南方医科大学检验系分子诊断学考试重点
分子诊断学 期末复习资料
1.（一）真核生物基因组：①有细胞核基因组和细胞器基因组之分；②核基因组以线状DNA分子的形式存在于染色质上；③基因多数为断裂基因，有内含子结构和大量重复序列；④单顺反子，基因家族；⑤核基因组由染色体DNA组成，分子量大，结构复杂，与蛋白质结合。
（二）原核生物基因组：①基因组相对较小，通常为一条双链DNA分子②功能相关的基因高度集中，构成操纵子③重复序列少，大多数的蛋白质基因保持单拷贝形式，而RNA基因常是多拷贝④没有内含子，基因是连续的⑤多顺反子，构成转录单位⑥绝大部分DNA都是用于编码蛋白质的，只有很少不编码序列⑦DNA分子中有各种功能区（三）病毒基因组：①只有一种核酸，4种类型，为双链DNA、单链DNA、双链RNA、单链RNA ②核酸大小差别较大③具有启动子和操纵子结构④具有重叠结构2.核酸提取总原则和过程：1)分离制备总原则：①保证核酸一级结构的完整性②尽量排除其他的污染，保证核酸的纯度2)核酸提纯步骤：①破碎细胞：超声破碎，匀浆法、低渗法②提取：采用酶学或化学试剂酚等去除蛋白质及其他大分子；③纯化：3.核酸分子杂交基本原理：利用核酸变性和复性的性质，使具有一定同源性的两条核酸单链在一定条件下按照碱基互补配对原则形成异质双链的过程。
（可发生在同源或异源的DNA链与DNA链之间，也可在RNA链与DNA链）4.理想探针的特点：①高度特异性②易于标记和检测③灵敏度高④稳定且制备方便5.核酸探针的种类和优缺点：1)基因组DNA探针：优点：制备方法简便、省时、易得，稳定不易降解，标记方法多样也较成熟缺点：杂交中可能会自我复性2)cDNA探针：优点：具有基因组DNA优点，且不存在内含子和其他高度重复序列，尤其适用于基因表达研究。
缺点：制备困难。
3)RNA探针：优点：不含高度重复序列，可降低非特异性杂交，复杂性低，杂交反应效率高；缺点：不稳定，标记方法复杂。
4)寡核苷酸探针：优点：①短的探针比长探针杂交速度快，特异性好；②可以在短时间内大量制备；③可以在合成过程中进行标记制成探针；④可合成单链探针，避免用双链DNA探针在杂交中的自我复性，提高了杂交效率；⑤可以检测小DNA片段缺点：长度有局限性，短链优于长链。
分子诊断学重点1
分子诊断：应用分子生物学方法检测患者体内遗传物质的结构或表达水平的变化而做出诊断的技术，称为分子诊断。
分子诊断学：是临床检验诊断学的一个重要分支，它利用分子生物学技术来研究机体外源性和内源性生物大分子和大分子体系的存在、结构或表达调控的改变，从而为疾病的预测、预防、诊治和转归提供分子水平信息。
基因：基因是一段携带功能产物（多肽、蛋白质、tRNA、rRNA和某些小分子RNA）信息的片段基因组：是指生物体的一套完整的单倍体遗传信息，包括所有基因和基因间的区域。
基因组学：指对所有基因进行基因组作图（包括遗传图谱、物理图谱、转录图谱）、核苷酸序列分析、基因定位和基因功能分析的一门科学。
人类基因组多样性：即人类基因组的个体差异。
生物大分子：指分子体内由分子量较低的基本结构单位首位相连形成的多聚化合物。
CsCl-EB密度梯度超速离心法：CsCl-EB法是一种沉降平衡离心法，经超速离心，离心介质CsCl形成一连续的密度梯度，在过量EB存在的条件下，各种不同密度的物质经离心平衡后得以分开。
(CsCl-EB法分离质粒和染色体DNA就取决于溴化乙锭与线状及闭环DNA分子的结合量有所不同)。
Western印迹：蛋白质印迹，又称免疫印迹，是一种通过标记的抗体检测经SDS-PAGE分离的特定蛋白质的技术。
克隆载体：能携带目的基因进入宿主细胞进行扩增和表达的一类DNA分子，用于在宿主细胞中克隆和扩增外援DNA片段表达载体：能携带目的基因进入宿主细胞进行扩增和表达的一类DNA分子，用于在宿主细胞中获得外援基因的表达产物。
重组DNA技术：是指在基因水平上，将目的DNA在体外重组于能自我复制的载体DNA分子上，然后将重组DNA导入宿主细胞中进行增生，以获得大量的目的DNA片段，或以此为基础，通过基因的诱导表达，得到大量相应蛋白质产物的过程。
基因组文库：将某种生物的基因组DNA切割成一定大小的片段，并与合适的载体重组后导入宿主细胞进行克隆。
南方医科大学实验诊断学真题
参考答案：
1）.诊断为缺铁性贫血；
2）。
本例经维生素B12和叶酸治疗3个月无效，可排除将巨幼细胞性贫血；尿三胆阴性，网织红细胞不增高，故溶血的可能性很小。
根据患者月经量多，两次妊娠哺乳，铁的需求了明显增多，故首先考虑此病。
3）.可进一步做血清铁、铁蛋白、总铁结合力、骨髓细胞铁染色及骨髓细胞形态学检查。
参考答案: 人卫版教材P378
1.定义: OGTT（oral glucose tolerance test)即口服葡萄糖耐量试验，以往成人采用一次100g，近年WHO建议用75g（或不论成人或儿童每kg标准体重1.75g，总量不超过75g）口服法。
于口服糖前及后1/2、1、2、3小时抽取静脉血测糖，同时搜集尿标本查尿糖。
2诊断糖尿病标准:临床上有以下条件者,即可诊断为糖尿病.:1).具有糖尿病症状,FPG＞7.0mmlo/L;2)OGTT血糖峰值＞11.1mmol/L，OGTT2h＞11.1mmol/L；3）.具有临床症状，随机血糖＞11.1mmol/L,且伴有尿糖阳性者。
临床症状不典型者，需要另1d重复检测确诊，但一般不主张做第三次OGTT。
实验诊断学复习资料(南方医科大学)
实验诊断学复习资料第一章临床血液学检测第二节溶血性贫血的实验室检测一溶血性贫血的筛查实验（一）血浆游离血红蛋白测定1.参考值：<50mg/l2.临床意义：血管内溶血时明显增高，血管外溶血不变，自免和溶血性贫血轻度增高（二）含铁血黄素尿试验1.原理：含铁血黄素和酸化的低铁氰化钾——普鲁士蓝反应。
尿沉渣镜下深蓝色物质2.临床意义：血管内溶血可见，常阵发性睡眠性蛋白尿。
溶血初期阴性3.正常值：阴性二、红细胞膜缺陷检测——红细胞渗透脆性试验1.正常值：0.42%-0.46%/0.28%-0.34%2.临床意义：（1）增高：>0.5%/0.38%：遗传性球形红细胞增多，温抗体型自身免疫性溶血性贫血，遗传性椭圆形红细胞增多症。
（2）减低：海洋性贫血，缺铁性贫血和阻塞性黄疸等。
三、红细胞酶缺陷的检测（一）高铁血红蛋白还原试验1.原理：G6DP正常时可以完成2.参考值：>75%，高铁血红蛋白0.3-1.3g/l3.临床意义：G6PD缺陷，高铁血红蛋白还原率减低。
见于蚕豆病和伯安奎类药物溶血。
（二）变性珠蛋白小体生成试验1.原理：高铁血红蛋白增高生成2.参考值：<30%3.临床意义：增高见于G6PD缺陷症，不稳定Hb,HbH病高于45%四、珠蛋白生成异常——血红蛋白电泳1.原理2.参考值：（阳极→阴极）HbA→HbA2→NH1→NH23.临床意义：（1）HbA2增高：轻型地贫诊断标准。
个别恶性贫血、巨幼细胞性贫血，不稳定血红蛋白血病（2）减低：缺铁性贫血和铁幼粒细胞贫血五、自身免疫性溶血性贫血（AIHA）的检测（一）抗人球蛋白试验1.原理：coombs实验，直接阳性说明患者红细胞表面上有不完全抗体；间接阳性说明血清中存在不完全抗体2.参考值：直接和间接都是阴性3.临床意义：（1）阳性：新生儿溶血病、自身免疫性溶血、SLE、类风湿性关节炎、恶性淋巴瘤、甲基多巴和青霉素药物溶血（2）AIHA大多为温抗体型，IgG，必要时要在4℃进行试验排除假阳性,也要用广谱抗人球蛋白血清试验（3）间接：主要用于Rh或ABO妊娠免疫性新生儿溶血母体血清抗体检测（二）冷凝集素试验1.原理：冷凝集素：可逆性抗体，在低温时与自身红细胞等同型红细胞反应，温度增高凝集块消失。
南方医科大学实验诊断学知识重点总结
南方医科大学实验诊断学知识重点总结简答题：1、什么是管型、管型的形成条件2、什么是核左移、核右移，有什么临床意义3、渗出液、漏出液4、肿瘤标志物有哪些5、正常骨髓结构特点6、骨髓细胞发育的特点7、尿糖、尿蛋白什么情况下出现？选择性蛋白尿、非选择性蛋白尿8、肾小球肾炎尿液的特点，观察到那些管型第一章1、分析影响前的因素2、诊断灵敏度，特异性（联合检测意义）第二章1、几个参考值的范围（血常规的基本参考范围如红白细胞，血小板，血红蛋白等；血钾，血钠，GFR,血糖），以及临床意义2、血沉加快和减慢影响因素3、异常的红细胞形态有哪些4、白细胞（考的多），各种情况下，粒细胞和淋巴细胞的增加和减少，贫血，辐射电离，伤寒副伤寒何种细胞增加或减少5、网织红细胞的定义，增多减少；红细胞沉降速率实验，6、溶血性贫血几个实验的意义，渗透脆性不需要记住参考值，高铁血红蛋白症（G6PD,蚕豆病），血红蛋白电泳临床意义，combs实验用途，7、骨髓检查的步骤，内容，方法以及正常骨髓象的形态特点。
8、粒红比值9、POX染色临床意义，SB染色临床意义，NAP染色临床意义，类白血病的概念，ACP.AS-D NCE,α-NAE,PAS,染色的临床意义10、最易发生DIC――M3型11、交叉配血试验的主侧，次侧12、溶血贫的特点1,2（尿胆原增加）13、白血病的各个特点/几种类型/什么样的医学方法14、MDS熟悉第三章血栓和止血检测1、临床上的四项检测指标2、内源性：APTT，延长S异常3、外源性：PT，延长S异常4、单纯血友病哪一项指标异常5、凝血试验一定要做对照6、假如APTT、PT都延长说明什么7、凝血酶时间8、血小板活化会伸出伪足9、原发性纤溶、继发性纤溶区分标志，异二聚体、3P实验10、阳性排除、阴性排除11、肌红蛋白：心梗第四章排泄物、分泌物及体液检测1、怎样收集尿液，应注意什么2、病理性尿液外观；如何区别血尿、血红蛋白尿3、管型的定义，管型包括那些，透明管型在什么条件下出现4、正常尿液中可以见到什么？5、蜡样管型――慢性肾炎6、最常见的寄生虫，如黏液遍：菌痢7、潜血、隐血8、三管化学检查9、渗出液与漏出液10、脑脊液蛋白升高最明显的是什么病理状况，糖保持正常是什么病理情况？11、脑脊液中可见的蛋白质12、脑脊液中乳酸脱氢酶变化表明什么13、白带外观改变；鉴别加德纳阴道炎：结核杆菌、新生隐球菌14、精液减少、无精症15、前列腺最常见,,,,,,,,（没听到）16、慢性前列腺炎第五章肾功能检测（从这章考试老师急着走，讲得不详细）1、肾小球滤过率（菊粉）、反应肾小球血流量的检测方法是：对氨基XXX2、肾前性、肾实质性少尿的鉴别3、β微球蛋白什么时候增高4、浓缩稀释功能：远端肾小管第六章肝功能1、脂类代谢2、胆红素代谢3、ALT、AST临床意义4、单胺氧化酶5、谷酰胺羟化酶：胶原纤维的关键酶6、急性肝损、慢性肝损第七章临床生化检测1、OGTT诊断糖尿病2、血钾高容易酸中毒3、血钙、血鳞，无机磷重要存在于4、心肌酶包括哪些指标；心肌钙蛋白；肌红蛋白：阴性排除心梗第八章免疫学检测1、T细胞、B细胞、花阶形成实验，T细胞形成实验，T细胞缺陷，HIV2、甲胎蛋白、肿瘤标志物选择：灵敏性、特异性3、系统性红斑狼疮，抗体4、梅毒、血红蛋白5、C反应蛋白、IgE检测第九章病原体检测1、学习微生物检测的临床意义2、伤寒病人第一周血培养结果最明显3、米泔样便：霍乱4、耐药性：β内酰胺酶，ESBL5、衣原体有细胞壁、支原体没有6、甲肝、乙肝、丙肝标志物7、巧克力培养基：脑膜炎奈瑟菌8、HIV、淋病。
分子诊断学复习资料
分子诊断学复习资料分子诊断学复习资料——参照中国医药科技出版社（第二版）编写1.分子诊断学:是以分子生物学理论为基础，利用分子生物学的技术和方法来研究人体内源性或外源性生物大分子和大分子体系的存在、结构或表达调控的变化，为疾病的预防、诊断、治疗和转归提供信息和依据。
①主要特点：直接以疾病基因为探索对象，属于病因学诊断，对基因的检测结果不仅具有描述性，更具有准确性；可准确诊断疾病的基因型变异，基因表型异常以及由外源性基因侵入引起的疾病。
灵敏度高，便于早期诊断及疾病预防；以基因分析为基础，特异性高。
②发展简史（三个阶段）第一个阶段：准备和酝酿阶段1953年前，蛋白质是生命的物质基础，DNA是遗传物质基础。
（三个实验：肺炎双球菌转化实验、体外转化实验、噬菌体转导实验）、第二个阶段：DNA双螺旋结构、中心法则、PCR技术第三个阶段：2001年，首张人类基因组序列图谱及其他物种基因组序列的公布。
基因组分、蛋白质组学等方面的巨大技术进步，促进进入第三阶段，即以生物芯片技术为代表的高通量密集型技术。
③主要应用：感染性疾病、遗传性疾病、肿瘤的分子诊断，个体化医疗，其他如耐药性、疗效监测，多基因疾病2.基因：是有功能的DNA片段，含有合成有功能蛋白质多肽链或RNA所必学的全部核苷酸序列，是遗传的结构和功能单位。
分为结构基因和调控基因。
①结构基因：编码蛋白质或RNA的编码序列调控基因：保证转录功能起调控作用的非编码序列②操纵子（operon）操纵基因与其控制下的结构基因共同组成的功能单位③断裂基因：指基因的内部存在间隔区，间隔区的DNA序列与该基因所决定的蛋白质没有关系。
间隔区又称为内含子。
出现在成熟RNA中的有效区段为外显子。
重叠基因：指基因的开放阅读框（ORF）存在一个或多个核苷酸重叠的基因跳跃基因：又称转座子，基因在染色体上的位置不固定，能由一条染色体跳到另一条染色体上。
必须基因：生物体中存在的一些维持生物细胞生长所必需的基因，缺少或突变这些基因均能导致生物体死亡3.基因组（gnome）：细胞中一套完整单倍体的遗传物质的总和基因组结构主要指不同的DNA功能区在DNA分子中的分布和排列4.C值：基因组的大小又称C值，常用碱基数目或碱基对数目来描述①C值是特异的，物种不同，差异极大，真核生物中，一般随着进化，C值增大②C值矛盾：又称C值悖论，生物的进化程度与基因组大小不完全成比例的现象5.真核生物基因组1）基本特征：①有细胞核基因组和细胞器基因组之分；②核基因组以线状DNA分子的形式存在于染色质上；③基因多数为断裂基因，有内含子结构和大量重复序列；④单顺反子，基因家族；⑤核基因组由染色体DNA组成，分子量较大，结构复杂，与蛋白质结合。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
名词解释：基因组，基因重叠，质粒的不相容性，假基因，单核苷酸多态性，蛋白质组，蛋白质组学，限制酶，质粒载体，转染，PCR, 荧光定量PCR, Taqman探针，基因芯片，蛋白芯片，外显子与内含子
简答：
真核生物染色体基因组的一般特点？
SNP的特点和主要用途有哪几个方面？
简述质粒的概念和特性，常用的质粒载体有哪几种？
简述重组DNA技术的原理与步骤？
影响PCR反应的因素有哪些？
PCR技术有何临床应用？
试述基因芯片的工作原理及制备？
举例说明基因芯片在临床诊断中的应用？。