生物化学实验
生物化学实验
⽣物化学实验实验⼀1、糖类的颜⾊反应1. α-萘酚反应糖在浓⽆机酸（硫酸或盐酸）作⽤下，脱⽔⽣成糠醛及糠醛衍⽣物，后者能与α-萘酚⽣成紫红⾊物质。
注意：因糠醛及糠醛衍⽣物对此反应均呈阳性，不是糖类的特异反应。
2. 间苯⼆酚反应在酸作⽤下，酮糖脱⽔⽣成羟甲基糠醛，后者再与间苯⼆酚作⽤⽣成红⾊物质。
此反应是酮糖的特异反应。
因为醛糖在同样条件下呈⾊反应缓慢，只有在糖浓度较⾼或煮沸时间较长时，才呈微弱的阳性反应。
2、还原作⽤许多糖类由于其分⼦中含有⾃由的或潜在的醛基或酮基，因此在碱性溶液中能将铜、铁、银等⾦属离⼦还原，同时糖类本⾝被氧化成糖酸及其他产物。
糖类这种性质常被利⽤于检测糖的还原性及还原糖的定量测定。
本实验所⽤的试剂为斐林试剂和本尼迪克特试剂。
它们都是Cu2＋的碱性溶液，能使还原糖氧化⽽本⾝被还原成红⾊（颗粒⼤）或黄⾊（颗粒⼩）的Cu2O沉淀。
实验⼆脂肪碘值的测定碘值（价）是指100g脂肪在⼀定条件下吸收碘的克数。
碘值是鉴别脂肪的⼀个重要常数，可⽤以判断脂肪所含脂肪酸的不饱和程度。
脂肪中常含有不饱和脂肪酸，不饱和脂肪酸具有⼀个或多个双键，能与卤素起加成作⽤⽽吸收卤素。
常⽤碘与脂肪中不饱和脂肪酸的双键起加成作⽤。
脂肪的不饱和程度越⾼，所含的不饱和脂肪酸越多，与其双键起加成作⽤的碘量就越多，碘值就越⾼。
故可⽤碘值表⽰脂肪的不饱和度。
I2+－CH=CH－－CHI－CHI－本实验⽤溴化碘(Hanus试剂)代替碘。
⽤⼀定量(必须过量)溴化碘和待测的脂肪作⽤后，⽤硫代硫酸钠滴定的⽅法测定溴化碘的剩余量，然后计算出待测脂肪吸收的碘量，求得脂肪的碘值。
加成作⽤：IBr+－CH=CH－－CHI－CHBr－剩余溴化碘中碘的释放：IBr + KI KBr + I2再⽤硫代硫酸钠滴定释放出来的碘：I2 +2Na2S2O3 2Na2S4O6+2NaI思考题：何谓空⽩溶液和空⽩实验？空⽩实验有何意义？在各种分析⽅法中，为消除⼲扰，⽤与测定试样时完全⼀致的条件进⾏测定的溶液。
生物化学实验
生物化学实验一、糖的颜色反应及还原作用实验一：糖的颜色反应实验1.1 莫氏实验一、目的掌握莫氏（molisch）实验鉴定糖的原理和方法。
二、原理糖经浓无机酸（浓硫酸、浓盐酸）脱水产生糠醛或糠醛衍生物，后者在浓无机酸作用下，能与α-萘酚生成紫红色缩合物，在糖液和浓硫酸的液面间形成紫环，因此又称“紫环反应”，其反应如下图：利用这一性质可以鉴定糖。
三、实验器材1、棉花或滤纸。
2、吸管1.0ml(*4)、2.0ml(*1)。
3、试管1.5*15cm(*4)。
四、实验试剂1、莫氏试剂：称取α-萘酚5g，溶于95%乙醇并稀释至100ml。
此试剂需新鲜配置，并贮于棕色试剂瓶中。
2、1%蔗糖溶液：称取蔗糖1g，溶于蒸馏水并定容至100ml。
3、1%葡萄糖溶液：称取葡萄糖1g，溶于蒸馏水并定容至100ml.4、1%淀粉溶液：讲1g可溶性淀粉与少量冷蒸馏水混合溶液合成薄浆状物，然后缓缓倾入沸蒸馏水中，边加边搅。
最后以沸蒸馏水稀释至100ml。
五、操作于4支试管中，分别加入1ml1%葡萄糖溶液、1%蔗糖溶液、1%淀粉溶液和少许纤维素（棉花或滤纸浸在1ml水中）。
然后各加莫氏试剂2滴1，摇匀，讲试管倾斜，沿管壁慢慢加入浓硫酸1.5ml(切勿振摇！)硫酸层沉于试管底部与糖溶液分成两层，观察液面交界处有无紫色环出现。
六、注意事项1、试管中加入各种糖后，应做好标记，浓硫酸加入的方式应保持一致。
2、莫氏反应非常灵敏，所用的试剂应洗净，不可再样品中混入纸屑等杂物。
3、当糖浓度过高时，由于浓硫酸对他的焦化作用，将呈现红色及褐色而不呈现紫色，需稀释后再做。
思考题：1、解释α-苯酚反应的原理。
2、用莫氏试验鉴定糖时需注意哪些？试验1.2 塞氏试验一、目的掌握塞氏（Seliwanoff）实验鉴定酮糖的原理和方法。
二、原理酮糖在浓酸的作用下，脱水生产5-羟甲基糠醛，后者与间苯二酚作用，呈红色反应，有时亦同时产生棕色沉淀，此沉淀溶于乙醇，呈鲜红色沉淀2，以果糖为例，其反应如下：三、实验器材1、吸管0.5ml(*3)、5.0ml(*1)。
生物化学实验
3、显色剂50～100mL
1.1％水合茚三酮正丁醇溶液。
五、操作
1.将盛有平衡溶剂的小烧杯置于密闭的层析缸中。
2.取层析滤纸(长22cm、宽14 cm)一张。在纸的—端距边缘2～3cm处用用铅笔划一条直线，在此直线上每间隔2cm作一记号如图。
5.显色用喷雾器均匀喷上O.1％茚三酮正丁醇溶液，然后置烘箱中烘烤5分钟(100℃)或用热风吹干即可显出各层析斑点。
6.计算各种氨基酸的只Rf值。
思考题
1、何谓纸层析法?
2、何谓片Rf值?影响Rf值的主要因素是什么?
3、怎样制备扩展剂?
4、层析缸中平衡溶剂的作用是什么？
实验二小麦萌发前后淀粉酶活力的比较
实验一纸层析法分离鉴定氨基酸
一、目的
通过氨基酸的分离，学习纸层析法的基本原理及操作方法。
二、原理
纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法。
层析溶剂由有机溶剂和水组成。
物质被分离后在纸层析图谱上的位置是用Rf值(比移)来表示的：
…
在一定的条件下某种物质的只Rf值是常数。Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、层析滤纸的质量和层析温度等因素有关。本实验利用纸层析法分离氨基酸。
休眠种子的淀粉酶活力很弱，种子吸胀萌动后，酶活力逐渐增强，并随着发芽天数增加而增加。
本实验观察小麦种子萌发前后淀粉酶活力的变化。
三、器材
1.25mL刻度试管 2. 吸管
3.离心管 4.乳钵
5.分光光度计 6.恒温水浴
7.离心机
四、试剂和材料
1、小麦种子
2、o.1％标准麦芽糖溶液
生物化学实验报告
生物化学实验报告实验目的，通过本次实验，掌握生物化学实验的基本方法和技能，了解生物化学实验的原理和应用，提高实验操作能力和实验结果分析能力。
实验原理，生物化学实验是利用生物化学原理和方法，对生物体内的化学成分和代谢过程进行研究的实验。
其中包括蛋白质、核酸、酶、碳水化合物等生物分子的分离、鉴定和定量分析。
实验材料和仪器，本次实验所需材料包括，蛋白质、核酸、酶、碳水化合物等生物分子样品；试剂，酚酞、硫酸、氢氧化钠、蛋白质定性试剂、酶定性试剂等；仪器，分光光度计、离心机、电泳仪、显微镜等。
实验步骤：1. 蛋白质的定性实验，取少量蛋白质样品，加入蛋白质定性试剂，观察颜色变化并记录结果。
2. 核酸的定性实验，取少量核酸样品，加入核酸定性试剂，观察颜色变化并记录结果。
3. 酶的定性实验，取少量酶样品，加入酶定性试剂，观察反应情况并记录结果。
4. 碳水化合物的定性实验，取少量碳水化合物样品，加入酚酞试剂，观察颜色变化并记录结果。
5. 生物分子的定量分析，利用分光光度计、离心机、电泳仪等仪器，对生物分子进行定量分析。
实验结果分析，根据实验结果，可以对样品中的蛋白质、核酸、酶、碳水化合物等生物分子进行鉴定和定量分析，从而了解生物体内的化学成分和代谢过程。
实验结论，通过本次实验，掌握了生物化学实验的基本方法和技能，了解了生物分子的定性和定量分析方法，提高了实验操作能力和实验结果分析能力。
实验意义，生物化学实验是生物化学理论与实践相结合的重要环节，通过实验可以加深对生物化学原理和方法的理解，为今后的科研工作和实验教学提供了重要的基础。
在本次实验中，我们不仅学会了生物分子的定性和定量分析方法，还培养了实验操作能力和实验结果分析能力，为今后的科研工作和实验教学打下了良好的基础。
通过本次实验，我们对生物化学实验的原理和应用有了更深入的了解，提高了实验操作能力和实验结果分析能力，为今后的科研工作和实验教学打下了良好的基础。
生物化学实验
生物化学实验一、糖的颜色反应及还原作用实验一：糖的颜色反应实验1.1 莫氏实验一、目的掌握莫氏（molisch）实验鉴定糖的原理和方法。
二、原理糖经浓无机酸（浓硫酸、浓盐酸）脱水产生糠醛或糠醛衍生物，后者在浓无机酸作用下，能与α-萘酚生成紫红色缩合物，在糖液和浓硫酸的液面间形成紫环，因此又称“紫环反应”，其反应如下图：利用这一性质可以鉴定糖。
三、实验器材1、棉花或滤纸。
2、吸管1.0ml(*4)、2.0ml(*1)。
3、试管1.5*15cm(*4)。
四、实验试剂1、莫氏试剂：称取α-萘酚5g，溶于95%乙醇并稀释至100ml。
此试剂需新鲜配置，并贮于棕色试剂瓶中。
2、1%蔗糖溶液：称取蔗糖1g，溶于蒸馏水并定容至100ml。
3、1%葡萄糖溶液：称取葡萄糖1g，溶于蒸馏水并定容至100ml.4、1%淀粉溶液：讲1g可溶性淀粉与少量冷蒸馏水混合溶液合成薄浆状物，然后缓缓倾入沸蒸馏水中，边加边搅。
最后以沸蒸馏水稀释至100ml。
五、操作于4支试管中，分别加入1ml1%葡萄糖溶液、1%蔗糖溶液、1%淀粉溶液和少许纤维素（棉花或滤纸浸在1ml水中）。
然后各加莫氏试剂2滴1，摇匀，讲试管倾斜，沿管壁慢慢加入浓硫酸1.5ml(切勿振摇！)硫酸层沉于试管底部与糖溶液分成两层，观察液面交界处有无紫色环出现。
六、注意事项1、试管中加入各种糖后，应做好标记，浓硫酸加入的方式应保持一致。
2、莫氏反应非常灵敏，所用的试剂应洗净，不可再样品中混入纸屑等杂物。
3、当糖浓度过高时，由于浓硫酸对他的焦化作用，将呈现红色及褐色而不呈现紫色，需稀释后再做。
思考题：1、解释α-苯酚反应的原理。
2、用莫氏试验鉴定糖时需注意哪些？试验1.2 塞氏试验一、目的掌握塞氏（Seliwanoff）实验鉴定酮糖的原理和方法。
二、原理酮糖在浓酸的作用下，脱水生产5-羟甲基糠醛，后者与间苯二酚作用，呈红色反应，有时亦同时产生棕色沉淀，此沉淀溶于乙醇，呈鲜红色沉淀2，以果糖为例，其反应如下：三、实验器材1、吸管0.5ml(*3)、5.0ml(*1)。
生物化学的实验技术有哪些
生物化学的实验技术有哪些生物化学是一门研究生物体化学组成和生命过程中化学变化的学科，实验技术在生物化学的研究中起着至关重要的作用。
以下为您介绍一些常见的生物化学实验技术。
一、分光光度法分光光度法是一种基于物质对光的吸收特性来定量分析物质浓度的方法。
在生物化学中，常用于测定蛋白质、核酸、酶等生物大分子的浓度。
例如，通过测量蛋白质在 280nm 处的吸光度，可以估算蛋白质的浓度。
分光光度法操作简便、快速，且灵敏度较高。
二、电泳技术电泳是指带电粒子在电场中向与其所带电荷相反的电极移动的现象。
在生物化学中，常用的电泳技术有琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳。
琼脂糖凝胶电泳常用于分离和分析 DNA 片段，根据 DNA 片段的大小不同，在凝胶中移动的速度不同，从而实现分离。
聚丙烯酰胺凝胶电泳则常用于分离蛋白质，能够分辨分子量差异较小的蛋白质。
三、层析技术层析技术是利用混合物中各组分在固定相和流动相之间的分配系数不同，从而实现分离的方法。
常见的层析技术有凝胶过滤层析、离子交换层析、亲和层析等。
凝胶过滤层析根据分子大小进行分离，大分子先流出，小分子后流出。
离子交换层析基于分子所带电荷的不同来分离物质。
亲和层析则利用生物分子之间的特异性亲和力进行分离，具有很高的选择性。
四、离心技术离心是利用离心机旋转产生的离心力，使不同密度、大小的颗粒分离的技术。
在生物化学实验中，常用于分离细胞器、细胞组分、蛋白质复合物等。
差速离心通过逐渐提高离心速度，分步沉淀不同大小的颗粒。
密度梯度离心则是在离心管中形成密度梯度，使不同密度的颗粒在相应的密度区带中沉降，从而实现分离。
五、PCR 技术（聚合酶链式反应）PCR 技术是一种用于扩增特定 DNA 片段的分子生物学技术。
通过高温变性、低温退火和适温延伸的循环过程，使 DNA 片段呈指数级扩增。
PCR 技术在基因诊断、基因克隆、基因突变检测等方面有着广泛的应用。
六、酶联免疫吸附测定（ELISA）ELISA 是一种利用抗原抗体特异性结合进行检测的技术。
常见的生物化学实验方法
常见的生物化学实验方法生物化学实验是研究生物分子结构、功能和相互作用的重要手段，广泛应用于生物医学研究、药物开发和环境保护等领域。
本文将介绍一些常见的生物化学实验方法。
一、色谱技术色谱技术是一种分离和分析物质的方法，根据分子的化学性质和大小差异，将混合物分离成各个组分。
常见的色谱技术包括气相色谱（GC）、液相色谱（LC）和薄层色谱（TLC）等。
在生物化学实验中，色谱技术常用于对生物样品中的分子进行纯化和分析。
例如，气相色谱可用于分析氨基酸和脂肪酸等小分子化合物，液相色谱则可以用于分离蛋白质、核酸和多糖等生物大分子。
二、电泳技术电泳技术是利用电场作用下物质的电荷和大小差异，将混合物分离成各个组分的方法。
常见的电泳技术包括聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）、聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和凝胶过滤电泳等。
在生物化学实验中，电泳技术常用于分离和检测蛋白质和核酸等生物大分子。
例如，聚丙烯酰胺凝胶电泳可用于分离和测定蛋白质分子量，SDS-PAGE则可以用于检测蛋白质的纯度。
三、质谱技术质谱技术是利用质量分析仪器对物质的质量和结构进行分析的方法。
常见的质谱技术包括质谱仪、飞行时间质谱（TOF-MS）和液相色谱质谱联用（LC-MS）等。
在生物化学实验中，质谱技术常用于鉴定和定量生物分子。
例如，利用质谱仪可以对蛋白质进行鉴定，通过测定样品中蛋白质的质量和碎片离子的质量谱图，确定蛋白质的氨基酸序列。
四、核酸杂交技术核酸杂交技术是利用互补的DNA或RNA序列进行结合，从而检测目标序列的方法。
常见的核酸杂交技术包括Southern blot、Northernblot和in situ hybridization等。
在生物化学实验中，核酸杂交技术常用于检测和定量特定DNA或RNA序列的存在。
例如，Southern blot可用于检测DNA片段在基因组中的分布和拷贝数，Northern blot则可用于检测特定mRNA的表达水平。
生物化学实验
（二）样品蛋白质浓度的测定 待测样品必须进行适当的稀释，使每毫升中含有0.5mg左右的蛋白质，才能进行测定。 该过程至少重复两次或平行测定两次。
7200分光光度计的使用
四、结果处理
固体样品中蛋白质含量＝m’×Vm/Vn×1/m×10-3×100% 式中m′——由标准曲线查到的样品的蛋白质含量（mg） Vn ——用于显色的样品体积（ml） Vm —— 样品稀释后的体积（ml） m ——样品的质量（g）
三、操作方法
1. 样品制备 称取粉碎过40目筛的（玉米）样品2.50 g（精确至0.01 g）放入100 mL锥形瓶中； 沿器壁缓慢加入50 mL l％的盐酸溶液，并轻轻摇动使全部样品润湿； 将锥形瓶放入沸水浴中，预热3min，在沸水中准确加热15min； 立即取出，迅速冷却至室温。
2．样品测定 先加1 mL30％的硫酸锌溶液，充分混匀； 再加入1 mL亚铁氰化钾溶液，摇匀并全部转 移至 100 mL容量瓶中，用少量蒸馏水将锥形瓶冲洗几次； 若泡沫过多，加几滴无水乙醇消泡； 用蒸馏水定容至刻度； 混匀后过滤，弃去初始滤液15 mL，收集其余滤液 充分混匀； 进行旋光测定。
四、结果处理 皂化值=
式中 VA—空白瓶盐酸用量（mL）； VB—样品瓶盐酸用量（mL）； m—油脂的质量（g）。
五、思考题
1. 上式中（VA - VB ）的含义是什么? 2. 试列出由皂化值计算油脂相对分子质量的公式。
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生物化学实验（二）绪论▪随着生物化学的发展和生物化学教学内容的不断丰富，生物化学实验也在不断更新和提高。
▪本门课程在以往教学工作的基础上，结合生物化学实验教学，力求使学生能够更加深刻地学习生物化学课程。
本实验课实验项目覆盖了当今生物化学研究中常用的技术和方法。
绪论一、实验目的▪掌握蛋白质、酶、核酸、糖等重要物质的分离、纯化和测定技术的原理及方法；▪掌握生物化学的基本知识、基本理论及基本实验技能；▪培养分析和解决问题能力以及严谨细致的科学作风、创新能力等综合素质。
▪二、通过生物化学实验应该做到▪学习设计一个实验的基本思路，掌握各个实验的基本原理，学会严密地组织自己的实验，合理地安排实验步骤和时间。
▪训练实验的动手能力，学会熟练地使用各种生物化学实验仪器。
▪学会准确翔实地记录实验现象和数据的技能，提高实验报告的写作能力，能够整齐清洁地进行所有的实验。
▪掌握生物化学的各种基本实验方法和实验技术，尤其是各种电泳技术和层析枝术，为今后参加科研工作打下坚实的基础。
▪三、实验室规则▪１、自觉遵守学习纪律，保持实验室肃静，不得喧哗吵闹、迟到早退。
▪２、爱护仪器，厉行节约。
试剂、药品、蒸馏水等应节约使用，不得浪费。
如不慎损坏仪器，应及时报告老师，说明原因；贵重、精密仪器，应先熟悉使用方法，在老师的指导下，严格按操作规程操作；发现故障，应立即报告老师，不得擅自处理。
仪器使用完毕后，一定要填写使用记录。
绪论▪３、取用试剂时，应仔细辨明标签，以免取错。
取完试剂后，应及时将瓶盖盖好，放回原处，切忌乱拿乱放。
▪４、注意安全。
对于有毒、腐蚀的试剂应避免其直接接触人体及衣物；乙醚、丙酮等易燃试剂应远离火源，以免发生意外。
▪５、注意实验室卫生、整洁。
废弃液体应倒入水槽，实验用过的和棉花、废纸、沉淀废渣及其他废弃物品等均应放入指定容器，不得随意乱扔。
实验结束后应将实验台整理好，并清扫、整理实验室。
关好水、电、门、窗，方可离开实验室。
绪论▪四、实验须知▪１、实验前应作好预习，认真阅读实验指导。
明确学习目标，能简述实验内容及主要的操作步骤。
▪２、实验过程中，应根据实验指导及老师的要求，认真操作，细心观察，如实记录。
严禁捏造实验数据，提倡实事求是的科学态度，杜绝弄虚作假。
▪３、实验结束后，将实验原始数据填写到实验报告册中的原始数据栏，并当场交给老师批阅。
回去后要认真书写实验报告，及时交老师批阅。
绪论—五实验记录与实验报告1、实验记录实验前写好实验预习报告(钢笔和园珠笔)。
实验中应及时准确地记录所观察到的现象和测量的数据。
(直接填写到实验报告册的原始数据栏） 实验记录要注意有效数字，如吸光度值应为“0.050”，而不能记成“0.05”。
所有数据都应如实记录，不得随意涂改。
实验中要详细记录实验条件，如使用的仪器型号、编号、生产厂等；生物材料的来源、试剂的规格、试剂的浓度等。
杜绝一切抄袭和弄虚作假现象，一旦发现后果自负。
绪论—五实验记录与实验报告▪2、实验报告▪实验预习报告包括如下内容：①实验项目名称；②详细实验目的、原理；③实验操作步骤；④注意事项。
▪实验报告包括如下内容：①实验项目名称；②简写实验目的、原理；③实验结果；④分析与讨论；⑤注意事项等。
实验一激活剂和抑制剂对酶活力的影响▪一、目的▪了解激活剂和抑制剂对酶活力的影响，掌握淀粉酶活性鉴定的方法。
实验一激活剂和抑制剂对酶活力的影响▪二、原理▪酶的活性受某些物质的影响，有些物质能增加酶的活性，称为激活剂；而另一些物质则降低酶的活性，称为抑制剂。
▪Cl-是唾液淀粉酶的激活剂。
而Cu+为抑制剂。
将淀粉与酶相混，作用一段时间后，淀粉被水解，遇碘不显蓝色，酶活力强，需时短，酶活力弱，需时长，故可用反应时间表示酶活力的强弱。
实验一激活剂和抑制剂对酶活力的影响▪四、实验器材▪1、0.1%淀粉液:称取可溶性淀粉0.1克,先用少量水加热调成糊状,再加热水稀释至100ml.▪2、1%的氯化钠溶液:1gNaCl溶于100ml 蒸馏水▪3、1%硫酸铜溶液:1gCuSo4溶于100ml 蒸馏水▪4、稀碘液：于2%碘化钾溶液中加入碘至淡黄色。
实验一激活剂和抑制剂对酶活力的影响▪五、操作▪取试管3支，按表1编号并加入试剂。
加毕，摇匀，同时置40℃水浴保温，每隔2min 取液体1滴置白瓷板上用碘液试之，哪支管液最先不呈现蓝色，哪支管次之，说明原因。
0.1%淀粉液/ml 1%的氯化钠溶液/ml 1%硫酸铜溶液/ml H2O/ml 1：30唾液/ml 1 2.0 1.0------ 1.02 2.0---- 1.0-- 1.03 2.0-------- 1.01.0管号试剂实验一激活剂和抑制剂对酶活力的影响▪六、实验注意事项▪1、实验过程中试剂取量一定要保证一致性，同时一定要认真观察实验现象，不能漏过实验颜色的变化点。
▪2、要正确找到反应终点，并记下相应反应时间。
▪3、要在预热2min后加入唾液，并在加入唾液后马上记时。
实验二、可溶性糖的薄层层析分离与定量鉴定▪一、目的和要求▪1.了解并初步掌握吸附层析的原理。
▪2.学习薄层层析的一般操作及定性与定量鉴定的方法。
▪3.学习提取植物材料中可溶性糖的一般方法，并学会简易薄板的制作实验二、可溶性糖的薄层层析分离与定量鉴定▪二、原理▪1、植物组织中的可溶性糖可用一定浓度的乙醇提取出来，经除去杂质，即可获得较纯的可溶性糖混合物。
▪▪二、原理▪2、薄层层析是层析法的一种，层析法是利用被分离样品混合物中各组分的物理，化学差别，使各组分以不同程度分布在两个“相”中，这两个相通常使一个被固定在一定的支持物上的，称为固定相；另一个是移动的，称为流动相；▪当流动相流过固定相时，在移动过程中由于各组分在两相中的分配情况不同，或吸附性质不同，或电荷分布不同，或离子亲和力不同等，而以不同速度前进，从而达到分离的目的。
▪二、原理▪3、薄层层析是一种快速而微量的层析方法，它是将一种固定支持物均匀地涂在薄板上，对物质进行层析的方法。
▪本实验只讨论吸附薄层层析，即所有支持物是吸附剂（如硅胶粉），层析时，主要是根据吸附剂对样品中各组分的吸附能力不同，因此个组分的移动速度不同，从而达到分离混合物的目的。
▪二、原理▪4、糖为多羟基化合物，具有较强的极性，在硅胶G薄板上展层时，糖与硅胶分子有一定的吸附力。
▪硅胶分子与糖的吸附能力大小取决于糖的分子量和羟基数目，造成各种糖分子在展层过程中移动的距离不同，从而将各种糖分离出来。
▪一般吸附力的大小为：三糖>双糖>己糖>戊糖。
其中各种糖移动的速率可用Rf值表示。
通过与标准糖的Rf值比较。
即可鉴定出植物组织提取液中糖的种类。
实验二、、可溶性糖的薄层层析分离与定量鉴定▪二、原理▪5、R f计算公式：▪溶质斑点中心到样点的距离▪R f(值)=溶剂前沿到点样点的距离▪▪三、实验材料、仪器和试剂▪1．材料：苹果或其他植物材料▪2．仪器：（1）离心机及离心管（2）天平（3）研钵（4）量筒25ml（5）移液管10ml（6）恒温水浴（7）毛细管（8）层析缸（9）吹风机（10）玻璃板：7×15cm（11）烘箱（12）喷雾器（13）烧杯50ml,100ml铅笔、尺子▪三、实验材料、仪器和试剂▪3．试剂▪（1）无水酒精▪（2）氯仿：冰醋酸：水，配比为30：35：5▪（3）1％标准糖溶液（10mg/ml）：木糖、葡萄糖、果糖、蔗糖等。
▪（4）苯胺－二苯胺－磷酸显色剂：2克二苯胺，加2ml苯胺，10ml85％磷酸，1ml浓HCl，100ml 丙酮，溶后摇匀。
▪（5）0.1M硼酸溶液▪四、操作▪1.水果中可溶性糖提取液的制备▪1.1取洗净的苹果（或其他水果）削去果皮，称8g果肉在研钵中研成匀浆后，倒在四层洗净的纱布上。
包起臵于漏斗，用干净玻璃棒将果汁压出。
▪1.2取果汁2ml于离心管中，加无水乙醇6ml，充分混匀后，在3000转／分下离心20分钟，上清夜即为可溶性糖提取液。
实验二、、可溶性糖的薄层层析分离与定量鉴定▪四、操作▪2.苹果提取液中可溶性糖的分离鉴定▪2.1点样取活化后的硅胶G板一块，距底边1.5厘米水平线上确定4个点，相互间隔1厘米，其中3个点，分别点上5％的木糖、葡萄糖、蔗糖标准溶液数滴，另一点点上苹果提取液数滴，一般点4次。
▪2.2展层以氯仿：冰醋酸：水展层剂上行展层，当展层前沿达距薄板顶端1.0厘米左右处，取出玻板用吹风机吹干。
▪2.3染色以苯胺－二苯胺－磷酸显色剂喷雾，于85℃烘箱中10分钟，各种糖即显示出不同色斑与标准糖比较，观察各点的颜色。
▪2.4计算根据斑点颜色及Rf值即可初步鉴定出苹果提取液中所存在的可溶性糖的种类。
▪四、操作▪3．板的制备：▪3.1 玻璃板须表面平整、光滑、清洁。
用洗涤液浸泡，洗净，晾干，否则吸附剂容易剥落。
▪3.2 取硅胶G粉2克，加0.1M硼酸溶液4.5ml于研钵中充分研磨成糊状时，倾倒在薄板上，然后用手轻轻倾斜玻璃板，使糊状吸附剂在整块板上分布均匀，表面平坦光滑。
▪3.3 将制好的薄板臵于水平台上自然晾干后，用前于110℃烘箱中活化一小时使用。
▪五、实验注意事项▪1、薄板制备过程中，一定要保证玻璃板干净、干燥且无油渍▪2、薄板制备过程中，加硼酸搅拌及研磨一定要快，要研磨均匀，一般研磨到发出如脂肪光泽时，且要有一定的流动性，立即涂匀为最好▪3、铺好板后，要在水平台上自然晾干，用前于110℃烘箱中活化一小时（时间计算从达110℃开始），但活化时要在低温（60℃左右）时就将板放进烘箱，防止因骤然升温导致硅胶板脱落。
▪五、实验注意事项▪4、在用毛细管点样时，毛细管应垂直于硅胶G板的方向点样，而且毛细管接触G板的时间应尽量短，点样斑点直径一般不宜超过3mm。
▪5、在确定点样位臵时，只需在板上轻轻一点，决不能点得过深，且不能用油笔或钢笔点。
样点位臵一定要高于展层剂层面。
▪6、点样时，要等前一次的样点干燥后，再点下一次，一般每个样点点4次。
▪五、实验注意事项▪7、在进行展层前，要先在层析缸中加入一些层析剂，使整个缸内充满层析剂，以使样品能在一个稳定的环境中进行展层。
▪8、在展层好后，立即用尺量出溶剂前沿距离，不要等到吹干后再量。
▪9、在用吹风机吹干时要注意用小风吹，或者将吹风机离板较远点吹。
▪五、实验注意事项▪10、染色完成后，放臵于烘箱85℃烘时，若烘了10min后有些点还是不显色，可以在记录已显色点的颜色和距离后，继续烘，直至显色为止。
▪11、为了使实验现象明显，提取糖时，宜使糖的浓度高一些。
实验三离子交换柱层析分离氨基酸▪一、目的▪通过实验要求学会装柱、洗脱、收集等离子交换层析技术实验三离子交换柱层析分离氨基酸▪二、原理▪树脂（惰性支持物）结合了阳离子或阴离子后，可与阳离子或阴离子结合。