琼脂糖电泳仪验证方案.(DOC)
琼脂糖凝胶电泳检测RNA质量
琼脂糖凝胶电泳检测RNA质量二．材料与方法1 材料RNA样品2 仪器、用具电泳仪、电泳槽、凝胶样品梳、微波炉、移液器等3 试剂(1) 1×TAE 电泳缓冲液(2) 溴化乙锭溶液（EB）[有毒，小心操作](3) 琼脂糖(4) 6×加样缓冲液4 方法(1) 选择孔径大小适合的点样梳，垂直架在胶版的一端，使点样梳底部离电泳槽水平面的距离为0.5-1mm。
(2) 称取0.25g琼脂糖，加入25ml 1×TAE电泳缓冲液中，微波炉加热使琼脂糖溶解均匀。
(3) 于50ml的离心管中加入1.25μl EB (10mg/ml)。
(4) 待凝胶冷却至50℃左右，将凝胶倒入50ml离心管中。
(5) 将离心管中的凝胶溶液轻轻倒入电泳凝胶板上，除去气泡。
(6) 待凝胶凝固后，小心取出点样梳。
(7) 在电泳槽中加入1×TAE 电泳缓冲液，将胶板放入电泳槽中（点样孔一端靠近电泳槽的负极），使电泳缓冲液没过胶面。
(8) 待测样品中加入1/6体积的6×上样缓冲液，混合后，移液枪点样，记录样品点样顺序及样量。
(9) 连接电泳槽与电泳仪之间的电源线，正极为红色，负极为黑色。
(10) 开启电源，开始电泳，最高电压不超过5V/cm。
(11) 当指示剂跑过胶板的2/3，可终止电泳；切断电源后，将电泳凝胶块放在凝胶成像仪中观察，拍照。
电泳检测：1%琼脂糖凝胶电泳，检测RNA完整性，观察18s、28s条带。
这里，RNA电泳要特别注意胶的浓度和质量。
首先，浓度不宜过高，1%-1.2%为宜。
其次，每次配胶不宜过多，最好现用现配，但是一次配100ml，3-5次可用完也可。
溶胶时一定要溶解彻底并且均匀，否则倒胶时产生气泡，影响电泳效果。
晾胶时，要以稍高于体温为佳，温度过高会导致胶体过软，给点样造成困难。
倒胶时，注意胶的厚度，原则是宁厚勿薄，胶板过薄点样孔盛放不下点样量，样品溢出导致弥散。
胶板如果很厚，一般要晾置20分钟以上，否则胶体晾置不彻底，拔掉梳子会破坏点样孔，同时胶体密度也会变得不均一，影响电泳效果。
琼脂糖凝胶电泳鉴定DNA
琼脂糖凝胶电泳鉴定DNA【实验目的】通过实验掌握琼脂糖凝胶电泳鉴定DNA的原理与方法。
【实验原理】琼脂糖是从海藻中提取出来的一种杂聚多糖，是由D型和L型半乳糖以α-1，3和β-1，4糖苷键相连形成的线状高聚物（如下图所示）。
琼脂糖遇冷水膨胀，溶于热水成溶胶，冷却后成为孔径范围从50nm到大于200nm的凝胶。
琼脂糖凝胶电泳是分离、鉴定和纯化DNA片段最为常用的方法之一，这种方法简便易行。
而且琼脂糖可以灌制成各种形状、大小和孔径，在不同的装置中进行电泳，如果有必要，还能够从凝胶中回收DNA谱带。
琼脂糖凝胶的分离范围较广，选择不同凝胶浓度和装置，从50个碱基对到几兆不同长度的DNA都可以实现分离。
使用电场强度和电泳方向恒定的水平板琼脂糖凝胶电泳的方法，可以很好的分离长度在50-20,000 bp 的DNA片段。
DNA在琼脂糖凝胶中的迁移率受多种因素影响。
例如DNA分子的大小；琼脂糖的浓度；所加电压等等。
DNA片段越长，泳动速度越慢，而且泳动速度与电场强度成正比。
一个给定大小的线性DNA片段，在不同浓度的琼脂糖凝胶中迁移率不同，DNA电泳迁移率的对数与凝胶浓度成线性关系。
用低浓度的荧光染料如溴化乙啶染色后，凝胶中的DNA可以直接被检测出来。
紫外灯下可以直接检测到20pg的双链DNA。
【实验材料】1. 实验器材水平板电泳槽；灌胶模具及梳齿；电泳仪；55℃水浴；沸水浴；微量移液器2.实验试剂（1）DNA样品；DNA标准分子量标记物；琼脂糖；1x电泳缓冲液TBE；6x样品缓冲液（2）溴化乙锭：水中加入溴化乙啶，搅拌数小时至溶解。
将配好的10 mg/ml溴化乙啶溶液装在棕色瓶中，室温保存，使用时稀释至0.5μg/ml。
缓冲溶液配制表【实验操作】1. 照厂家说明准备好灌胶模具，置于水平面上（实验操作示意图如下）。
2. 配制1%琼脂糖凝胶。
取250ml三角瓶，加入100ml TBE缓冲液，称取1克琼脂糖加入缓冲液中，沸水浴加热至完全溶解，然后在55℃水浴中保温。
琼脂糖凝胶电泳实验
琼脂糖凝胶电泳实验⼀、实验原理：琼脂糖凝胶电泳是分离和纯化DNA ⽚段的常⽤技术。
把DNA样品加⼊到⼀块包含电解质的多孔⽀持介质（琼脂糖凝胶）的样品孔中，并置于静电场上。
由于DNA分⼦的双螺旋⾻架两侧带有含负电荷的磷酸根残基，因此在电场中向正极移动。
在⼀定的电场强度下，DNA分⼦的迁移速度取决于分⼦筛效应。
具有不同的相对分⼦质量的DNA⽚段泳动速度不⼀样，因⽽可依据DNA分⼦的⼤⼩来使其分离。
凝胶电泳不仅可分离不同分⼦质量的DNA，也可以分离相对分⼦质量相同，⽽构型不同的DNA分⼦。
在电泳过程中可以通过⽰踪染料或相对分⼦质量标准参照物和样品⼀起进⾏电泳⽽得到检测。
相对分⼦质量标准参照物相对可以提供⼀个⽤于确定DNA⽚段⼤⼩的标准。
在凝胶中加⼊少量溴化⼄锭(ethidium bromide, EB)或者ＥＢ类似物，其分⼦可插⼊DNA的碱基之间，形成⼀种络合物，在254～365nm波长紫外光照射下，呈桔红⾊荧光，因此也可对分离的DNA进⾏检测。
⼀般琼脂糖凝胶电泳适⽤于⼤⼩在0.2kb～50kb范围内的DNA⽚段。
三种不同构型分⼦进⾏电泳时的迁移速度⼤⼩顺序为：超螺旋DNA>线性DNA>开环DNA正确选择凝胶浓度对于琼脂糖凝胶电泳，浓度通常在0.5～2％之间，低浓度的⽤来进⾏⼤⽚段核酸的电泳，⾼浓度的⽤来进⾏⼩⽚段分析。
低浓度胶易碎，⼩⼼操作和使⽤质量好的琼脂糖是解决办法。
注意⾼浓度的胶可能使分⼦⼤⼩相近的DNA带不易分辨，造成条带缺失现象。
适合的电泳缓冲液常⽤的缓冲液有TAE和TBE，⽽TBE⽐TAE有着更好的缓冲能⼒。
电泳时使⽤新制的缓冲液可以明显提⾼电泳效果。
注意电泳缓冲液多次使⽤后，离⼦强度降低，PH 值上升，缓冲性能下降，可能使DNA电泳产⽣条带模糊和不规则的DNA带迁移的现象。
Marker的选择DNA电泳⼀定要使⽤DNA Marker或已知⼤⼩的正对照DNA来估计DNA⽚段⼤⼩。
琼脂糖电泳仪验证方案
验证方案审批表验证方案审核验证方案批准目录1、概述2、验证目的3、验证项目4、职责4.1、质监部QC的职责4.2、QC主任的职责4.3、质量负责人的职责5、验证计划6、参考标准7、验证实施7.1、设计确认7.2、安装确认7.3、运行确认7.4、人员培训的确认7.5、文件的确认7.6、验证项目7.7、验证合格证书8、偏差分析与处理9、验证结论10、再验证周期的确定概述一、概述本公司采用MINI-SUB CELL GT琼脂糖电泳仪来检测供试品溶液。
按照GMP 的要求，需要对该仪器进行设计确认、安装确认、运行确认，以确定目前的实验室环境能否满足该仪器的正常操作和使用，仪器是否具有良好的检测性能，能否满足验证可接受标准和我们日常分析测试的需要。
二、仪器基本情况验证目的验证该设备安装是否符合要求，能否持续、稳定地运行 能否满足验证可接受标准和检验分析测试工作的需要。
一、确认MINI-SUB CELL GT琼脂糖电泳仪设计符合实验要求二、确认MINI-SUB CELL GT琼脂糖电泳仪的安装符合要求，资料和文件齐全三、确认MINI-SUB CELL GT琼脂糖电泳仪运行指标符合标准验证项目MINI-SUB CELL GT琼脂糖电泳仪一、设计确认二、安装确认三、运行确认职责一、质监部QC的职责负责性能确认方案的起草；负责相关指标的检测；负责原始记录的书写；负责原始记录的复核；负责性能确认报告的出具。
二、QC主任的职责审核以确保性能确认方案符合《药品生产质量管理规范(2010年修订)》和相关指导文件的标准；负责性能确认工作的实施；负责性能确认报告的复核。
三、质量负责人的职责批准性能确认方案；批准经性能确认符合规定的仪器投入使用。
验证计划验证计划验证立项时间： 年月日验证时间：年月日 ～年月日验证报告时间： 年月日参考标准《药品生产质量管理规范》（2010年修订）《中国药典》2010年版《药品GMP指南》验证实施一、设计确认确认仪器的设计符合要求，达到标准。
琼脂糖凝胶电泳检测dna实验报告
琼脂糖凝胶电泳检测dna实验报告琼脂糖凝胶电泳检测DNA实验报告。
实验目的，通过琼脂糖凝胶电泳技术检测DNA分子的大小和数量，以验证DNA的提取和纯度。
实验材料与方法：1. 实验材料，琼脂糖凝胶、TAE缓冲液、DNA样品、DNA分子量标准品、电泳槽、电泳仪等。
2. 实验步骤：a. 制备琼脂糖凝胶，按照比例将琼脂糖和TAE缓冲液混合煮沸后倒入电泳槽中，待凝固后形成琼脂糖凝胶。
b. 样品处理，将待测DNA样品加入适量的载体溶液，并在65°C水浴中恒温30分钟。
c. 电泳操作，将处理后的DNA样品和DNA分子量标准品加载至琼脂糖凝胶孔中，进行电泳操作。
实验结果与分析：经过琼脂糖凝胶电泳检测，观察到DNA样品在电场作用下向阳极迁移，形成明显的DNA条带。
通过对DNA条带的位置和长度进行分析，可以初步判断DNA的大小和纯度。
同时，与DNA分子量标准品进行比对，可以更准确地确定DNA的分子量。
实验结论：本次实验通过琼脂糖凝胶电泳技术成功检测了DNA样品的大小和纯度，验证了DNA的提取和纯度。
实验结果为后续的分子生物学研究提供了重要的数据支持。
实验注意事项：1. 实验过程中需注意琼脂糖凝胶的制备和电泳操作的细节，保证实验结果的准确性。
2. 实验后要及时清洗和消毒实验器材，保持实验环境的整洁和卫生。
实验改进方向：1. 可以尝试不同浓度的琼脂糖凝胶和不同电泳条件，寻找更适合本实验的操作参数。
2. 可以尝试其他DNA检测技术，与琼脂糖凝胶电泳技术进行对比，寻找更准确、高效的检测方法。
总结：琼脂糖凝胶电泳检测DNA实验是分子生物学实验中常用的技术手段，通过本次实验的学习和实践，对该技术有了更深入的了解，并为今后的科研工作打下了坚实的基础。
希望通过不断的实验探索和改进，能够为科学研究做出更大的贡献。
以上为琼脂糖凝胶电泳检测DNA实验报告内容，如有不足之处，欢迎指正。
琼脂糖凝胶电泳检测
使用3 mg的DNA Marker DL 2,000（500 ng/条带） 进行1%的琼脂糖凝胶电泳后，各DNA条带自上至下 分别为2kb，1Kb，750bp，500bp，250bp，100bp。
9. 用移液器吸起离心管中溶液，移入凝胶的 梳孔中； 10. 插上导线，打开电泳仪电源，按照需要调 节电压至100V，电泳开始，观察电流情况 或电泳槽中负极的铂金丝是否有气泡出现； 11. 等溴酚蓝泳动至凝胶前沿后，将电压（或 电流）回零，关闭电源，停止电泳； 12. 取出凝胶，在紫外观测仪上观察电泳结果； 13. 根据需要切下DNA条带，放入1.5ml Ep管 中，放于4℃保存，以备下周实验用。
琼脂糖凝胶电泳检测
1.了解琼脂糖凝胶电泳的原理 2. 掌握琼脂糖凝胶的制作及进行电泳 的方法 3. 琼脂糖凝胶电泳是基因工程操作中 常规的实验方法，它能检测少量的 DNA（如用肉眼观察，可检测到10 ng的DNA），且检测的范围很广。
4. 琼脂糖凝胶电泳对DNA分子的检测，主要
基于在凝胶中加入溴化乙锭，这样溴化乙 锭分子就会嵌入DNA分子中形成络合物， 使DNA在紫外光下发射很强的荧光，而在 紫外光下DNA发出的荧光是可见光。 在溴化乙锭足够的情况下，荧光的强度正 比于DNA的含量，因而DNA的检测很方便。 如将已知大小和浓度的标准样品（Marker） 作电泳对照，就可估计出待测样品的大小 和浓度。
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琼脂糖凝胶制备步骤
1. 洗净电泳槽、制胶槽、梳子、挡板，晾 干； 2. 插好挡板、梳子； 3. 配制1 %的 Agrose琼脂糖凝胶液：根据实 验所需称取0.4克琼脂糖，放入制胶 的容器 中（一般用三角瓶），然后加入40ml电泳 缓冲液（1×TAE）； 4. 加热煮沸，使琼脂糖完全溶解；
实验：琼脂糖明胶电泳
OCDNA LDNA CC DNA
电 泳 方 向
含不同量琼脂糖的凝胶的分离范围
凝胶中的琼脂糖含量 [%（W/V）] 0.3 0.6 0.7 DNA/RNA分子的分离 范围（ kb ） 5—60 1—20 0.8—10
0.9 1.2
1.5
0.5—7 0.4—6
0.2—3
2
0.1—2
一、实验原理
一、实验原理
电泳是现在用于分离和纯化DNA/RNA片段的
最常用技术。当制备好的一块“胶”即一块包含电 解质的多孔支持介质并把它置于静电场中， DNA/RNA分子将向阳极移动，这是因为DNA/RNA 分子沿其双螺旋骨架两侧带有富含负电荷的磷酸根 残基。
一、实验原理
2.分类
DNA的凝胶电泳常使用两种支持介质：琼脂糖凝胶 和聚丙烯酰胺凝胶 分类 琼脂糖凝胶电泳 凝胶电泳 聚丙烯酰胺凝胶 电泳 分离长度 200bp—近 50kb 5—500bp 分辨率高
电泳样品 DNA相对分子质量标准物 电泳缓冲液 沉降DNA并起指示作用 电泳支持介质 嵌入DNA中，在紫外灯下 显色
二、仪器、材料与试剂
1.琼脂糖凝胶电泳系统
二、仪器、材料与试剂
2.紫外投射仪
二、仪器、材料与试剂
3. DNA的染料 EB：即溴化乙锭，它能够插入DNA分子中的碱基对 之间而与DNA结合。由于EB分子的插入，在紫外光 的照射下，凝胶电泳中的DNA条带呈现出红色荧光 ，易于检测。可以检测10ng 的DNA 注意：EB是一种诱变剂，操作时一定要注意安全， 必须戴塑料或乳胶手套
10×：108g Tris碱 15.5mL 85%磷酸 40mL 0.5moL/L EDTA(PH8.0) 5×：54g Tris碱 27.5g硼酸 20mL 0.5moL/L EDTA(PH8.0)
琼脂糖凝胶电泳
分辨率与凝胶浓度的关系？ 3、DNA荧光染料的发光原理？
DNA分子在碱性环境中带负电荷，在外加电场作用下向正极泳动。DNA分 子在琼脂糖凝胶中泳动时，有电荷效应与分子筛效应。不同DNA，其分 子量大小及构型不同，电泳时的泳动率就不同，从而分出不同的区带。 琼脂糖凝胶电泳法分离DNA，主要是利用分子筛效应，迁移速度与分子 量的对数值成反比关系。
溴化乙锭(EB)为扁平状分子，在紫外光照射下发射荧光。EB可与DNA分 子形成EB-DNA复合物，其发射的荧光强度较游离状态EB发射的荧光强度 大10倍以上，且荧光强度与DNA的含量成正比。用肉眼观察，可检测到5 ng以上的DNA。
（一）制胶
1、称取1.5g琼脂糖加入盛有100 ml 0.5TAE电泳缓冲液的250 ml三角瓶中， 摇匀，在微波炉上加热至琼脂糖完全溶 解。冷却到约60℃后，加入10 l的EB， 并摇匀。
2、将溶解的琼脂糖（约50℃）倒入制胶模 具中，直至厚度为4-6 mm，插入适当的 梳子，在室温下冷却凝固。
五、实验用具
移液器 吸管头若干 加样板 量筒100 ml1 三角瓶500 ml1
六、试剂
琼脂糖 50TAE电泳缓冲液 6 载样缓冲液 （loading buffer） 溴化乙锭(EB) DNA分子量标准（DNA marker）：Marker III
七、实验步骤
（一）制胶（1% agarose gel） （二）点样 （三）电泳 （四）观察
实验三、琼脂糖凝胶电泳
琼脂糖凝胶电泳是分子克隆的核心技术之一，用于分 离、鉴定和纯化DNA片段。凝胶中DNA的位置可以用 低浓度的荧光插入染料染色直接观察。
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验证方案审批表
目录
1、概述
2、验证目的
3、验证项目
4、职责
4.1、质监部QC的职责
4.2、QC主任的职责
4.3、质量负责人的职责
5、验证计划
6、参考标准
7、验证实施
7.1、设计确认
7.2、安装确认
7.3、运行确认
7.4、人员培训的确认
7.5、文件的确认
7.6、验证项目
7.7、验证合格证书
8、偏差分析与处理
9、验证结论
10、再验证周期的确定
概述
一、概述
本公司采用MINI-SUB CELL GT琼脂糖电泳仪来检测供试品溶液。
按照GMP 的要求，需要对该仪器进行设计确认、安装确认、运行确认，以确定目前的实验室环境能否满足该仪器的正常操作和使用，仪器是否具有良好的检测性能，能否满足验证可接受标准和我们日常分析测试的需要。
二、仪器基本情况
验证目的
验证该设备安装是否符合要求，能否持续、稳定地运行
可接受标准和检验分析测试工作的需要。
一、确认MINI-SUB CELL GT琼脂糖电泳仪设计符合实验要求
二、确认MINI-SUB CELL GT琼脂糖电泳仪的安装符合要求，资料和文件齐全
三、确认MINI-SUB CELL GT琼脂糖电泳仪运行指标符合标准
验证项目
MINI-SUB CELL GT琼脂糖电泳仪
一、设计确认
二、安装确认
三、运行确认
职责
一、质监部QC的职责
负责性能确认方案的起草；
负责相关指标的检测；
负责原始记录的书写；
负责原始记录的复核；
负责性能确认报告的出具。
二、QC主任的职责
审核以确保性能确认方案符合《药品生产质量管理规范(2010年修订)》和相关指导文件的标准；
负责性能确认工作的实施；
负责性能确认报告的复核。
三、质量负责人的职责
批准性能确认方案；
批准经性能确认符合规定的仪器投入使用。
验证计划
验证计划
验证立项时间：年月日
验证时间：年月日～年月日验证报告时间：年月日
参考标准《药品生产质量管理规范》（2010年修订）
《中国药典》2010年版
《药品GMP指南》
验证实施
一、设计确认
确认仪器的设计符合要求，达到标准。
二、安装确认
确认资料齐全，安装符合规范，能满足该仪器的安装条件。
1、资料、文件确认
检查人：复核人：日期：2、环境、电源等(对照使用说明书要求)确认
温度15～35℃相对湿度35%-75%
检查人：复核人：日期：
安装确认结论：
三、运行确认
根据仪器使用说明书，确认仪器各功能模块运转协调，符合设计要求。
检查人：复核人：日期：
运行确认结论：
四、人员培训的确认
所有与本方案有关的人员应接受培训，并签名。
五、文件的确认
确认此确认所支持的文件齐全且均为现行版文件，并记录文件名称、版本号。
六、验证项目
1、运行确认
确认仪器在正常工作下能够正常开启及关闭，运行平稳、无异常噪音。
七、验证合格证书
对经确认合格的仪器由质量监督部颁发确认合格证书，附在性能确认报告后存档。
偏差分析与处理
验证结论
再验证周期的确定
当经历重大维修，或更换关键部件，仪器、设备的安装地点需要变化，软件或硬件升级，出现偏差、数据超出标准或数据趋势分析时，怀疑是仪器、设备造成的应重新确认，并报验委员会审核。
附件清单
人员培训确认记录
文件确认记录
运行确认记录
测试结果总结
安装的确认
资料齐全，安装符合规范，能满足该仪器的安装条件。
人员培训
所有与本方案有关的人员均已接受培训，并签名。
文件的确认
此验证所支持的文件并记录文件名称、版本号均为现行版本，准确无误。
仪器仪表的确认
仪器、仪表完好，经过校准且在有效期内，可以保证验证结果的准确性。
性能验证
运行确认
仪器在正常工作电压下能够正常开启，运行平稳、无异常噪音。
性能验证
电极和滴定液输出的准确度和精密度在可接受范围内，性能良好。
偏差情况
本确认过程中未出现偏差。
再确认周期
当经历重大维修，或更换关键部件，仪器、设备的安装地点需要变化，软件或硬件升级，出现偏差、数据超出标准或数据趋势分析时，怀疑是仪器、设备造成的。
应重新确认。
验证合格证书
对经验证合格的仪器，由质量监督部颁发确认合格证书，附在性能确认报告后存档。
验证报告的审核批准。