，进行传代培养。
吸去培养瓶中的培养基，用 PBS 缓冲液冲洗细胞 2 次。
加入 1ml 胰蛋白酶，轻轻晃动培养瓶，使胰蛋白酶均匀覆盖细胞表面，置于 37℃培养箱中消化 1-2min。
在倒置显微镜下观察细胞形态，当细胞变圆、间隙增大时，加入5ml 含血清的培养基终止消化，轻轻吹打细胞使其脱落。
将细胞悬液转移至 15ml 离心管中，1000rpm 离心 5min。
弃去上清液，加入 5ml 新鲜培养基重悬细胞，按照 1:2 或 1:3 的比例将细胞接种至新的培养瓶中，置于 37℃、5% CO2 培养箱中继续培养。
3、细胞计数取 01ml 细胞悬液，加入 09ml 台盼蓝染液，轻轻混匀。
吸取少量混合液加入细胞计数板，在显微镜下计数细胞总数和活细胞数（未被染成蓝色的细胞为活细胞）。
计算细胞浓度：细胞浓度（个/ml）＝细胞总数/4×104×稀释倍数。
医学研究中细胞培养技术实验指南
医学研究中细胞培养技术实验指南细胞培养技术是医学研究中不可或缺的重要手段之一，它为研究人类疾病、药物筛选和治疗方案提供了有力的工具。
本文将为您介绍细胞培养技术实验的指南，帮助您更好地开展医学研究中的细胞培养实验。
一、细胞培养基准备细胞培养基是细胞生长和繁殖所必需的基础培养环境，正确配制培养基是实验成功的关键。
1.1 选择合适的培养基根据所研究的细胞类型选择适合的培养基，通常，最常用的培养基有DMEM、MEM和RPMI 1640等。
另外，根据实验需要，可以添加胎牛血清、人血清、抗生素和生长因子等。
1.2 培养基的配方与储存根据细胞类型和实验需要，制备培养基的配制液，遵循供应商提供的配方和使用说明。
配制好的培养基应储存在4℃冰箱中，避免阳光直射，保质期根据供应商指引执行。
二、细胞培养槽和培养器具准备保持实验环境的清洁和无菌是细胞培养实验中的另一个关键点。
2.1 准备培养槽和培养器具将所需培养槽、培养瓶、离心管、吸头、培养皿、离心机等培养器具在高压蒸汽灭菌锅或培养箱中进行高温高压灭菌。
培养槽在灭菌后应放置在无尘台上，注意避免污染。
2.2 储备适量的试剂和培养物品体外培养需要用到的培养基、胎牛血清、人血清、生长因子、抗生素等试剂必须事先准备好，并按照实验操作规范使用。
三、细胞的分离和培养细胞的有效分离和培养对保证实验结果的准确性至关重要。
3.1 细胞的分离根据所要研究的细胞类型选择合适的方法进行细胞的分离，如胰蛋白酶消化法、组织弹性体分离法以及银离子胶体沉淀分离法等。
在进行细胞分离前，务必将所有操作具备无菌条件，避免外界环境的污染。
3.2 细胞的培养将分离得到的细胞用预先准备好的培养基进行悬浮培养。
培养器具需先预先灭菌处理，避免细胞感染。
培养皿或培养瓶中应添加适量的培养基，根据实验需要添加相应的血清、生长因子等。
将需要培养的细胞分散均匀地加入培养器具中，将培养器具放入恒温培养箱中，维持适当的温度、湿度和二氧化碳浓度。
细胞培养实验操作
细胞培养实验操作注意事项一、无菌操作1.培养前准备在开始实验前要制定好实验计划和操作程序，有关数据的计算要事先做好。
根据实验要求，准备各种所需器材和物品。
避免物品不全往返拿取而增加污染机会。
2.培养室和超净台的消毒无菌培养室每天用0.2%的新洁而灭拖洗地面一次，紫外线照射消毒30-50分钟。
超净工作台每次使用前用75%酒精擦洗，然后紫外线消毒30分钟，使用后也应用75%酒精将台面擦干净。
在工作台面消毒时切勿将培养细胞和培养用液同时照射紫外线。
消毒时台面物品不要过多或重叠放置。
一些操作用具如移液器、废液缸，试管架等用75%酒精擦洗后置于台内同时照射紫外。
3.洗手和着装进入无菌培养室前必须彻底洗手，更换无菌服，戴上帽子和口罩，并用75%酒精消毒手和前臂。
操作前再用酒精棉球擦手消毒。
4.无菌培养操作实验前，点燃酒精灯，打开超净台通风开关。
在实验中，一切操作如打开瓶口等，都应在火焰近处并经火焰烧灼进行。
但要注意：金属器械不能在火焰中长时间烧灼；烧过的器械要冷却后才能使用；用过的吸管不能再用火烧；开启或关闭长有细胞的培养瓶时，火焰灭菌时间要短。
工作台面上的用品摆放有序，布局合理。
组织、细胞及培养瓶在未处理和使用前，不要过早暴露于空气中。
分别使用不同吸管吸取营养液、PBS、细胞悬液及其他液体。
用吸管、注射器进行转移液体操作时，吸管、注射器针头不能触及瓶口。
进行培养操作时，不要用手接触已消毒的器皿。
操作时勿大声说话。
二、传代培养1．倒去旧的培养液，PBS洗涤1-2次。
2．加入适量的胰酶，37℃消化数分钟。
3．镜检细胞变圆，收缩时倒去胰酶，加入新鲜培养液。
4．用吸管轻轻地反复吹打，使细胞脱离瓶壁。
5．计数，接种至新的培养瓶。
三、细胞复苏1．将细胞冻存管从液氮中迅速取出，立即放入37℃的水中，使其迅速融化。
2．待冻存液完全融化后，吸出冻存液放入含有5ml培养液的离心管中。
3．1000rpm离心5分钟。
4．弃去上清，加入一定量培养液，用吸管将细胞吹打均匀后接种至培养瓶中。
细胞共培养实验的步骤及方法
细胞共培养实验的步骤及方法步骤一：准备培养器械和培养基1.1准备无菌仪器和试剂：包括培养皿、培养瓶、离心管、移液器等。
1.2准备无菌培养基：根据实验需要选择合适的培养基。
1.3准备细胞悬液：从培养的细胞系中收获细胞并制备成适宜浓度的细胞悬液。
步骤二：共培养细胞2.1接种细胞：在培养皿或培养瓶中，按照实验计划将两个或以上的细胞系接种在适宜的培养基中。
2.2控制细胞密度：根据细胞生长速度和实验需要，控制每个细胞系的初始细胞密度。
2.3培养条件控制：控制培养条件，如温度、湿度和CO2气体浓度等，满足细胞生长的要求。
步骤三：培养细胞3.1培养时间：根据具体实验设计，培养细胞一定时间，一般从几小时到几天不等。
3.2观察细胞生长：通过显微镜观察细胞增殖和形态学变化。
3.3细胞采集：在培养时间结束后，将细胞用合适的方法采集，如离心收集上清液等。
步骤四：实验分析4.1细胞计数：对采集到的细胞进行计数，得到不同时间点和不同培养条件下细胞的增殖情况。
4.2细胞形态观察：通过显微镜观察细胞在共培养过程中的形态学变化。
4.3细胞功能分析：通过细胞生物学实验方法，如细胞凋亡检测、增殖指标检测等，对细胞功能进行评估。
4.4统计分析：对实验结果进行统计分析，如平均值、方差等统计指标的计算和绘制图表等。
共培养实验的注意事项：1.细胞系的选择：选择适合共培养的细胞系，关注不同细胞系之间的相互作用。
2.培养基的选择：根据实验需要选择合适的培养基，如无血清培养基、特定培养基等。
3.控制细胞密度：合理控制细胞密度，避免过高或过低造成实验结果的偏差。
4.培养条件的控制：严格控制培养条件，如温度、湿度和CO2气体浓度等，保证实验的可重复性和结果的可比性。
5.细胞采集的处理：在采集细胞时注意操作的无菌性，避免细胞污染和误差的产生。
细胞培养的实验报告
一、实验目的1. 熟悉细胞培养的基本原理和操作流程。
2. 掌握原代细胞培养和传代细胞培养的方法。
3. 培养无菌操作意识，提高实验技能。
二、实验原理细胞培养是指将生物体中的细胞取出，在人工控制的条件下，使其生长、繁殖或传代的过程。
细胞培养技术在生物学、医学、药物学等领域具有广泛的应用。
本实验主要涉及原代细胞培养和传代细胞培养。
三、实验材料与仪器1. 材料：动物组织块、胎牛血清、DMEM培养基、胰蛋白酶、青霉素、链霉素、DMSO、细胞培养瓶、移液枪、超净工作台、CO2培养箱、显微镜等。
2. 仪器：细胞培养瓶、移液枪、超净工作台、CO2培养箱、显微镜、酒精灯、高压灭菌器等。
四、实验步骤1. 原代细胞培养（1）取动物组织块，用生理盐水清洗，去除杂质。
（2）将组织块放入培养皿中，用眼科剪剪成小块。
（3）将组织块加入含有胰蛋白酶的DMEM培养基中，37℃水浴消化30分钟。
（4）将消化后的组织块用移液枪吹打，使细胞离散成单个细胞。
（5）将细胞悬液转移至培养瓶中，加入胎牛血清，混匀。
（6）将培养瓶放入CO2培养箱中，37℃、5%CO2条件下培养。
2. 传代细胞培养（1）待细胞生长到一定密度时，用移液枪吸出细胞，加入胰蛋白酶消化。
（2）消化后的细胞用移液枪吹打，使细胞离散成单个细胞。
（3）将细胞悬液转移至培养瓶中，加入胎牛血清，混匀。
（4）将培养瓶放入CO2培养箱中，37℃、5%CO2条件下培养。
五、实验结果1. 原代细胞培养：细胞从组织块中离散出来，形成单个细胞，细胞呈圆形或椭圆形，细胞之间相互连接。
2. 传代细胞培养：细胞生长旺盛，细胞密度逐渐增加，细胞形态与原代细胞相似。
六、实验讨论1. 细胞培养过程中，无菌操作至关重要，应严格遵守无菌操作规程。
2. 细胞培养过程中，培养基、胎牛血清、CO2培养箱等条件对细胞生长具有重要影响。
3. 细胞传代过程中，应注意细胞密度，避免细胞过度生长或生长缓慢。
4. 本实验成功培养了原代细胞和传代细胞，为后续实验提供了细胞来源。
细胞培养操作指南
细胞培养操作指南1.实验室准备：在开始细胞培养之前，准备好所有所需的实验室设备和试剂：培养皿、细胞培养基、胎牛血清、无菌移液器、无菌离心管、显微镜等。
2.个人准备：进入实验室前，务必穿戴好个人防护装备，包括实验室服、手套和口罩。
确保双手清洁，并使用含酒精的消毒液消毒工作台。
3.细胞培养基准备：根据实验需求，配制适当的细胞培养基。
将细胞培养基加热至37摄氏度，使其变得温暖。
4.细胞扩增与传代：a.从冷冻保存的细胞存储管中取出细胞，并将其转移到一只预先加热的离心管中。
b.离心管轻轻离心，使细胞沉淀在管底。
c.弃去上清液，加入预先加热的新鲜培养基，轻轻悬浮细胞沉淀。
d.将细胞悬液转移到一个新的培养皿中，确保细胞均匀分布。
e.将培养皿放入恒温培养箱，并根据细胞类型和实验要求设置合适的温度和湿度。
f.观察细胞生长情况，并根据需要传代细胞。
传代细胞时，将细胞悬液转移到新的培养皿中，注意细胞定植的密度不要太高。
5.细胞分裂与凝聚度检测：使用显微镜观察细胞培养的生长情况，检查细胞的形态和凝聚度。
正常细胞应该呈现光滑、扁平、并且凝聚在一起的形态。
6.细胞的移植和收获：当细胞生长到适当的数量时，可以进行细胞的移植或收获。
使用无菌移液器将细胞转移至其他试管或培养皿中，确保操作环境和使用器皿都是无菌的。
7.细胞冻存：根据实验的需要，将细胞制备成冻存物。
将细胞悬液转移到冻存保存培养基中，并加入适量的冷冻保护剂（如DMSO），在-80摄氏度的冰箱中快速冷冻。
8.废弃物处置：在培养过程中产生的废弃物（例如培养皿、试管等），必须按照实验室的规定进行处理。
通常情况下，将废弃物放入带有生物危险标识的废物箱中。
9.清洗和消毒：在培养工作完成后，清洗并消毒实验室工作台和使用的器皿。
使用含酒精的消毒液对工作台表面进行擦拭，并将使用过的器皿彻底清洗，并经过高温高压灭菌。
10.实验记录：进行细胞培养时，要详细记录每个操作步骤，包括使用的细胞类型、培养方法、检测结果等。
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细胞培养实验指导陈轶霞刘俊林实验报告书写要求：1、学生实验后应按时完成并提交实验报告。
报告要求结构完整、内容充实、图表齐全、书面整洁、分析讨论认真合理等。
2、严禁互相抄袭实验报告，发现雷同实验报告一律视为不及格。
3、切忌全班同学统一打印相同的实验结果图（以前曾发生过全班同学共用一张错误的图的情况）实验一细胞培养实验室介绍及使用卫生要求【目的与要求】1.了解细胞培养实验室的基本设施和布局2. 掌握细胞培养实验室的使用卫生要求【基本原理】细胞培养必须无菌操作，要求工作环境和条件必须保证无微生物污染和不受其它有害因素影响，应建立专门的实验室并划分不同功能区。
理想的细胞培养实验室可分为准备室、更衣室、缓冲室、培养室等。
【内容与方法】1．通过教师讲解并参观了解开展本课程教学的细胞培养实验室的布局、设施与仪器设备的摆放情况2.使用卫生要求。
（1）实验室的消毒实验室日常采用紫外灯消毒；按实验室的卫生管理要求对实验室洁净区按周期进行熏蒸消毒；在培养期间发生严重污染时要进行熏蒸消毒。
（2）培养工作开始操作前将所有培养用的物品经专用物流通道通过传递窗放进培养室，开紫外灯消毒30min，关紫外灯后方进入操作。
配有空气净化系统的洁净室在风机开启至少30min后才能达到相应的洁净度级别。
（3）操作者进入培养室时要遵守的程序a: 用肥皂洗手，在干手器上吹掉手臂上的水滴。
b: 换穿无菌室专用鞋，进入更衣室，外衣挂到指定的衣柜里，用0.1%新洁尔灭溶液对手及前臂进行消毒，戴帽子（不露头发）、口罩（应包住胡须），穿已消毒的洁净服，进入缓冲室。
再用0.1%新洁尔灭溶液对手及前臂消毒，在其滞留3min后进入培养室。
（4）开超净工作台10min，期间用0.1%新洁尔灭溶液的擦拭操作台面后可开始具体的操作，同时点燃酒精灯用于临时性的火焰消毒。
（5）实验完毕，关闭超净工作台，及时清理实验用品，废物从通往物流通道的传递窗中传出。
工作台面用0.1%新洁尔灭溶液的擦拭消毒后方可出培养室。
（6）出培养室时，将工作服放在更衣室指定的位置以便清洗和消毒，鞋放到隔离鞋柜里，跨过隔离鞋柜，将用过的一次性帽子、口罩、鞋套等放到指定的废物桶，出实验室前用肥皂洗手，关闭空气净化系统，开紫外灯30min。
注：(不写实验报告)实验二细胞培养的设备与器材【目的与要求】1.了解细胞培养常用设备与器材；2.掌握常用设备的基本操作程序及使用注意事项【内容与方法】1．通过教师讲解了解细胞培养常用设备的种类、使用注意事项以及常用器材。
2．通过教师讲解和演示，学生进行操作练习。
常用设备：C02培养箱、电热干燥箱、冰箱、倒置显微镜、超净工作台、过滤除菌装置、纯化水装置、细胞冷冻贮存器、离心机、天平、移液器、血球计数板、高压蒸汽消毒装置等。
常用器材：玻璃器皿：培养瓶、培养皿、离心管、注射器、储液瓶、吸管、载玻片、盖玻片、漏斗、烧杯、量筒等。
塑料品：冷冻管、多孔培养板、离心管等。
器械：解剖刀、眼科剪和镊、中号圆头镊、止血钳等。
橡胶制品：各种规格胶塞。
杂用品：金属饭盒、试管架、记号笔、搪瓷盘、吸头、酒精灯、酒精、碘酒棉球瓶和火柴等。
吸管筒等。
注：（不写实验报告）准备实验要求：整理常用器械并置于瓷盘内，以便演示讲解。
实验三实验器材的清洗、包装和灭菌【目的与要求】掌握细胞培养常用实验器材的清洗、包装、灭菌方法以及注意事项。
【实验原理】离体条件下，细胞对任何有害物质十分敏感，极少残留物都可以对细胞产生毒副作用。
因此，细胞培养器材清洗的要求要比普通实验的严格的多，应按不同器材的清洗、包装和消毒程序分别、分类处理。
【器材与试剂】剪刀、棉绳、棉花、牛皮纸、记号笔、饭盒、吸管筒、烧杯、清洁液、三蒸水等。
【内容与方法】1.各实验组准备后续实验所用的器材，如吸管、注射器、培养皿、青霉素瓶、盐水瓶、培养瓶、瓶塞、眼科剪及镊子等。
2.清洗步骤浸泡于水中的使用过的玻璃器材、胶塞煮沸，加入适量洗涤剂继续煮10min→刷洗→流水振荡冲洗→沥水→清洁液浸泡24小时→流水振荡冲洗15～20遍→沥水→蒸馏水冲洗3次→50℃烤干，待包装。
3．包装清洗后的培养瓶、培养皿、注射器、金属器械等器材用牛皮纸进行严密包装，封闭器材使用端，标记器材手持端，以便于消毒和贮存。
吸管的手持端加棉塞后单独包装或放入吸管筒；瓶盖、胶塞包装（5-10个/包）或放入铝饭盒。
4．消毒湿热灭菌：将包装好的物品放入压力蒸汽灭菌器内，15磅，20min。
干热消毒：主要用于玻璃器皿消毒，160℃维持90～120min。
注：（不写实验报告）准备实验要求：1、将清洗场所摆置整齐，比如清洗用洗盆、凳子、毛刷摆放整齐；2、放置3桶纯净水，并做好顺序标记以方便学生完成冲洗流程；3、配置好清洁液，并事先放入适量玻璃器皿以备教学之用；4、安排好烘干烤箱，并分别张贴好：“自来水冲洗烘干烤箱”和“纯净水冲洗烘干烤箱”；5、准备好包装所用的用品及器械，供教学时演示。
实验四细胞培养用液的配制【目的与要求】1. 掌握完全培养液、Hank’s液等常用细胞培养用液的配置及过滤除菌方法。
2. 培养无菌意识和无菌操作。
【实验原理】细胞培养离不开细胞在体外生存和生长的各种溶液，即培养用液。
培养用液主要包括培养液、平衡盐溶液、血清以及消化液、pH调整液和抗生素液等。
配置容器要严格清洗、消毒。
要明确标注所配液体名称及配制日期。
制备好的培养用液要及时消毒除菌并分装, 在适当的条件下贮存。
【器材与试剂】过滤器、试剂瓶、烧杯、容量瓶、吸管、移液器、KCl、KH2PO4、NaCl、NaHCO3、Na2HPO4.7H2O、酚红、DMEM、血清、双抗、5.6%的NaHC03 溶液、三蒸水等【内容与方法】1. 各组配制500mL D-Hanks液（1）用数滴5.6%的NaHC03 溶液溶解0.01g酚红；（2）称取0.2g KCl、0.03g KH2PO4、4g NaCl、0.175g NaHCO3、0.03gNa2HPO4.7H2O依次溶解于适量三蒸水中( 注意应待前一种试剂完全溶解后，再溶解下一种成分)。
（3）将（1）加入（2）中；（4）将（3）移入容量瓶中，定容至500mL；（5）分装，10磅20分钟高压蒸气灭菌，4℃冰箱内保存。
2. 各组练习配制30mL完全培养液，培养无菌操作意识。
在超净台内按照无菌操作要求取27mL DMEM液，加入3 mL血清、300μL双抗，练习过滤除菌方法。
注：（不写实验报告）准备实验要求：在超净台内放置好做好标记的DMEM液、血清、双抗（3种都可用替代品）、用过的过滤器（平时注意收集）、吸管、洗耳球、烧杯及培养瓶等。
实验五培养细胞的观察【目的与要求】掌握倒置显微镜观察贴壁型细胞的方法。
【实验原理】细胞在体外培养过程中需要每天观察，以便及时了解细胞的生长状态。
活细胞对光线是透明的，光线通过活细胞时，波长和振幅几乎没有改变，所以用普通光学显微镜无法看清未经染色的活细胞。
倒置显微镜利用光的衍射和干涉特性，把透过标本不同区域的光波的光程差转变成振幅差，使细胞内各种结构之间呈现清晰可见的明暗对比，从而使标本的各种结构变得清晰。
因此，体外培养细胞的观察必须要用倒置显微镜。
【器材与试剂】倒置显微镜、生长良好的细胞。
【内容与方法】在倒置相差显微镜下对培养细胞的生长状况进行观察。
注：（本实验不写实验报告）准备实验要求：准备几瓶细胞供学生练习观察实验六细胞计数及活力检查【目的与要求】掌握细胞计数及活力检查的原理和方法。
【基本原理】培养的细胞接种合适的密度才能生长良好，细胞计数是调整细胞密度的依据。
细胞活力测定是了解细胞状态的重要手段。
用台盼蓝染细胞时，由于死细胞的细胞膜通透性发生改变，染料可大量进入不能排出被染成蓝色；活细胞能排出染料，不易着色。
【器材与试剂】移液器、血球计数板、盖玻片、吸管、吸耳球、dorf管、离心管、SP2/0-Ag14悬浮细胞、0.4%台盼蓝液等。
【内容与方法】1. 细胞计数——计数板计数法(1)将血球计数板及盖片擦试干净，并将盖片盖在计数板的2个小室上。
(2)加样：细胞悬液吹匀后，用200μl加样枪吸出滴加在盖片边缘与计数板交界处，使细胞悬液进入小室，并充满盖玻片和计数板的间隙。
(3)用10×物镜镜下观察，计算计数板四大格细胞总数，压线细胞计左侧和上方者。
按下式计算：细胞数/mL＝4大格细胞总数/4×104注意：镜下偶见由两个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算，若细胞团占10%以上，说明分散不好，需重新制备细胞悬液。
2. 染色法检查细胞活力(1) 分别滴一滴细胞悬液和0.4%台盼兰染液于载玻片上，用盖玻片角混匀。
(2) 45度盖上盖玻片，计数200个细胞。
(3) 计算细胞活力。
细胞活力（%）= 活细胞数/（活细胞数+死细胞数）×100%（完成实验报告）准备实验要求：将本实验用器材、液体、待计数的细胞做好标记放置于普通光学显微镜旁边，以方便学生操作。
实验七细胞生长曲线的绘制【目的与要求】掌握细胞生长曲线绘制的方法.【实验原理】细胞生长曲线是观测细胞在一代生存期内的增生过程的重要指标,它以培养时间(d)为横坐标、细胞密度为纵坐标作坐标图。
【器材与试剂】吸管、吸耳球、血球计数板、微量加样器、96孔培养板、SP2/0-Ag14细胞悬液等。
【内容与方法】1. 在超净台中，将浓度为1.0×104个/mL SP2/0-Ag14细胞悬液，用微量加样器接种96孔细胞培养板，每孔200µL，接种24孔，置CO2培养箱培养。
2．从培养第24h开始，每24h分别于超级工作台上吸出3孔的细胞进行计数，计算其平均值。
（注意，每天取计数细胞时将待取培养孔中的细胞吹打几下，确保沉于孔底的细胞全部吸出，此过程要保证无菌操作，以免污染细胞，导致细胞死亡，实验失败）3．以细胞浓度为纵坐标、细胞生长时间为横坐标绘制生长曲线。
注意：每2组或3组用一块培养板。
（完成实验报告）准备实验要求：将接种细胞事先计数浓度，然后预先稀释成1.0×104个/mL的细胞悬液，吹吸混匀后为各小组分装一份，做好标记放置于超净工作台内。
实验八细胞融合【目的与要求】掌握聚乙二醇（PEG）诱导细胞融合的操作方法。
【实验原理】两个或两个以上的同种或不同种细胞在诱导物的作用下，细胞膜发生一定变化，融合成一个双核或多核细胞的现象称为细胞融合。
聚乙二醇（PEG）是常用的化学诱导剂，它可促使细胞凝结，并破坏互相接触处的细胞膜的磷脂双分子层，使细胞膜之间发生融合，进而细胞质沟通，形成一个双核或多核融合细胞。
【器材与试剂】移液器、吸管、离心管、载玻片、盖玻片、50%PEG、次甲基蓝染液、Hanks液、SP2/0-Ag14细胞、DMEM完全培养液等。