基于生物热活性表达的中药板蓝根品质评价研究_赵艳玲
复方南板蓝根片质量标准研究
本科毕业论文复方南板蓝根片质量标准研究二级学院中药学院专业中药学（中药制药方向）班级2009级（1）班学生姓名***学号0906505148指导教师黄**2013年4月诚信声明我声明，所呈交的毕业论文（设计）是本人在老师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。
据我查证，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文（设计）中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。
我承诺，论文（设计）中的所有内容均真实、可信。
毕业论文（设计）作者（签名）：年月日目录摘要............................................................ Ⅰ-Ⅱ1 前言 (1)2 材料与仪器 (2)2.1 实验材料 (2)2.2 仪器 (2)3 方法与结果 (3)3.1 薄层鉴别 (3)3.2 咖啡酸的含量测定 (7)4 讨论 (12)4.1 薄层鉴别 (12)4.2 含量测定 (12)参考文献........................................... 错误！未定义书签。
综述 (15)致谢 (22)复方南板蓝根片质量标准研究摘要：目的建立复方南板蓝根片的质量控制方法。
方法采用薄层色谱法（TLC）对方中的南板蓝根、紫花地丁和蒲公英进行定性鉴别，采用高效液相色谱法（HPLC）对方中蒲公英的指标性成分咖啡酸进行含量测定，色谱柱为菲罗门Phenomenex C18（250×4.60mm），流动相为甲醇-磷酸盐缓冲液（23:77），柱温：30℃，流速：1.0mL·min-1，检测波长：323nm。
结果在T LC图谱中供试品和对照品溶液在相同位置显示同颜色的斑点，且阴性无干扰。
含量测定结果显示，咖啡酸0.15~0.75 µg范围内与峰面积积分值呈良好线性关系，回归方程为y=428 2300x+14400，R2=0.9996，平均回收率为98.85%，RSD为0.81%（n＝6）。
板蓝根颗粒的质量研究进展
板蓝根颗粒的质量控制研究进展刘红梅摘要：对板蓝根颗粒的质量控制的研究情况进行综述。
板蓝根颗粒是一种常用的中成药，中国药典对其鉴别只是采用简单的荧光与显色反应，专属性不强，且无含量测定指标，难以严格控制药品质量，有必要对其质量控制情况进行深入的研究。
关键词：板蓝根颗粒质量控制研究板蓝根颗粒[1]是一种常用的中成药，收载于《中国药典》2005年版一部中，由单味药板蓝根组成，具有清热解毒、凉血利咽的作用，主要用于肺胃热盛所致的咽喉肿痛、口咽干燥、腮部肿胀、急性扁桃体炎、腮腺炎见上述证侯者。
板蓝根为十字化科植物菘蓝Isatis indigotica Fort.的干燥根。
主要化学成份包括1-硫氰酸-2-羟基-3-丁烯、（＋）5-乙烯噁唑烷-2-硫酮、腺苷、棕榈酸、β-谷甾醇、蔗糖、靛蓝、靛玉红及精氨酸等[2]。
中国药典中对板蓝根颗粒的鉴别只是采用简单的荧光与显色反应，专属性不强，且无含量测定指标，难以严格控制药品质量，本文对近年来我国在板蓝根颗粒质量研究方面取得的进展作一综述。
1鉴别1.1薄层色谱迟芳振等[3]用薄层色谱法鉴别板蓝根颗粒。
方法：采用硅胶G薄层板；以靛蓝、靛玉红、板蓝根药材为对照品，；以氯仿-丙酮（9：1）为展开剂。
供试品色谱中，对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
王小龙等[4]采用薄层色谱法对其主要成分精氨酸与靛玉红进行了鉴别研究。
经研究认为精氨酸与靛玉红对照品色谱中相应的位置上显现出相同颜色的斑点，斑点清晰，无杂质干扰，因此建议采用专属性较强的薄层色谱法鉴别板蓝根颗粒的主要成份。
1.2指纹图谱中药指纹图谱发展迅速，指纹图谱是反映中药多种成分特点的一种质量控制技术，也是中药现代化的一个重点内容。
板蓝根及其制剂的质量很难找到一个指标性成分进行有效地控制，多成分综合评价的质量控制体系较为客观。
曾令杰等[5]研究了板蓝根颗粒氨基酸部位的指纹图谱，由于氨基酸没有紫外吸收，以DNFB柱前衍生化的HPLC法，BDSC18色谱柱（4.6 mm×250 mm）为分析柱、pH 6.4的醋酸钠缓冲液-乙腈（95∶5）梯度洗脱，紫外365 nm下建立氨基酸部位的指纹图谱，以角余弦系数和距离系数来计算不同批次的样品之间的质量一致程度，结果显示精密度、稳定性和重现性良好，此方法可有效地判断和控制板蓝根的质量及其工艺过程的稳定性。
微量热法研究板蓝根的生物热力学特征
微量热法研究板蓝根的生物热力学特征赵艳玲;王伽伯;肖小河【期刊名称】《中草药》【年(卷),期】2007(38)2【摘要】目的选取大肠杆菌做为工具菌,建立板蓝根不同萃取部位的生物热力学研究方法。
方法采用微量热法测定大肠杆菌在板蓝根不同萃取部位作用下的生长热曲线特征谱图,得到相应的生物热动力学参数,评价板蓝根不同萃取部位的差异性。
结果板蓝根不同萃取部位能够不同程度地抑制或促进大肠杆菌的生长,其中水提物、萃取后残渣促进其生长,而有机溶剂萃取物则抑制其生长;在热力学参数上表现为随着有机溶剂萃取物的极性降低,萃取物的抑制率下降、细菌传代时间延长;在生长热特征曲线上则表现为最大产热峰强度和对应的培养时间具有显著的差异,其中水提物、萃取后残渣的最大产热峰强度不变或略下降、达峰时间提前,有机溶剂萃取物的最大产热峰强度明显下降、达峰时间滞后,且存在特异的后期产热现象,可以较好的表征提取物间的差异性。
结论微量热法可以较好的反映板蓝根的生物热力学参数及特征,该方法可为其他生物模型的研究提供参考和指导。
【总页数】4页(P193-196)【关键词】板蓝根;微量热法;大肠杆菌;生物热力学【作者】赵艳玲;王伽伯;肖小河【作者单位】解放军第302医院;军事医学科学院,北京100850;成都中医药大学,四川成都610075【正文语种】中文【中图分类】R282.15;R284.2【相关文献】1.滴定微量量热法研究HPMBP从硝酸介质中萃取铅的热力学性质 [J], 王高升2.微量热法研究板蓝根中四种有机酸对微生物生长代谢的影响 [J], 孔维军;赵艳玲;山丽梅;肖小河;郭伟英3.聚氧乙烯月桂醚在含醇的非水体系中的热力学性质的微量量热法研究 [J], 张洪林;张可;孔长青;杨淑娟;毕红艳;李晶;李干佐;于丽4.丁二酸二异辛酯磺酸钠在长链醇/N,N-二甲基甲酰胺体系中临界胶束浓度和热力学函数的微量量热法研究 [J], 毕红艳;李晶;孔长青;杨淑娟;孙艳芝;张洪林;李干佐;于丽因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
板蓝根颗粒中有效成分的测定及药理作用研究进展
板蓝根颗粒中有效成分的测定及药理作用研究进展王建敏;李伟【摘要】板蓝根颗粒由板蓝根和大青叶两种中药材组成,主要含生物碱、有机酸、苷类、氨基酸、硫代葡萄糖苷及其代谢产物、金属等成分,具有抗病原微生物、抗内毒素、增强免疫功能、抗肿瘤、抗衰老、保护和预防金属中毒等作用.通过测定板蓝根颗粒中的有效成分,提升板蓝根药材品质,确保该药临床使用的安全性.本文从板蓝根颗粒的有效成分、测定方法及药理作用、实际临床应用等方面进行综述,为板蓝根颗粒今后的研究提供一定的借鉴.【期刊名称】《中国医药导报》【年(卷),期】2019(016)018【总页数】4页(P49-52)【关键词】板蓝根颗粒;有效成分;药理作用【作者】王建敏;李伟【作者单位】河北医科大学第四医院药学部,河北石家庄050011;河北医科大学第四医院药学部,河北石家庄050011【正文语种】中文【中图分类】R284.1板蓝根颗粒是由板蓝根和大青叶两种中药材组成的中药成方制剂，具有清热、解毒、凉血、利咽等功效，临床广泛用于预防流行性感冒发热、流行性腮腺炎等病毒性感染，是预防及治疗病毒性肝炎的传统用药，对带状疱疹、扁平疣等多种病毒性皮肤病有较好疗效[1]。
大青叶清热解毒、凉血消斑，可用于抗病毒、抑菌、增强机体免疫力、抗肿瘤、解热、抗炎[2]。
板蓝根清热解毒、凉血利咽，具有抗菌、抗病毒、抗内毒素、增强免疫功能、抑制血小板聚集、解热、抗癌作用[3]。
现就板蓝根颗粒的药理作用及其有效成分的测定作一综述。
1 板蓝根颗粒的有效成分、测定方法及药理作用1.1 有效成分与测定方法按照传统中医药学的整体观，中药的有效成分往往涉及几种、十几种，甚至是几十、上百种，中药药效不能依靠一个或几个有效成分的量决定，而是药品中多个药效成分的综合效应，产品中活性成分越多，含量越高，中药内在有效成分之间的配比关系越好，药效也可能越好。
大青叶主要化学成分包括生物碱、有机酸、苷类、甾醇等几种化合物。
板蓝根片质量标准的研究
板蓝根片质量标准的研究李明涛 (新密市妇幼保健院,新密 475000)王 焕 (济源市人民医院,济源 454600)王 荔 陈勇敢 (河大医学院药学系,开封 475001)[摘 要]目的:为板蓝根片的质量控制寻找可靠的方法。
方法:用薄层色谱扫描法对质量控制进行试验。
结果:本法可用于板蓝根片的质量控制测量。
[关键词]板蓝根片;靛定红;氨基酸薄层色谱[中图分类号]R961 [文献标识码]A [文章编号]1008-2867(2000)04-0060-02 板蓝根片由板蓝根一味药材经加工制成。
具有清热解毒的功用,临床广泛用于流感、腮腺炎、乙脑、肝炎等多种疾病的治疗。
《中国药典》1990年版收载了板蓝根颗粒,1995年版仍有收藏,但其质量标准中既无薄层鉴别,也无含量测定项。
为了有效的控制产品质量,我们依据板蓝根的化学成分,应用薄层色谱法鉴别其脂溶性成分靛玉红和水溶性成分氨基酸,并进行了含氮量的测定。
1 鉴别氨基酸1.1 试液L-精氨酸对照品(卫生部生物制品鉴定所);对照材料:板蓝根片(自制,每片相当于原药材110g);薄层层析硅胶G(中国海洋化工集团公司);茚三酮试液;正丁醇、冰醋酸均为分析纯。
1.2 方法1.2.1 供试品溶液的制备:取本品5片,研细,称取2g,加乙醇20ml,回流1h,滤过,滤液蒸干,残渣加水10ml溶解,加入015g活性炭,加热回流20min,滤过,滤液蒸干,残渣加入60%乙醇10ml溶解,作为供试品溶液。
1.2.2 对照品溶液的制备:取L—精氨酸对照品加60%乙醇制成每1ml含0.1mg的溶液,作为对照品溶液。
1.2.3 对照药材溶液的制备:取对照药材粉末2g,照“1,2,1供试品溶液的制备”项下操作,制备对照药材溶液。
1.2.4 阴性对照溶液的制备:按处方比例取各种辅料混匀,照“1,2,1供试品溶液的制备”项下操作,制备阴性对照溶液。
1.2.5 鉴别试验:照薄层色谱法(中国药典,1995年版,一部,附录ⅥB)试验,吸取上述四种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以正丁醇—冰醋酸—水(3∶1∶1)为展开剂,展开,取出,晾干。
板蓝根化学成分中表告依春提取工艺的研究
毫 升 的表 告 依 春 储 备 液 待 用 。 色 谱 柱 检 测 波 长 为 ２ ４ ５纳 米 ； 流 动相用 的配方 为水 ： 乙腈 ： 磷酸 ： 三 乙 胺 ＝ ９ ０ ． ７ ２： ８ ． ５ ０： ０ ． ７ ３： ０ ． ０ ５ ， 流 速保 持在 １ ． ０ １ ． ２毫
是６ ０ ０ ０ Ｄ超滤膜 ， 超滤次数为 ３ 次， 提取液质量浓度
１ 材 料
板蓝根产 自黑龙江 ，表告依春对照品由中国药 品生物制品检定所提供 。
示， 随质量浓度的增大， 透过率减小 ， 最后变平稳 。这 是 因为药 液 浓度 与 粘度 同时增 大 ，使 药 液通 过 膜 界
面时受 到 的阻力 增 大 ， 进 而透 过通 量 减小 ， 药液 透 过 率减小 。同 时 ， 增大 药液 浓度 ， 溶 质沉 积在膜表 面 ， 阻
率 变高 。同 时 ， 逐 步 升 高 的温度 减 缓 了浓 差极 化 ， 降 低 膜污 染程度 。 使 膜 的阻塞程 度 降低 。根 据制 造商 提
品溶液 ， 分别注入到高效液相色谱仪中进样分析。以 对照品的浓度为横坐标 ， 纵坐标为峰面积 ， 得到表告 依春的回归方程 为 Ｙ ＝ ８ ４ ２ ０ ７ Ｘ ＋ １ ４ ３ １（ Ｒ ： ０ ． ９ ９ ９ ９ ） 。
板 蓝 根 主产 于北 京 、 河 北省 、 黑龙 江 省 、 江苏 省 、
转／ 分钟 离 心 ， 时间 １ ０分 钟 ， 所 得离 心液 备用 。 超 滤 次数对 表 告 依 春保 留率 的影 响 。试 验 条件 是６ ０ ０ ０ Ｄ超 滤膜 ， 药 液浓 度 １ ６ ． ０毫克 ／ 毫升 ， 压 力保 持在 ０ ． ７ ９兆 帕 ， 温 度保 持 在 ４ ０ ￣ Ｃ。根 据试 验 结果 显 示 ，随着 超滤 次 数 的增 加 ，表 告依 春 透 过率 逐 渐升 高 。因为超 滤第 二 、 三、 四次时 ， 加人 与药 液 同等 体积 的蒸馏 水进 行 蒸馏 ， 这种 做法 使 药 液浓 度 降低 ， 药 液
基于生物热动力学分析的板蓝根抑菌效价检测方法的建立
板 蓝根对 金黄色 葡 萄球 菌 作 用 的生 长 代谢 热 曲线 ，
酸 二氢钾 和 磷酸氢 二 钾 等试 剂均 为分 析纯 （ 京 化 北 学 试剂 公司 ） 板蓝 根药 材 样 品均 系 原产 地 采 集 ， ； 经
版 ） 写大 纲 明确 提 出 ： 中药 的质 量标 准 要逐 步 由 编 “
单一 指标成 分定性 定 量 测定 ， 活性 有 效 成分 及 生 向
用、 经济 ” 的原则 。本 文 采 用生 物 热动 力 学 方 法 ， 以 金 黄色葡 萄球 菌为 工作 菌 ， 生 物 热 活性 检 测 角 度 从 初 步建立 了中药生 物效 价 方 法 ， 将 其 运用 于板 蓝 并 根 生物效 价检 测 ， 为更 好 地评 价 中药 质 量 提供 了新
ｍｅ ｔ ｏ ｉｌｇｃ ｌ ｏｅ ｃ ｅｅ ｔ ｎ Ｔ ｅ ｃ ａ ａ ｔｒｓ ｃ ｉｆ ｒ ｔ ｎ ｏ ｉｌｇ ｃ ｌｔ ｅ ｍｏ ｙ ａ ｃ ｒ ｓ ｎｅ ｎ ｓ ｆ ｏｏ ｉａ ｔ ｎ ｙ ｄ ｔｃｉ ． ｈ ｈ ｃ ｅ ｔ ｎ ｏｍａｉ ｆｂ ｏｏ ｉａ ｈ ｒ ｄ ｎ ｍｉ ｓ ｐ ｅ ｅ ｔｄ ａ ｂ ｐ ｏ ｒ ｉ ｉ ｏ
・ 溶 浓度 的溶液 ， ｍＬ 按药 典 管碟 法操 作 规 程进 行 操作 ， 精密 吸取 上 述各 浓 度 的板 蓝 根溶 液 ０ ３ｍ ． Ｌ， 按管碟 法操 作规 程操 作 ， 个 浓度 工 作 标 注 品溶 每 液重 复 ８次 ， 录各管碟 抑 菌圈直径 ， 以磷酸盐 缓 记 并 冲液 （ Ｈ： ． ） ｐ ７ ８ 为空 白对照 。 ６ 数据 处理 ： 用 Ｏｉｉ 计 分析 软件 进 行 运 ． 运 ｒ ｎ统 ｇ 算。板蓝根生物效价检测用 中国药典生物检定统 计软件进行统计分析。
板蓝根化学成分及质量控制研究的开题报告
板蓝根化学成分及质量控制研究的开题报告一、研究背景板蓝根是我国传统中药中的一种重要药材，具有清热解毒、抗病毒、抗菌、抗氧化等多种药理作用。
目前，板蓝根已经被广泛应用于临床各种病症的治疗和预防，如感冒、病毒性肝炎、流感等。
在板蓝根的化学成分研究中，已经发现具有药理作用的主要成分为环烯醇二萜类、黄酮类等。
对于板蓝根化学成分及其质量控制的研究，不仅是临床应用的重要基础，也是进一步推广板蓝根的重要保障。
因此，本次课题选取了板蓝根的化学成分及其质量控制研究为研究主题，旨在全面深入地了解板蓝根的化学成分及其质量控制研究现状，为板蓝根的临床应用提供有力的支撑和保障。
二、研究目的和内容本次研究的目的是深入研究板蓝根的化学成分及其质量控制方法，为板蓝根的临床应用提供科学依据和保障。
具体研究内容如下：1. 建立板蓝根的质量控制方法，包括外观、气味、含水量、灰分、总酚等指标的测定方法。
2. 提取并分离板蓝根中的主要化学成分，包括环烯醇二萜类、黄酮类等，通过色谱、质谱等方法对其结构进行鉴定。
3. 研究板蓝根不同产地、不同时期的化学成分和质量变化规律，分析其影响因素。
4. 对板蓝根的药理作用进行研究，探究其与化学成分之间的关系。
5. 设计实验验证板蓝根提取物的抗病毒、抗菌、抗氧化等药理活性。
三、研究方法1. 实验材料：选取不同产地的板蓝根，按不同的季节采集，进行实验。
2. 质量控制方法的建立：通过不同的实验方法，测定板蓝根不同指标的含量，并建立合理的质量控制方法。
3. 主要化学成分的提取和分离：采用不同的提取方法获取板蓝根中的主要化学成分，并采用色谱、质谱等方法对其进行鉴定。
4. 化学成分和质量变化规律的研究：采用不同的实验方法，对板蓝根不同产地、不同时期的化学成分和质量进行分析研究。
5. 药理学实验：对板蓝根提取物的药理活性进行研究，包括抗病毒、抗菌、抗氧化等指标。
四、预期研究结果1. 建立板蓝根的质量控制方法，为板蓝根生产和应用提供重要指导意义。
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中药品质的优劣是保证临床用药有效性和安全 性的重要前提 。然而 ,由于中药本身的复杂性 、研究 技术条件的制约以及研究思路的局限 ,现行的主要 基于指标成分化学分析的中药品质评价模式和方 法 ,与疗效的好坏无直接关联 ,难以客观 、准确地评 价中药的 品 质 〔1〕。为 了 寻 求 中 药 品 质 评 价 方 法 的 新突破 ,笔者所在课题组尝试从生物活性的角度评 价中药的品质 。本文以临床常用但品质评价方法薄 弱的板蓝根为研究对象 ,探索建立基于生物热活性
大 肠 杆 菌 菌 株 ( Escherich ia coli CCTCC AB91112) 、BALB / c小鼠 (雄性 , 6～8周 ,体重 20 ±2 g)购于中国药品生物制品检定所 。Hela细胞系 、流 行性腮腺炎病毒由解放军传染病研究所病毒室貌盼 勇馈赠 。
所用板蓝根药材样品由解放军三〇二医院全军 中药研究所肖小河研究员鉴定为菘蓝的干燥根 ,经 检验均符合 2005 年版中国药典一部要求 。药材来 源和商品等级见表 1。板蓝根传统用法为水煎煮 , 但在体外试验中需对样品适当处理才能体现出药理 活性 。根据笔者先前的研究〔325〕,水提物经乙酸乙酯 萃取后抗菌 、抗病毒活性较好 ,而水提物不需处理即 可表现出较好的免疫促进活性 。因此 ,本文中板蓝 根样品首先水煎煮 3次 (加水量分别为药材重量的 10、10、8倍 ,各提取 115、110、015 h) ,趁热滤过 ,合 并滤液 ,减压浓缩 ,真空干燥即得板蓝根水提物 ;板 蓝根水提液适当浓缩后用等倍量的乙酸乙酯萃取 3 次 ,合并萃取液 ,减压浓缩除去溶剂 ,真空干燥即得 板蓝根乙酸乙酯提取物 。 2 方法 211 板蓝根中有机酸和多糖含量测定方法 〔6、7〕 将板蓝根乙酸乙酯提取物加适量乙醇溶解 ,滤过 ,滤 液加至已预处理好的大孔吸附树脂柱 (干膏和树脂 的比例为 1∶15)上脱色 ,用水洗至洗脱液无色 ,换用 60%乙醇洗至水杨酸检识为阴性 ,合并中间洗脱液 , 减压浓缩得流浸膏 ,真空干燥备用 。精密称取上述 干燥物 014 g,置 50 m l锥形瓶中 ,无水乙醇溶解 ,加 入酚酞指示剂 2滴 ,用邻苯二甲酸氢钾标定过的氢
表达的中药板蓝根品质评价研究模式和方法 。 板蓝根为十字花科植物菘蓝 ( Isa tis ind igotica
Fort1)的干燥根 , 性味苦寒 , 是常用的清热解毒中 药 。现代研究表明其具有抑菌 、抗细菌内毒素 、抗病 毒 、解热抗炎 、提高机体免疫力的作用〔2〕。现行药 典对板蓝根的品质评价和控制是以精氨酸为指标 , 既不是特异性的成分 (不能鉴别真伪 ) ,也不是有效 成分 (不能体现疗效好坏 ) ,因此无法评价板蓝根药 材的品质 。本文从抑菌 、抗病毒和免疫促进三个方
2 1134 2911
7 北京燕北饮片厂
060916 2 1119 3115
河北 祁 新 中 药 颗 粒
8 饮片有限公司
060701
2
1108 3419
9
安国 市 光 明 饮 片 加 工厂
060809
3
1106 3418
10
甘肃省陇南市 (成都 五块石药材市场 )
3 1111 3016
3 本文参照卫生部制定的药材商品规格标准 ,将板蓝根划分为 三个品质等级 。一等 :芦头下 2 cm 处直径达到 1 cm 以上 ,无苗茎 、 须根 、杂质 、虫蛀及霉变 ;二等 :芦头下 2 cm 处直径 015 ～1 cm ,截面 呈粉性 ,其它同一等标准 ;三等 :截面呈柴性 ,其它同二等标准 。
L1B1培养基 (北京三药科技开发公司 ) ; DM EM 培养基 (美国 Sigma公司 ) ;胎牛血清 (美国 Hyclone 公司 ) ; 96孔培养板 、0122μm 滤器 (美国 Corning公 司 ) ;二甲基亚砜 (DM SO ) 、噻唑蓝 (M TT)购于北京 北实纵横科技公司 ; D 2101大孔吸附树脂 (南开大学 化工厂 ) 。乙腈为色谱纯 ,水为高纯水 ,甲醇 、乙醇 、 乙酸乙酯 、盐酸 、硫酸 、磷酸 、三氯乙酸 、氢氧化钠 、邻 苯二甲酸氢钾 、酚酞 、苯酚 、水杨酸 、苯甲酸 、葡萄糖 等均为分析纯 。
·制剂与质量 ·
基于生物热活性表达的中药板蓝根品质评价研究
赵艳玲 ,山丽梅 ,金 城 ,周 旭 ,肖小河 3 (解放军第三〇二医院全军中药研究所 ,北京 100039)
摘要 目的 :建立基于生物热活性表达的中药板蓝根品质评价研究模式和方法 。方法 :分别采用常规化学方法 和生物热动力学方法分析不同板蓝根的化学差异及作用于细菌 、病毒和免疫细胞的生物热活性差异 ,比较化学方 法和生物方法表达板蓝根品质的异同 ,并应用计算机模式识别技术建立品质评价数学模型 。结果 :板蓝根中有机 酸 、多糖含量与品质有一定的相关性 ,但含量 +化学指纹图谱的方法难以准确区分不同品质的板蓝根样品 ;而基于 4个主要生物热活参数建立的数学模型可以较好的判断板蓝根的品质 ,误判率仅为 1139%。结论 :本文建立的基 于生物热活性表达的板蓝根品质评价模型较常规化学方法更准确 、可靠 。
基金项目 :国家杰出青年基金 (30625042) ;国家中医药管理局基金 (04205ZP70) 3 通讯作者 :肖小河 。
·744·
中药材 Journal of Chinese M edicinal M aterials 第 31卷第 5期 2008年 5月
面综合研究板蓝根品质的生物活性评价模型 。 1 L )滴定至溶液变粉红色即为 终点 。总有机酸以水杨酸计 (每 1 m l氢氧化钠滴定 液相当于 91916 mg的水杨酸 ) 。
表 1 板蓝根样品来源 、等级及含量分析结果
样品
来源
批号
商品 等级 3
有机酸 含量
(%)
多糖 含量
(%)
1
北京 绿 野 药 业 有 限 公司
TAM A ir微量热仪 (瑞典 Thermom etric 公司 ) ; ZS23板式酶标仪 (北京航新公司 ) ; CO2 孵箱 (美国 NAPCO 公 司 ) ; Agilent 1100 型 高 效 液 相 色 谱 仪 , DAD 检测器 , HP Chem station色谱工作站 (美国 Agi2 lent公司 ) ; SENCOR502B 型旋转蒸发仪 (上海申生 科技有限公司 ) 。
将板蓝根水提物加适量水溶解 ,滤过 ,加入乙醇 至含醇量为 80% ,静置 12 h,滤过 ,沉淀用乙醇洗 涤 , 60℃真 空干 燥备 用 。精 密称 取上 述 干 燥 物 2 mg,置 50 m l量瓶中加水溶解并稀释至刻度 ,精密量 取 2 m l, 置具塞试管中 , 分别加入 4%苯酚溶液 1 m l,混匀 ,迅速加入硫酸 710 m l,摇匀 ,于沸水浴中保 温 15 m in,取出 ,置冰水浴 5 m in,取出 ,在 490 nm 处 测定吸收度 ,扣除空白 ,以标准曲线法计算含量 (以 葡萄 糖 计 ) 。葡 萄 糖 标 准 曲 线 为 : Y = 01003 + 161217X, r = 019996。 212 板蓝根化学指纹图谱的建立〔8、9〕 板蓝根水 提物的 HPLC 指纹图谱建立方法同文献 。色谱条 件 :色 谱 柱 为 Kromasil C18 分 析 柱 ( 250 mm ×416 mm , 5μm ) ;检测波长 222 nm;流速 115 m l/m in;柱 温为室温 ;流动相 : A 相为 011%磷酸水溶液 , B 相为 乙腈 ,线形梯度洗脱 , 0 ～10 m in保持 V (A ) ∶V (B )
( PLA Institute of Chinese M ateria M edica, 302 Hosp ital of PLA , Beijing 100039, China) Abstract Objective: To establish a novel pattern and method to evaluate the quality of Radix Isatis based on analysis of biother2 m ic activity1 M ethods: Chem ical and biothermodynam ic methods were used and compared to investigate the quality of different Radix Isatis samp les1 And a mathematic model was established by computer aided pattern recognition to evaluate the quality of Radix Isatis1 Results: The quality of Radix Isatis was partially related to the content of organic acids and polycose, but it could not be correctly rec2 ognized by both chem ical determ ination and HPLC fingerp rint1 On the other hand, the mathematic model based on the main four pa2 rameters of biothermodynam ic analysis was very correct (m isjudgment ratio of 1139% ) to recognize the quality of Radix Isatis1 Conclu2 sion: The established model in this paper based on analysis of biotherm ic activity is more accurate and reliable than that of chem ical methods to evaluate the quality of Radix Isatis1 Key words Radix Isatis; Quality evaluation; M athematic model; B iothermodynam ics; Chem ical fingerp rint