18知识讲解植物的组织培养技术
植物的组织培养方法
植物的组织培养方法植物组织培养是一种无性繁殖技术，通过培养植物的各种器官组织，包括种子、茎、叶和根的细胞和组织，使其在适当的条件下进行生长和分化，从而产生新的植株。
这项技术已被广泛应用于农业、园艺、林业和植物学研究中。
以下是植物组织培养的一般步骤和方法：1. 材料准备：首先，选择适合的植物作为材料，常用的包括水果、蔬菜和花卉植物。
收集新鲜的种子、茎、叶或根，并进行消毒处理，以防止细菌、真菌和其他病原体的污染。
2. 植物组织的分离：将植物材料切成小块或将细胞分离开来。
对于植物的种子，可以直接将种子表面进行消毒处理后，在培养基上进行培养；对于茎、叶和根等组织，则需要进行切割处理。
3. 培养基的准备：制备适当的培养基是进行植物组织培养的重要步骤。
培养基通常由无机盐和有机添加剂组成，以提供植物生长所需的营养物质。
根据组织的不同类型，可以使用不同种类和浓度的培养基。
4. 培养基的调整：将分离的组织放入培养基上，可以将培养基涂覆在组织表面上，或者将组织植入培养基中。
然后，在无细菌的条件下，将组织培养在适当的温度、湿度和光照条件下。
5. 激素的添加：植物生长激素是控制植物生长和分化的关键因素。
在组织培养中，可以根据实验的需要添加适量的激素来促进细胞分裂和分化。
常用的激素有生长素、细胞分裂素和愈伤组织生成素等。
6. 愈伤组织的诱导：愈伤组织是植物组织培养中产生的一种可分化细胞。
通过搅拌、震荡或辐射等途径，诱导组织分化成愈伤组织，然后将其继续培养。
7. 植株的再生：通过培养基中激素的平衡调节，可以使愈伤组织再生为整个植株。
在培养基中，植株的幼苗养分丰富，需要的培养基成分和激素浓度可能与之前的不同。
8. 培养环境的控制：为了使植物组织正常生长和分化，需要控制培养环境的参数。
例如，可以调节培养基的pH值、光照强度、温度和湿度等因素。
9. 组织转化：经过培养，植物组织中可以引入外源基因，使其具有某种特定的性状，这被称为转基因。
植物组织培养技术所有名词解释
植物组织培养复习材料一、名词解释。
1、植物组织培养(plant tissue culture) :植物的离体器官、组织或细胞在人工制备的培养基上进行无菌培养，并在人工控制的环境条件下，使其发育成完整植株的科学技术2、脱分化(dedifferentiation ):指失去分裂能力的细胞回复到分生性状态并进行分裂，形成无分化的细胞即愈伤组织的现象。
3、再分化(redifferentiation ):愈伤组织形成不定芽或不定根或胚状体。
4、外植体(explant):植物组织培养过程中从活体植株上切去下来的用于离体培养的一切材料。
(如器官、组织、细胞、原生质体、种子等)5、愈伤组织(callus):原本指植物在受伤后于其伤口表面形成的一团薄壁细胞。
在组培中，则指人工培养基上由外植体形成的一团无序生长的薄壁细胞。
6、器官发生：胚胎时期由胚层器官原基发育成器官的过程。
包括细胞分化和器官形成。
7、胚状体发生：在植物细胞、组织或器官体外培养过程中，由一个或一些体细胞经过胚胎发生和发育过程，形成的与合子胚相类似的结构。
可进一步发育成植株。
8、细胞全能性(cell totipotency ):指植物的每一个细胞都携带有一完整的基因组, 并具有发育成完整植株的潜在能力。
9、细胞分化：一个尚未特化的细胞发育出特征性结构和功能的过程。
10、极性:细胞(也可指器官或植株)内的一端与另一端在形态结构和生理生化上的差异。
11、试管苗：通过组织培养产生的植株。
12、看护培养:是指用一块活跃生长的愈伤组织来看护单个细胞，使其持续分裂和增殖的一种培养方法。
这块愈伤组织被称为看护组织。
13、固相化培养：将细胞或原生质体固着在琼脂糖、藻（月元）酸盐或多聚赖氨酸中，然后将他们放入液体培养基中震荡培养。
这种培养方法既利用了振荡培养室营养物质和气体易于交换的优点，有利用了固相化使细胞免受振荡时剪切力的作用。
14、悬浮细胞培养:将单个游离细胞或小细胞团在液体培养基中进行培养增值的技术。
专题3《植物的组织培养技术》1ppt课件
potato
tomato
pomato 泡马豆
⑷突变育种：采用组织培养可以直接诱变和筛选出 具抗病、抗盐、高赖氨酸、高蛋白等优良性状的品种
⑸基因工程：基因工程主要研究DNA的转导，而基 因转导后必须通过组织培养途径才能实现植株再生
⑹生物制品：有些极其昂贵的生物制品，可以用大 规模培养植物细胞来直接生产
⑵器官培养：
将植物的器官如 胚、胚乳、珠心、 子房、根、茎、 叶、花和幼果的 部分组织接种在 无菌培养基上进 行培养。
⑶细胞和原生质体 培养：
细胞培养是将植 物的单个细胞分离出 来，并进行培养，而 原生质体培养是指将 植物细胞的细胞壁通 过机械、物理或化学 的方法去除，然后再 进行培养。
原球茎----主要是兰科植物在诱导时，分化出的原初植物形态，具 有完整植株的器官雏形，成苗容易。 胚状体-----由愈伤组织或表面形成的许多类似胚的突起，是初步 分化的幼小生命体，芽根有共同的维管束，是双极性结构，起源 于单细胞，无嵌合现象，结构完整，可直接形成小植株，成苗率 高，去分化难，再分化也很难。
– mitosis and chromosome replication compete with virus replication
– high auxin in meristem inhibits virus replication
– a virus “inactivating” system has greatest activity in meristem
再分化：经脱分化的组织或细胞在一定的培养 条件下可有转变为各种不同细胞类型的能力。
4.植物组织培养分类
➢按材料的类别分
愈伤组织培养 细 胞 培养 器 官 培养 原生质体培养
高二生物《植物的组织培养技术》
一、基本过程−−−→−−−→→脱分化再分化外植体（离体的组织、器官或细胞）愈伤组织根、芽或胚状体完整植株1.外植体由活植物体上切取下来以进行培养的那部分组织或器官叫做外植体。
一般取植物幼嫩部位（如茎 尖）或花药等。
2.愈伤组织原指植物体的局部受到创伤刺激后，在伤口表面新生的组织。
它由活的薄壁细胞组成，可起源于植物体任何器官内各种组织的活细胞。
其特点是：排列疏松、无规则、高度液泡化、呈无定形状态的薄壁细胞，具有未分化特性。
知识点睛第10讲 植物组织培养技术愈伤组织形成过程中，没有叶绿素和叶绿体的形成，所以愈伤组织形成初期不需要充足的光照。
通常使用细胞分裂素和生长素比例在1:l来诱导植物材料愈伤组织的形成。
3.胚状体胚状体是在离体植物细胞、组织或器官培养过程中，由一个或一些体细胞，经过胚的发生和发育过程，形成与合子胚相类似的结构。
一般专指在组织培养条件下产生的非合子胚。
诱导胚状体需要的条件，因植物种类、部位和培养时组织细胞所处状况的不同而异。
胚状体的诱导与外植体所处生理状况，内源激素的变化及遗传性、倍性等都有密切关系。
①胚状体的产生不需要任何激素，如烟草、曼陀罗和水稻等的花药培养。
②培养中需要生长激素或细胞分裂素或二者的组合，如檀香和石刁柏的愈伤组织培养。
③需先在有激素的培养基上诱导，然后转入低浓度激素或无激素的培养基中，如胡萝卜在诱导愈伤组织时需2,4-D，但由愈伤组织诱导出胚状体时，则需在没有2,4-D的培养基培养。
④某些天然产物，如椰乳，西瓜汁，酵母提取物，酪朊水解物或腺嘌呤等都有利于胚状体的发生。
二、理论基础：植物细胞的全能性1. 细胞全能性的定义：指已经分化的细胞，仍然具有发育成完整个体的潜能。
2. 在生物的生长发育过程中，细胞并不表现出全能性，而是分化成各种组织和器官。
3. 细胞具有全能性的原因：含有该种生物全部遗传信息。
4. 细胞的全能性高低比较：①一般，细胞分化程度越高，全能性越低②受精卵>生殖细胞>体细胞③植物体细胞>动物体细胞三、条件1.离体2.无菌3.一定的营养物质：水、无机盐、蔗糖（提供碳源和调节渗透压）、维生素等4.植物激素在配制好的培养基中，常常需要添加植物激素。
植物的组织培养的原理
植物的组织培养的原理
植物的组织培养是指将植物的组织（如幼芽、茎段、根尖等）在无菌条件下培养，并利用培养基中的营养物质和植物生长激素来促进其生长和分化。
其原理主要包括以下几个方面：
1. 选择合适的植物材料：通常选择健康的、无病毒和无真菌感染的组织作为培养材料。
可以使用鲜花、叶片、茎段、根尖等植物组织。
2. 无菌条件：组织培养需要在无菌条件下进行，以防止细菌、真菌和病毒等微生物的污染。
常用的无菌技术包括灭菌、无菌操作台和培养器的无菌处理等。
3. 培养基的配制：培养基是培养植物组织所需的营养物质的来源，通常由无机盐、有机物、碳源和植物生长激素等几个组成部分构成。
培养基的配方可以根据植物的不同需求进行调整和优化。
4. 植物生长激素的添加：植物生长激素是影响植物生长和分化的关键因素。
常用的激素包括生长素、激动素和细胞分裂素等，它们的浓度和比例可以调整植物组织的增殖和分化过程。
5. 培养环境的调控：温度、光照和湿度等环境因素对植物的组织培养也有一定影响。
不同植物组织需要不同的环境条件来促进其生长和发育。
通过以上原理的综合作用，可以实现植物组织的体外培养，从而实现植物的繁殖和研究等应用。
植物组织培养知识点总结
堂清日结31、原生质是细胞内生命物质的总称。
原生质层指的是细胞膜和液泡膜以及两层膜之间的细胞质。
去掉细胞壁的植物细胞就是原生质体，所以一个动物细胞就相当于一个原生质团。
2、原生质层的融合过程体现了细胞膜的流动性。
3、植物体细胞融合的实质：原生质体的融合，植物体细胞融合完成的标志：细胞壁的再生。
新细胞壁的产生与细胞内高尔基体相关。
4、植物组织培养中愈伤组织的形成是细胞分裂的结果。
5、植物细胞工程通常所采用的技术手段：植物组织培养技术和植物体细胞杂交技术。
6、植物体细胞杂交的过程：1）酶解法去除细胞壁，获得原生质体2）利用物理或者化学法诱导原生质体的融合3）再生细胞壁，获得杂种细胞。
4）利用植物组织培养技术，通过脱分化和再分化获得杂种植物。
7、微型繁殖技术：也叫快速繁殖技术即快速繁殖优良品种的植物组织培养技术。
该技术与传统繁殖技术相比，具有：①繁殖速度快；②“高保真”（因为是无性繁殖）；③不受自然生长季节的限制（因为在具有一定人工设施的室内生产）等特点。
堂清日结41、作物脱毒材料：分生区细胞作物脱毒方法：进行植物组织培养作物脱毒结果：获得脱毒苗脱毒苗的特点：不会或极少感染病毒。
2、人工种子的组成：胚状体（或不定芽或顶芽或腋芽）+人工薄膜；要获得人工种子，需将离体的器官、组织或细胞培养至再分化阶段。
3、人工种皮中应具有的有效成分：适量的养分、无机盐、有机碳源、农药、抗生素、有益菌等，为了促进胚状体的生长发育，还可以向人工种皮中加入植物生长调节剂。
4、单倍体育种原理：染色体变异方法：花药离体培养采用的技术：植物组织培养技术优点：后代无性状分离、明显缩短育种年限突变体的利用育种原理：突变（基因突变、染色体变异）优点：能够产生新性状植物体细胞杂交育种原理：染色体变异优点：克服远缘杂交不亲和的障碍5、植物组织培养中易获得突变体的原因：培养的细胞一直处于分生的状态，易受培养条件和外界压力（如射线、化学物质等）的影响。
组织培养技术
第五章组织培养技术第一节植物组织培养所谓植物组织培养广义又叫离体培养，指从植物体分离出符合需要的组织. 器官或细胞，原生质体等，通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。
狭义上是指用植物各部分组织，如形成层、薄壁组织、叶肉组织、胚乳等进行培养获得再生植株，也包括在培养过程中从各器官上产生愈伤组织的培养，愈伤组织再经过再分化形成再生植株。
一、概述（一）概念1. 植物组织培养：是指通过无菌操作，把植物的外植体接种于人工配置的培养基上，在人工控制的条件下进行培养，使其成为完整植株的方法。
2. 外植体：是指用于植物组织培养的接种材料，它包括植物体的各个器官、组织、细胞和原生质体等。
3. 愈伤组织（Callus ）:原指植物在受伤之后于伤口表面形成的一团薄壁细胞，在组培中则指人工培养基上由外植体长出来的一团无序生长的薄壁细胞。
（二）组织培养类型1. 根据接种的外植体不同分：胚胎培养；器官培养；3组织培养；细胞培养；原生质体培养；2. 根据培养基态相不同分：固体培养；液体培养；3. 根据培养过程不同分：初代培养；继代培养；（三）植物组织培养历史植物组织培养是20 世纪初开始，以植物生理学为基础发展起来的。
有以下过程：思想准备阶段；理论奠基阶段；技术建立阶段；形态发生阶段；应用研究阶段；1902 年德国植物学家Haberlandt 提出了细胞全能性概念。
1939 年White 报道了烟草组培成功。
并提出植物细胞全能性学说。
同年，Gautheret 与Nobecourt 培养胡萝卜成功。
三人被誉为植物组培奠基人。
罗士韦是我国植物组织和细胞培养研究的开拓者和奠基人之一（四）植物组织培养的应用1•植物的快速繁殖：⑴园艺、花卉植物的大规模快速繁殖；⑵抢救濒危珍稀植物⑶进行某些植物的种质资源保存2•培育无病毒的植物，如脱病毒草莓等；3•制造人工种子。
4 突变体的筛选培育5 药用植物的工厂化生产6 花药培养和花粉单倍体育种7 基因工程的应用等二、实验室设计和设备（一）实验室设计一般具有：1. 准备室器皿洗涤，培养基配制、分装、高压灭菌，植物材料的预处理，重蒸馏水的制备以及进行生理、生化因素的分析等各种操作都要在此室中进行2. 缓冲室进入无菌室前需在缓冲室里换上经过灭菌的卫生服、拖鞋，戴上口罩。
专题植物的组织培养技术
2 细胞分化的实质：细胞内遗传物质的执行 情况不同基因的选择性表达
离体状态
无机营养
营养物质有机营养 3．条件激素细生胞长分素裂素
适宜外界条件
愈伤组织再分化时应先诱导分化出芽;后诱导 产生根;若顺序颠倒;则不好诱导根的生成
二 影响植物组织培养的因素及成功的关键 1 影响因素 1内部因素：材料的选取 2外部因素：营养成分的种类及配比；植物激 素的用量及使用顺序；pH 温度 光照等
三 植物激素在组织培养过程中的重要作用
生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂 脱分化 和再分化的关键性激素;其作用及特点为：
1 在生长素存在的情况下;细胞分裂素的作用 呈现加强的趋势
2 使用顺序不同;结果不同;具体如下：
使用顺序 先使用生长素;后使用
细胞分裂素
先使用细胞分裂素;后 使用生长素
同时使用
实验结果 有利于细胞分裂;但细
1植物细胞全能性含义及其表达的条件 2植物组织培养中生长素和细胞分裂素的作用 3花药培养产生花粉植株的两种途径 4花粉发育经历的不同时期
1细胞分化与细胞全能性的生产应用 2植物组织培养的基本原理及其培养条件 3影响植物组织培养的因素 4植物激素在植物组织培养中的作用
一 对植物组织培养的分析 1 原理：植物细胞全能性 基础：细胞内具有该物种发育所需的全部遗传物质 全能性高低：受精卵>生殖细胞>体细胞
3在再分化阶段所用培养基中;含有植物激素X 和植物激素Y 逐渐改变培养基中这两种植物 激素的浓度比;未分化细胞群的变化情况如下 图所示 据图指出两种激素的不同浓度比与形
成芽 根 愈伤组织的关系：
①当植物激素X与植物激素Y的浓度比等于1 时;________________；②_Leabharlann _________________；
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植物的组织培养技术【学习目标】1、指导植物组织培养技术的基本原理和基本技术。
2、掌握植物培养过程中使用的无菌技术（重点）。
3、掌握植物知识培养的基本过程及操作。
4、说出被子植物花粉发育的过程及花药例题培养产生花粉植株的两种途径。
5、说出花药离体培养的因素，学习话要例题培养的基本技术。
【要点梳理】要点一、植物组织培养的基础知识【高清课堂：植物的组织培养技术 高清未发布 课题1：基础知识】1、植物组织培养的基本过程：离体的植物器官、组织或细胞，在培养了一段时间以后，会通过细胞分裂，形成愈伤组织。
愈伤组织的细胞排列疏松而无规则，是一种高度液泡化的呈无定形状态的薄壁细胞。
由高度分化的植物组织或细胞产生愈伤组织的过程，称为植物细胞的脱分化（去分化）。
脱分化产生的愈伤组织继续进行培养，又可以重新分化成根或芽等器官，这个过程叫再分化。
再分化形成的试管苗移栽到地里，可以发育成完整的植物体。
植物组织培养的过程可以简要归纳为：离体的植物器官、组织或细胞（外植体）−−−→脱分化愈伤组织−−−→再分化根、芽—→植物体。
2、植物组织培养的理论基础：细胞的全能性要点诠释：细胞的全能性与植物组织培养间的关系①细胞的全能性是植物组织培养的理论基础。
植物组织培养的理论基础是细胞的全能性。
植物细胞只有脱离了植物体，在一定的外部因素作用下，经过细胞分裂形成愈伤组织，才能表现出全能性，由愈伤组织发育、分化出新的植物体。
②高度分化的植物细胞仍具有全能性的原因是所有体细胞均来自受精卵的有丝分裂，均有和受精卵相同的一整套遗传信息。
③植物体的组织、器官的形成，是基因选择性表达的结果，其细胞的全能性受到限制，在离体状态下，其全能性才容易得以表达，表达的过程须经过脱分化和再分化。
④容易进行营养繁殖的植物细胞，其全能性容易表达，易进行植物组织培养。
要点二、影响植物组织培养的因素1、无机营养（1）大量元素：除碳（C ）、氢（H ）、氧（O ）外，还有氮（N ）、磷（P ）、钾（K ）、钙（Ca ）、镁（Mg ）、硫（S ）等元素。
（2）微量元素：包括铁（Fe ）、铜（Cu ）、钼（Mo ）、锌（Zn ）、锰（Mn ）、钴（Co ）、硼（B ）和碘（I ）等。
2、有机营养（1）维生素类：植物组织培养中经常使用维生素C 、维生素B 1（盐酸硫胺素）、维生素B 6（盐酸吡哆醇）、维生素H （生物素）、叶酸和烟酸等，一般使用浓度为0.1～10 mol ／L 。
（2）氨基酸：有甘氨酸、丝氨酸、酪氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、水解酪蛋白（CH ）和水解乳蛋白（LH ）等，是重要的有机氮源。
（3）有机添加物：是一些成分比较复杂，大多含氨基酸、激素、酶等的复杂化合物，它们对细胞和组织的增殖与分化有明显的促进作用。
3、植物生长调节物质植物生长调节物质是培养基中的关键物质，对植物组织培养起着重要、明显的调节作用。
植物生长调节物质包括生长素、细胞分裂素及赤霉素等。
要点诠释：①植物激素中生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性激素。
在生长素存在的情况下，细使用顺序实验结果先使用生长素，后使用细胞分裂素有利于细胞分裂，但细胞不分化先使用细胞分裂素，后使用生长素细胞既分裂也分化同时使用分化频率提高②当同时使用这两类激素时，两者用量的比例影响植物细胞的发育方向。
生长素的用量与细胞分裂素的用量比值低时，（即生长素少，细胞分裂素多）有利于芽的分化、抑制根的形成；比值高时，（即生长素多，细胞分裂素少）有利于根的分化、抑制芽的形成；比值适中时，促进愈伤组织生长。
可见，植物激素的浓度、使用的先后顺序以及用量的比例等，都会影响实验结果。
植物激素的应用要做到得心应手，还得靠大量实践。
4、能源和渗透压通常植物本身进行光合作用，产生糖类，不需要外部供给糖，但在植物组织培养进行异养的状况下，大多不能进行光合作用来合成糖类，因此必须在培养基中添加糖作为碳素来源和能量物质，同时糖对保持培养基的渗透压（一般需在1.5×105 Pa～4.1×105 Pa）也有重要作用。
5、温度温度是植物组织培养成功的重要条件（1）最适温度：在植物组织培养中大多采用最适温度，并保持恒温培养，以加速生长。
通常采用（25±2）℃的温度，对大多数植物来讲是合适的，但也因种类而异。
进行菊花组织培养，温度控制在18℃～22℃。
（2）温度预处理的影响：在植物组织培养以前先对培养材料进行低温或高温处理，往往有促进诱导生长的作用，为此，常在培养实践中采用。
6、光照组织培养中光照也是重要条件，它对生长和分化有很大影响。
当然这也与材料的性质、培养基情况以及由于光照而引起的温度上升等因素有关。
菊花培养的光照强度为1000 lx～4000 lx，每天照光12 h。
此外，进行菊花组织培养的pH控制在5.8左右。
要点三、植物组织培养的实验操作1、制备MS固体培养基MS培养基含有20多种营养成分，实验室一般使用4℃保存的配制好的培养基母液来制备。
具体操作如下。
（1）配制各种母液：配制母液时，无机物中大量元素浓缩10倍，微量元素浓缩100倍，常温保存。
激素类、维生素类以及用量较小的有机物一般可按l mg／mL的质量浓度单独配制成母液。
用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩倍数，计算用量。
（2）配制培养基：配制1 L MS培养基时，先将称好的琼脂加入800 mL蒸馏水，加热使琼脂熔化，然后加入蔗糖30 g，取配制好的大量元素、微量元素、有机物和植物激素的母液，依次加入，加蒸馏水定容至1000 mL，调节pH，最后分装到锥形瓶中，每瓶分装50 mL或100 mL。
由于菊花茎段的组织培养比较容易，因此不必添加植物激素。
（3）灭菌：将分装好的培养基连同其他器械一起进行高压蒸汽灭菌。
2、外植体消毒（1）外植体：用于离体培养的植物器官或组织片段，叫做外植体。
（2）外植体消毒：选取菊花茎段时，要取生长旺盛的嫩枝。
菊花茎段用流水冲洗后可加少许洗衣粉，用软刷轻轻刷洗，刷洗后在流水下冲洗20 min左右。
用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入体积分数为70％的酒精中摇动2～3次，持续6 s～7 s，立即将外植体取出，在无菌水中清洗。
取出后仍用无菌吸水纸吸干外植体表面水分，放入质量分数为0.1％的氯化汞溶液中1 min～2 min。
取出后，在无菌水中至少清洗3次，漂净消毒液。
3、接种接种前用体积分数为70％的酒精将工作台擦拭一遍。
工作台消毒后，首先点燃酒精灯。
此后，所有的接种操作都必须在酒精灯旁进行，并且每次使用器械后，都需要用火焰灼烧灭菌。
将装有培养基的锥形瓶整齐地排列在酒精灯左侧。
将消过毒的菊花茎段在无菌培养皿中切成小段（长约0.5 cm～1 cm）。
左手持锥形瓶，右手拉开捆扎锥形瓶的绳子，并将封口膜攥于右手手心，以避免封口膜接触瓶口的一面被污染。
左手持瓶，使瓶口旋转通过火焰；右手用镊子夹取菊花茎段，插入培养基中。
插入时应注意方向，不要倒插。
每瓶接种6～8块外植体。
接种后，将封口膜重新扎好。
4、培养接种后的锥形瓶最好放在无菌箱中培养，培养期间应定期消毒。
培养温度控制在18℃～22℃，并且每日用日光灯光照12 h。
5、移栽在移栽生根的菊花试管苗之前，应先打开培养瓶的封口膜，让试管苗在培养间生长几日。
然后用流水清洗根部的培养基，将幼苗移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境下生活一段时间，等幼苗长壮后再移栽到土壤中。
6、栽培将幼苗移栽后，每天观察并记录幼苗生长情况，适时浇水、施肥，直至开花。
要点四、植物的花药离体培养1、被子植物的花粉发育【高清课堂：植物组织培养技术高清未发布被子植物的花粉发育】要点诠释：①发育场所：被子植物雄蕊的花药中。
②分裂方式：花粉是由花粉母细胞经过减数分裂而形成的，因此花粉是单倍体的生殖细胞。
③发育过程：被子植物花粉的发育要经历小孢子四分体时期、单核期和双核期等阶段。
在小孢子四分体时期，4个单倍体细胞连在一起，进入单核期时，四分体的4个单倍体细胞彼此分离，形成4个具有单细胞核的花粉粒。
这时的细胞含浓厚的原生质，核位于细胞的中央（单核居中期）。
随着细胞不断长大，细胞核由中央移向细胞一侧（单核靠边期），并分裂成1个生殖细胞核和1个花粉管细胞核，进而形成两个细胞，一个是生殖细胞，一个是营养细胞。
生殖细胞将再有丝分裂一次，形成两个精子。
被子植物花粉的发育过程可以归纳为：花粉母细胞（或小孢子母细胞）−−−−→减数分裂4个小孢子（小孢子四分体时期）—→单核期小孢子（单核居中期—→单核靠边期）()−−−−−→有丝分裂每个小孢子双核期（花粉管细胞核和生殖细胞核）—→1个生殖细胞−−−−→有丝分裂2个精子。
也就是说，花粉萌发进行受精作用时，每个花粉粒可释放出两个精子，从而完成被子植物的双受精。
注意：每个花粉粒产生的两个精子基因型一般相同。
2、产生花粉植株的两种途径通过花药培养产生花粉植株一般有两种途径：这两种途径之间并没有绝对的界限，主要取决于培养基中激素的种类及其浓度配比。
3、影响花药培养的因素（1）材料的选择：不同植物的诱导成功率很不相同。
就同一种植物来说，亲本植株的生理状况对诱导成功率也有直接影响。
花期早期时的花药比后期的更容易产生花粉植株。
一般月季的花药培养时间选在五月初到五月中旬，即月季的初花期。
选择合适的花粉发育时期也是提高诱导成功率的重要因素。
这是因为并不是任何时期的花粉都可以经过培养产生愈伤组织或胚状体，在花粉发育的过程中，只有某一个时期对离体刺激敏感。
一般来说，在单核期，细胞核由中央移向细胞一侧的时期，花药培养成功率最高。
选择单核期以前的花药接种，质地幼嫩，极易破碎；选择单核期以后的花药接种，花瓣已有些松动，又给材料的消毒带来困难。
为了挑选到单核期的花药，通常选择完全未开放的花蕾。
盛开的或略微开放的花，都不宜选作实验材料。
（2）培养基的组成花粉培养所采用的培养基可因植物不同而有所变化。
培养基各成分中，植物生长调节剂的水平和配比，常对诱导细胞的分裂、生长和分化起决定性作用。
（3）亲本植株的生长条件、材料的低温预处理以及接种密度等对诱导成功率都有一定影响。
归纳：诱导花粉植株能否成功及诱导成功率的高低，受多种因素的影响，其中材料的选择与培养基的组成是主要的影响因素。
要点五、月季的花药培养的实验操作1、材料的选取选择花药时。
一般要通过镜检来确定其中的花粉是否处于适宜的发育期。
常用的方法有醋酸洋红法、焙花青—铬矾法（某些植物的花粉细胞核不易着色，需要此方法，能将花粉细胞核染成蓝黑色）2、材料的消毒体积分数为70％的酒精浸泡约30 s →无菌水清洗→用无菌吸水纸吸干→放入质量分数为0.1％的氯化汞溶液中2 min ～4 min →无菌水冲洗3～5次。
3、接种和培养灭菌后的花蕾。