葫芦素 E诱导刚地弓形虫从宿主细胞逸出的观测

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2019级本护实验八疟原虫、刚地弓形虫ppt

女性：阴道、尿道等，以阴道后穹窿多见男性：尿道、前列腺、精囊等
阴道毛滴虫形态
椭圆形或梨形体长30µm×（10～15） µm 前端有4根前鞭毛后端有1根后鞭毛椭圆形的泡状细胞核轴柱由前向后纵贯虫体
滋养体
二、刚地弓形虫
生活史要点
1.感染阶段：卵囊、包囊、假包囊、滋养体。 2.寄生部位：所有有核细胞，特别是脑、淋
晚上班测试时间
实验室
实验室
一、五
15:00-15:20
五
19:00-19:20
二、六
15:20-15:40
六
19:20-19:40
三、七
15:40-16:00
七
19:40-20:00
四、八
16:00-16:20
八
20:00-20:20
评教
基础医学院病原生物学与免疫学教研室
巴结、肌肉、心、肝、肺等。 3.中间宿主：除人外，140多种哺乳动物，鸟
类，鱼类。 4. 猫既是终宿主，也是中间宿主。
5.感染方式： A. 猫粪中卵囊污染食物、水源； B. 食入动物肉类（猪、羊、牛）中包囊、假包囊； C. 孕妇体内的假包囊中的速殖子随血流经胎盘传给胎儿； D. 滋养体经伤口感染。
2）染色：待血膜干燥后，滴加A液（约1-2滴）布满血膜，染色约1min；再滴加B液
（2-4滴），两液充分混合，染色3-10 min。
3）冲洗：用蒸馏水轻轻冲去染液，竖直待干后镜检。
3. 观察
A 红细胞 B 、H 淋巴细胞 C 、E、I 中性粒细胞 D 嗜酸性粒细胞 F 单核细胞 G 血小板 J 嗜碱性粒细胞
刚地弓形虫形态
滋养体
（速殖子和缓殖子）
香蕉形或半月形一端较尖一端钝圆胞浆蓝色胞核紫红色，位于虫体中央

弓形虫TgHlyⅢ蛋白诱导虫体从宿主细胞逸出

网络出版时间：2019 -1 -317:25 网络出版地址:http://k n s. cnki. net/kcm s/detail/34.1065. r.20181230.1809.003. html 弓形虫rgHly-m蛋白诱导虫体从宿主细胞逸出张倩'金郁\姚湧\计永胜\汪学龙1摘要目的检测外源性弓形虫三型溶血素（7^Hly-m)蛋白诱导弓形虫逸出的效果和分子机制。

方法通过在线软件预测rgHiy-in的功能与结构，外源表达rgffly-皿蛋白，并用其孵育感染弓形虫的宿主细胞，用流式细胞仪在不同时间点检测逸出虫体数目；用免疫印迹检测宿主细胞凋亡相关蛋白的表达水平;用不同阻断剂阻断虫体钙离子、运动能力和细胞凋亡、程序性坏死通路，检测7^ffly-m诱导虫体逸出效果。

结果rgHiy-m在序列上具有较高的保守性，具有膜穿孔功能;外源表达的7>Hly-m可有效诱导弓形虫从宿主细胞逸出，并且此种逸出依赖于虫体内钙离子和虫体的运动能力;阻断宿主细胞凋亡途径后,rgffly-m诱导虫体逸出效率显著降低，并且7kHly-ni孵育可以提高宿主细胞凋亡相关蛋白Bax的表达和JNK、p38的磷酸化水平。

结论rgHly-lE 可以通过细胞凋亡途径诱导虫体从宿主细胞逸出，这类逸出与虫体钙离子和运动能力有关。

关键词弓形虫;三型溶血素蛋白;逸出;细胞凋亡中图分类号R382.5文献标志码A文章编号1000-1492(2019)01 -0010-05 doi：10.19405/ki.issnlOOO- 1492.2019.01.003刚地弓形虫（JbicopZasma gwwiii)是一■种细胞内寄生原虫，世界人群的隐性感染率约为30%[1]。

弓形虫逸出时破碎宿主细胞是虫体损伤机体的主要原因。

课题组在弓形虫基因组（/ toxo/)中发现一个与细菌三型溶血素（Hemolysin III)同源的弓形虫三型溶血素（r g H l y-M)基因。

刚地弓形虫速殖子名词解释

刚地弓形虫速殖子名词解释
刚地弓形虫（Toxoplasma gondii）是一种寄生虫，属于原生动物门（Apicomplexa）下的弓形虫科（Toxoplasmatidae）。

它可以感染包括人类和其他哺乳动物在内的多种宿主。

速殖子（tachyzoite）是刚地弓形虫的一种发育阶段。

当刚地弓形虫进入宿主体内后，它会通过感染宿主细胞并在其中繁殖。

在繁殖过程中，刚地弓形虫会产生速殖子。

速殖子具有高度的代谢活性和运动能力，可以快速繁殖和侵袭宿主细胞。

它们是刚地弓形虫感染宿主时最活跃和具有传染性的阶段。

速殖子在宿主内传播，可通过血液和淋巴系统迁移到不同的组织和器官，导致感染的扩散。

在人类中，刚地弓形虫感染通常会引起弓形虫病（toxoplasmosis），尤其在免疫功能低下的人群中可能导致严重的并发症。

刚地弓形虫

刚地弓形虫 Toxoplasma gondiiIntroduction1.Toxoplasma gondii 是猫科动物的肠道球虫，因其滋养体形似弓形而得名。

2.其分类地位是：Kingdom Protista>Subkingdom Protozoa>PhylumApicomplexa>Class Sporozoa>Order ?>Family Toxoplasmatidae> Toxoplasma gondii3.该虫呈世界性分布，可感染鸟类、鱼类、哺乳动物和人，引起Toxoplasmosis.人群平均感染率33%，有5亿人抗体阳性。

我室血清学检查数据显示重庆地区孕妇抗体阳性率20%以上。

4．Morpholog y Trophozoite (tachyzoites and bradyzoites)Indirect fluorescent antibody test. Slide shows endozoites exposed to antibody containing serum and then treated with fluorescein conjugated anti-human globulin. There is a zone of light green fluorescence around each organism. The cytoplasm appears reddish as it was counterstained with Evan's blue. ×1000. Enlarged by 5.4.In the centre is a macrophage filled with endozoites. This stage is also known as the pseudocyst. Giemsa stain. ×1000. Enlarged by 9.6.A ruptured macrophage which has liberated endozoites. Many are still lying close to the macrophage nucleus. Giemsa stain. ×1000. Enlarged by 9.6.A ruptured macrophage with the endozoites dispersed in the background. Some parasites are undergoing division. The large dense body is the macrophage nucleus. Giemsa stain. ×1000. Enlarged by 5.4.A macrophage containing endozoites and some free endozoites, stained with acridine orange. The cytoplasm of the endozoites consisting mostly of RNA takes up a red color and the nucleus consisting mainly of DNA takes up a yellowish green color. ×1000. Enlarged by 5.4.Intracellular tachyzoites of Toxoplasma gondii.Freshly passed Toxoplasma oocysts. Most of the oocysts have a single spororblast. Interference contrast. ×400. Enlarged by 5.4.Toxoplasma oocysts after incubation in vitro for 12 hours.Most of the oocysts have now sporulated. Interference contrast. ×400. Enlarged by 23.4.Toxoplasma cyst from mouse brain. The cyst has partly detached from the brain tissue. Phase contrast. ×400. Enlarged by 5.4.Toxoplasma cyst from mouse brain.The cyst has completely detached from the brain tissue. Phase contrast. ×400. Enlarged by 5.4.Toxoplasma cyst from mouse brain.Showing the argyllophilic nature of the cyst wall after silver staining. This is the best method for demonstration the cyst wall. ×1000. Enlarged 5.4.Toxoplasma cyst from mouse brain. Showing the PAS positive cystozoites. The cyst wall is faintly visible. This is the best method for demonstrating the cystozoites. ×1000. Enlarged by 5.4.Toxoplasma cyst from mouse brain after H and e stain.The cyst wall is faintly visible and the nuclei appear as dark bodies inside the cyst. ×1000. Enlarged by 5.4. Life Cycle在中间宿主体内的发育1 Infective stage:(1) Oocyst in feces of cat(2) cyst or pseudocyst in muscle of animals.2 感染方式和途径经口感染。

人体寄生虫学基础实验

第二章人体寄生虫学基础实验实验一总论线虫（1）一、人体寄生虫学实验须知【目的】1. 加深和巩固课堂讲授内容。

通过实验可以巩固和加深对医学寄生虫学理论知识的理解，掌握和熟悉寄生虫的形态结构。

2. 初步掌握寄生虫学的基本操作技能，掌握实验观察的基本方法。

3. 培养实事求是的科学作风和独立工作能力，为今后从事寄生虫病的诊断、防治和科研打下良好的基础。

【要求】1. 实验前做好预习，明确实验目的和内容。

实验时要认真，操作要正规。

2. 进实验室一律穿白大衣。

每位学生必须严格遵守实验室规则。

不得迟到、早退和无故缺席。

有病或有事应向任课教师请假。

实验室内要保持清洁、肃静，关闭手机，禁止吸烟、大声讲话和随便走动，以免影响他人实验。

3. 要爱护显微镜和标本。

实验前，要认真检查所用仪器、器材、标本等是否完好、齐全，如有缺损应及时向指导教师报告，不得随意调换仪器、标本等。

使用油镜后务必将镜头擦干净。

实验过程中如遇实验物品损坏或遗失，应立即报告教师，并按学校规定进行适当赔偿。

4. 示教标本不得随意移动，镜下示教标本，只在必要时，调节光源和微调，以免影响其他学生观察。

5. 作业要在规定时间内完成。

绘图应力求正确、客观。

写报告要简明扼要、重点突出、字迹清楚。

6. 实验完毕，显微镜和标本放回原处，玻璃器皿要洗净。

每次实验应安排卫生值日，关好门、窗、水、电后离开。

【步骤】1. 预习在课前，应认真预习实验指导以及教材的相关章节，必须对该次实验的目的要求、实验内容、操作方法有一定的了解。

2. 观看录像、示教实验开始，一般先看录像，以便对实验内容有概括了解。

每次实验都有示教内容，其目的是让学生在实验课的有限时间内有更多的观察机会。

3. 讲解教师一般仅对该实验内容的安排及注意事项进行讲解，让学生有充分的时间按实验指导的要求进行独立操作与观察。

4. 自己观察和操作由学生自己进行观察和操作。

在实验中要按实验指导认真操作，仔细观察，有问题举手提问。

尖吻蝮蛇蛇毒对刚地弓形虫侵入宿主细胞的作用研究

置氍医科大字删士字怔诧又
图１刚地弓形虫速殖子侵入Ｈｅｌａ细胞姬氏染色结果照片
Ａ图：箭头指示侵入Ｈｅｌａ细胞的速殖子，位于细胞质内，１个离细胞核较远，１个离细胞核较近。

Ｂ图：箭头指示侵入Ｈｅｌａ细胞的速殖子，２个侵入细胞中的速殖子均位于同一细胞核边缘，并已分裂。

ｃ图：箭头指示侵入Ｈｅｌａ细胞的速殖子，１个位于细胞核边缘，己分裂，另一个位于离核较远的细胞的延伸部分。

Ｄ图：箭头指示侵入Ｈｅｌａ细胞的速殖子，位丁．细胞核中。

１４
ｔ安徽医科人毕碗十学位论文
图２．爿ｉ同时间尖吻蝮蛇蛇毒对弓形虫速殖子侵入细胞的影响
Ｆｉｇ２．ＩｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆＡｇｋｉｓｌｒｏｄｏｎｃｗ硪“ｓｓｎａｋｅｖｅｎｏｍｏｎｔｈｅｉｎｖａｓｉｏｎｏｆＴｏｘｏｐｌａｓｎｍｇｏｎｄｉｉｔａｃｈｙｚｏｉｔｅｓｔｏｈｏｓｔｃｅｌｌｓａｔｄｉｆｆｅｒｅｎｔｔｉｍｅ，
图２显示在月．ａｃｕｔｕｓ蛇辑的作用下，弓形虫迷雅子埘宿土细胞的感染率随肴培养时问增加而Ｉ卿娃增高。

３．２ｌＦ＾检测结果
以１ｉ同剂量尖吻蝮蛇蛇蓐加入分孔培养、楼种４ｉ嗣数毓述鲥ｉｒ的｜｜ｃｌａ细胞中，朋闽接荧光染色。

在荧光显微镜Ｆ汁数ｌｌｅｌａ细胞感染ｎｊ彤虫述殖了的ｄ分牢：表２．ｆｆｅｌａ细胞感染削地弓形虫速殖子的百分率（问接荧光染色）
图３下列照片为间接荧光染色结果
Ａ、Ｂ、ｃ、Ｄ四图中速殖子被荧光所染，显示有的速殖子已完全侵入Ｈｅｌａ细胞，有的部分侵入。

刚地弓形虫纳虫泡的形成机制及其作用

【Abstract】 Toxoplasma gondii is a ubiquitous, obligate intracellular protozoan parasite in human and animals. Chronic infection with this parasite is likely one of the most common infection in human. Following invasion of host cells T. gondii resides within membrane-bound vacuoles known as parasitophorous vacuole （PV）, which can protect the parasite from the endosomal acidification and lysosomal fusion of host cells. It plays an essential role in the whole parasitic process of T. gondii. This review summarizes the mechanism of PV formation and its function in the host cells.
彭鸿娟
【提要】刚地弓形虫是寄生宿主广泛的细胞内寄生性原虫，人群感染相当普遍。弓形虫侵入宿主细胞后寄居于一个抗宿主细胞内涵体酸化作用和溶酶体融合作用的纳虫泡（parasitophorous vacuole）内，纳虫泡在弓形虫的寄生过程中起着非常重要的作用。本文就弓形虫纳虫泡形成的机制及其在弓形虫寄生宿主细胞过程中的作用进行综述。
【关键词】刚地弓形虫；纳虫泡；细胞内寄生

[寄生虫学]原虫

2、获得性弓形虫病 1）淋巴结肿大（最常见）：颌下和颈后淋巴结 2）累及脑、眼部：脑炎、脑膜脑炎、癫痫和精神异常。视网膜脉络膜炎：视力突然下降，婴幼儿可见手抓眼症，外界事物反应迟钝，也可出现斜视、虹膜睫状体炎，葡萄膜炎等，多见双侧性病变。
3、条件致病性
隐性感染者若患恶性肿瘤长期接受免疫抑制剂和放射治疗免疫缺陷（如艾滋病患者）急性或亚急性严重的全身性弓形虫病，多因并发弓形虫脑炎而死囊—猫粪中
动物肉
致病机制
弓形虫的侵袭作用取决于寄生虫与宿主的相互作用。哺乳动物、人及家畜家禽类对弓形虫都是易感中间宿主。 1、速殖子—急性感染期主要致病阶段。 • 速殖子在有核细胞内迅速繁殖以致细胞破裂，随后逸出的速殖子侵入邻近的细胞，如此反复破坏，导致局部组织炎症反应、水肿，同时伴有以单核细胞为主的炎细胞浸润。
这图中为培养成熟的卵囊，内含两个孢子囊，每个孢子囊含4个子孢子。（×800）
裂殖体：长椭圆形，内含4～29个裂殖子，
一般10～15个，呈扇状排列。
配子体：有雌雄之分，雌雄配子受精结合发育为合子，而后发育成卵囊。
生活史
1、完成生活史需要两个宿主。（1）猫科动物--终宿主、中间宿主。（2）人、鸟类和哺乳动物--中间宿主有性生殖（猫科动物小肠上皮细胞内，肠内期） --终宿主无性生殖（肠外其它组织细胞内，肠外期） --中间宿主 2、对组织选择不严格：除红细胞外的有核细胞均可寄生。
胞核轴柱
蓝氏贾第鞭毛虫包囊
铁苏木素染色
碘染色
生活史
滋养体和包囊
成熟包囊是感染期十二指肠内脱囊，形成 2个滋养体
二分裂法繁殖包囊
生活史要点
• 感染阶段: • 感染途径: • 寄生部位: • 致病阶段: • 诊断阶段: 成熟的四核包囊经口误食十二指肠、胆囊滋养体包囊、滋养体

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ａｎｄ１，２－ｂｉｓ（２－ａｍｉｎｏｐｈｅｎｏｘｙ）ｅｔｈａｎｅ — Ｎ，Ｎ，ＮＮ＂－ｔｅｔｒａａｃｅｔｉｃａｃｉｄｔｅｔｒａｋｉｓａｃｅｔｏｘｙｍｅｔｈｙｌｅｓｔｅｒ（ＢＡＰＴＡ — ＡＭ），ｆｏｌｌｏｗｅｄ
文献标志码：Ａ
ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３ — ８４０６．２０１５．０９．０１８
葫芦素Ｅ诱导刚地弓形虫从宿主细胞逸出的观测
邱家洋（淮南市第一人民医院检验科，安徽淮南２３２００７）
素Ｅ可以诱导刚地弓形虫的逸出，为探索弓形虫和宿主细胞相互作用提供了新的研究方向。
关键词：葫芦素Ｅ０地弓形虫；逸出
ＯｂｓｅｒｖａｔｉｏｎｏｆｃｕｃｕｒｂｉｔａｃｉｎＥ－ｉｎｄｕｃｅｄｅｇｒｅｓｓｏｆＴｏｘｏｐｌａｓｍａｇｏｎｄｉｉｆｒｏｍｈｏｓｔｃｅｌｌｓＱＩＵＪｉａｙａｎｇ．（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＬａｂｏｒａｔｏｒｙ，ｔｈｅＦｉｍｔＰｅｏｐｌｅｓＨｏｓｐｉｔａｌｆｏＨｕａｉｎａｎ，ＡｎｈｕｉＨｕａｉｎａｎ２３２００７，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：０ｂｊｅｃｉｆｖｅＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｃｕｃｕｒｂｉｔａｃｉｎＥｏｎｔｈｅｅｇｒｅｓｓｏｆＴｏｘｏｐｌａｓｍａｇｏｎｄｉｉｆｒｏｍｈｏｓｔ
（２－氨基苯氧基）乙烷一Ｎ，Ｎ，ＮＮ＇－四乙酸四乙酰氧甲基酯（ＢＡＰＴＡ — ＡＭ）预处理感染刚地弓形虫的ＨＦＦ细胞，用５０ｔｘｍｏｌ／Ｌ葫芦素Ｅ孵育１ｈ，统计纳虫空泡破损比例；将逸出虫体重新感染细胞或腹腔注射昆明小鼠，检测虫体毒力变化。结果葫芦素Ｅ可以诱导刚地弓形虫从ＨＦＦ细胞释放逸出，葫芦素Ｅ浓度越高，逸出率越高。葫芦葫芦素Ｅ诱导的虫体逸出与虫体的运动能力和虫体内钙离子有关，逸出虫体的毒力没有发生明显变化。结论
摘要：目的检测葫芦素Ｅ诱导刚地弓形虫从感染的宿主细胞逸出的效力。方法用不同浓度（２０、５０和
１００Ｉ￣ｍｏｌ／Ｌ）的葫芦素Ｅ孵育刚地弓形虫感染的ＨＦＦ细胞１ｈ，统计纳虫空泡破损比例；用细胞松弛素Ｄ、１，２－二
ｂｙ５０ｐ￣ｍｏｌ／ＬｃｕｃｕｒｂｉｔａｃｉｎＥｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｒｆ１ｈａｎｄｅｇｒｅｓｓｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ．ＴｈｅｖｉｒｕｌｅｎｃｅｃｈａｎｇｅｏｆｅｇｒｅｓｓｉｎｇＴｏｘｏｐｌａｓｍａ
检验医学２０１５年９月第３０卷第９期
ＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ
文章编号：１６７３ — ８６４０（２０１５）０９－０９４４－０４
中图分类号：Ｒ９７９．１
１ｈ，ａｎｄｔｈｅｅｇｒｅｓｓｒａｔｅｗａｓｅｖａｌｕａｔｅｄｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙ．ＴｏｘｏｐｌａｓｍａｇｏｎｄｉｉｉｎｆｅｃｔｅｄＨＦＦｃｅｌｌｓｗｅｒｅｐｒｅｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈＣｙｔｏ — Ｄ
ｇｏｎｄｉｉ，ｓｕｃｈｐａｒａｓｉｔｅｓｗｅｒｅｃｏｌｌｅｃｔｅｄａｎｄｕｓｅｄｔｏｒｅ— ｉｎｆ பைடு நூலகம் ｃｔＨＦＦｏｒｉｎｆｅｃｔＫｕｎｍｉｎｇｍｉｃｅ，ｗａｓａｎａｌｙｚｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ
ｃｅｌｌｓ．ＭｅｔｈｏｄｓＴｏｘｏｐｌａｓｍａｇｏｎｄｉｉｉｎｆｅｃｔｅｄＨＦＦｃｅｌｌｓｗｅｒｅｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈＣＵＣＨｒｂｉｔａｃｉｎＥ（２０，５０ａｎｄ１００Ｉｘｍｏｌ／Ｌ）ｆｏｒ