逆体积排阻层析法测定层析介质的孔径分布

合集下载

蛋白质纯化的一般原则及方法选择

随着分子生物学的发展，越来越多的科研人员熟练掌握了分子生物学的各种试验技术，并研制成套试剂盒，使基因克隆表达变得越来越容易lIl。

但分子生物学的上游工作往往并非是最终目的，分子克隆与表达的关键是要拿到纯的表达产物，以研究其生物学作用，或者大量生产出可用于疾病治疗的生物制品。

相对与上游工作来说，分子克隆的下游工作显得更难，蛋白纯化工作非常复杂，除了要保证纯度外，蛋白产品还必须保持其生物学活性。

纯化工艺必须能够每次都能产生相同数量和质量的蛋白，重复性良好。

这就要求应用适应性非常强的方法而不是用能得到纯蛋白的最好方法去纯化蛋白。

在实验室条件下的好方法却可能在大规模生产应用中失败，因为后者要求规模化，且在每日的应用中要有很好的重复性。

本文综述了蛋白质纯化的基本原则和各种蛋白纯化技术的原理、优点及局限性，以期对蛋白纯化的方法选择及整体方案的制定提供一定的指导。

1 蛋白纯化的一般原则蛋白纯化要利用不同蛋白间内在的相似性与差异，利用各种蛋白间的相似性来除去非蛋白物质的污染，而利用各蛋白质的差异将目的蛋白从其他蛋白中纯化出来。

每种蛋白间的大小、形状、电荷、疏水性、溶解度和生物学活性都会有差异，利用这些差异可将蛋白从混合物如大肠杆菌裂解物中提取出来得到重组蛋白。

蛋白的纯化大致分为粗分离阶段和精细纯化阶段二个阶段。

粗分离阶段主要将目的蛋白和其他细胞成分如DNA、RNA等分开，由于此时样本体积大、成分杂，要求所用的树脂高容量、高流速，颗粒大、粒径分布宽．并可以迅速将蛋白与污染物分开，防止目的蛋白被降解。

精细纯化阶段则需要更高的分辨率，此阶段是要把目的蛋白与那些大小及理化性质接近的蛋白区分开来，要用更小的树脂颗粒以提高分辨常用的离子交换柱和疏水柱，应用时要综合考虑树脂的选择性和柱效两个因素。

选择性指树脂与目的蛋白结合的特异性，柱效则是指蛋白的各成分逐个从树脂上集中洗脱的能力，洗脱峰越窄，柱效越好。

仅有好的选择性，洗脱峰太宽，蛋白照样不能有效分离。

试验四体积排除色谱SEC法测定聚合物的分子量及分子量分布

实验四体积排除色谱(SEC)法测定聚合物的分子量及分子量分布分子量的多分散性是高聚物的基本特征之一。

聚合物的性能与其分子量和分子量分布密切相关。

体积排除色谱( size exclusion chromatography , SEC)是液相色谱的一个分支，已成为测定聚合物分子量分布和结构的最有效手段。

其还可测定聚合物的支化度，共聚物及共混物的组成。

采用制备型的色谱仪，可将聚合物按分子量的大小分级，制备窄分布试样，供进一步分析和测定其结构。

该方法的优点是：快捷、简便、重视性好、进样量少、自动化程度高。

体积排除色谱在一段时期内常称为凝胶渗透色谱(gel permeation chromatography，GPC)、凝胶过滤色谱(gel filtration chromatography ，GFC )、凝胶色谱。

从分离机理看，使用体积排除色谱较为确切。

一、实验目的：1．了解SEC 法测定高聚物分子量及分子量分布的原理；2．掌握Waters—510 型仪器的操作技术；3．掌握SEC 数据处理方法。

二、基本原理：体积排除色谱(SEC)分离机理认为在多孔载体(其孔径大小有一定的分布，并与待分离的聚合物分子尺寸可比拟的凝胶或多孔微球)充填的色谱柱里引入聚合物溶液，用溶剂淋洗，体系是处于扩散平衡的状态。

聚合物分子在柱内流动过程中，不同大小的分子向载体孔洞渗透的程度不同，大分子能渗透进去的孔洞数目比小分子少，有些孔洞即使大小分子都能渗透进去，但大分子能渗透的深度浅。

溶质分子的体积越小渗透进去的几率越大，随着溶剂流动，它在柱中保留的时间越长。

如果分子的尺寸超过载体孔的尺寸时，则完全不能渗透进孔里，只能随着溶剂从载体的粒间空隙中流过，最先淋出。

当具有一定分子量分布的高聚物溶液从柱中通过时，较小的分子在柱中保留的时间比大分子保留的时间要长，于是整个样品即按分子尺寸由大到小的顺序依次流出。

色谱柱总体积为V t,载体骨架体积为V g，载体中孔洞总体积为V i,载体粒间体积为V o，则V t= V g+ V°+ V iV0 和V i 之和构成柱内的空间。

9种层析分离纯化方法详解

9种层析分离纯化方法详解层析法是利用不同物质理化性质的差异而建立起来的技术。

所有的层析系统都由两个相组成：一是固定相，它或者是固体物质或者是固定于固体物质上的成分；另一是流动相，即可以流动的物质，如水和各种溶媒。

当待分离的混合物随溶媒（流动相）通过固定相时，由于各组份的理化性质存在差异，与两相发生相互作用（吸附、溶解、结合等）的能力不同，在两相中的分配（含量对比）不同，而且随溶媒向前移动，各组份不断地在两相中进行再分配。

与固定相相互作用力越弱的组份，随流动相移动时受到的阻滞作用小，向前移动的速度快。

反之，与固定相相互作用越强的组份，向前移动速度越慢。

分部收集流出液，可得到样品中所含的各单一组份，从而达到将各组份分离的目的。

按层析原理可将层析分为以下9种：1、亲和层析利用待分离物质和它的特异性配体间具有特异的亲和力，从而达到分离的目的。

将可亲和的一对分子中的一方以共价键形式与不溶性载体相连作为固定相吸附剂，当含混合组分的样品通过此固定相时，只有和固定相分子有特异亲和力的物质，才能被固定相吸附结合，性无关组分随流动相流出。

改变流动相组分，可将结合的亲和物洗脱下来。

亲和层析中所用的载体称为基质，与基质共价连接的化合物称配基。

具有专一亲和力的生物分子对主要有：抗原与抗体，DNA与互补DNA或RNA，酶与底物、激素与受体、维生素与特异结合蛋白、糖蛋白与植物凝集素等。

亲和层析可用于纯化生物大分子、稀释液的浓缩、不稳定蛋白质的贮藏、分离核酸等。

亲和层析纯化的分离原理特点：亲和层析具有高选择性、高纯度、快速、浓缩等特点，在重组蛋白的分离中多作为第一步的粗纯，实现对绝大部分杂质蛋白的去除。

2、离子交换层析采用具有离子交换性能的物质作固定相，利用它与流动相中的离子能进行可逆交换的性质来分离离子型化合物的方法。

主要用于分离氨基酸、多肽及蛋白质，也可用于分离核酸、核苷酸及其他带电荷的生物分子。

不同蛋白质的等电点（pI，isoelectric point）特性，使在不同pH缓冲液条件下所带正/负净电荷不同，选择不同的离子交换柱实现分离。

8反相层析

BioPharm
4.2 流动相的pH控制
流动相pH的改变会影响到溶质的解离状态、固定相表面残留硅醇基和其它吸附基团的解离情况、以及添加至流动相的可解离组分的离子平衡，因此pH值的改变会引起溶质选择性和保留值的改变酸性条件常用三氟乙酸（TFA）、七氟丁酸（HFBA）和正磷酸调节pH，接近中性时常用乙酸铵或磷酸盐来调节pH ，碱性条件用NaOH来调节控制
– n-辛基
– n-十八烷基 – n-丙基
– 二苯基等
3.1.3 配基与基质的偶联用氯化三甲基硅烷或氯化三乙基硅烷封阻硅胶表面残留的硅醇基配基较大时，由于空间位阻效应，导致亲硅醇基效应存在
BioPharm
3.2 反相层析介质的性质
粒径
– RPC是与HPLC技术伴随发展的，有着高分辨率，反相介质的粒径一般在5~30μm之间，小于常用的凝胶过滤介质和离子交换剂，有着较高的柱效 – 分析型应用：< 15μm介质 – 制备型应用：> 15μm介质
BioPharm
反相层析流动相的溶剂洗脱强度变化范围大，使溶质保留值的差别可以达到1-2个数量级，因此反相层析可分离的溶质范围很宽，从极性较大的寡肽、小分子有机物到疏水性较强的生物大分子反相层析能够区分分子在疏水性质方面的细微差异而有效地进行分离，具备高分辨率的特性
BioPharm
BioPharm
加样量对Rs的影响
BioPharm
柱长
反相介质粒径普遍较小，本身有着较高的柱效，一般所用层析柱柱长较短
对于寡肽等生物小分子，适当增加柱长能够改善Rs
生物大分子在反相柱中的保留值对于流动相的微小变化十分敏感，可以认为是由开/关机制控制，增加柱长不能明显改善Rs

生物制药名词解释

1、药物Medicine(remedy)：用于预防、治疗或诊断疾病或调节机体生理功能、促进机体康复保健的物质，有4 大类：预防药、治疗药、诊断药和康复保健药。

2、生物药物（biopharmaceutics）：是以生物体、生物组织或其成份为原料（包括组织、细胞、细胞器、细胞成分、代谢、排泄物）综合应用生物学、物理化学与现代药学的原理与方法加工制成的药物。

3、基因药物（gene medicine）：是以基因物质（RNA 或DNA 及其衍生物）作为治疗的物质基础，包括基因治疗用的重组目的DNA 片段、重组疫苗、反义药物和核酶等。

4液-液萃取：是指用一种溶剂将物质从另一种溶剂中提取出来的方法。

5萃取:料液与萃取剂接解后，料液中的溶质的萃取济转移的过程就叫萃取。

6、反义药物：是以人工合成的十至几十个反义寡核苷酸序列，它能与模板DNA 或mRNA 互补形成稳定的双链结构，抑制靶基因的转录和mRNA 翻译，从而达到抗肿瘤和抗病毒作用。

7、生物制品（biologics）：是应用普通的或以基因工程、细胞工程、蛋白质工程、发酵工程等生物技术获得的微生物、细胞及各种动物和人源的组织和液体等生物材料制备的，用于人类疾病预防、治疗和诊断的药品。

8、RNA 干涉（RNAi，RNA interference）：是指在生物体细胞内，dsRNA 引起同源mRNA 的特异性降解，因而抑制相应基因表达的过程。

9、siRNA (small interfering RNA)：是一种小RNA 分子（~21-25 核苷酸），由Dicer （RNAase Ⅲ家族中对双链RNA 具有特异性的酶）加工而成。

siRNA是siRISC (RNA-induced silencing complex 由核酸内切酶、核酸外切酶、解旋酶等构成，作用是对靶mRNA 进行识别和切割）的主要成员，激发与之互补的目标mRNA 的沉默。

10、酶工程（enzyme engineering）：是从应用目的出发，研究酶和应用酶的特异催化功能，并通过工程化过程将相应原料转化成所需产物的技术。

各类层析色谱分析技术完全讲解

二、层析法的特点
❖ 分离效率高：复杂混合物、有机同系物、异构体、手性异构体。
❖ 灵敏度高：可以检测出μg.g-1(10-6)级甚至ng.g-1(10-9)级的物质量。
❖ 分析速度快：一般在几分钟或几十分钟内可以完成一个试样的分析。
❖ 应用范围广
不足之处：被分离组分的定性较为困难。
层析应用范围
吸附介质的分类及其性质（一）
❖ 羟基磷灰石特点：抗机械强度弱。原理：溶质分子中的酸性基团与洗脱液中的磷酸根离子对羟基磷灰石中的钙离子有竞争作用。应用：分离有序和无序的生物大分子，如分离RNA和 DNA等。
❖
1941年，英国生物学家Martin和Synge 首先提出了色谱塔板理论，为后来各种色谱技术的发展奠定了基础。
1944年出现纸层析。以后层析法不断发展，相继出现气相层析、高压液相层析、薄层层析、亲和层析、凝胶层析等。
层析法是利用混合物中各组分物理化学性质的差异（如吸附力、分子形状及大小、分子亲和力、分配系数等），使各组分在两相（一相为固定的，称为固定相；另一相流过固定相，称为流动相）中的分布程度不同，从而使各组分以不同的速度移动而达到分离的目的。
层析分类法
按操作形式不同分类
名称
操作形式
柱层析法
固定相装于柱内，使样品沿着一个方向前移而达分离
薄层层析法纸层析法
将适当粘度的固定相均匀涂铺在薄板上，点样后用流动相展开，使各组份分离
用滤纸作液体的载体，点样后用流动相展开，使各组份分离
薄膜层析法
将适当的高分子有机吸附剂制成薄膜，以类似纸层析方法进行物质的分离
层析技术是一种分离技术，是混合物最有效的分离、分析方法。
经典色谱（offline)

蛋白纯化办法大全及优缺点比较

蛋白纯化方法大全及优缺点比较1.?蛋白沉淀蛋白能溶于水是因为其表面有亲水性氨基酸，在蛋白质的等电点处若溶液的离子强度特别高或者特别低，蛋白则倾向于从溶液中析出。

硫酸铵是沉淀蛋白最常用的盐，因为它在冷的缓冲液中溶解性好，冷的缓冲液有利于保持目的蛋白的活性。

硫酸铵分馏常用作试验室蛋白纯化的第一步，它可以初步粗提蛋白质，去除非蛋白成分。

蛋白质在硫酸铵沉淀中较稳定，可以短期在这种状态下保存中间产物，当前蛋白质纯化多采用这种办法进行粗分离翻。

在规模化生产上硫酸铵沉淀方法仍存在一些问题，硫酸铵对不锈钢器具的腐蚀性很强。

其他的盐如硫酸钠不存在这种问题，但其纯化效果不如硫酸铵。

除了盐析外蛋白还可以用多聚物如PEG和防冻剂沉淀出来，PEG是一种惰性物质，同硫酸铵一样对蛋白有稳定效果，在缓慢搅拌下逐渐提高冷的蛋白溶液中的PEG浓度，蛋白沉淀可通过离心或过滤获得，蛋白可在这种状态下长期保存而不损坏。

蛋白沉淀对蛋白纯化来说并不是多么好的方法，因为它只能达到几倍的纯化效果，而我们在达到目的前需要上千倍的纯化。

其好处是可以把蛋白从混杂有蛋白酶和其他有害杂质的培养基及细胞裂解物中解脱出来。

2.缓冲液的更换?虽然更换缓冲液不能提高蛋白纯度，但它却在蛋白纯化方案中起着极其重要的作用。

不同的蛋白纯化方法需要不同pH及不同离子强度的缓冲液。

假如你用硫酸铵将蛋白沉淀出来，毫无疑问蛋白是处在高盐环境中，需要想办法脱盐，可用的方法有利用半透膜透析，通过勤换透析液体去除盐分，此法尚可，但需几个小时，通常要过夜，也难以用予大规模纯化中。

新型的设备将透析膜夹在两个板中间，板的一侧加缓冲液，另一侧加需脱盐的蛋白溶液，并在蛋白溶液一侧通过泵加压，可以使两侧溶液在数小时内达到平衡，若增加对蛋白溶液的压力，还可迫使水分和盐更多通过透析膜进入透析液达到对蛋白浓缩的目的。

也有出售的脱盐柱，柱内的填料是小孔径的颗粒，蛋白分子不能进入孔内，先于高浓度盐离子从柱中流出，从而使二者分离。

体积排阻色谱孔径

体积排阻色谱孔径
体积排阻色谱的孔径是指用于分离样品的色谱柱的孔径大小。

体积排阻色谱是基于样品分子在填充有固定相的色谱柱中流动的速度差异来进行分离的。

色谱柱的孔径大小会直接影响分离效果和分离时间。

孔径较大的色谱柱会有更高的通透性和较快的流速，分离效果会更好，但可能会出现分辨率较低的情况。

孔径较小的色谱柱会有较慢的流速和较高的分辨率，但可能会导致分离时间较长。

常见的体积排阻色谱柱的孔径范围一般为1.8 μm至10 μm，
常用的孔径包括2 μm、3 μm、5 μm和10 μm。

选择合适的孔
径大小需要考虑到分离目标、样品特性和分析要求等因素。

1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。

］３５述，对于层析分离过程具有重要影响［。
｛［
∞
］｝
（）２
对数正态分布模型中狉ｐ和狊ｐ分别描述孔径和孔径不再直接表示平均孔半径，分布的宽度，其中狉ｐ平均孔半径可由式狉＝
生物分离用层析介质多为亲水软胶，难以用一些常规的孔径分布分析方法来测定，如气体吸附
，
犛狋犪狋犲犓犲犪犫狅狉犪狋狅狉犺犲犿犻犮犪犾犈狀犻狀犲犲狉犻狀犺犲犻犪狀狀犻狏犲狉狊犻狋犪狀狕犺狅狌３１００２７，犣犺犲犻犪狀犺犻狀犪）狔犔狔狅犳犆犵犵，犣犼犵犝狔，犎犵犼犵，犆
１１２１，犔犛犎犈犖犣狌犻犐犖犇狅狀犻犪狀犃犗犛犺犪狀犻狀犵狇犵，犢犼犵
１（犇犲犪狉狋犿犲狀狋狅犺犲犿犻犮犪犾犪狀犱犅犻狅犾狅犻犮犪犾犈狀犻狀犲犲狉犻狀犺犲犻犪狀狀犻狏犲狉狊犻狋犪狀狕犺狅狌３１００２７，犣犺犲犻犪狀犺犻狀犪；狆犳犆犵犵犵，犣犼犵犝狔，犎犵犼犵，犆
１（浙江大学化学工程与生物工程学系，浙江杭州３１００２７；２
檭檭殐
：Ｔ犃犫狊狋狉犪犮狋ｈｅｍｅｔｈｏｄｏｆｉｎｖｅｒｓｅｓｉｚｅｅｘｃｌｕｓｉｏｎｃｈｒｏｍａｔｏｒａｈＩＳＥＣ）ｗａｓｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｔｏｄｅｔｅｒｍｉｎｅｔｈｅｇｐｙ（（）ＳＤｏｆｐｏｒｏｕｓｃｈｒｏｍａｔｏｒａｈｉｃｍｅｄｉａ．ＴｗｏｗｅｌｌｋｎｏｗｎｐｏｒｅｓｉｚｅｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｒｅｓｉｚｅｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎＰｇｐｐ（，Ｇ，ｗＰＳＤ）ｍｏｄｅｌｓａｕｓｓｉａｎｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎａｎｄｌｏｎｏｒｍａｌｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｅｒｅｉｎｖｅｓｔｉａｔｅｄｉｎｔｈｅｐｒｅｓｅｎｔｇｇｗｏｒｋ．Ｔｈｅｍｏｓｔｕｓｅｄｌｏｃａｌｐａｒｔｉｔｉｏｎｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔｍｏｄｅｌｗａｓａｄｏｔｅｄｗｉｔｈｔｈｅａｓｓｕｍｔｉｏｎｏｆｒｉｉｄｓｈｅｒｉｃａｌｐｐｇｐｓｏｌｕｔｅｓｉｎｔｈｅｃｌｉｎｄｒｉｃａｌｐｏｒｅｓ．ＴｈｅｎｔｈｅｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｅｔｗｅｅｎＰＳＤａｎｄｔｈｅｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｙｐｂａｓｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ．Ａｆｔｅｒｔｈｅｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｏｆ犓ｄｗｉｔｈａｓｅｒｉｅｓｏｆｍｏｌｅｃｕｌｅｓｔａｎｄａｒｄｓｂｉｚｅｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ犓ｄｗｙｓ，ｔｈｅｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆＰＳＤｃｏｕｌｄｂｅｏｂｔａｉｎｅｄｗｉｔｈｔｈｅｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｏｆｃａｌｃｕｌａｔｅｄ犓ｄｅｘｃｌｕｓｉｏｎｃｈｒｏｍａｔｏｒａｈｇｐｙ，Ｓｔｏｔｈｅｅｘｅｒｉｍｅｎｔａｌｄａｔａ．Ｉｎｔｈｅｐｒｅｓｅｎｔｗｏｒｋ，犓ｄｏｆｆｉｖｅｔｉｃａｌｃｈｒｏｍａｔｏｒａｈｉｃｍｅｄｉａＰＳｅｈａｒｏｓｅｐｙｐｇｐｐＦＡＳＴＦＬＯＷ，ＱＳｅｈａｒｏｓｅＦＡＳＴＦＬＯＷ，ＴｏｏｅａｒｌＤＥＡＥ６５０Ｍ，ＳｔｒｅａｍｌｉｎｅＤＥＡＥａｎｄＳｅｈａｄｅｘＧｐｙｐｐ１５０，ｗｅｒｅｍｅａｓｕｒｅｄｂｓｉｎｅｘｔｒａｎｓａｓｔｈｅｓｔａｎｄａｒｄｓ．ＴｈｅｎｔｈｅＰＳＤｓｏｆｆｉｖｅｍｅｄｉａｔｅｓｔｅｄｗｅｒｅｙｕｇｄ，ａｎｄｔｈｅｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｈｅｍｅｔｈｏｄｏｆＩＳＥＣ．Ｔｈｅｍｏｄｅｌｃａｌｃｕｌａｔｉｏｎｆｉｔｔｅｄｗｅｌｌｗｉｔｈｔｈｅｅｘｅｒｉｍｅｎｔａｌｄａｔａｙｔｐ，ＰＳＤｓｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｍｅｄｉａｗｅｒｅａｎａｌｚｅｄ．Ｉｎａｄｄｉｔｉｏｎｔｈｅａｃｃｅｓｓｉｂｌｅｉｎｔｅｒｎａｌｏｒｅｓｕｒｆａｃｅａｒｅａｗａｓｃａｌｃｕｌａｔｅｄｙｐａｎｄｄｉｓｃｕｓｓｅｄ．ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄｔｈａｔＩＳＥＣｉｓａｆｅａｓｉｂｌｅｍｅｔｈｏｄｔｏｄｅｔｅｒｍｉｎｅｔｈｅＰＳＤｏｆｐｏｒｏｕｓｃｈｒｏｍａｔｏｒａｈｉｃｍｅｄｉａ．ｇｐ
１卷第４期第６０１０年４月２
化工学报ＩＥＳＣＪｏｕｒｎａｌＣ
ｏｌ．６１Ｎｏ．４Ｖｒｉｌ０１０Ａ２ｐ
檭殐
檭檭檭檭檭檭殐
研究论文
逆体积排阻层析法测定层析介质的孔径分布
２沈醉１，林东强１，，姚善泾１
００９－０９－２９收到初稿，２００９－１１－２３收到修改稿。２联系人：姚善泾。第一作者：沈醉（，男，硕士研１９８６—）究生。基金项目：国家自然科学基金项目（；２０７７６１２９，２０９７６１５４）新世纪优秀人才支持计划项目。：２犲犮犲犻狏犲犱犱犪狋犲００９－０９－２９．犚犆狅狉狉犲狊狅狀犱犻狀狆犵ｕ．ｅｄｕ．ｃｎ＠ｚｊ犉狅狌狀犱犪狋犻狅狀犻狋犲犿：ｓｕｏｒｔｅｄｂｈｅＮａｔｉｏｎａｌＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｐｐｙｔＦｏｕｎｄａｔｉｏｎｏｆＣｈｉｎａ（２０７７６１２９，２０９７６１５４）ａｎｄｔｈｅＰｒｏｒａｍｆｏｒｇＮｅｗＣｅｎｔｕｒｘｃｅｌｌｅｎｔＴａｌｅｎｔｓｉｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔＮＣＥＴ）．ｙＥｙ（
］６７法、压汞法、气泡法、Ｘ射线小角散射法等［。
犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳狆狅狉犲狊犻狕犲犱犻狊狋狉犻犫狌狋犻狅狀狅犳狆狅狉狅狌狊犿犲犱犻犪犫狔犻狀狏犲狉狊犲狊犻狕犲犲狓犮犾狌狊犻狅狀犮犺狉狅犿犪狋狅狉犪犺犵狆狔
∞
引言
层析是生物大分子分离纯化的有效方法，具有多孔结构的层析介质是层析分离得以进行的必要条
］１２件，直接影响了分离的效果［。绝大多数天然或
差，犃则是归一化常数，为
在孔径很狉）ｄ狉。 ∫ 况下，高斯正态分布函数可能会出现狉为负数的情况。１０］对数正态分布模型［的表达式为
２（／ｎ狉狉１ｌｐ））＝犃ｅ狉ｘｐ－犳（狊２狉ｐ
合成的多孔介质的孔隙具有不规则的几何形状以及不均一的大小，为了描述复杂的孔结构，产生了许多结构参数，其中孔径分布（ｏｒｅｓｉｚｅｄｉｓｔｒｉｂｕｐ，ＰｔｉｏｎＳＤ）能够表示孔径大小在一定范围内的分布密度，是对不同孔径大小分布的一个统计学描
檭檭檭檭檭殐
２
化学工程联合国家重点实验室（浙江大学），浙江杭州３）１００２７
摘要：针对层析介质的孔径分析，基于刚性球状分子进入柱状孔的假设，分别采用高斯正态分布和对数正态分布描述孔径分布，利用简化的单孔分配因子模型，建立了孔径分布函数和分配因子犓ｄ的关联，通过体积排阻层析实验测定系列标准物的犓ｄ，从而拟合得到孔径分布信息，建立了逆体积排阻层析法。以葡聚糖作为分子大小的标准物，测定了５种典型层析介质（ＳＰＳｅｈａｒｏｓｅＦＡＳＴＦＬＯＷ、ＱＳｅｈａｒｏｓｅＦＡＳＴＦＬＯＷ、Ｔｏｏｅａｒｌｐｐｙｐ）的犓ｄ，计算和比较了不同介质的孔径分布，分析了介质的ＤＥＡＥ６５０Ｍ、ＳｔｒｅａｍｌｉｎｅＤＥＡＥ和ＳｅｈａｄｅｘＧ１５０ｐ可吸附孔表面积等结构参数，证实了逆体积排阻层析法分析层析介质孔径分布的可行性和实用性。关键词：逆体积排阻层析；层析介质；孔径分布；分配因子中图分类号：ＴＱ０２８．８文献标识码：Ａ文章编号：０）０４３８－１１５７（２０１０４－０８６７－０８