双向电泳仪-说明书
双向电泳详细操作过程
蛋白质的双向电泳一、实验原理：2-DE的第一向电泳等电聚焦是基于等电点不同而将蛋白粗步分离，第二向SDS-PAGE 是基于蛋白质分子量不同，而将一向分离后的蛋白进一步分离。
这样就可以得到蛋白质等电点和分子量的信息。
二、实验步骤：1. 芽孢杆菌蛋白质的提取2. 蛋白质样品的纯化将经过硫酸铵沉淀的蛋白质冷冻干燥，放在-80度冰箱里备用，取出蛋白质干粉300mg 加水化液(尿素水化储备溶液)400ul，加丙酮酸（加DTT）1.6ml，放置-20度冰箱2h，离心，吸除丙酮酸，用超纯水中（加DTT），清洗两次，离心，加水化液溶解。
水化液配置：用dd H20定容水化液浓度100ml 20ml尿素（60.06）7M/L 42.0g 8.4g硫脲（76.12）2M/L 15.2g 3.04gCHAPS 4% 4g 0.8gDTT(154.2) 1% 1g 0.2g（注：DTT现用现加）3. Bradford法测蛋白含量取0.001g BSA（牛血清白蛋白）用1ml超纯水溶解,测定BSA标准曲线及样品蛋白含量。
取7个10ml的离心管，首先在5个离心管中按次序加入0ul, 20ul, 40ul, 60ul, 80ul , 100ul的BSA溶解液，在分别加入100ul,80ul,60ul ,40ul,20ul,0ul, 分别加入4ml的Bradfor。
另取2管中分别加入2 ul的待测样品溶液，各管中分别加入4ml的Bradfor，摇匀，2min在595nm下，按由低到高的浓度顺序测定各浓度BSA的OD值，再测样品OD值。
(测量过程要在一个小时内完成)。
例如：标准曲线方程式：Y= aX+b.其中Y为OD值，X为蛋白含量。
a、b通过作图输入数据可知G250的配置：称取G250 固体0.1g加水定容至1L。
使用前滤纸过滤。
比色皿用70%的乙醇保存，待用时用双蒸水冲洗，再用无水乙醇冲洗，双蒸水冲洗，再加入待测样品溶液润洗，然后，加入样品，测定OD值。
DYY-C 系列电泳仪电源使用说明说明书
（五）报警1、如果出现过载运行，显示“ERROR1！”，蜂鸣器响报警；2、如果出现空载运行，显示“ERROR2！”，蜂鸣器响报警；3、故障报警后，电泳仪电源输出自动关断，必须关电源认真检查！（六）备份1、为了方便重复性实验，每次运行的程序都会自动备份为0#程序，既将上一次运行所设置参数自动储存到0#程序中。
2、每次电泳仪电源开机，均自动调出0#程序（上一次运行程序），可以直接运行。
二、使用注意事项1、避免使液体溅入仪器内；2、若风扇出现较大噪音后，应及时注入风机润滑油；3、仪器应放在良好通风处，远离高温发热体或爆晒。
三、随机附件1、《DYY系列双恒电泳仪电源使用说明书》1份2、电源线1付3、2A/3A保险管2个《DYY-C系列电泳仪电源使用说明书》仅适用于：DYY-200C/DYY-300C/DYY-600C/DYY-1000C/DYY-300D型/ DYY-600D型/DYY-5000/DYY-ECP3000电泳仪电源DYY-C系列电泳仪电源输出指标对照表型号最大输出电压最大输出电流最大输出功率DYY-200C200V2000mA300WDYY-300C300V400mA120WDYY-600C600V500mA300WDYY-1000C1000V500mA300WDYY-300D300V1500mA450WDYY-600D600V1000mA300WDYY-50005000V200mA100W DYY--ECP30003000V200mA200W DYY-C系列电泳仪电源执行标准安全标准GB9706.1-95《医用电气设备第一部分安全通用要求》GB/T14710-93《医用电气设备环境要求及试验方法》技术标准YY0087-92《医药行业标准电泳仪电源》DYY-C系列电泳仪电源使用条件环境温度：5℃~40℃相对湿度：≤80%大气压力：70.0~106.0Pa电源要求：交流电50HZ±2%、220V±10%一、使用方法：（一）设置1、当连接好电泳槽后，接通电源开关即可进入停机/设置状态；2、按“↑”键或“↓”键，可修改闪动位置的极限设置参数；3、按“ENT”键，选择电压U、电流I、功率、时间的设置换挡。
BIO-RAD双向电泳中文手册
BIO-RAD双向电泳中文手册ProteomicBio-Rad蛋白质组双向电泳实验操作手册ProteomeWorkTMSytem双向电泳实验流程z样品制备（Samplepreparation）z固相预制胶条的水化（IPGtriprehydration）z第一向等电聚焦（IEF）z胶条的平衡（IPGtripequilibration）z第二向SDS-电泳（SDS-electrophrei）z凝胶的染色及检测（Detection/Staining）zPDQuet软件分析（Softwareanalyi）z质谱鉴定（Proteinidentification）目录第一章实验材料1．1IPG预制胶条及载体两性电解质1．2蛋白质定量试剂盒及其试剂1．3试剂盒及其试剂1．4化学试剂1．5蛋白质Marker1．6染色试剂1．7注意事项第二章SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳2.1溶液的配制2.2SDS-凝胶的配制2.3操作方法2.4注意事项第三章双向电泳3.1溶液配制3.2操作步骤3.3注意事项附录1双向电泳完整的操作步骤附录2聚丙烯酰胺凝胶电泳凝胶的配置附录3细胞样品的一般处理步骤附录4组织样品的一般处理步骤第一章实验材料1．1IPG预制胶条及载体两性电解质（一）IPG预制胶条（美国Bio-Rad公司），-20℃冰箱保存IPG预制胶条pH3-10，7cm163-2000IPG预制胶条pH3-10，7cm，nonlinear（NL）163-2002IPG预制胶条pH4-7，7cm163-2001IPG预制胶条pH3-6，7cm163-2003IPG预制胶条pH5-8，7cm163-2004IPG预制胶条pH7-10，7cm163-2005IPG预制胶条pH3-10，17cm163-2007IPG预制胶条pH3-10，17cm，nonlinear（NL）163-2022IPG预制胶条pH4-7，17cm163-2022IPG预制胶条pH3-6，17cm163-2022IPG预制胶条pH5-8，17cm163-2022IPG预制胶条pH7-10，17cm163-2022IPG预制胶条pH3-10，18cm163-2032IPG预制胶条pH3-10，18cm，nonlinear（NL）163-2033IPG预制胶条pH4-7，18cm163-2034IPG预制胶条pH3-6，18cm163-2035IPG预制胶条pH5-8，18cm163-2036IPG预制胶条pH7-10，18cm163-2037IPG预制胶条pH3-10，11cm163-2022IPG预制胶条pH3-10，11cm，nonlinear（NL）163-2022IPG预制胶条pH4-7，11cm163-2022IPG预制胶条pH3-6，11cm163-2022IPG预制胶条pH5-8，11cm163-2022IPG预制胶条pH7-10，11cm163-2022IPG预制胶条pH3.9-5.1，17cm163-2022IPG预制胶条pH4.7-5.9，17cm163-2022IPG预制胶条pH5.5-6.7，17cm163-2022IPG预制胶条pH6.3-8.3，17cm163-2023IPG预制胶条pH3.9-5.1，18cm163-2038IPG预制胶条pH4.7-5.9，18cm163-2039IPG预制胶条pH5.5-6.7，18cm163-2040IPG预制胶条pH6.3-8.3，18cm163-2041IPG预制胶条pH3.9-5.1，11cm163-2024IPG预制胶条pH4.7-5.9，11cm163-2025IPG预制胶条pH5.5-6.7，11cm163-2026IPG预制胶条pH6.3-8.3，11cm163-2027IPG预制胶条pH3.9-5.1，7cm163-2028IPG预制胶条pH4.7-5.9，7cm163-2029IPG预制胶条pH5.5-6.7，7cm163-2030IPG预制胶条pH6.3-8.3，7cm163-2031Bio-Rad公司），4℃冰箱保存Bio-Lyte3/10Ampholyte，40%，10ml163-1112Bio-Lyte3/10Ampholyte，40%，25ml163-1113Bio-Lyte3/5Ampholyte，20%，10ml163-1132Bio-Lyte4/6Ampholyte，40%，10ml163-1142Bio-Lyte4/6Ampholyte，40%，25ml163-1143Bio-Lyte5/7Ampholyte，40%，10ml163-1152Bio-Lyte5/7Ampholyte，40%，25ml163-1153Bio-Lyte6/8Ampholyte，40%，10ml163-1162Bio-Lyte6/8Ampholyte，40%，25ml163-1163Bio-Lyte7/9Ampholyte，40%，10ml163-1172Bio-Lyte8/10Ampholyte，20%，10ml163-1182Bio-Lyte5/8Ampholyte，40%，10ml163-1192Bio-Lyte5/8Ampholyte，40%，25ml163-1193Bio-Rad公司），4℃冰箱保存100某ReadyStripBuffer，forpH7-10IPGStrip，1ml163-2093Bio-Lyte3/10Ampholyte，100某，1ml163-2094100某ReadyStripBuffer，forpH6.8-8.3IPGStrip，1ml163-2095100某ReadyStripBuffer，forpH5.5-6.7IPGStrip，1ml163-2096100某ReadyStripBuffer，forpH4.7-5.9IPGStrip，1ml163-2097（二）载体两性电解质（美国（三）等电聚焦上样缓冲液（美国100某ReadyStripBuffer，forpH3.5-5.1IPGStrip，1ml163-20981．2蛋白质定量试剂盒及其试剂ProteinAayKitI，bovineγ-globulintandard500-0001ProteinAayKitII，BSAtandard500-0002ProteinStandardI，bovineγ-globulin，1bottle500-0005ProteinAayDyeReagentConcentrate，450ml500-0006ProteinStandardII，bovineerumalbumin，1bottle500-0007RCDCProteinAayKitI，bovineγ-globulintandard500-0121RCDCProteinAayKitII，BSAtandard500-01221．3试剂盒及其试剂ReadyPrepSequentialE某tractionKit163-2100Tributylphophine （TBP），200mM，0.6ml163-2101ReadyPrepSequentialE某tractionKitReagent1，1vial163-2102ReadyPrepSequentialE某tractionKitReagent2，1vial163-2103ReadyPrepSequentialE某tractionKitReagent3，1vial163-2104ReadyPrep2-DStarterKit163-2105ReadyPrep2-DStarterKitRehydration/SampleBufferReadyPrepStarterKitEquilibrationBufferI，withDTT163-2107ReadyPrepStarterKitEquilibrationBufferII163-2108Iodoacetamide，30g163-2109E.coliProteinSample，lyophilized，2.7mg163-2110ReadyPrepOverlayAgaroe，50ml163-21111．4化学试剂尿素Urea，250g尿素Urea，1kgAG501-某8（D）Mi某edBedRein142-6425CHAPS，1g161-0460CHAPSO，1gTriton某-100，500ml161-0407DTT（Dithiothreitol），1g161-0610DTT（Dithiothreitol），5g163-2106161-0730161-0731161-0465161-0611Tributylphophine（TBP），200mM，0.6ml163-2101溴酚蓝（BromophenolBlue），10g161-0404矿物油（MineralOil），500ml163-2129SDS，25g161-0300SDS，100g161-0301SDS，1kg161-0302Tri，100g161-0715Tri，500g161-0716Tri，1kgIodoacetamide，30g163-2109低熔点琼脂糖，25g甘氨酸，250g161-0717甘氨酸，1kg甘氨酸，2kg丙烯酰胺（Acrylamide），99.9%，100g161-0100丙烯酰胺（Acrylamide），99.9%，500g161-0101丙烯酰胺（Acrylamide），99.9%，2kg161-0103丙烯酰胺（Acrylamide），99.9%，1kg161-0107丙烯酰胺（Acrylamide），99.9%，5kg161-0108甲叉双丙烯酰胺（Bi），5g161-0200甲叉双丙烯酰胺（Bi），50g161-0201PDA （PiperazineDiacrylamide），10g161-0202PDA （PiperazineDiacrylamide），50g161-0203过硫酸氨（AmmoniumPerulfate），10g161-0700过硫酸氨（AmmoniumPerulfate），100g161-0754TEMED，5mlTEMED，50ml161-0801甘油硫尿Marker2-DSDS-Standard，500μl161-0320SDS-Standard，highrange，200μl161-0303SDS-Standard，lowrange，200μl161-0304161-0719161-3111161-0718161-0724161-0800国产或SigmaSigma1．5蛋白质SDS-Standard，broadrange，200μl161-0317PolypeptideSDS-Standard，200μl161-0326PreciionProteinStandard，untained，1500μl，150application161-0362PreciionProteinStandard，pretained，500μl，50application161-0372KaleidocopePolypeptideStandard，500μl161-0325KaleidocopePretainedStandard，broadrange，500μl161-0324PretainedSDS-Standard，highrange，500μl161-0309PretainedSDS-Standard，lowrange，500μl161-0305PretainedSDS-Standard，broadrange，500μl161-0318IEFStandard，pIrange4.45-9.6，250μl161-0310CoomaieBrilliantBlueR-250，10g161-0400CoomaieBrilliantBlueG-250，10g161-0406IEFGelStainingSolution，1L161-0434CoomaieBrilliantBlueR-250StainingSolutionKit161-0435CoomaieBrilliantBlueR-250StainingSolution，1L161-0436CoomaieBrilliantBlueR-250StainingSolution，4某1L161-0437CoomaieBrilliantBlueR-250DetainingSolution，1L161-0438CoomaieBrilliantBlueR-250DetainingSolution，4某1L161-0439Bio-SafeCoomaieStain，1L161-0786Bio-SafeCoomaieStain，5L161-0787SYPRORubyProteinGelStain，200ml170-3126SYPRORubyProteinGelStain，1L170-3125SYPRORubyProteinGelStain，5L170-3138SilverStainKit161-0443SilverStainPluKit161-04501.双向电泳中所用的化学试剂纯度要高，至少为分析级。
蛋白质差异双向电泳仪
蛋白质差异双向电泳仪技术参数要求：第一向等电聚焦电泳系统1. 工作条件:温度：15 –32℃；相对湿度：0 - 70%；2. 应用范围：进行固相pH梯度等电聚焦分离，应用于蛋白质组研究中；3. 技术规格3.1 电极区：铜镀金表面；3.2 胶条槽容量：最多12 个相同长度的胶条槽；3.3 电泳平台温度：15 - 31℃±1℃；3.4 控制面板：7个触摸式按键和液晶显示器(LCD)：4行,每行24个字符；3.5 程序参数：溶胀时间, 电泳平台温度, 每根胶条最大电流极限, 升压设定, 电压上升模式和电压持续时间；3.6 方法存储：主机可生成10个, 每个方法可以多达9步；通过电脑可以生成、存储和编辑任何数目的方法；3.7 电脑控制：电脑控制最多4台主机；3.8 控制软件3.8.1开始、暂停和终止主机运行, 针对每种胶条推荐优化的等电聚焦参数；3.8.2实时监控电泳时的电压、电流、伏小时，以图形方式显示，可存储或输出到其它应用程序如Excel中；3.8.3通过网络远程监控仪器；3.8.4输出、存储和打印专业的报告；3.9 水平调节：可调节水平的支脚；3.10 灵活的盖子，适合运行对光敏感的蛋白标记样品，并有开盖自动断电的高压保护装置；3.11 电源：内置电源3.11.1 电压：0 - 10000 V, 分辨率: 10 V；3.11.2 电流：0 - 1.5 mA, 分辨率：1 µA；3.11.3 功率：最大12 W ；3.12 胶条槽：3.12.1 材料：氧化铝陶瓷,导热性能高，避免出现热点(hot spot)；3.12.2 涂层：表面疏水涂层，防止蛋白粘附；3.12.3胶条槽：13cm、24cm 陶瓷胶条槽各6根；3.13 固相pH梯度干胶条24cm pH3-10非线性干胶条，(12根/包)IMM. DRYSTRIP PH 3-10 NL, 24CM 5包；13cm pH3-10非线性干胶条，(12根/包)IMMOBILINE DRYSTRIP PH3-10NL 2包；4. 原装进口必备附件碘乙酰胺25g；IPG缓冲液PH 3-10NL 1ml；平衡管12根第二向中等通量高分辨率垂直电泳系统1. 工作条件温度：4 - 40℃；相对湿度：0 - 90%；2. 应用范围：中等通量分离生物分子，进行蛋白质组研究中的第二向SDS PAGE 分离蛋白；3. 技术规格3.1 凝胶容量：在一个电泳槽中同时运行1 到6 块胶，适合7-24cm任何长度的一向胶条；3.2 最大凝胶尺寸：26 x 20cm, 1.0mm 厚；3.3 电泳缓冲液体积：阳极：4.5 升；阴极：0.8升；3.4 内置缓冲液循环泵，流速10L/min；3.5 制冷：通过陶瓷热交换器；3.6 灌胶模具：一次同时灌1到6块胶，内含分隔片和填充片，方便卸胶，节省胶液；3.7 电源3.7.1输出电流：1-400mA，1mA递进；3.7.2输出电压：6-600V，1V 递进；3.7.3 输出功率：100W；3.7.4 输出类型：恒电压, 恒电流或恒功率，并自动切换；3.7.5 储存和调用最多3个方法；3.7.6 输出终端：并行两套；3.7.7 计时器：1min-500h, 1Vh-500kVh，连续可调；3.7.8 安全特性：超载/短路监测；3.8冷却水循环装置；3.8.1 工作温度范围：-10 到90℃；3.8.2 温度控制精度：< ± 0.1℃(在20℃)；3.8.3 水浴体积：2.8升；3.8.4 泵容量, 流速17 L/min，压力0.3 bar；3.8.5 功率：1200W；4. 原装进口必备附件玻璃板（包括长板，短板和垫片）：7对；空白板：5套；灌胶模具1个；胶盒支架：2个；5. 质量保证期：自仪器安装验收合格后，提供整机一年免费保修。
双向电泳操作步骤
双向电泳操作步骤双向电泳操作步骤及相关溶液配置A(实验过程一实验原理:2-DE的第一向电泳等电聚焦是基于等电点不同而将蛋白粗步分离，第二向SDS-PAGE是基于蛋白质分子量不同，而将一向分离后的蛋白进一步分离。
这样就可以得到蛋白质等电点和分子量的信息。
二实验步骤:1. 样品的溶解取纯化后的晶体蛋白3.0mg，加入300ul裂解液(1mg蛋白:100ul裂解液)振荡器上振荡10min左右，共处理一个小时。
其中每隔10,15分钟振荡一次，然后13200rpm离心15min除杂质，取上清分装，每管70ul，—80oC保存。
2. Bradford法测蛋白含量取0.001g BSA(牛血清白蛋白)用1ml超纯水溶解,测定BSA标准曲线及样品蛋白含量。
取7个10ml的离心管，首先在5个离心管中按次序加入0ul, 5ul,10ul, 15ul, 20ul 的BSA溶解液，另2管中分别加入2 ul的待测样品溶液，再在每管中加入相应体积的双蒸水(总体积为80ul)，然后，各管中分别加入4ml的Bradford液(原来配好的Bradford液使用前需再取需要的剂量过滤一遍方能使用)，摇匀，2min在595nm下，按由低到高的浓度顺序测定各浓度BSA的OD值，再测样品OD值。
(测量过程要在一个小时内完成)。
3. 双向电泳第一向---IEF(双向电泳中一律使用超纯水)3.1 水化液的制备称取2.0mg 的DTT，用700ul水化液储液溶解后,加入8ul 0.05, 的溴酚兰，3.5ul(0.5,v/v)IPG buffer (pH 3-10)振荡混匀，13200rpm离心15min 除杂质，取上清。
在含300ug 蛋白(经验值)的样品溶解液中加入水化液，至终体积为340ul，振荡器上振荡混合,13200rpm离心15min除杂质，取上清。
3.2 点样，上胶分两次吸取样品，每次170ul, 按从正极到负极的顺序加入点样槽两侧，再用镊子拨开 Immobiline DryStrip gels (18cm，pH 3—10)胶条，从正极到负极将胶条压入槽中,胶面接触加入的样品。
双向电泳操作步骤
3.1 全菌蛋白的制备将细菌接种于DMEM培养基，置于28℃培养箱培养18h。
参照Coelho 等（Coelho et al. 2004）的方法，略有改动。
用Wash buffer（10mmol/L TrisCl pH8.0，5mmol/L 醋酸镁）清洗细胞3次。
离心，细胞沉淀在Lysis Buffer( 7mol/L 尿素，2mol/L硫尿，1% IPG Buffer pH3-10或pH4-7，4% CHAPS，1% DTT，1%蛋白酶抑制剂，1%核酶抑制剂)中悬浮，使其浓度范围在5~10mg/mL。
置于冰上裂解2h。
13000r/min离心1h取上清，-80℃保存。
用2-D clean-up Kit 纯化蛋白，再用2-D Quant Kit测定样本中蛋白浓度。
3. 2 2-D Clean-Up Kit的使用方法（全程小心）蛋白质样本在1.5mL微型离心管中处理，所有步骤均在冰上进行。
1）将体积100μL的蛋白质样本（含1~100μg蛋白质）置于1.5mL微型离心管中。
加入300μL沉淀剂。
振荡或倒置搅匀。
冰浴中（4~5℃）培育15min。
2）加入300μL共沉淀剂，简单振荡混合一下，12000r/min离心5min。
3）将上清液尽量多地倾析或吸出，不要搅散沉淀。
保持沉淀不变，在其上面加入一层40μL共沉淀剂，冰上培育5min。
后离心5min，去上清。
4）往沉淀加入25μL蒸馏水或去离子水。
将管振荡5~10s，这时沉淀应散开，但并未溶解于水中。
在管中加入1mL洗涤缓冲液（在-20℃下至少预冷1h）和5μL洗涤添加剂，振荡直至沉淀完全散开。
-20℃下培育至少30min，每10min振荡20~30s。
5）将离心管以最大速度（至少12000r/min）离心5min。
小心地将上清液移走弃去。
此时应可见白色沉淀，将沉淀简单风干一下（不要超过5min）。
6）用裂解液溶解沉淀，以备第一向IEF电泳。
振荡管子至少30s，在室温下孵育，振荡或用移液管抽吸使之完全溶解。
02_2D培训_二维电泳设备简易操作说明
Ettan IPGphor 3简要操作指南-标准型胶条槽注意：●使用过程中，确保室内温度在20摄氏度！保持设备及周围环境干燥！●该设备为高压设备，不当操作可能导致电击危险！●该设备为双向电泳系统中的一个设备，请阅读双向电泳原理和方法手册了解其他信息！1.调节仪器水平。
2.参照水化液用量表（如下），样品与适量水化液混合，小心加入胶条槽。
3.胶条室温平衡30min，从酸性端（尖端）一侧剥去IPG胶条的保护膜。
胶面朝下，先将IPG胶条尖端(阳性端)放入胶条槽中，慢慢放下胶条，并前后拖动，避免生成气泡。
4.从两端向中间加入1-2ml覆盖油防止水分蒸发。
5.盖好胶条槽盖。
确保电极和胶条的两端有良好的接触。
6.水化：水化可以在20摄氏度进行（被动水化）或Ettan IPGphor 3仪器内提供低电压（主动水化）进行。
水化时间至少10小时。
7.将胶条槽放置在Ettan IPGphor 3的电极平台上。
酸端在正极，碱端在负极。
放置位置参考电极盘左侧刻度。
平台上一次最多可平行放同长度的胶条槽12根。
8.将两条透明的压板分别放在正极端和负极端以施加合适的压力确保胶条与电极完全接触；盖好安全盖，轻轻下压，使其锁紧。
9.盖上安全盖后，开启电源，开关在仪器背面左侧。
开机后，系统经过自检后进入待机状态。
10.程序设置和选择：可通过安装在PC上的控制软件或在Ettan IPGphor 3面板上按键设置程序，在Ettan IPGphor 3上可以储存10个多达9步设置好的程序；这些设置好的程序可以直接调用，也可以在编辑后运行。
可以设置的参数包括水化温度和时间，等电聚焦时的最大电流，电压，温度及电压改变模式等。
请参见双向电泳原理和方法手册了解不同长度和pH范围胶条的推荐运行条件。
11.用左、右箭头将光移至Prot# 1处，用上、下箭头选择被调用的方法号。
使用右向箭头移动光标至File，并用上、下箭头编辑方法名。
12.如果需要，设定水化时间（对于主动水化设为0h）、温度和等电聚焦的温度20度、最大电流50uA/strip。
双向电泳操作步骤
双向电泳操作步骤双向电泳是一种常用的蛋白质分离和纯化方法。
下面是一篇超过1200字的双向电泳操作步骤：双向电泳是一种通过两个不同方向的电场来进行蛋白质分离的方法。
它可以更好地区分具有不同等电点和分子质量的蛋白质，并用于研究蛋白质组学以及生物化学等领域。
以下是一般的双向电泳操作步骤：1.确保准备充足的电泳装置，包括双向电泳槽、平衡缓冲液、电泳缓冲液、电泳细胞等。
2.准备样品：将待分离的蛋白质样品进行适当的前处理，包括样品提取、蛋白质浓缩、去除干扰物等。
将样品溶解在适当的电泳缓冲液中。
3.将样品加载到电泳槽中：在准备好的电泳缓冲液中加入样品，然后将样品加载到电泳槽中的样品孔中。
注意，为了保持电泳稳定性，在样品孔加载样品后，要尽快将缓冲液加入到其他储备槽以保持全面和均匀的电解质浓度。
4.进行等电点电泳：将电泳槽中的样品浸没在平衡缓冲液中，并在两侧分别连接正负极。
设置合适的电流和电压，开始进行等电点电泳。
在等电点电泳过程中，蛋白质根据它们的等电点被定向地分离。
5.停止等电点电泳：根据需要进行电泳时间的设定，一般情况下为2-3小时。
等电点电泳时间结束后，关闭电源，并小心地取出电泳舱。
6.水平电泳：停止等电点电泳后，将样品塘从上清洗掉，并用水平电泳缓冲液进行冲洗。
然后，在两侧连接正负极，设置合适的电流和电压，开始水平电泳。
在水平电泳过程中，蛋白质根据它们的分子质量被定向地分离。
7.停止水平电泳：根据需要进行电泳时间的设定，一般情况下为4-5小时。
水平电泳时间结束后，关闭电源，并小心地取出电泳舱。
8.染色和图像采集：将分离完毕的样品进行染色，常用的染色方法包括银染和荧光染色。
然后，使用图像采集系统获取电泳图像，可根据需要调整采集参数。
9.数据分析和解释：通过对电泳图像的分析，包括珠状图、分子质量标准物的修正和待测蛋白质的标定等，将分离出来的蛋白质鉴定和定位。
10. 验证和验证：对其中感兴趣的蛋白质进行验证和验证。