人同型半胱氨酸(Hcy)ELISA试剂盒说明书
同型半胱氨酸速率法检测说明书
同型半胱氨酸速率法检测说明书I. 介绍同型半胱氨酸（Homocysteine，简称Hcy）是体内一种重要的氨基酸，它在蛋氨酸代谢过程中形成。
近年来，研究发现Hcy与多种心血管疾病、神经系统疾病以及某些遗传代谢病的发生发展密切相关。
因此，准确、快速地检测Hcy的水平对于疾病诊断与治疗具有重要意义。
II. 检测原理同型半胱氨酸速率法检测基于同型半胱氨酸在特定条件下与酶的催化作用，通过测定反应体系中底物和产物的生成速率来间接测定Hcy的浓度。
该方法的原理简单，操作方便，能够准确地测定Hcy的水平。
III. 检测设备与试剂1. 检测设备：同型半胱氨酸速率法检测仪2. 试剂：- 试剂A：同型半胱氨酸标准品- 试剂B：底物溶液- 试剂C：酶溶液IV. 检测步骤1. 样本处理：- 取适量样本，加入适量去蛋白液混匀，沉淀离心，取上清液作为待测样本。
2. 准备工作：- 分别将试剂A、试剂B和试剂C室温静置至室温。
- 预热同型半胱氨酸速率法检测仪至37°C。
3. 检测步骤：a. 取一定体积的底物溶液加入反应池中。
b. 加入一定体积的试剂A并混匀。
c. 加入一定体积的待测样本混匀。
d. 加入一定体积的试剂C并立即混匀。
e. 将反应池放入预热好的同型半胱氨酸速率法检测仪中进行反应。
f. 按照仪器指示记录一定时间内反应速率的变化。
g. 通过与同型半胱氨酸标准品的比对，计算出待测样本中Hcy的浓度。
V. 结果解读根据检测结果得出的Hcy浓度，可以用作评估患者的心血管疾病和神经系统疾病的风险。
一般来说，Hcy的浓度越高，表示患相应疾病的风险越大。
但具体的标准值要根据医生的指导和临床实际情况来确定。
VI. 注意事项1. 检测前应严格按照说明书的要求储存试剂及设备，避免高温、湿度等不利因素。
2. 操作过程中应注意实验室内无任何污染物干扰，避免误差。
3. 操作时需穿戴个人防护装备，做好安全防护工作。
4. 检测结果仅供医生参考，不能用于自我诊断和自我治疗。
人同型半胱氨酸(Hcy)ELISA试剂盒说明书
人同型半胱氨酸（Hcy）酶联免疫分析试剂盒使用说明书厦门慧嘉生物科技有限公司本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中同型半胱氨酸（Hcy）的含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人同型半胱氨酸（H cy）水平。
用纯化的人同型半胱氨酸（H cy）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入同型半胱氨酸（H cy），再与HRP标记的羊同型半胱氨酸（H cy）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的同型半胱氨酸（H cy）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人同型半胱氨酸（H cy）浓度。
试剂盒组成：样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。
加入一定量的PBS，PH7.4。
用液氮迅速冷冻保存备用。
同型半胱氨酸检测试剂盒产品技术要求
同型半胱氨酸检测试剂盒产品技术要求同型半胱氨酸(Homocysteine, HCY)是一种重要的氨基酸，它在体内的代谢过程中，参与甲硫酸盐和硫酸葡萄糖胺的形成以及尿苯丙氨酸的代谢。
正常情况下，体内HCY的浓度较低，但如果HCY的产生量过高或清除速度减慢，就会导致HCY浓度升高，从而引发多种健康问题，如心血管疾病、新生儿缺陷、神经系统疾病等。
1.灵敏度：该检测试剂盒的灵敏度应足够高，能够准确测量HCY浓度的变化。
测量的线性范围应广泛，能够覆盖普通人群和高危人群的HCY浓度范围。
2.准确性：检测试剂盒应具有较高的准确性，能够在不同样本中精确测量HCY的浓度。
它应可靠地区分正常浓度和异常浓度，并提供准确的浓度结果。
3.精密度：检测试剂盒应具有较高的精密度，能够重复测量同一样本以获得一致的结果。
它应具有较低的内部和外部变异性，以确保可靠的实验重复性和结果比对性。
4.反应速度：检测试剂盒应能够在合理的时间内完成反应，并提供可靠的测量结果。
反应时间不宜过长，以节省实验时间。
5.操作简便性：检测试剂盒应具有操作简便的特点，使实验操作人员能够方便、快速地使用该试剂盒进行测量。
试剂盒应包含清晰明确的使用说明书，以便用户能够正确操作和解读结果。
6.安全性：检测试剂盒应符合安全性要求，不含有有害物质或重金属等对操作人员和环境有害的成分。
同时，应提供必要的标识和保护措施，以确保使用过程中的安全性。
7.长期稳定性：检测试剂盒应具有较长的稳定性，可以长期保存而不会失去活性。
试剂盒应提供有效期和储存条件等相关信息，以便用户能够合理储存和使用。
8.适用范围：检测试剂盒应适用于不同类型的样本，如血液、尿液等，以满足不同场景下HCY测量的需求。
总之，同型半胱氨酸检测试剂盒(酶法)的技术要求包括灵敏度、准确性、精密度、反应速度、操作简便性、安全性、长期稳定性和适用范围等方面，以确保该产品能够准确、可靠地测量HCY浓度，为相关疾病的诊断和治疗提供科学依据。
Hcy说明书
液体生化试剂使用说明书同型半胱氨酸测定试剂盒（酶法）【包装规格】【预期用途】本试剂适用于人血清或血浆中同型半胱氨酸含量的测定。
【检验原理】同型半胱氨酸被转化为游离型后，通过与共价底物反应，同时产生腺苷。
腺苷立即水解成氨和次黄嘌呤，氨在谷氨酸脱氢酶的作用下，使β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原性（NADH）转化为NAD+，样本中的同型半胱氨酸的浓度与NADH的变化成正比。
【主要组成成分】R1：S-腺苷甲硫氨酸盐（SAM）0.1mmol/L β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原性（NADH）0.2mmol/L三（2羧乙基）磷氯化氢（TCEP）0.5mmol/Lα- 酮戊二酸 5.0mmol/L修饰化Hcy甲基转移酶（HMTase） 5.0KU/L谷氨酸脱氢酶（GLDH）10.0KU/LR2：修饰化S-腺苷同型半胱氨酸（SAH）水解酶3.0KU/L 腺苷脱氨酶（ADA） 5.0KU/L【储存条件及有效期】试剂贮存于2－8℃、避光环境中，有效期为12个月。
【适用仪器】适用于日立7170、7060、7020、奥林巴斯、Beckman、东芝、利霸、迈瑞、岛津、欧宝、Microlab300等各种半自动、全自动生化分析仪。
【样本要求】样本为新鲜血清或肝素血浆。
请采血后立即离心分离血浆，或冷藏保存1小时内离心分离。
离心后样本在室温可稳定4天，0-2℃可稳定2周，-20℃下可稳定2个月。
【检验方法】1. 试剂准备液体试剂，直接使用，无需配制。
2. 基本参数测定模式速率法样本量13 ul延迟时间3分钟R1240 ul测定时间2-3分钟R265ul温度37℃主波长340nm光径1cm 副波长700nm值△A4. 结果计算采用合适的非线性模式，如logit/Log拟合多点定标的校准曲线；样品含量值通过校准曲线得出。
【参考值】3-15umol/L建议各实验室建立自己的参考值范围。
【检验结果的解释】如果不能确定检测结果的真实性则需直接重新测定或对样本进行稀释后重新测定。
同型半胱氨酸检测试剂盒(酶法)产品技术要求
医疗器械产品技术要求编号：同型半胱氨酸检测试剂盒（酶法）1.产品型号/规格及其划分说明序号规格1R1：2×50ml、R2：2×5ml、R3：2×9ml（2×250Tests）2R1：2×50ml、R2：1×10ml、R3：1×18ml3R1：1×50ml、R2：1×5ml、R3：1×9ml2.性能指标2.1外观试剂R1溶液应呈粉红色、无颗粒、无杂质；试剂R2溶液应呈黄色、无颗粒、无杂质；试剂R3溶液应呈淡黄色、无颗粒、无杂质。
2.2净含量试剂盒各试剂装量应不小于标示值。
2.3试剂空白吸光度应为≤0.20。
用蒸馏水作为样品加入试剂测试,试剂空白吸光度A660nm2.4分析灵敏度测试40μmol/L被测物时，吸光度差值（△A）应不小于0.02。
2.5线性范围在（0～40）μmol/L范围内，其线性相关系数r≥0.990；浓度≥6μmol/L时，相对偏差≤20%；浓度＜6μmol/L时，绝对偏差≤1μmol/L。
2.6测量精密度2.6.1重复性用控制血清重复测试所得结果的重复性（变异系数，CV）应≤10.0%。
2.6.2批间差批间差应≤10.0%。
2.7准确度用参考物质进行测试，其相对偏差应≤20.0%。
3.检验方法仪器基本要求a）波长：660nm；温度：37℃±1℃。
b）全自动生化分析仪。
测试方法按说明书规定，因不同机型使用试剂最终浓度相同。
在此推荐以本公司BECKMAN或HITACHI全自动生化分析仪进行测试。
3.1外观和性状目测检查，试剂R1、R2、R3溶液性状应符合2.1的要求。
3.2净含量用通用量具进行测量，应符合2.2的要求。
3.3试剂空白吸光度用蒸馏水作为样品测试试剂（盒），在测试波长660nm下，记录测试启动时的吸光度（A1）和约5min(t)后的吸光度（A2），A2测试结果即为试剂空白吸光度测定值，应符合2.3的要求。
人同型半胱氨酸(Hcy)ELISA试剂盒说明书
人同型半胱氨酸(Hcy)酶联免疫分析试剂盒使用说明书厦门慧嘉生物科技有限公司本试剂盒仅供研究使用检测范围：0.8 nmol/ml –50 nmol/ml最低检测限：0.2 nmol/ml特异性：本试剂盒可同时检测天然或重组的人Hcy，且与其他相关蛋白无交叉反应。
有效期：6个月预期应用：ELISA法定量测定人血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中Hcy含量。
说明1.试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。
2.浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。
3.中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。
4.刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。
概述同型半胱氨酸Hcy又称高半胱氨酸，是一种含硫氨基酸，不属于组成蛋白质的20种氨基酸，体内不能合成，只能来源于蛋氨酸的分解代谢。
Hcy是甲硫氨酸代谢形成的中间产物。
，在体内由甲硫氨酸转甲基后生成，有两种途径。
再甲基化途径：约有50%Hcy在蛋氨酸合成酶的作用下，以维生素B12为辅因子，以N5-甲基四氢叶酸为甲基供体，发生再甲基化，重新合成蛋氨酸。
转硫途径：另外约50%的Hcy经转硫途径不可逆生成半胱氨酸和α酮丁酸，此过程需维生素B6依赖的胱硫醚β合成酶和甲硫氨酸合成酶参与。
Hcy合成和代谢途径及其相关的酶系统、叶酸、维生素B12和维生素B6的缺乏、MTHFR、甲硫氨酸合成酶(MS)、CBS的缺陷都可引起高同型半胱氨酸血症。
实验原理用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗Hcy抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗Hcy抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。
TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的Hcy呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制1.酶联板(Assay plate )：一块（96孔）。
hcy综述资料
同型半胱氨酸测定试剂盒（酶法）综述资料1、产品的预期用途：1.1产品的预期用途同型半胱氨酸测定试剂盒（酶法）用于定量测定人体血清或血浆中同型半胱氨酸的含量。
1.2与预期用途相关的临床适应症背景情况同型半胱氨酸（homocysteine，HCY）又称高半胱氨酸，是蛋氨酸去甲基后形成的一种含硫氨基酸，属于蛋氨酸循环的中间产物。
有关其代谢紊乱的报道最早来源于先天性胱硫醚合成酶缺乏导致出现同型半胱氨酸尿患者的观察。
此后，又相继发现其他几种参与HCY代谢的酶或辅酶改变所引起的代谢紊乱。
近几年来，随着测定技术方法的改进，已经能够对正常人血浆中以各种形式存在的HCY进行测定，并且发现在心、脑及外周血管疾病、慢性肾功能不全、牛皮癣、维生素B12缺乏等疾病的患者中存在HCY的代谢紊乱。
对同型半胱氨酸的研究始于20世纪70年代，1969年首次提出高同型半胱氨酸血症可致动脉粥样硬化并可形成血栓后，人们逐渐发现人体血清中同型半胱氨酸的含量与冠心病、脑血管疾病、外周血管疾病和静脉血栓的发生和发展有着密切的关系，而且随着同型半胱氨酸含量的增加发生血管疾病的危险也呈递增趋势。
高同型半胱氨酸通过氧自由基介导引起血管内皮损伤，不同浓度的血清Hcy还可通过抑制内皮细胞DNA的合成，影响内皮功能及细胞形态改变，并促使血管平滑肌细胞增殖，导致动脉粥样硬化。
血清Hcy可使血小板受损，使血小板的黏附性和聚集性增加。
血清HCy尚能改变花生四烯酸代谢，使血栓素A2合成增加，血栓素A2具有收缩血管和促血小板聚集的作用。
血清Hcy还通过抑制凝血酶调节蛋白在内皮细胞表面的表达及活性，进一步抑制蛋白C的激活，影响凝血酶的灭活。
血清Hcy还能增加组织因子的活性，激活凝血酶，导致血管系统的血栓少形成。
目前越来越多的资料显示Hcy与脑血管病有着紧密的联系。
甚至有人认为Hcy水平升高是脑血管病的一项独立危险因素和重要危险因子。
研究分析表明，随着血浆Hcy水平的增高，患缺血性脑血管病的相对危险度逐渐增加，与非Hcy患者相比，Hcy患者患缺血性脑血管病相对危险度增加。
同型半胱氨酸HCY检测作业指导书
同型半胱氨酸HCY检测作业指导书1 检验目的规范同型半胱氨酸(HCY)检测试验，确保检测结果准确性和重复性。
2 测定方法酶法。
3 检测原理氧化型HCY杯转化为游离的HCY，游离HCY在CBS的催化下和丝氨酸反应生成L-胱硫醚，L-胱硫醚在CBL催化下又生成HCY，丙酮酸和NH3.该循环反应生成的丙酮酸可以用乳酸脱氢酶（LDH）和NADH检测到，NADH转变成NAD的速率与样品中HCY含量成正比。
4 样本血清、肝素或EDTA抗凝血浆，处理方法见生化标本采集程序。
5 仪器和试剂5.1 仪器：美国贝克曼-库尔特DXC800、AU5811全自动生化仪。
5.2 试剂：由武汉元景商贸公司提供利德曼试剂（详见试剂说明书），超过失效期的试剂不能使用。
5.3 校准物：厂家配套校准品，符合WHO标准，贮存、准备严格遵照其说明书。
5.4 质控物：Rodan正常值及病理值质控品，符合WHO 标准，贮存、准备严格遵照说明书。
6 校准6.1 仪器校准：每年由该仪器维修工程师参照厂方的技术规范对仪器进行一次校准。
6.2 项目校准：试剂盒在仪器上放置稳定期后；试剂批号更换后；由质控结果随时决定。
7 操作步骤上机操作，操作程序、质量控制程序见相应生化仪操作程序。
8 参考范围0～15umol/L。
9 警告/危急值未规定。
10 性能指标10.1 线形上限：50umol/L。
10.2 精密度：批内（n=20）CV≤10.0％、批间相对极差≤15.0％。
10.3 不准确度:在+15%之间。
10.4 试剂贮存:密闭避光贮存2～8℃可稳定12个月。
11 干扰因素及变异的潜在来源高浓度的内源性干扰物对测定结果有影响，如Hb>5g/L。
12 临床意义12.1 胱氨酸尿症的诊断和疗效评估，包括对胱氨酸尿症患者后代的筛查。
12.2 诊断和筛查叶酸和维生素B12缺乏。
12.3 心血管疾病危险评估。
在对心血管疾病进行评估时，主要目标人群为已确诊的动静脉血栓性疾病人群和相关高危人群，对普通人群筛查必要性不大。
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本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断人（Human）同型半胱氨酸（Hcy）ELISA检测试剂盒使用说明书检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。
往预先包被同型半胱氨酸（Hcy）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。
用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的同型半胱氨酸（Hcy）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
样品收集、处理及保存方法1.血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2.血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。
3000转离心30分钟取上清。
3.细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4.组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。
3000转离心10分钟取上清。
5.保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品1.酶标仪（450nm）2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3.37℃恒温箱操作注意事项1.试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。
从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
3.浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。
4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5.所有液体组分使用前充分摇匀。
试剂盒组成名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无标准品0.3mL*6管0.3mL*6管无样本稀释液6mL3mL无检测抗体-HRP10mL5mL无20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释底物A6mL3mL无底物B6mL3mL无终止液6mL3mL无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无注：标准品（S0-S5）浓度依次为：0、1、2、4、8、16μmol/L试剂的准备20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
洗板方法1.手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。
2.自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。
操作步骤1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；样本孔加待测样本50μL。
3.样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不加。
4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
结果判断绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。
试剂盒性能1.准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9500。
2.灵敏度：检测范围0-16μmol/L，最低检测浓度小于0.1μmol/L。
3.特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
4.重复性：板内、板间变异系数均小于15%。
5.贮藏：2-8℃，避光防潮保存。
6.有效期：6个月免责声明1.试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。
2.严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。
FOR RESEARCH USE ONLY.NOT FOR USE IN DIAGNOSTIC PROCEDURES.Human Homocysteic acid(Hcy)ELISA Kit instruction Intended useThis Hcy ELISA kit is intended Laboratory for Research use only and is not for use in diagnostic or therapeutic procedures.The Stop Solution changes the color from blue to yellow and the intensity of the color is measured at450nm using a spectrophotometer.In order to measure the concentration of Hcy in the sample,this Hcy ELISA Kit includes a set of calibration standards.The calibration standards are assayed at the same time as the samples and allow the operator to produce a standard curve of Optical Density versus Hcy concentration.The concentration of Hcy in the samples is then determined by comparing the O.D.of the samples to the standard curve.Sample collection and storagesSerum-Use a serum separator tube and allow samples to clot for30minutes before centrifugation for10minutes at approximately3000×g.Remove serum and assay immediately or aliquot and store samples at-20℃or-80℃.Avoid repeated freeze-thaw cycles Plasma-Collect plasma using EDTA or heparin as an anticoagulant.Centrifuge samples for30minutes at3000×g at2-8℃within30minutes of collection.Store samples at-20℃or-80℃.Avoid repeated freeze-thaw cycles.Cell culture supernates and other biological fluids-Remove particulates by centrifugation and assay immediately or aliquot and store samples at-20℃or -80℃.Avoid repeated freeze-thaw cycles.Note:The samples shoule be centrifugated dequately and no hemolysis or granule was allowed.Materials required but not supplied1.Standard microplate reader(450nm)2.Precision pipettes and Disposable pipette tips.3.37℃incubatorPrecautions1.Do not substitute reagents from one kit to another.Standard,conjugate and microplates are matched for optimal e only the reagents supplied by manufacturer.2.Do not remove microplate from the storage bag until needed.Unused strips should be stored at2-8°C in their pouch with the desiccant provided.3.Mix all reagents before using.Remove all kit reagents from refrigerator and allow them to reach room temperature(20-25°C)Materials suppliedName96determinations48determinations Microelisa stripplate12*8strips12*4stripsStandard0.3ml*6tubes0.3ml*6tubesSample Diluent 6.0ml 3.0mlHRP-Conjugate reagent10.0ml 5.0ml20X Wash solution25ml15mlChromogen Solution A 6.0ml 3.0mlChromogen Solution B 6.0ml 3.0mlStop Solution 6.0ml 3.0mlClosure plate membrane22User manual11Sealed bags11Standard(S0→S5)concentration was followed by:0,1,2,4,8,16μmol/L Reagent preparation20×wash solution:Dilute with Distilled or deionized water1:20.Assay procedure1.Prepare all re a g e n t s before starting assay procedure.It is recommended that all Standards and Samples be added in duplicate to the Microelisa Stripplate.2.Set Standard wells and testing sample wells.Add50μl of Standards or Samples to the appropriate well of the Microtiter Plate.3.Add Sample:Add testing sample10μl then add Sample Diluent40μl to testing sample well;Blank well doesn’t add anyting.4.Add100μl of HRP-conjugate reagent to each well,c over with an adhesive strip and incubate for60minutes at37°C.5.Aspirate each well and wash,repeating the process four times for a total of five washes.Wash by filling each well with Wash Solution(400μl)using a squirt bottle, manifold dispenser or plete removal of liquid at each step is essential to good performance.After the last wash,remove any remaining Wash Solution by aspirating or decanting.Invert the plate and blot it against clean paper towels.6.Add chromogen solution A50μl and chromogen solution B50μl to each well. Gently mix and incubate for15minutes at37°C.Protect from light.7.Add50μl Stop Solution to each well.The color in the wells should change from blue to yellow.If the color in the wells is green or the color change does not appear uniform,gently tap the plate to ensure thorough mixing.8.Read the Optical Density(O.D.)at450nm using a microtiter plate reader within15minutes.Calculation of results1.This standard curve is used to determine the amount in an unknown sample.The standard curve is generated by plotting the average O.D.(450nm) obtained for each of the six standard concentrations on the vertical(Y)axisversus the corresponding concentration on the horizontal(X)axis.2.First,calculate the mean O.D.value for each standard and sample.All O.D.values,are subtracted by the mean value of the zero standard before result interpretation.Construct the standard curve using graph paper or statistical software.3.To determine the amount in each sample,first locate the O.D.value on theY-axis and extend a horizontal line to the standard curve.At the point of intersection,draw a vertical line to the X-axis and read the corresponding concentration.4.Any variation in operator,pipetting and washing technique,incubation time ortemperature,and kit age can cause variation in result.Each user should obtain their own standard curve.5.The sensitivity by this assay is0.1μmol/L6.Standard curve Storage：2-8℃.validity：six months.FOR RESEARCH USE ONLY;NOT FOR THERAPEUTIC OR DIAGNOSTIC APPLICATIONS!PLEASE READ THROUGH ENTIRE PROCEDURE BEFORE BEGINNING!。