植物组织培养技术
植物的组织培养方法
植物的组织培养方法植物组织培养是一种无性繁殖技术，通过培养植物的各种器官组织，包括种子、茎、叶和根的细胞和组织，使其在适当的条件下进行生长和分化，从而产生新的植株。
这项技术已被广泛应用于农业、园艺、林业和植物学研究中。
以下是植物组织培养的一般步骤和方法：1. 材料准备：首先，选择适合的植物作为材料，常用的包括水果、蔬菜和花卉植物。
收集新鲜的种子、茎、叶或根，并进行消毒处理，以防止细菌、真菌和其他病原体的污染。
2. 植物组织的分离：将植物材料切成小块或将细胞分离开来。
对于植物的种子，可以直接将种子表面进行消毒处理后，在培养基上进行培养；对于茎、叶和根等组织，则需要进行切割处理。
3. 培养基的准备：制备适当的培养基是进行植物组织培养的重要步骤。
培养基通常由无机盐和有机添加剂组成，以提供植物生长所需的营养物质。
根据组织的不同类型，可以使用不同种类和浓度的培养基。
4. 培养基的调整：将分离的组织放入培养基上，可以将培养基涂覆在组织表面上，或者将组织植入培养基中。
然后，在无细菌的条件下，将组织培养在适当的温度、湿度和光照条件下。
5. 激素的添加：植物生长激素是控制植物生长和分化的关键因素。
在组织培养中，可以根据实验的需要添加适量的激素来促进细胞分裂和分化。
常用的激素有生长素、细胞分裂素和愈伤组织生成素等。
6. 愈伤组织的诱导：愈伤组织是植物组织培养中产生的一种可分化细胞。
通过搅拌、震荡或辐射等途径，诱导组织分化成愈伤组织，然后将其继续培养。
7. 植株的再生：通过培养基中激素的平衡调节，可以使愈伤组织再生为整个植株。
在培养基中，植株的幼苗养分丰富，需要的培养基成分和激素浓度可能与之前的不同。
8. 培养环境的控制：为了使植物组织正常生长和分化，需要控制培养环境的参数。
例如，可以调节培养基的pH值、光照强度、温度和湿度等因素。
9. 组织转化：经过培养，植物组织中可以引入外源基因，使其具有某种特定的性状，这被称为转基因。
植物的组织培养
植物组织细胞的全能性
多细胞生物中每个体细胞的细胞核具有个体发育 的全部基因，只要条件许可，都可发育成完整的 个体。
二是利用植物的再生作用
与植物体分离的器官具有恢复完整植株的能力。
植物组织培养的优势
• ①繁殖速度快，
• 通常一年内可以繁殖数以万计的，较为整齐一致的种苗 ，大大提高繁殖系数。特别对于难繁殖的园艺植物的名 贵品种、稀有种质的繁殖推广具有重要意义。一个兰花 的茎尖一年内可育成400万个原球茎，一个草莓茎尖一年 内可育出成苗3000万株。
七单元 生物圈中生命的延续和发展
第一章 植物的生殖和发育
植物组织培养技术
什么是植物组织培养
植物组织培养是指在无菌条件下，将离 体的植物器官（根、茎、叶、花等）、 组织（如形成层、花药组织、胚乳、等 ）、细胞（体细胞和生殖细胞），培养 在人工配制的培养基上，给予适当的培 养条件，使其长成完整的植株的现代生 物技术。
• ②占用空间小，
• 一间30平方米的培养室可以放置一万多个瓶子，足以同 时繁殖几万株种苗。
• ③可以培养脱毒种苗
再见
植物组织培养技术
2种激素5种浓度的实验组合 6-BA mg/L） 0 NAA 0 (mg/L) 0.5 2.5 5 10 0.5 1 6 11 16 21 2.5 2 7 12 17 22 3 8 13 18 23 5 4 9 14 19 24 10 5 10 15 20 25
• 完全试验方案试验因子越多，处理数越多，试验越复杂，消耗的 精力、物力越多。为了减少试验处理，但又能准确全面地获得试 验信息，通常采用正交试验。例如，采用正交设计，在使用此表 时就可以安排4个因子，3种水平的试验，一共做9种不同搭配的试 验，其结果相当于做了27次种种搭配的试验。正交试验虽然是多 因素搭配在一起的试验，但是在试验结果的分析中，每一种因素 所起的作用却又能够明白无误地表现出来。因此，一次系统的试 验结果，就可以把问题分析得清清楚楚，用有限的时间取得成倍 的收获。在组织培养研究中，可用于同时探求培养基中适宜的几 种成分的用量，如细胞分裂素、生长素、糖和其他成分的用量。
四、广谱实验法
• 在广谱实验法中，把培养基中所有组分分为4大类：无 机盐、有机营养物质(蔗糖、氨基酸和肌醇等)、生长素、 细胞分裂素。对每一类物质选定低(L)、中(M)、和高 (H)3个浓度。4类物质各3种浓度的自由组合即构成了 一项包括81个处理的实验。在这81个处理中最好的一 个可用4个字母表示。例如，一个包含中等浓度无机盐， 低等浓度生长素、中等浓度细胞分裂素和高等浓度有 机营养物质的处理即可表示为MLMH。达到这个阶段， 再试用不同类型的生长素和细胞分裂素即可找到培养 基的最佳配方。这是因为不同类型的生K素和细胞分裂 素对不同植物的活性有所不同。
• 不同的植物对培养基最适pH值的要求也是不同的(表 2—1)，大多在5、6．5左右，一般培养基皆要求5.8， 这基本能适应大多植物培养的需要。 • pH值适度因材料而异，也因培养基的组成而不同。以 硝态氮作氮源和以铵态氮作氮源就不一样，后者较高 一些。一般来说当pH值高于6．5时，培养基全变硬； 低于5时，琼脂不能很好地凝固。因为高温灭菌会降低 pH值(约0.2—0.3个pH值)因此在配制时常提高pH值 0．2—0．3单位。pH值大小调整可用0．1M的NaOH和 0．IM的HCI来调整。lml的NaOH可使pH值升高0．2单 位，lml的HCl可使pH值降低0．2单位。调节时一定要 充分搅拌均匀。
组织培养技术
第五章组织培养技术第一节植物组织培养所谓植物组织培养广义又叫离体培养，指从植物体分离出符合需要的组织. 器官或细胞，原生质体等，通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。
狭义上是指用植物各部分组织，如形成层、薄壁组织、叶肉组织、胚乳等进行培养获得再生植株，也包括在培养过程中从各器官上产生愈伤组织的培养，愈伤组织再经过再分化形成再生植株。
一、概述（一）概念1. 植物组织培养：是指通过无菌操作，把植物的外植体接种于人工配置的培养基上，在人工控制的条件下进行培养，使其成为完整植株的方法。
2. 外植体：是指用于植物组织培养的接种材料，它包括植物体的各个器官、组织、细胞和原生质体等。
3. 愈伤组织（Callus ）:原指植物在受伤之后于伤口表面形成的一团薄壁细胞，在组培中则指人工培养基上由外植体长出来的一团无序生长的薄壁细胞。
（二）组织培养类型1. 根据接种的外植体不同分：胚胎培养；器官培养；3组织培养；细胞培养；原生质体培养；2. 根据培养基态相不同分：固体培养；液体培养；3. 根据培养过程不同分：初代培养；继代培养；（三）植物组织培养历史植物组织培养是20 世纪初开始，以植物生理学为基础发展起来的。
有以下过程：思想准备阶段；理论奠基阶段；技术建立阶段；形态发生阶段；应用研究阶段；1902 年德国植物学家Haberlandt 提出了细胞全能性概念。
1939 年White 报道了烟草组培成功。
并提出植物细胞全能性学说。
同年，Gautheret 与Nobecourt 培养胡萝卜成功。
三人被誉为植物组培奠基人。
罗士韦是我国植物组织和细胞培养研究的开拓者和奠基人之一（四）植物组织培养的应用1•植物的快速繁殖：⑴园艺、花卉植物的大规模快速繁殖；⑵抢救濒危珍稀植物⑶进行某些植物的种质资源保存2•培育无病毒的植物，如脱病毒草莓等；3•制造人工种子。
4 突变体的筛选培育5 药用植物的工厂化生产6 花药培养和花粉单倍体育种7 基因工程的应用等二、实验室设计和设备（一）实验室设计一般具有：1. 准备室器皿洗涤，培养基配制、分装、高压灭菌，植物材料的预处理，重蒸馏水的制备以及进行生理、生化因素的分析等各种操作都要在此室中进行2. 缓冲室进入无菌室前需在缓冲室里换上经过灭菌的卫生服、拖鞋，戴上口罩。
植物组织培养的方法
植物组织培养的方法植物组织培养（Plant tissue culture）是指利用无菌条件下培养植物细胞或组织，以实现繁殖、繁育新品种、生物合成化合物、环境污染处理等目的的技术。
其不仅可以大幅度提高植物材料的品质和数量，还可以在无限制地产生同一种植物。
方法一：赤潮法（Embryogenesis）这一方法是利用赤潮细胞发生器官（如胚性板）的细胞分化，诱导植物组织的胚胎发生，进而实现植物再生。
该方法适用于很多种植物，如玉米、大麦、水稻等。
步骤为：1. 准备培养基：含有赤潮素、氨基酸、维生素、植物激素和适当的糖类和盐类的基础培养基。
2. 处理材料：将植物的姿态板或种子材料在高温（35-40C）下进行消毒，使其无菌。
3. 材料分离：将消毒材料放入无菌条件下进行材料分离。
4. 培养细胞：将细胞或组织放入含有培养基的无菌培养皿中，保持恒定的温度、湿度和光照条件，促进发生素感应化。
5. 发生胚胎体：促进胚胎形成，通过培养发生胚胎胶囊或胚胎体。
6. 块茎冷藏：利用低温存储胚胎体或胚胎胶囊。
方法二：组织培养（Organogenesis）组织培养方法是通过培养植物的基本组织如叶片、茎尖、芽分根进而再生整个植株。
步骤为：1. 材料处理：对种子或植株进行表层消毒处理。
2. 制备组织片：将消毒好的植株切成组织片段，如茎尖、叶片等。
3. 培养基准备：准备无菌的培养基，其中含有植物的必需胰凡陈列如糖类、氨基酸、维生素、生长因子和植物激素等。
4. 组织分化：将组织片段放入含有培养基的培养皿中，使其分化成根、茎、叶等。
5. 干涸与移栽：将培养的加上适量水后，移栽到含有生长素适量的培养基中，促进植物以正常生长的形式营养。
方法三：悬浮细胞培养（Suspension Culture）在此方法中，使用悬浮培养细胞进行植物细胞或组织的生物合成和生物转化。
步骤为：1. 培养基准备：通常使用植物基础培养基加入氨基酸、维生素和植物激素等。
2. 细胞处理：将细胞分散在含有培养基的匀浆器中，使其悬浮在培养基中。
《植物组织培养技术》课件
04 植物组织培养技术的应用实例
快速繁殖技术
快速繁殖技术是指利用植物组 织培养技术，快速、大量繁殖
植物种苗的一种方法。
该技术广泛应用于花卉、果树 、林木等植物的快速繁殖，能 够大大缩短繁殖周期，提高繁
殖系数。
快速繁殖技术还可以通过控制 培养条件，实现植物的定向繁 殖，如矮化、无病毒等。
快速繁殖技术具有高效、环保 、可重复利用等优点，是现代 农业和林业生产的重要手段之 一。
濒危植物保护与复壮是保护生 物多样性和维护生态平衡的重 要手段之一，具有深远的社会 意义和生态意义。
05 植物组织培养技术的挑战与前景
技术瓶颈与解决方案
技术瓶颈
目前植物组织培养技术面临的主要瓶颈包括培养基的优化、外植体的选择与处 理、污染控制以及基因转化效率等。
解决方案
针对这些问题，研究者们正在探索新型的培养基成分、优化外植体的选择标准 、开发新型的消毒方法以及改进基因转化技术，以期提高植物组织培养的效率 和成功率。
指任何一个植物细胞都包含该物种的 全套遗传信息，具有发育成完整个体 的潜在能力。
植物细胞全能性证明
植物细胞全能性的应用
植物组织培养技术利用植物细胞的全 能性，通过离体培养获得完整的植株 ，广泛应用于植物繁殖、品种改良、 基因工程等领域。
许多植物细胞如胡萝卜、烟草、草莓 等在适宜条件下能够发育成完整的植 株，证明了植物细胞的全能性。
技术发展趋势与展望
发展趋势
随着生物技术的不断发展，植物组织培 养技术也在不断进步和完善。未来，该 技术将更加注重与基因编辑、合成生物 学等新兴技术的结合，以实现更为精准 和高效的植物育种和种质资源保护。
VS
展望
未来，植物组织培养技术有望在农业、园 艺、林业等领域发挥更大的作用，为解决 全球粮食安全、生态恢复等问题提供有力 支持。
植物组织培养技术
植物组织培养技术第一章绪论第二章植物组织培养实验室组成、仪器设备及无菌操作技术第三章植物组织培养基本原理第四章器官培养技术第五章植物胚胎培养第六章花粉及花药培养第七章细胞及原生质体培养第八章组培培养技术在中药学上的应用第一章绪论一、植物组织培养的概念1. 概念植物组织培养（Plant tissue culture）广义上是指无菌条件下，在特定的培养基上对离体的植物器官、组织、细胞和原生质体甚至包括完整植株进行培养的技术。
2.主要特征（1）在培养容器中进行；（2）无菌培养环境，排除了微生物如真菌、细菌以及害虫等的侵入；（3）各种环境因子如营养因子、激素因子以及光照、温度等物理因子处于人工控制之下，并可达到最适条件。
（4）通常打破了正常的植物发育过程和格局；（5）随着单细胞和原生质体培养技术的发展，对植物显微结构进行操作成为可能。
二、植物组织培养类型：根据不同分类的依据可以分为不同类型。
1、根据培养材料不同分为：（1）完整植株培养（Plant Culture）：对幼苗和较大植株等的培养。
（2）胚胎培养（Embryo Culture）：包括成熟胚、幼胚、子房、胚珠等的培养。
（3）器官培养（Organ Culture）：包括离体根、茎、叶、果实、种子、花器官的培养。
（4）组织培养（Tissue Culture）：如分生组织、薄壁组织、输导组织培养。
（5）细胞培养（Cell Culture）：指对单细胞或较小的细胞团进行培养。
（6）原生质体培养（Protoplast Culture）：指对去掉细胞壁后所获得的原生质体进行培养。
2、根据再生途径分为：（1）器官发生途径（Organogenesis）：直接器官发生途径：植物器官可以直接由外植体上诱导。
如茎尖培养。
间接器官发生途径：成熟细胞经过脱分化（dedifferentiation）及再分化（redifferentiation）过程而形成新的组织和器官的过程。
植物组织培养技术
植物组织培养技术1. 概念概念2. 发展与成果例证发展与成果例证3. 培养基的组成和配制培养基的组成和配制 4. 培养条件培养条件5. 培养材料及处理方法培养材料及处理方法 6. 技术流程技术流程1. 概念概念2. 发展与成果例证发展与成果例证3. 培养基的组成和配制培养基的组成和配制and and Skoog Skoog ）培养基配方为最常用的一种基本培养基，其特点是有利于一般植物组织和细胞的快速生长。
的快速生长。
4. 培养条件培养条件温度：温度： 对大多数植物组织20～28℃即可满足生长所需，其中26～27℃最适合℃最适合光：光： 组织培养通常在散射光线下进行。
光的影响可导致不同的结果。
有些植物组织在暗处生长较好，而另一些植物组织在光亮处生长较好，而另一些植物组织在光亮处生长较好，但由愈伤组织分化成器官时，但由愈伤组织分化成器官时，但由愈伤组织分化成器官时，则每日必须则每日必须要有一定时间的光照才能形成芽和根。
有些次生物质的形成，光是决定的因素。
要有一定时间的光照才能形成芽和根。
有些次生物质的形成，光是决定的因素。
渗透压：渗透压： 渗透压对植物组织的生长和分化很有关系。
在培养基中添加食盐、蔗糖、甘露醇和乙二醇等物质可以调整渗透压。
通常1～2个大气压可促进植物组织生长，2个大气压以上时，出现生长障碍，6个大气压时植物组织即无法生存。
个大气压时植物组织即无法生存。
酸碱度：酸碱度： 一般植物组织生长的最适宜pH 为5～6．5。
在培养过程中pH 可发生变化，加进磷酸氢盐或二氢盐，可起稳定作用。
磷酸氢盐或二氢盐，可起稳定作用。
通气：通气： 悬浮培养中植物组织的旺盛生长必须有良好的通气条件。
小量悬浮培养时经常转动或振荡，可起通气和搅拌作用。
大量培养中可采用专门的通气和搅拌装置。
或振荡，可起通气和搅拌作用。
大量培养中可采用专门的通气和搅拌装置。
5. 培养材料及处理方法培养材料及处理方法 从低等的藻类到苔藓、蕨类、种子植物等高等植物的各类、种子植物等高等植物的各类、各部分都可采用作为组织培养各部分都可采用作为组织培养的材料。
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液体培养基、蒸馏水
培养材料 器械、瓶口、棉塞、包头纸 接种室。培养间
（1）干热灭菌
适用于玻璃器皿和金属器械的灭菌。操作方 法：150℃ 、40min或120℃ 、120min，如 果发现芽孢杆菌，160℃ 、90～120min
（2）湿热灭菌
适用于各种器皿、培养基、器皿、蒸馏水、 棉塞、纸等。121℃ 维持20～30min 注意点：加足水、排尽气、气压降到0时， 才能开盖
（二）、灭菌的方法
1、物理方法：干热、湿热、过滤（0.25微 米）紫外灯、超声波等。 2、化学方法：使用灭菌剂或抗菌素，如酒 精、次氯酸钠、升汞、漂白粉、高锰酸钾、 双氧水、福尔马林等
各种灭菌方法及其使用范围
干热灭菌 玻璃器皿、器械
湿热灭菌
熏蒸灭菌
培养基、蒸馏水、器械、棉塞等
接种室、培养室
过滤灭菌
2、细胞分裂素
是一类腺嘌呤衍生物。主要有激动素（ 6-糠 基氨基嘌呤KT）、6-苄基氨基嘌呤（6-BA）和 玉米素（ZT）等。其中最常用的是6—苄基氨 基嘌呤。 功能： 1、促进细胞的分裂和分化 2、诱导芽的分化 3、促进侧芽的萌发和生长 4、抑制衰老
A
B
A：BA(0mg/L) ，芽（减少），根（增多）愈伤组织（一定量） B：BA(0.1mg/L)，芽（适量），根（适量）愈伤组织（一定量）
甲醛熏蒸接种室应至少在使用前24小时进行，熏蒸后 密闭保持4小时以上再进入室内工作。甲醛对人的眼、 鼻有强烈刺激作用。因此，可在使用前用氨进行中和。 取与甲醛等量的氨水，倒在另一个烧杯里，迅速放入 熏蒸室内，使甲醛和氨水发生中和反应，以消除甲醛 味，减少对人体的刺激作用。使用氨水应在工作前2 小时进行。 对有材料的培养室，也可以采用乙二醇加热熏蒸
4、其它有机物质 1）肌醇（环己六醇） 肌醇可以形成果胶物质，是细胞壁的构建物质 另外还可以形成植酸，与阳离子结合或形成磷脂， 参与细胞膜的组成。利于胚和芽的形成 2）天然有机物 一些天然的有机物如椰乳、番茄提取物、酵母提 取物、马铃薯煮汁也常用于植物组织培养，并表 现出了良好的促进作用。
（三）、植物生长调节物质
（4）射线灭菌
主要是利用紫外灯进行照射，适合实验室 空气、操作台等，灭菌时间20～30min。 注意：关灯后5min后再进入。超净工作台 关灯后要打开风机。
（5）火焰灼烧灭菌
用火焰灼烧达到灭菌目的，适用于 接种器皿的灭菌。
（6）消毒剂
适用外植体、实验器皿、操作表面、皮肤等。 几种常用消毒剂的效果比较
熏蒸灭菌
长期不用的培养室或接种室要进行熏蒸。方法：甲 醛、高锰酸钾熏蒸。 甲醛的用量通常按每立方米空间2-6毫升计算， 高锰酸钾的用量是甲醛的一半。室内准备妥当后， 把称好的高锰酸钾放在瓷碗或烧杯内(最好在碗或 杯下面铺一张报纸，以利清洗)，然后将甲醛也倒 入碗或杯内，立即出屋关门。几秒钟后，甲醛溶液 即沸腾挥发。高锰酸钾是一种氧化剂，当它与一部 分甲醛作用时，由氧化反应产生的热可使其余的甲 醛挥发为气体。
生长素的生理作用
1、促进细胞生长和细胞分裂 2、诱导受伤组织表面细胞恢复分裂能力 3、形成愈伤组织，促进生根 4、与一定量的细胞分裂素配合共同诱导不定 芽的分化、侧芽的萌发与生长、胚状体的诱 导。
A
B
C
A：NAA 0mg/L，芽（少），根（无） B：NAA 0.1mg/L，芽（少），根（无），愈伤组织（少量） C：NAA 5.0mg/L，芽（少），根（多），愈伤组织（一定量
（3）过滤灭菌
培养基的灭菌一般用高压高温处理，但如果 培养基中某些成分遇到高温分解（如某些生长调 节剂GA3、玉米素等），就需要过滤灭菌。另外酶、 血清等也需要过滤灭菌 灭菌方法：将生长调节剂或酶配成一定浓度， 用注射器注入微孔滤膜虑，滤膜孔径0.22～0.45 微米。制培养基时，现将培养基高压灭菌，待降 至50℃左右时，加入适量的激素，然后分装。
4、用70－75％的酒精拭擦台面并消毒双手。试验 用具也应该用酒精消毒。点燃酒精灯，将金属器 械在其火焰上灼烧，冷却待用。 注意：所有操作应在火焰近处并经过灼烧进行。 金属器械不能过度灼烧，以防退火。移液管不能 灼烧，培养瓶口、塑料材料、橡胶材料过火焰不 能时间太长。
5、打开培养瓶，瓶口在灯焰处旋转灼烧，用镊 子将培养材料置于培养基上，灼烧镊子放回， 灼烧瓶口，盖上瓶塞。
1.3 灭菌室
配备高压灭菌锅、灭菌锅的选择应根据不同的 要求选择不同型号的灭菌锅。一般实验室可选用小 型的医用手提式高压灭菌锅，较大的实验室可选用 立式自动控制压力和温度的灭菌锅。生产性的实验 室可选用大型的卧式灭菌锅。 小的10万，大的45万。
1.4 无菌操作室
无菌操作室又叫接种室。通常由里外两间组成，外间 是缓冲间，用于准备工作，防止污染的作用。缓冲间 的门应该与接种室的门错开，两个门也不要同时开启， 以保证无菌室不因开门和人的进出带进杂菌。缓冲间 内应该设有洗手池、鞋帽架、和柜子、紫外灯。无菌 操作室的内壁应当用塑钢板或瓷砖装修，工作人员进 入操作间前要穿上消过毒的工作服和拖鞋。 室内应配有超净工作台，紫外灯、解剖镜、各种 接种器械等。
植物激素是在植物体内合成的，对植物 生长发育有显著调节作用的微量有机物， 而植物生长调节剂是外源的调节植物生 长发育的物质。 无机元素和有机营养构成的培养基仅保 证培养物的生存与最低生理活动，只有 加入植物生长调节物质，才能诱导细胞 分裂、脱分化和再分化。
1、生长素类：
1）吲哚类：IAA（吲哚乙酸）、 IBA（吲哚丁酸） 、 IPA（吲哚丙酸） 2）萘酸类： NAA（萘乙酸） 3）苯氧羧酸类：2,4-D（2,4-二氯苯氧乙酸）、 2,4,5-T（ 2,4,5-三氯苯氧乙酸）、 2,4,5-TP （ 2,4,5-三氯苯氧丙酸）等。 其中吲哚乙酸在植物体内普遍存在，是生理活性最 强的生长素。
消 毒 剂 使用浓度(%)
75 10～20 0.1～1 10～12 4～50mgl-1 9 ～ 10
乙醇 新洁尔灭 氯化汞 过氧化氢 抗菌素 次氯酸钙/纳
消毒时间 (min.) 0.1-3 5～30 2～15 5～15 30～60 5～30
效 果
好 好 最好 较好 较好 好
残液去除 难易 易 易 最难 最易 较难 易
注意（1）进行培养时，动作要准确敏捷，但又不必 太快，以防空气流动，增加污染机会。（2）不能用 手触及已消毒器皿，如已接触，要用火焰烧灼消毒或 取备品更换。 （3）为拿取方便，工作台面上的用品 要有合理的布局，原则上应是右手使用的东西放置在 右侧，左手用品在左侧，酒精灯置于中央。（4）工 作由始至终要保持一定顺序性，组织或细胞在未做处 理之前，勿过早暴露在空气中。同样，培养液在未用 前，不要过早开瓶；用过之后如不再重复使用，应立 即封闭瓶口直立可增加落菌机会。
2、AA类物质 绝大多数AA适量时对培养效果都有正象效应。常用 的有Gly、Asn、Gln。在植物组织培养中，有时也 用水解乳蛋白和水解酪蛋白。
3、糖类
糖在培养基的作用： 1）、为细胞提供合成新物质的碳骨架 2）、为细胞的呼吸代谢提供底物和能量 3）、维持渗透压 蔗糖是广泛应用的一种碳源。葡萄糖和麦芽糖也是常 用的碳源。
§1
实验室设置及仪器设备
实验室是进行组培研究的主要场所，须 满足洗涤、培养基制备、无菌操作、培 养、鉴定等工作。
1．基本实验室
1.1 洗涤间 根据生产量的大小决定其大小，一般面积控 制在30-50m2。在实验室的一侧设置专用的洗涤水 槽，用来清洗玻璃器皿。中央实验台还应配置2 个水槽，用于清洗小型玻璃器皿。如果工作量大， 可以购置一台洗瓶机。地面应耐湿并排水良好。
三、无菌操作技术
人为因素（工作人员本身）：工作服、帽、口罩、酒精擦手。 器 皿 和 用 具 污染来源
培养皿：洗→热压 玻璃器皿：洗→干热（干热箱）或晾干 接种用具：用CCL4布擦→湿布擦→泡75%~9来自%酒精→烧培养基：湿热
物品因素
培 养 材 料
外部细菌：用水冲洗→化学药剂处理
内部细菌 茎尖培养 加抗生素：青霉素、利福平
接种时在近火焰处打开瓶口，使瓶倾斜， 以免空气中微生物落入瓶中
正 确
错 误
整个接种操作应在近火焰处进行，且动作要 迅速
正 确
错
误
防止操作带来的污染 接种过程中尽可能达到悬空要求
正
确
错
误
接种时不得用手接触瓶盖内壁或瓶口
正 确
错
误
瓶盖朝上放，接种完毕后立即盖好瓶口
正
确
错
误
接种完一瓶用火烧用具以防止交叉污染产生
种子和分生组织：培养时通常将其贴放在培养基表 面，而不是插到培养基内部，以免供氧不足
正 确
错 误
接种茎段：注意形态学下端插入培养基内，而形 态学上端露于空气中
正 确
错 误
§3.培养基的成分及其配制
一、培养基的成分及其作用
（一）无机营养物质
培养的植物组织、器官、细胞或者原生质体需
要连续的供给某些无机化学物质，除了C、H、O之
操作的空气：洗刷地板95%酒精擦超净工作台 用化学试剂薰蒸
1、实验器具和材料的准备 2、用75%的酒精擦拭超净工作台，然后室内及超 净工作台用紫外灯杀菌20min-30min。注意：台 面上的用品不要放置太多或重叠放置，以免降低 灭菌效果。 3、关紫外灯、打开风机，过5-10min进入缓冲间， 以75%洗手和手臂，更换无菌服、帽子和口罩。 进入接种室。（注：没有特别情况，尽量不要下 工作台）
按需消毒空间每立方米用于苍术片(中药店 有售)1克计算，将苍术浸泡于95％酒精内， 酒精用量以淹没苍术为准，密封浸泡24小 时待用。消毒时将浸泡好的苍术置于1个或 2个耐高温容器内，点燃熏蒸2小时，每周 1次。需要注意的是，开始点燃时有5厘米 左右高的火焰，约持续2分钟。因此，需待 火焰灭后，观有淡淡的烟雾上升后室内方 可离人