生物化学实验技术
生物化学实验原理和方法
生物化学实验原理和方法
生物化学实验是研究生物体内化学反应的实验方法，主要用于研究生物体内分子结构、代谢途径、蛋白质结构和功能等方面的问题。
生物化学实验的基本原理是利用生物体内的生物分子（如蛋白质、核酸、酶等）进行化学反应或与其他物质相互作用，从而检测、分离或定量这些分子。
生物化学实验主要包括以下几个方面的原则和方法：
1. 分离与纯化：将某一特定生物分子从其他组分中分离出来，获得纯净的样品。
常用方法包括离心、电泳、柱层析、过滤等。
2. 分析与测定：对生物分子的含量、结构和性质进行定量或定性的研究。
常用方法包括分光光度法、荧光法、比色法、拉曼光谱等。
3. 酶反应：酶是生物体内催化生物化学反应的一类蛋白质，其活性与底物浓度、温度、pH值等因素有关。
通过测定底物转化率来研究酶的活性。
常见的酶反应方法有酶解反应、酶促进反应等。
4. 蛋白质分析：蛋白质是生物体内最为重要的分子之一，可以通过电泳、质谱、Western blot等方法进行分析，从而了解蛋白质的结构、含量和功能。
5. 核酸分析：核酸是生物体内遗传信息的主要载体，可以通过PCR、凝胶电泳、
Southern blot等方法进行分析，用于检测基因的突变、限制性片段长度多态性等。
以上是一些常用的生物化学实验原理和方法，实际的生物化学实验会根据具体的研究目的和问题而选择适合的方法和技术。
微生物生物化学实验技术
微生物生物化学实验技术微生物生物化学实验技术是一门涉及微生物和生物化学的实验技术学科，其研究内容包括微生物的生长特性、代谢途径、原生态功能等方面。
在实验室中，通过一系列实验手段和技术手段，可以研究微生物的生物化学过程，揭示微生物在环境中的作用和影响。
一、菌种的保存和鉴定在微生物生物化学实验技术中，首先需要进行菌种的保存和鉴定工作。
菌种的保存是为了长期保存某种微生物，以备后续实验使用。
常见的保存方式包括在琼脂培养基上制备菌斑、制备冻干粉末或低温冷冻保存等。
而菌种鉴定则是为了确保所使用的微生物种属准确，常见的鉴定方法包括形态学观察、生理生化特性检测、分子生物学技术等。
二、微生物生长曲线的绘制和分析微生物生长曲线是研究微生物生长和繁殖规律的重要手段。
利用实验技术，可以通过不同培养条件下不同时间点的菌液浓度进行测定，从而得到微生物生长曲线。
通过绘制生长曲线并进行数据分析，可以了解微生物在不同生长阶段的生长速率、最大生长速率、最大生长速率等参数。
三、微生物代谢产物的检测和分析微生物代谢产物是微生物在代谢过程中产生的各种物质，包括有机酸、氨基酸、酶等。
通过实验技术，可以对微生物代谢产物进行检测和分析，了解微生物的代谢途径和代谢产物的种类及含量。
常见的检测方法包括高效液相色谱法、气相色谱-质谱联用法等。
四、微生物酶活性的测定和应用微生物酶是微生物体内产生的一种特殊蛋白质，具有催化作用。
通过实验技术，可以对微生物酶的活性进行测定，了解酶的催化特性和反应底物的种类。
此外，微生物酶在生物化学工程、食品工业、医药等领域有着广泛的应用，通过研究微生物酶的活性和性质，可以进一步开发和利用其潜在的应用价值。
五、微生物工程技术的发展趋势随着现代科学技术的不断发展，微生物工程技术也在不断更新和完善。
新兴的技术包括代谢工程、系统生物学、合成生物学等，将为微生物生物化学实验技术的发展带来新的契机和挑战。
同时，微生物生物化学实验技术在环境保护、资源利用、新药开发等方面具有广阔的应用前景，将为人类社会的可持续发展做出重要贡献。
00 生物化学实验--常用生物化学实验技术及原理-比色分析技术
比色分析技术分光光度法是利用单色器（主要是棱镜）获得单色光来测定物质对光吸收能力的方法。
物质对不同波长的光波具有选择吸收的特性，分光光度法就是基于物质的这种特性而建立起来的分析方法，它是光谱分析技术中最基本和最常用的方法，因其具有灵敏、准确、快速、简便、选择性好等特点而被广泛应用。
一、比色分析的基本原理比色分析技术是利用物质对光的吸收作用来对物质进行定性或定量分析的技术。
分光光度法是光谱分析技术中最常用的一种，应用最多的是紫外 - 可见光分光光度法。
（一）吸光度与透光度当一束光线通过均匀、透明的溶液时可出现三种情况：一部分光被散射，一部分光被吸收，另有一部分光透过溶液。
设入射光强度为I 0 ，透射光强度为I ，I 和I 0 的比值称为透光度（ transmittance ，T ），即T ＝，其数值小于 1 。
T 与 100 的乘积称为百分透光度，以 %T 表示。
透光度的负对数称为吸光度 (absorbance ， A) 。
其表达式为：A ＝－LgT ＝－Lg ＝Lg（二） Lambert-Beer 定律Lambert-Beer 定律指出当一束单色的辐射能通过介质或溶液后，有一部分被吸收，其辐射能的吸收与溶液中吸收物质的浓度和溶液厚度的乘积成正比。
Lambert-Beer 定律适用于可见光、紫外光、红外光和均匀非散射的液体。
Lambert-Beer 定律是描述溶液吸光度同溶液浓度和溶液液层厚度之间关系的基本定律，该定律是分光分析的理论基础。
其表达式为：A ＝KLC式中，A ——吸光度；K ——吸光系数；L ——溶液厚度，称为光径；C ——溶液浓度。
根据 Lambert-Beer 定律，当液层厚度单位为 cm ，浓度单位为 mol/L 时，吸光系数K 称为摩尔吸光系数（ε）。
ε的意义是：当液层厚度为 l cm ，物质浓度为 l mol/L 时，在特定波长下的吸光度值。
ε是物质的特征性常数。
在一定条件（入射光波长、温度等）下，特定物质的ε不变，这是分光光度法对物质进行定性的基础。
生物化学实验技术与方法
生物化学实验技术与方法生物化学实验技术与方法是生物化学学科中非常重要的一部分，它涉及到生物体内化学反应的研究以及相关的实验操作方法。
通过掌握生物化学实验技术与方法，我们能够更好地理解生物体内的化学反应机制，为生物化学研究的深入开展提供有力的实验支持。
一、光谱分析技术光谱分析技术是生物化学中常用的一种实验手段，主要用于分析物质的组成、结构以及化学变化过程。
常见的光谱分析技术包括紫外可见吸收光谱、红外光谱和质谱等。
紫外可见吸收光谱可用于分析物质的吸收特性，进而推断它们的结构；红外光谱则用于研究物质的分子谐振运动，从而得到物质的结构信息；质谱则是通过对物质进行高能离子化，随后将离子进行质量筛选，最终得到物质的质谱图谱，从而确定物质的分子量和结构。
二、酶动力学实验技术酶动力学实验技术用于研究酶的催化过程和酶动力学参数，对于理解酶的性质和功能具有重要意义。
常见的酶动力学实验技术包括酶活测定、酶底物浓度对酶反应速率的影响、酶的温度和pH值对酶活性的影响等。
通过这些实验技术，我们可以深入了解酶在不同条件下的催化机制，为酶的应用研究提供理论依据和实验指导。
三、电泳技术电泳技术是生物化学中常用的一种分离和检测方法，广泛应用于DNA、蛋白质和核酸等生物大分子的分离、纯化和测定。
根据所用电场的性质，电泳技术可分为凝胶电泳和毛细管电泳。
其中，凝胶电泳是利用凝胶基质来分离生物大分子，其分离效果主要取决于凝胶浓度和凝胶孔径的选择；而毛细管电泳则是利用毛细管对生物大分子进行分离，其分离效果主要取决于毛细管的粗细和表面电荷特性。
四、核磁共振技术核磁共振技术是一种非常重要的生物化学实验手段，广泛应用于生物体内化学物质的结构解析和动力学研究。
通过核磁共振技术，可以获取分子的核磁共振信号，从而得到核磁共振谱图，进而推断出物质的结构和组成。
核磁共振技术在生物化学研究中的应用非常广泛，例如用于蛋白质结构的解析、代谢产物的鉴定等。
综上所述，生物化学实验技术与方法在生物化学研究中起着举足轻重的作用。
生物化学实验技术
生物化学实验技术生物化学是一门研究生物分子及其功能的学科，与其他化学学科相比，它的特点是针对生命体系进行研究。
因此，对生物化学实验技术的需求比较高。
下面我将介绍一些常用的生物化学实验技术。
一、蛋白质电泳蛋白质电泳是一种常见的分离和检测蛋白质的技术，也可以用来鉴定DNA或RNA中所含的蛋白质。
在此技术中，蛋白质通过电荷、分子量或结构等因素分离，在凝胶上形成带状条纹。
根据这些条纹的位置和形态，可以确定样品中蛋白质的数量和品种。
二、反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）RT-PCR是一种用于检测RNA的技术，首先将RNA转录成cDNA，然后进行PCR扩增。
由于RNA不易稳定，在实验过程中需要特别注意RNA的提取和保存，避免样品受到污染。
该技术用于检测病毒等疾病的诊断、基因的表达以及基因突变等多个方面。
三、糖转运实验糖转运实验是一种用于研究细胞膜上的糖转运体的实验。
在糖转运实验中，研究人员可以使用放射性标记的糖分子，测量它们在不同时间内对于细胞膜上的糖转运体的吸收情况。
通过这种方法，可以研究不同的糖转运体的种类和功能，进而研究其在人体内的应用和药物的研发。
四、质谱分析质谱分析是一种利用质谱仪对样品分子进行鉴定和定量的技术。
该技术具有高灵敏度、高精度和高分辨率等优点，广泛应用于生物化学研究和新药研发。
在实验过程中，需要特别注意样品的制备和保存，并使用合适的离子化方法和背景校正方法，以获得准确的分析结果。
五、蛋白质晶体学蛋白质晶体学是研究蛋白质晶体结构的一种技术。
在这个实验中，研究人员将蛋白质结晶，然后使用X射线或中子衍射等方法来研究其结构和功能。
该技术广泛用于药物研发和疾病治疗研究。
综上所述，生物化学实验技术是研究生命体系的重要手段和工具。
这些技术在药物研发、疾病治疗、基因转录等多个方面有着广泛的应用和研究价值。
最后，前景看好的生物化学实验技术在未来必将得到更加广泛和深入的应用。
生物化学的实验技术有哪些
生物化学的实验技术有哪些生物化学是一门研究生物体化学组成和生命过程中化学变化的学科，实验技术在生物化学的研究中起着至关重要的作用。
以下为您介绍一些常见的生物化学实验技术。
一、分光光度法分光光度法是一种基于物质对光的吸收特性来定量分析物质浓度的方法。
在生物化学中，常用于测定蛋白质、核酸、酶等生物大分子的浓度。
例如，通过测量蛋白质在 280nm 处的吸光度，可以估算蛋白质的浓度。
分光光度法操作简便、快速，且灵敏度较高。
二、电泳技术电泳是指带电粒子在电场中向与其所带电荷相反的电极移动的现象。
在生物化学中，常用的电泳技术有琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳。
琼脂糖凝胶电泳常用于分离和分析 DNA 片段，根据 DNA 片段的大小不同，在凝胶中移动的速度不同，从而实现分离。
聚丙烯酰胺凝胶电泳则常用于分离蛋白质，能够分辨分子量差异较小的蛋白质。
三、层析技术层析技术是利用混合物中各组分在固定相和流动相之间的分配系数不同，从而实现分离的方法。
常见的层析技术有凝胶过滤层析、离子交换层析、亲和层析等。
凝胶过滤层析根据分子大小进行分离，大分子先流出，小分子后流出。
离子交换层析基于分子所带电荷的不同来分离物质。
亲和层析则利用生物分子之间的特异性亲和力进行分离，具有很高的选择性。
四、离心技术离心是利用离心机旋转产生的离心力，使不同密度、大小的颗粒分离的技术。
在生物化学实验中，常用于分离细胞器、细胞组分、蛋白质复合物等。
差速离心通过逐渐提高离心速度，分步沉淀不同大小的颗粒。
密度梯度离心则是在离心管中形成密度梯度，使不同密度的颗粒在相应的密度区带中沉降，从而实现分离。
五、PCR 技术（聚合酶链式反应）PCR 技术是一种用于扩增特定 DNA 片段的分子生物学技术。
通过高温变性、低温退火和适温延伸的循环过程，使 DNA 片段呈指数级扩增。
PCR 技术在基因诊断、基因克隆、基因突变检测等方面有着广泛的应用。
六、酶联免疫吸附测定（ELISA）ELISA 是一种利用抗原抗体特异性结合进行检测的技术。
生物化学与分子生物学实验技术
生物化学与分子生物学实验技术生物化学与分子生物学实验技术是现代生物科学研究中不可或缺的重要工具。
它们通过一系列的实验技术和方法，帮助研究者深入了解生物大分子的结构、功能以及生物分子之间的相互作用。
本文将重点介绍生物化学与分子生物学实验技术的一些常用方法和应用。
一、蛋白质纯化技术蛋白质是生物体内最重要的大分子之一，其功能多种多样，参与了生物体内的各种生命活动。
而蛋白质的研究离不开纯化技术。
目前常用的蛋白质纯化方法包括离子交换层析、凝胶过滤层析、亲和层析和透析等。
这些方法可以根据蛋白质的特性和目的进行选择，从而获得高纯度的蛋白质样品，为后续的分析和研究提供了可靠的基础。
二、核酸提取与分离技术核酸是生物体内信息传递和遗传的基础分子，对于研究生物体的基因组结构和功能起着重要作用。
核酸提取与分离技术是研究核酸的关键步骤。
常用的核酸提取方法包括酚-氯仿法、硅胶柱法和磁珠法等。
通过这些方法，可以从不同来源的生物样品中提取出高纯度的DNA或RNA，为进一步的PCR扩增、酶切、测序等实验提供可靠的样本。
三、蛋白质电泳技术蛋白质电泳是一种常用的蛋白质分析方法，可以根据蛋白质的分子量和电荷进行分离和鉴定。
常见的蛋白质电泳方法包括SDS-PAGE和二维电泳。
其中，SDS-PAGE通过蛋白质与SDS（十二烷基硫酸钠）的结合，使蛋白质带负电荷，从而根据蛋白质的分子量进行分离；而二维电泳则结合了蛋白质的分子量和等电点，可以更精确地分离复杂的蛋白质混合物。
四、PCR技术PCR技术（聚合酶链式反应）是一种在体外扩增DNA片段的技术，其原理基于DNA的双链结构和DNA聚合酶的酶活性。
通过PCR技术，可以迅速扩增出目标DNA片段，并进行后续的测序、克隆、基因组分析等实验。
PCR技术具有高度灵敏性和特异性，已成为现代分子生物学研究中的重要手段。
五、基因测序技术基因测序是研究基因组结构和功能的重要方法。
随着测序技术的不断发展，高通量测序技术（Next Generation Sequencing，NGS）已成为目前最常用的基因测序方法之一。
常见的生物化学实验方法
常见的生物化学实验方法生物化学实验是研究生物分子结构、功能和相互作用的重要手段，广泛应用于生物医学研究、药物开发和环境保护等领域。
本文将介绍一些常见的生物化学实验方法。
一、色谱技术色谱技术是一种分离和分析物质的方法，根据分子的化学性质和大小差异，将混合物分离成各个组分。
常见的色谱技术包括气相色谱（GC）、液相色谱（LC）和薄层色谱（TLC）等。
在生物化学实验中，色谱技术常用于对生物样品中的分子进行纯化和分析。
例如，气相色谱可用于分析氨基酸和脂肪酸等小分子化合物，液相色谱则可以用于分离蛋白质、核酸和多糖等生物大分子。
二、电泳技术电泳技术是利用电场作用下物质的电荷和大小差异，将混合物分离成各个组分的方法。
常见的电泳技术包括聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）、聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和凝胶过滤电泳等。
在生物化学实验中，电泳技术常用于分离和检测蛋白质和核酸等生物大分子。
例如，聚丙烯酰胺凝胶电泳可用于分离和测定蛋白质分子量，SDS-PAGE则可以用于检测蛋白质的纯度。
三、质谱技术质谱技术是利用质量分析仪器对物质的质量和结构进行分析的方法。
常见的质谱技术包括质谱仪、飞行时间质谱（TOF-MS）和液相色谱质谱联用（LC-MS）等。
在生物化学实验中，质谱技术常用于鉴定和定量生物分子。
例如，利用质谱仪可以对蛋白质进行鉴定，通过测定样品中蛋白质的质量和碎片离子的质量谱图，确定蛋白质的氨基酸序列。
四、核酸杂交技术核酸杂交技术是利用互补的DNA或RNA序列进行结合，从而检测目标序列的方法。
常见的核酸杂交技术包括Southern blot、Northernblot和in situ hybridization等。
在生物化学实验中，核酸杂交技术常用于检测和定量特定DNA或RNA序列的存在。
例如，Southern blot可用于检测DNA片段在基因组中的分布和拷贝数，Northern blot则可用于检测特定mRNA的表达水平。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
思考题：
1．比较几种方法的优点和缺点？ 2．为什么标准蛋白质必须用凯氏定氮法测定度？ 3．若样品中含有核酸杂质，紫外法测定时应如何
排除干扰？ 4. 说明你所选择的蛋白质样品、制备方法和蛋白
质含量测定方法的依据。
示意图（交换树脂表面）
示意图（离子交换过程）
电离基团（磺酸根） 可交换离子（钠离 子） 交换离子 阳离子交换树脂：可供交换的是阳离子；
阴离子交换树脂：可供交换的是阴离子；
不交换离子
示意图
B物质
水分子
A物质
三、操作步骤
1、装柱
¾ 装柱是最关键的一步。 ¾ 重力沉降法装柱 ¾ 陆续不断地添加糊状物，使其形成的胶粒床面
1.安装膜具
装封胶条，注意封胶条平面朝 下，不能有裂口
盖上凹玻璃
将凹玻璃冲外装进槽里
将楔子插进，将底部插紧
2. 配制凝胶溶液
胶的配制(平行电泳两块胶板)
胶母液： 8.4ml 配胶缓冲液：13ml 蒸馏水：4ml 10% TEMD： 0.2ml，混匀 10%AP： 0.2ml ，混匀
根据以上选择制定实验方案，并确定 具体的实验参数，具体实验步骤和参数的 选择可参考实验教材。
第二部分：样品中蛋白质含量的测定
设计要求： （1）根据所制备的样品中蛋白质的性质选择合适的
测定方法，如粗制品的粗蛋白质含量和蛋白质含 量一般可选择凯氏定氮法，纯化后没有干扰的蛋 白质样品可选择紫外分光光度法等其它方法，标 准蛋白质为牛血清白蛋白。 （2）参考附录中提供的可选用的方法，制定测定的 具体实验方案。
蓝色物质
注意：DNA、蛋白质和黏多糖等物质对测定有干 扰作用。
按教材表1加入各种试剂，反应后观察并记录结果。
表1 二苯胺反应加入试剂
管号
1
2
3
4
5
蒸馏水/mL
1
-
-
-
-
DNA溶液/mL
-
1
-
-
-
RNA溶液/mL
-
-
1
-
-
提取物一/mL
-
-
-
1
-
提取物二/mL
-
-
-
-
1
二苯ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ试剂/mL
2
2
2
2
2
放沸水浴中10min 后的现象
实验目的： 通过学习的生物化学知识和实验技术，学会
自行设计一种含蛋白质的样品处理方法、蛋白质 制备方法和测定方法。
基本要求：
掌握常用的蛋白质制备和定量测定的方 法及其原理，能够根据样品的种类不同设计 蛋白质制备的方法，并根据蛋白质性质不同 设计选用相应的定量测定方法。
培养目标：
通过实验方案设计及方法选择，使学生 了解不同来源蛋白质制备的基本原理与方 法；熟悉几种蛋白质含量测定方法的基本原 理及应用条件；学会设计并实施一种蛋白质 的制备及测定实验方案；通过实验独立完成 试剂的配制、蛋白质的制备、标准曲线的制 作、蛋白质含量测定、结果计算、方案实施 总结全过程。并能够熟练使用离心机、分光 光度计等进行蛋白质制备和紫外、可见分光 光度测定。
可选择的蛋白质含量测定方法有：
（一）紫外分光光度法 （二）Bradford法 （三）微量凯氏定氮法 （四）双缩脲法等 （五）Folin-酚法
实验报告：
要求给出实验目的、设计方案及设计原 理、实验技术路线和参数选择的依据、实验 参考文献、实验方法和步骤、实验结果和分 析、总结。
第一部分：蛋白质样品的选择、处理及制备
设计要求：
（1）蛋白质样品的选择: 乳制品、植物蛋白、动物蛋白等 （2）处理方法的选择：根据所要制备和测定的蛋白质样品
的来源、种类和特性选择处理的方法——可选择粉碎、匀 浆、超声破壁等方法 （3）制备方法的选择：根据要测定的蛋白质组分选择制备 的方法——要求必需选择一种蛋白质样品的制备方法，如 采用特定溶剂提取后测定特定溶解性的蛋白质、分离纯化 后测定特定组分的蛋白质或除去脂肪等杂质制备粗蛋白测 定蛋白质等等。
(1) 计算迁移率（Rm值）：计算公式见教材。 (2) 绘制标准曲线：以标准蛋白亚基的Rm值为横坐标，以相
应分子量的对数值为纵坐标，即可绘制出测定蛋白质分 子量的标准的线图。 (3) 计算未知蛋白亚基样品的分子量：根据未知样品样的Rm 值，从上述标准曲线图中即可查出其分子量。
实验三 菜花中核酸的分离与鉴定
5. 加 样
6. 电泳
接通电源，电流 恒定为80mA，待溴酚 兰指示剂移至离下端 0.5cm（约3小时）， 切断电源，拔去插 头，倒出电极缓冲液 于大烧杯中（如此缓 冲液欲重用时，应把 正负电极液分别贮 存）。
7. 剥胶
8.染色： 考马斯亮蓝染色，详见教材
9.脱色
10. 凝胶（脱色之后）结果分析
3 实验记录与实验报告
3.2 实验报告 实验报告的格式应为：
⑴ 实验目的； ⑵ 实验原理； ⑶ 仪器、材料和试剂； ⑷ 实验步骤； ⑸ 结果讨论（含数理据处）； ⑹ 注意事项; (7)思考题 注意：实验结果的讨论要充分，尽可能多查阅一些有 关的文献和教科书，充分运用己学过的知识和生物化 学原理，进行深入的探讨，勇于提出自己独到的分析 和见解，并欢迎对实验提出改进意见。
¾ 阳离子交换树脂：可供交换的是阳离子； ¾ 阴离子交换树脂：可供交换的是阴离子；
z 常用的惰性基质：人工合成树脂（单体：苯乙烯、交联 剂：二乙烯苯）
z 阳离子交换剂：磺酸甲基、羧甲基、磷酸基 z 阴离子交换剂：二乙基胺乙基、三乙基胺乙基 z 可交换离子：阳离子：Na+、H+
阴离子：Cl-、OH-
根据现象分析提取物一和提取物二中主要 含有什么物质?为什么？
思考题：
1．核酸分离时为什么要除去小分子物质和脂类物 质？本实验是怎样除掉的？
2．运用本实验方法是否可以制备得到高纯度核酸? 3．快速鉴别RNA和DNA的方法是什么?
实验四 设计性实验——蛋白质的制 备及其含量测定
实验类型： 给定选题的综合设计性实验
（2）苔黑酚反应
测定核糖的常用方法是苔黑酚法（3，5—二羟基甲
苯，即Orcinol反应）。当含有核糖的RNA与浓盐酸及3， 5—二羟基甲苯在沸水水浴中加热10～20min后，有绿色物 产生，这是因为RNA脱嘌呤后的核糖与酸作用生成糠醛， 后者再与3，5—二羟基甲苯作用生成绿色物质。
CH3
100 o C
生物化学实验技术
Biochemical Experiment
绪论
1 实验目的
z 掌握蛋白质、酶、核酸、糖等重要物质的分 离、纯化和测定技术的原理及方法；
z 掌握生物化学的基本知识、基本理论及基本实 验技能；
z 培养分析和解决问题能力以及严谨细致的科学 作风、创新能力等综合素质。
2 通过生物化学实验应该做到
一、实验目的
¾ 学习和掌握从植物组织中分离核酸的原理和方法 ¾ 掌握定糖法测定核酸的原理及操作方法
二、原理
核酸的提取：三氯乙酸或高氯酸除酸溶小分子 有机溶剂去脂类 浓盐溶液（10％NaCl）提DNA 0.5M高氯酸提RNA
RNA核糖的测定:苔黑酚法
DNA脱氧核糖的测定：二苯胺法
三、操作步骤
1、核酸的分离
3、加样
z 上样量：0.3-0.5mL
注意：
¾加样的同时开始收集 ¾加样时且勿搅动树脂床面
z 0.5mL缓冲液冲洗加样处2次
4、洗脱与收集
z 尽量维持衡定柱压
z 每2分钟收集一管，共收集25管
5、氨基酸的鉴定
每个收集管
＋
沸水浴15min
1mL水合茚三酮
比色测定
绘制洗脱曲线
实验二 SDS-PAGE分离蛋白质
4 实验成绩评分方法
实验预习情况（10%） 实验操作情况（20%） 实验报告情况（30%） 实验考试成绩（40%）
实验一 离子交换层析法分离氨基酸
一、实验目的 学习用阳离子交换树脂分离氨基酸 的操作方法和基本原理
二、原理 氨基酸的pI不同，在同一pH下所带电荷的
数量和性质不同，与树脂的亲和力就有差异， 因此可根据亲和力从小到大的顺序依次被洗脱 下来。
一、实验目的 掌握SDS-PAGE的工作原理和操作方法
二、原理 不同蛋白质具有不同的分子量，并在一定
的pH溶液中带有不同的电荷。但经过SDS处理 后的蛋白质，分子表面完全被负电荷所覆盖， 因此在电泳时，电泳迁移率近取决于蛋白质的 分子量大小而与其所带电荷的性质无关。 ¾ 分子筛效应 ¾ 浓缩效应
三、操作步骤
2、平衡
z 层析柱正式使用前，必须平衡至所需的pH和离子强 度，一般用起始缓冲液在恒定压力下走柱，其洗脱体 积相当于4-6倍床体积，使交换剂充分平衡，柱床稳 定。装好的柱必须均匀，无纹路，不含气泡，柱顶交 换剂沉积表面十分平坦。
z 本实验平衡体积：60－80mL
z 调节流速：0.5mL/min或8-12滴/min
RNA+浓盐酸+
OH
OH FeCl 3
绿色化合物
注意：DNA、蛋白质和黏多糖等物质对测定有干扰作用。
按教材表2加入各种试剂，反应后观察并记录结 果。
表2 苔黑酚反应加入试剂
管号
1
2
3
4
5
蒸馏水/mL
1
-
-
-
-
DNA溶液/mL
-
1
-
-
-
RNA溶液/mL
-
-
1
-
-
提取物一/mL
-
-
-
1
-
提取物二/mL
-
-
-
-
1
三氯化铁浓盐酸溶液/mL
2