荧光显微镜的基本使用方法
实验二 荧光显微镜的基本使用方法
实验二荧光显微镜的基本使用方法荧光显微术是在细胞或组织水平上对生物大分子进行定位和动态观察的最常用的实验方法。
它广泛地应用于核酸、蛋白质、细胞器、细胞骨架、激素、离子等多种细胞结构或物质的定位和功能分析。
很多生命科学的研究工作都需要频繁地使用荧光显微镜。
比如，采用荧光探针的原位分子杂交用于确定某个基因在组织中的表达或在染色体上的定位（Polak et al. 1999; Andreeff and Wiley-Liss 1999），绿色荧光蛋白基因（gfp）用于了解某个基因产物在组织和细胞中的特异性分布（Chalfie et al. 1994; Haseloff and Amos 1995）等等。
然而，在我们接触的一些低年级研究生中，一些同学并没有很好地掌握荧光显微镜的基本原理和使用方法。
他们拍摄的荧光显微照片往往不能满足国际性高水平学术刊物的要求。
这种状况既不利于科研效率的提高，也限制了研究成果的发表。
因此，了解荧光显微术中的一些基本原理和注意事项、掌握荧光显微镜的基本使用方法是非常重要和有意义的。
本实验讲解荧光显微镜的基本结构和使用方法。
要求学生通过细胞核、细胞质DNA的荧光显微显示以及转绿色荧光蛋白基因拟南芥根、茎、叶细胞的观察掌握荧光显微术的基本原理和注意事项，熟练掌握荧光显微镜的使用方法。
实验目的：1. 了解荧光显微镜的基本结构；2. 掌握荧光显微术的基本原理和注意事项；3. 掌握核酸的荧光显示技术，直观地认识细胞质DNA的存在；4. 了解绿色荧光蛋白（GFP）在蛋白质定位等研究中的应用，直观地认识GFP的荧光显微效果。
实验内容：1.荧光显微镜的基本原理和结构荧光显微镜的放大成像原理与普通透射光显微镜完全相同。
不同的是荧光显微镜需要另外的激发光光源和光路。
因此，只要加上激发光光源和光路，再换上允许激发光通过的目镜（荧光显微镜的目镜在透镜玻璃的材质上与普通透射光显微镜不同），一台普通的透射光显微镜就可以被升级成一台荧光显微镜了。
荧光显微镜操作说明书
荧光显微镜操作说明书欢迎使用我司生产的荧光显微镜。
为了能够准确并顺利地操作该设备，我们为您提供了以下的操作说明书。
请仔细阅读并按照步骤进行操作，以确保获得最佳的观察效果。
1. 安装与准备1.1 确保在操作荧光显微镜之前，您已经将其安放在一个平稳的台面上。
确保设备的底部有足够的空间，并保持周围环境整洁，避免灰尘、湿气和其他杂物对设备的影响。
1.2 使用专用的电源线将荧光显微镜连接到稳定的电源插座上。
1.3 确保荧光灯泡已正确安装，轻轻旋紧螺丝，使用调节凸轮进行灯泡亮度的调节。
2. 样本准备2.1 在操作荧光显微镜之前，准备好待观察的样本。
样本可以是细胞、组织切片、荧光染料等。
确保样本已经标记或染色，以与荧光显微镜的工作原理相符。
2.2 使用移液管将样本滴到盖玻片上，并轻轻覆盖一个玻璃片或载玻片。
确保样本层均匀薄且没有气泡。
3. 荧光显微镜操作步骤3.1 打开荧光显微镜的电源开关，并将放大倍数调至最低。
3.2 调节聚焦旋钮，使样本清晰地呈现在目镜中。
3.3 通过调节荧光滤光片，选择适当的荧光波长进行观察。
3.4 使用荧光显微镜配套的光源控制器来调节荧光灯的亮度。
3.5 通过调节眼PIE镜，使左右目镜成像重叠，获得清晰的三维像。
4. 荧光显微镜的功能与特点4.1 荧光显微镜具备普通显微镜的观察功能，同时能够通过荧光染色技术研究生物样本。
4.2 荧光显微镜的激发光源与观测光路相分离，可以有效地抑制杂散光的干扰，提高观测质量。
4.3 荧光显微镜配备多种滤光片和滤镜，可选择不同波长的激发光源和观测光源进行观察与记录。
4.4 荧光显微镜配备数字相机接口，可方便地连接到计算机进行图像采集和分析。
5. 注意事项5.1 使用前请仔细熟悉该设备的使用说明，并遵循安全操作规范。
5.2 操作荧光显微镜时，请注意保持实验环境的整洁和无尘，确保样本不受外界污染。
5.3 荧光显微镜操作结束后，将其电源开关关闭，并确保设备处于干燥通风的环境中。
荧光显微镜使用方法
荧光显微镜使用方法荧光显微镜是一种常用的生物学实验设备，广泛应用于细胞和组织的观察和分析。
它利用荧光染料标记的生物分子来实现对细胞结构和功能的研究。
本文将介绍荧光显微镜的使用方法，帮助您更好地进行实验操作。
首先，准备工作。
在使用荧光显微镜之前，需要对显微镜进行检查和准备。
检查显微镜的光源、镜头和滤光片是否干净完好，确保显微镜处于正常工作状态。
同时，准备好荧光染料和待观察的样本，并将样本制备在玻片上。
接下来，调整显微镜。
将玻片放置在显微镜的载物台上，通过调节镜头和焦距，使样本清晰地显示在视野中。
根据待观察的荧光染料的激发波长和发射波长，选择合适的滤光片，并将其安装在显微镜上。
调整光源的亮度和对比度，以获得清晰的荧光信号。
然后，观察样本。
通过调节镜头和焦距，将样本的不同部位移动到视野中心，并观察荧光信号的分布和强度。
可以通过改变放大倍数和调节对焦来获得更详细的观察。
同时，可以利用荧光显微镜的成像系统进行图像采集和记录，以便后续的分析和比较。
在观察过程中，需要注意保持样本和显微镜的稳定性，避免因为振动或移位导致观察结果的失真。
同时，注意调节光源的亮度和对比度，以避免过曝或欠曝的情况发生，影响观察结果的准确性。
最后，进行数据分析。
根据观察到的荧光信号，可以对样本的结构和功能进行分析和推断。
可以利用图像处理软件对采集到的图像进行处理和分析，提取出感兴趣的信息和参数。
同时，可以通过与其他实验结果的比较，验证和解释观察结果，从而得出科学结论。
总之，荧光显微镜是一种强大的生物学研究工具，正确的使用方法可以帮助我们获得准确的观察结果，并推动科学研究的进展。
希望本文介绍的使用方法能对您的实验工作有所帮助，祝您实验顺利，取得理想的结果！。
荧光显微镜使用方法和荧光显微镜操作规程
荧光显微镜使用方法和荧光显微镜操作规程荧光显微镜是中的一种。
关键字：荧光显微镜使用方法荧光显微镜操作规程荧光显微镜使用使用方法和荧光显微镜操作规程1. 用窗帘遮蔽光线，关闭房间内的灯光，除去显微镜的防尘罩，确保显微镜灯室通风良好、无遮盖。
装上汞灯灯箱，并转动灯箱卡圈上的拨杆，将灯箱与镜臂连接。
2. 将汞灯灯箱的电源插头插入荧光电源箱后的插座，再将荧光电源箱的插头插入220V外接电源。
3. 打开电源开关，电压表显示出电源电压，如电源电压波动不大于额定电压值的±5%，即可按下启动开关点燃汞灯，如因天气太冷或电压不稳定等原因，一次启动未点燃汞灯，可以多揿动几次。
待超高压汞灯弧光达到稳定状态并达到最大发光效率，即可开始工作。
4. 灯泡的调中：（1）任选一块标本放在载物台上.（2）转动镜臂上的聚光镜旋钮使聚光镜移出光路，转动滤色片组转换手轮，将紫光（Ｖ）或蓝光（Ｂ）或绿光（Ｇ）激发滤色片组转入光路，并将10×荧光物镜转入光路。
（3）调节粗微调手轮，将标本像调焦清晰。
（4）前后推动垂直照明器右边的聚光镜调焦推杆，使视场光栏成像清晰，转动视场光栏拨杆将视场光栏收小，调节视场光栏调中螺钉使视场光栏居中，然后再将视场光栏开至最大。
（5）转动镜臂上的聚光镜旋钮使聚光镜移入光路，前后调节灯箱上的聚光镜拨杆，使汞灯的弧光在视场内成像清晰。
（6）调整灯箱上的灯泡水平调节螺钉和垂直调节螺钉，使汞灯的弧光居中。
（7）调整反光镜水平调节螺钉和垂直调节螺钉，使光源的反射像与汞灯的弧光分开。
（8）转动聚光镜旋钮把聚光镜移出光路，此时视场照明均匀。
5. 荧光观察：（1）将荧光染色标本放到载物台上。
（2）将10×平场物镜或40×荧光物镜转入光路，调节载物台纵横移动手轮，将标本移入光路。
（3）转动滤光片转换拨轮，将荧光染色标本所需要的激发滤光片组转入光路。
激发滤光片组编号刻在滤片组转换拨轮上。
滤光片选择正确与否，是荧光显微镜能否得到正确应用的关键。
荧光显微镜的基本使用方法
荧光显微镜的工作原理
荧光显微镜通常由光源、滤 光片、物镜、目镜和荧光屏 等部分组成。
激发光通过物镜照射到样品 上，激发样品中的荧光物质 发出荧光。
光源发出特定波长的光，通 过滤光片过滤掉其他波长的 光，只留下激发光。
荧光通过物镜和目镜的放大 作用，在荧光屏上呈现样品 的图像。
荧光显微镜的应用领域
如果发现仪器工作异常，应及时维修或更换部件，以免影响 观察结果。
定期进行仪器保养与维护
荧光显微镜需要定期进行保养和维护，以确保其长期稳定运行。
保养和维护内容包括清洗物镜、校准光源、检查电路连接等，具体操作应根据仪器说明书进行。
谢谢观看
生物学
荧光显微镜在生物学研究中广 泛应用，如细胞形态学、细胞 分子生物学和生物医学成像等
。
医学
荧光显微镜在医学诊断和治疗 中发挥重要作用，如病理学诊 断、肿瘤标记和药物筛选等。
环境科学
荧光显微镜可用于环境监测和 污染控制等领域，如水体和土 壤中污染物的检测。
材料科学
荧光显微镜在材料科学中用于 研究材料的微观结构和性能， 如表面增强拉曼散射和光子晶
02
了解各种荧光染料的激发波长和发射波长，以便正 确选择合适的滤光片。
03
按照染料说明书进行配制和染色，注意控制浓度和 时间，避免过度染色或染色不足。
样本的制备与染色
01 根据实验目的选择合适的样本，如细胞、 组织切片等。
02
对样本进行预处理，如清洗、固定、脱水 等，以便更好地染色和观察。
03
采用适当的染色方法对样本进行染色，如 免疫荧光染色、核酸染色等。
02
将显微镜的载物台恢复原位， 清理现场。
03
对仪器进行日常维护和保养， 确保仪器性能稳定和延长使用 寿命。
荧光显微镜使用方法和荧光显微镜操作规程【可编辑范本】
发布时间：２011－06—15荧光显微镜使用方法和荧光显微镜操作规程荧光显微镜是光学显微镜中的一种。
ﻫ关键字：荧光显微镜使用方法ﻫ荧光显微镜操作规程荧光显微镜使用荧光显微镜使用方法和荧光显微镜操作规程1 ﻫ。
用窗帘遮蔽光线，关闭房间内的灯光,除去显微镜的防尘罩,确保显微镜灯室通风良好、无遮盖。
装上汞灯灯箱,并转动灯箱卡圈上的拨杆，将灯箱与镜臂连接。
2。
将汞灯灯箱的电源插头插入荧光电源箱后的插座，再将荧光电源箱的插头插入22０Ｖ外接电源.3．打开电源开关,电压表显示出电源电压,如电源电压波动不大于额定电压值的±5%,即可按下启动开关点燃汞灯，如因天气太冷或电压不稳定等原因,一次启动未点燃汞灯，可以多揿动几次。
待超高压汞灯弧光达到稳定状态并达到最大发光效率，即可开始工作。
ﻫ 4. 灯泡的调中:（1）任选一块标本放在载物台上。
ﻫ(2)转动镜臂上的聚光镜旋钮使聚光镜移出光路,转动滤色片组转换手轮,将紫光（Ｖ)或蓝光(B)或绿光(G)激发滤色片组转入光路,并将1０×荧光物镜转入光路。
（３)调节粗微调手轮,将标本像调焦清晰。
(4）前后推动垂直照明器右边的聚光镜调焦推杆,使视场光栏成像清晰,转动视场光栏拨杆将视场光栏收小，调节视场光栏调中螺钉使视场光栏居中，然后再将视场光栏开至最大。
ﻫ(５)转动镜臂上的聚光镜旋钮使聚光镜移入光路,前后调节灯箱上的聚光镜拨杆,使汞7）调整反光镜水平(灯的弧光在视场内成像清晰。
ﻫ(６)调整灯箱上的灯泡水平调节螺钉和垂直调节螺钉,使汞灯的弧光居中。
ﻫ调节螺钉和垂直调节螺钉，使光源的反射像与汞灯的弧光分开。
5。
荧光观察：ﻫ(1）将荧光染色标本放到载物台上。
ﻫ(2)(8)转动聚光镜旋钮把聚光镜移出光路,此时视场照明均匀。
ﻫ将10×平场物镜或40×荧光物镜转入光路,调节载物台纵横移动手轮,将标本移入光路。
（3)转动滤光片转换拨轮，将荧光染色标本所需要的激发滤光片组转入光路。
荧光显微镜使用方法
荧光显微镜使用方法荧光显微镜是一种广泛应用于生物学、医学和材料科学等领域的高级显微镜。
它通过激发样品中的荧光染料，使其发出可见光，从而观察和分析样品的细胞结构、蛋白质分布和荧光标记等信息。
本文将介绍荧光显微镜的使用方法，希望能够帮助您更好地进行实验和研究。
1. 样品准备。
在使用荧光显微镜之前，首先需要准备样品。
样品的准备工作包括固定、染色和装片等步骤。
在固定样品时，需要选择合适的固定液和固定时间，以保持样品的形态和结构。
染色是为了使样品中的特定成分能够发出荧光，常用的染色剂包括DAPI、FITC和TRITC 等。
在装片时，需要将样品放置在载玻片上，并加入适量的缓冲液，然后覆盖一张封片玻片。
2. 仪器准备。
在进行荧光显微镜观察之前，需要对显微镜进行适当的准备工作。
首先需要打开显微镜的电源，并调节亮度和对比度，使样品能够清晰可见。
然后需要选择合适的物镜和滤光片，以获得所需的放大倍数和荧光波长。
在使用荧光显微镜时，需要注意避免光源直射样品，以免损坏荧光染料和样品。
3. 观察操作。
在进行荧光显微镜观察时，需要注意以下几点操作。
首先，需要将装有样品的载玻片放置在显微镜的载物台上，并通过调节焦距和聚焦，使样品清晰可见。
然后需要选择合适的荧光滤光片，以滤除非荧光信号，并选择合适的荧光波长，以激发样品中的荧光染料。
在观察过程中，需要避免长时间曝光样品，以免造成荧光淬灭和伤害样品。
4. 数据分析。
在观察完样品后，需要对所获得的荧光图像进行数据分析。
首先需要对荧光图像进行采集和保存，并根据实验需要进行图像处理和分析。
常用的图像处理软件包括ImageJ、Adobe Photoshop和MetaMorph等。
在进行数据分析时，需要注意选择合适的分析方法和工具，以获得准确的实验结果。
总结。
荧光显微镜作为一种高级显微镜，广泛应用于生物学、医学和材料科学等领域。
在使用荧光显微镜时，需要注意样品的准备、仪器的准备、观察操作和数据分析等步骤，以获得准确的实验结果。
2.荧光显微镜的使用方法与注意事项
荧光显微镜的使用方法与注意事项1、打开显微镜电源。
2、需要使用荧光才开启荧光光源，开启汞灯需要记录打开和关闭的时间。
提示：两次开启汞灯的时间必须间隔半小时以上，打开汞灯后，必须半小时后方可关闭。
3、擦拭镜头：擦拭目镜和物镜。
在长纤维脱脂棉签顶端蘸上无水乙醇，从中央部分开始，采用螺旋渐进的方式轻轻逐步擦到边缘。
提示：①无需经常将物镜/目镜拆下来清理擦拭，日常使用时仅需用脱脂棉签及擦镜纸配合无水乙醇擦去油污即可，只有遇到顽固污渍时才应将物镜拆卸清理。
擦拭镜头时，动作应轻柔，不能过于用力，以避免损坏镀膜层。
②留意擦镜纸的两个面，纹路是不同的：其中一面是粗糙的，另一面更光滑些，要使用更光滑的那一面来清洁。
一般不建议用干的擦镜纸直接擦拭，同样可能划伤镜头。
4、放置样本，正置显微镜将样本放至物镜下方，倒置显微镜将样本放至物镜上方。
提示：显微镜样本一定要保持干净，如有盖片样本，一定要干净干燥，以免样本上的试剂污染物镜。
免疫荧光染色用抗荧光淬灭剂封片。
HE染色、免疫组织化学染色、高尔基染色等用中性树脂封片。
5、选择适合于自己实验的物镜放大倍数，由低到高进行观察。
6、选取实验相应方案，如光强，shutter，明场/DIC等。
切换滤光片，将荧光染色标本所需的激发滤光片组转入光路。
提示：选择与荧光染色标本相应滤色块。
如UV——DAPI，hochest等（镜下观察为蓝色）；蓝光——FITC，Alex488等（镜下观察为绿色）；绿光——Alex555，Cy3等（镜下观察为红色）。
7、实验结束，关闭电源。
提示：①显微镜使用过程中，镜体、灯箱及电源等位置应无遮挡或覆盖，以免影响散热从而损耗显微镜寿命。
显微镜使用完后，等灯箱部分冷却后，再盖上防尘罩。
②显微镜包含很多光学部件，避免显微镜碰撞，以保护光学系统。
显微镜属精密仪器，如需搬动，拆修，请联系专业人员。
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荧光显微镜的基本使用方法
实验目的
1. 了解荧光显微镜的基本原理； 2. 掌握荧光显微镜的基本结构和 使用注意事项；
自发性荧光物质
• 神经细胞和心肌细胞等内的脂褐素呈棕黄色荧光。 • 肝贮脂细胞和视网膜色素上皮细胞内的维生素A呈 绿色荧光。 • 某些神经内分泌细胞和神经纤维内的单胺类物质 （儿茶酚胺、5－羟色胺、组胺等）在甲醛作用下 呈不同颜色的荧光。 • 组织内含有的奎宁、四环素等药物也呈现一定的 荧光。 • 嗜中性粒细胞中脱氢酶辅酶呈现一定的荧光。
1、 该镜可作为明视场显微镜使用，也可作为荧光 显微镜使用，根据需要，做相应的附件连接，开启 相应的电源。禁止乱调设置，以免影响他人正常使 用。
2、 作为明视场显微镜使用；A、接通电源后，打开 显微镜底座前的电源开关，按光亮需要调节底座右 侧的滑竿。B、根据需要，调节底座光栅和聚光器 光栅及其高度，可获得最佳的图象效果。C、需要 图片，要把镜体上的相应拉杆拉到绿线位子。按下 相应附件上的照相按扭。
根（显示 叶绿体）
叶片
线粒体GFP转基因拟南芥
注意事项
激发光挡片的使用----减少淬灭
注意事项
• 荧光的淬灭与激发光的照射时间成正比，因此应尽 量减少观察时间外激发光对样品的照射。激发光挡 片可以部分或完全阻断激发光光路。在正式观察样 品之前，激发光光路应该处于完全阻断状态。否则， 在我们将样品放到载物台上，移动样品台将样品调 整到物镜位置，找到要观察的细胞并进行调焦的过 程中，样品上的荧光可能已经发生了相当程度的淬 灭。为了避免观察前不必要的淬灭，上述一系列操 作需要在透射光源下进行。 • 当眼睛离开物镜进行记录或将显微镜交给合作实验 者观察时，要随手阻断激发光光路。实践结果表明， 熟练、规范和合理的观察操作可以将样品淬灭对观 察和记录造成的影响降低到最小限度。 • 荧光信号的淬灭还与激发光的强度成正比。因此， 在可以观察到荧光信号的情况下，应该尽量降低激 发光的强度。这样做还有利于降低背景。
NOTES
1. The inside of the ultrahigh-pressure mercury burner is very hot and hazardous during lighting and for about 10 minutes after turning off. Do not open the lamp housing in this period. The mercury burner has a service life period of 200 hours (USH102D) or 300 hours (HBD103W/2). When the hour counter on the power supply unit indicates this value, set the main switch to “O ” (OFF) and wait for more than 10 minutes before replacing the mercury burner. Unlike electric bulbs, the mercury burner seals high-pressure gas inside. If it continues to be used after the service life has expired, the glass tube may eventually explode due to accumulated distortion.
激发滤色块
六孔激发块转盘
多用途型BX-RFA(适合多种科研要求)及通用型BX-URA2。可同时使用6种荧光 激发块， “轻拨式”激发块转换功能，使不同荧光激发之间的迅速转换非常方 便，并可消除震动，有利于复染样品的荧光观察。激发块标识在暗室环境中发 光，在暗室中也能很容易地选择需要的荧光激发块。另外，根据需要还可以选 择6孔滤色片滑块(U-RSL6/U-RSL6EM)安放激发滤色片和发射滤色片进行荧光 观察。
激发光源
• 高压汞灯拥有313, 337, 365, 405, 436, 546, and 577 纳米的峰值谱。高压 Xenon灯有连续的可见光光 谱范围, 光源强度比较平均。
汞灯光谱
激发滤色块ห้องสมุดไป่ตู้
• 具有多套激发滤色块：激发滤色镜（Excitation Filter），分 光镜（Dichromatic Mirror），发射滤色镜（Emission Filter）。
ÓÓÓ DAPI AMC A Hoe ch st 33258 FITC Acri di n e O ran ge Acri di n e Ye l l ow C Y3 TRITC Propi di u m Iodi de
¤· Ó ÓÓ ¨Ó ¤ · ¢ É ä ² ¨³ ¤ 372 350 365 490 490 470 552 541 530 456 450 465 520 590 550 565 572 615
3、 作为荧光显微镜使用；A、先关闭荧光通道，再 打开荧光激发器电源，等待15分钟。B、等待期间， 打开显微镜光源，找到需要观察的样品，选用合适 的物镜，调整焦距。C、关闭显微镜光源，打开荧 光通道。D、需要图片，要把镜体上的相应拉杆拉 到绿线位子。按下相应附件上的照相按扭。
细胞核与细胞质DNA的直接荧光染色
荧光显微镜的优点和用途
优点： 检出能力高 对细胞的刺激小 能进行多重染色 用途： 物体构造的观察 荧光的有无、色调比较进行物质判别 发荧光量的测定对物质定性、定量分析
实验原理
激发滤色镜 光源
发射滤色镜 （阻挡滤片）
分色镜
实验原理
荧光显微镜的光路及主要部件
光源 激发光挡片 激发滤色镜 分色镜 发射滤色镜
2.
思考题
1．根据你的观察，荧光显微镜和光学显微镜 除了使用同一个机架以外，还共用哪些部 件？ 2．一台高质量的荧光显微镜在要求荧光信号 充分明亮的同时，还需要没有信号的视野 充分黑暗。请问视野的黑暗是怎样实现的？ 3. 你在实验中观察叶绿体用的绿色激发光还 是蓝色激发光效果比较好？说明其中的原 因。
Microscopes with an upright-style frame are capable of producing fluorescence illumination either through episcopic or diascopic optical pathways, although the latter is rarely used today. Epi-illuminators usually consist of a mercury or xenon lamphouse coupled to a vertical illuminator that is positioned above the main frame in a separate assembly. The microscope nosepiece and transmitted light components (diascopic illuminator, condenser, field diaphragm, filters, etc.) are built into the main frame, while fluorescence components are housed in the vertical illuminator. These illuminators often contain a revolving or sliding turret that houses four to six "cubes" that contain a mixture of interference filters including a barrier filter, dichroic mirror, and an excitation filter. As illustrated above, light emitted from the lamp positioned in the episcopic lamphouse passes through a collector lens and then the field and aperture diaphragms before entering the first interference filter in the cube set, the emission filter. This light is then directed through the objective and onto the specimen by a special dichroic mirror that reflects certain wavelengths while passing others. Secondary fluorescence, emitted by fluorophores residing in the specimen, travels back through the objective and the dichroic mirror before passing through a barrier filter and into the microscope eyepieces or camera system.
BX51 在镜基上装有3个滤色 片（ND6，ND25，LBD）， 另外，还可以选装第四个。 镜基侧面的拉杆可以很容易 地插入/取出滤色镜。
Specimen color fading can be delayed by reducing the excitation light intensity with ND filters. Use the ND filters as far as they do not hinder observations. Insert the ND filters (U25ND6 and/or U-25ND25) with the marked side facing toward the observer.