植物组织培养技术1(1)
植物组织培养技术
植物组织培养技术第一篇：植物组织培养技术简介植物组织培养技术是指利用植物体外培养的方法繁殖、培育和改良植株，可以通过体细胞培养、生殖细胞培养和整个植株培养等方式进行。
植物组织培养技术已广泛应用于植物繁殖、遗传改良、新品种选育和药物合成等方面，是一个极具应用前景的研究领域。
本文将介绍植物组织培养技术的相关知识，包括培养基的配制、培养条件的控制、组织培养的应用以及注意事项等方面。
一、培养基的配制培养基是植物体外培养的重要条件，其成分根据不同植物和培养方法的需要而有所差异。
通常，培养基由无机盐、有机物、维生素和激素等组成。
无机盐是培养基中最主要的成分，其种类和含量的调整对植物体外生长和发育起着至关重要的作用。
有机物则为植物提供必需的碳源和能量，维生素和激素则分别参与细胞代谢和生长调控。
二、培养条件的控制培养条件的控制包括温度、光照、湿度、氧气供应和培养容器等方面。
温度通常在20~30℃之间调节，对不同植物和组织形态有所不同。
光照较为复杂，一般来说，不同种类和不同阶段的植物对光照要求不同，应根据具体需要进行调节。
湿度和氧气供应则是影响植物体外生长和发育的关键条件之一，应根据植物的需要而确定。
培养容器也是植物组织培养的重要因素，常用的有试管、琼脂糖和蒸馏水等。
三、组织培养的应用组织培养技术可以用于改良传统植物栽培技术难以完成的任务，如大规模繁殖技术、植物遗传改良、病毒清除和药物合成等。
其中大规模繁殖技术主要应用于经济价值高、生长缓慢或不易育种的植物。
生长缓慢或不易育种的植物通过组织培养技术可以实现大规模繁殖，从而满足市场需求。
植物遗传改良则是利用组织培养技术改变植物性状、耐受性和适应性的方法，通过体细胞选择、诱导突变等方式实现。
此外，组织培养技术还可以用于病毒清除和药物合成等领域的研究。
四、注意事项在进行植物组织培养时，需要遵循一些基本的注意事项。
首先，应选择适宜的组织，一般来说，嫩芽、茎尖、子叶、愈伤组织等新陈代谢活跃的组织较易进行培养。
植物组织培养技术综合测试1
《植物组织培养技术》综合测试题（一）一、填空题（每空1分，共20分）2. 在组织培养中，培养基常用__________法灭菌，而其中不耐热的物质用__________法灭菌。
3. 1962年印度Guha等人成功地培养毛叶曼陀罗花药获得_________，这促进了花药和花粉培养的研究。
4. 细胞分裂素/ 生长素浓度的高低决定了外植体的发育方向，比值__________促进根的生长，这时__________占主导地位；比值__________促进芽的生长，这时__________占主导地位5. 病毒植物的鉴定方法有________、________、和________。
6. 花药培养属于________培养，花粉培养属________培养。
7.非洲菊组织培养时，可采用________方式继代培养增殖，而香石竹则采用________________为无性系继代培养增殖。
8.大多数植物组织培养的温度都是在________ 之间进行的，一般采用________ 。
二、选择题（每题2分，共10分）2.下列培养基中_________无机盐的浓度最低。
A MS培养基；B B5培养基；C White培养基；N6培养基3.高温不易被破坏分解的植物生长调节物质是_________。
A IAA；B GA；C NAA；D Zt4.从单个细胞或一块外植体形成典型的愈伤组织，大致经历_________三个时期。
A 诱导期；B 潜伏期；C 分化期；D 分裂期5.病毒在植物体中的分布规律为_________A 从茎尖到底部含量越来越多B 从茎尖到底部含量越来越少C 病毒在植株体的分布是均匀的D 茎尖含量最多，底部几乎没有三、名词解释（每题3分，共18分）2. 愈伤组织5. 再分化：四、简答题（每题6分，共30分）1.在植物组织培养中，通过哪些途径可以得到完整的植株？2.为何幼胚比成熟胚培养要求的培养基成分复杂？3. 水稻花药培养方法？4. 比较获取原生质体的两种方法:机械法和酶解法？5. 茎尖培养脱毒的原理？五、问答题（每题11分，共22分）1. 某地区的一种马铃薯经多年的种植后，植株变的矮小，产量和品质都下降，怀疑是由病毒所至。
《植物组织培养技术》 讲义
《植物组织培养技术》讲义一、植物组织培养技术的概述植物组织培养技术是一种在无菌条件下，将植物的离体器官、组织或细胞培养在人工配制的培养基上，使其生长、分化并发育成完整植株的技术。
这项技术具有广泛的应用前景，如快速繁殖优良品种、脱毒苗的培育、植物新品种的选育、植物次生代谢产物的生产等。
植物组织培养的基本原理是植物细胞的全能性，即每个植物细胞都具有发育成完整植株的潜在能力。
然而，在自然条件下，由于细胞受到各种分化信号的影响，这种全能性通常无法表现出来。
通过组织培养技术，提供适宜的营养和环境条件，解除细胞的分化抑制，使其重新恢复分裂和分化的能力。
二、植物组织培养的基本设备和条件（一）实验室设计植物组织培养实验室通常包括准备室、接种室和培养室。
准备室用于器具的清洗、干燥和培养基的配制；接种室要求无菌环境，进行外植体的接种操作；培养室则为培养物提供适宜的温度、光照和湿度条件。
（二）设备和器具1、超净工作台：提供无菌操作的工作区域。
2、高压灭菌锅：对培养基、器具等进行灭菌处理。
3、培养箱：精确控制温度、光照和湿度。
4、天平：用于称量化学试剂。
5、显微镜：观察细胞和组织的形态结构。
（三）培养基的成分1、大量元素：包括氮、磷、钾、钙、镁等。
2、微量元素：如铁、锰、锌、铜等。
3、有机成分：如维生素、氨基酸、糖类等。
4、植物生长调节剂：如生长素、细胞分裂素等，对细胞的分裂、分化和生长起着重要的调节作用。
（四）无菌操作技术无菌操作是植物组织培养成功的关键。
操作人员需经过严格的培训，在操作过程中，使用酒精消毒双手和工具，在超净工作台中进行操作，避免微生物的污染。
三、植物组织培养的基本过程（一）外植体的选择和处理外植体的选择要考虑植物的种类、部位和生理状态。
一般选择生长旺盛、无病虫害的部位，如茎尖、叶片、花药等。
外植体在接种前需进行表面消毒，常用的消毒剂有酒精、次氯酸钠等。
（二）初代培养将消毒后的外植体接种到初代培养基上，诱导其脱分化形成愈伤组织或直接分化出芽和根。
高中生物第5章植物的组织培养技术第1节植物快速繁殖技术教案中图版
第一节植物快速繁殖技术一、植物组织培养简介1．理论基础：植物细胞的全能性。
(1)愈伤组织的特点：细胞是一种高度液泡化的薄壁细胞，呈无定形状态，排列疏松而无规则，具有很强的分生能力。
(2)脱分化：由高度分化的细胞重新恢复到未分化的状态。
(3)再分化：愈伤组织在适当的人工培养基上继续培养又可以重新分化成芽、根等器官，进而发育成一棵完整的植株。
3．培养基(1)成分：除含外植体所需的各种营养物质外，还需添加生长素和细胞分裂素两种植物激素。
(2)类型：据外植体在不同发育阶段的要求，需配制“脱分化培养基”、“生芽培养基”、“生根培养基”。
4．无菌条件：培养基的灭菌要彻底、外植体的消毒要充分、接种时的无菌操作要严格。
二、月季的快速繁殖程序1．配制培养基先将各种营养成分按比例配制成MS 培养基母液，再利用母液配制所需的三种培养基。
(1)脱分化培养基：母液中加入质量浓度为0.1 mg/L 的6－BA 和IAA 。
(2)生芽培养基：去掉脱分化培养基中的IAA 即可。
(3)生根培养基：无机盐浓度为MS 的12，另外添加质量浓度均为0.1 mg/L 的NAA 和IAA 。
2．外植体消毒清水洗净→体积分数为70%的酒精浸5 s→质量分数为2%的次氯酸钠溶液中浸泡6 min ～10 min→用无菌水清洗至少3次，漂净消毒液→用无菌滤纸吸干。
3．接种：将已消毒的月季嫩茎接种到脱分化培养基上，使嫩茎的形态学下端接触培养基。
4．培养：接种后的锥形瓶放在恒温培养箱中培养，将愈伤组织接种到生芽培养基上，每天用日光灯光照12 h ，培养10 d 左右长出小芽，小芽继续长成枝条。
待枝条长到3 cm左右时，将它切下后插在生根培养基上诱导生根。
5．驯化试管苗6．移栽预习完成后，请把你认为难以解决的问题记录在下面的表格中一、植物组织培养1．原理——细胞的全能性(1)原因：生物体的每个细胞都含有本物种生长、发育、遗传和变异的全部遗传信息。
(2)实现全能性的条件：离体状态和适宜的环境条件(如营养物质、激素、温度等)。
植物组织培养技术
植物组织培养技术植物组织培养技术是一种在无菌条件下通过培养组织和细胞的方式来繁殖和研究植物的方法。
它可以被广泛应用于植物育种、生产和研究等领域。
本文将介绍植物组织培养技术的基本原理、培养基组成和培养过程，并简要介绍其在实际应用中的一些重要方面。
一、基本原理植物组织培养技术基于植物细胞的分裂和分化能力。
在无菌条件下，取自植物的幼嫩组织、芽尖、胚乳或种子中的胚或胚乳端胚发育相对较低的部分，通过体外培养的方法，将其置于适当的培养基中，利用培养基中的植物生长激素和营养物质，可以诱导组织再分化和器官发生，从而实现对植物的繁殖和研究。
二、培养基组成植物组织培养过程中的培养基主要由无机盐、有机物、糖类和植物生长调节剂等组成。
无机盐提供了植物细胞所需的矿质元素，有机物则作为植物细胞的能量来源和原料。
糖类则提供能量和调节物质，植物生长调节剂在培养基中的加入可以调节细胞分裂、分化和器官发生等过程。
三、培养过程植物组织培养过程一般分为前处理、组织分离、无菌处理、培养和转地培养等几个步骤。
1. 前处理前处理包括新鲜植株的选择、幼嫩组织或胚的提取、洗涤和消毒等步骤。
新鲜植物材料能提供较高的活力和分裂能力，幼嫩组织或胚则更易于培养。
2. 组织分离在无菌条件下，通过手工或酶解的方法将所需的幼嫩组织或胚提取出来。
组织分离需要注意操作的轻柔和对组织的保护，以确保分离出的细胞和组织能够在后续的培养中保持较高的生活力。
3. 无菌处理在培养过程中，保持无菌状态是一项关键工作。
这包括对器皿、培养基和工具等进行高温高压处理或酒精灯烧烤，同时采取合适的工作台、手套箱、无菌技巧等。
4. 培养和转地培养将提取的幼嫩组织或胚块置于含有适当生长激素和营养物质的培养基中，暴露于合适的光照和温度条件下。
在培养过程中，可以通过调整培养基的成分和组织的处理方式来促进细胞分裂和分化，实现器官发生和植株生长。
如果需要将培养物转移到土壤中，还需要进行转地培养的处理，以适应土壤环境。
《植物组织培养技术》课件
04 植物组织培养技术的应用实例
快速繁殖技术
快速繁殖技术是指利用植物组 织培养技术，快速、大量繁殖
植物种苗的一种方法。
该技术广泛应用于花卉、果树 、林木等植物的快速繁殖，能 够大大缩短繁殖周期，提高繁
殖系数。
快速繁殖技术还可以通过控制 培养条件，实现植物的定向繁 殖，如矮化、无病毒等。
快速繁殖技术具有高效、环保 、可重复利用等优点，是现代 农业和林业生产的重要手段之 一。
濒危植物保护与复壮是保护生 物多样性和维护生态平衡的重 要手段之一，具有深远的社会 意义和生态意义。
05 植物组织培养技术的挑战与前景
技术瓶颈与解决方案
技术瓶颈
目前植物组织培养技术面临的主要瓶颈包括培养基的优化、外植体的选择与处 理、污染控制以及基因转化效率等。
解决方案
针对这些问题，研究者们正在探索新型的培养基成分、优化外植体的选择标准 、开发新型的消毒方法以及改进基因转化技术，以期提高植物组织培养的效率 和成功率。
指任何一个植物细胞都包含该物种的 全套遗传信息，具有发育成完整个体 的潜在能力。
植物细胞全能性证明
植物细胞全能性的应用
植物组织培养技术利用植物细胞的全 能性，通过离体培养获得完整的植株 ，广泛应用于植物繁殖、品种改良、 基因工程等领域。
许多植物细胞如胡萝卜、烟草、草莓 等在适宜条件下能够发育成完整的植 株，证明了植物细胞的全能性。
技术发展趋势与展望
发展趋势
随着生物技术的不断发展，植物组织培 养技术也在不断进步和完善。未来，该 技术将更加注重与基因编辑、合成生物 学等新兴技术的结合，以实现更为精准 和高效的植物育种和种质资源保护。
VS
展望
未来，植物组织培养技术有望在农业、园 艺、林业等领域发挥更大的作用，为解决 全球粮食安全、生态恢复等问题提供有力 支持。
植物组织培养技术
植物组织培养技术植物组织培养技术是一种在无机培养基中培养、繁殖植物组织的生物技术。
这种技术可以促进植物繁殖的速度和效率，创造新品种，识别植物的变异和突变等。
此外，它还可以用来进行基因工程和农业生产的改良，为农业生产带来了重大贡献。
植物组织培养技术与显微技术、细胞生物学、遗传学、生理学等学科有密切的联系。
通过使用一系列培养基和生长因子，可以选择特定的细胞类型生长，以实现植物再生或重组遗传信息的目的。
植物组织培养技术的基本原理是将成熟的植物组织，如种子、茎、叶等，切成小块或单个细胞，然后将其放置在特殊的培养基中，培养出植物组织。
培养基是一种由水溶液、植物晶体、蛋白质和其他能量物质构成的无机物质。
这些无机物质和生长因子充分提供了培养组织所需的营养和激素。
培养基的选择对于植物再生和重组遗传信息非常重要。
通常会根据不同植物种类及其操作目的制备不同的培养基。
培养基的主要组成部分是无机盐、有机物质、碳源、氮源、微量元素和生长因子。
其中无机盐是培养基最重要的组成部分，它含有大量植物生理学功能所需的离子和物质。
培养基中的生长因子有三种主要类型：激素、生长素和多种激素。
激素能够调节植物细胞分化、增殖和发育，促进再生和器官发育，从而实现植物组织培养；生长素则能够促进细胞分裂和伸长，从而产生新的细胞和器官；而多种激素则具有生长因子的作用。
植物组织培养技术的具体步骤如下：1、提取植物材料：从成熟的植物中获取材料，并将其进行清洗、消毒和准备工作。
2、处理组织：将植物材料切下或离心成细胞，将其放置在培养基中。
3、培养：将处理好的组织放在预先准备好的培养基中，给予适当的生长因子、营养物质和温度，并保持湿润。
4、观察：观察组织的生长和发育情况，记录数据并进行理论分析。
5、保存和传递：将培养好的组织分装或进行冷冻保藏，方便后续使用和传递。
虽然植物组织培养技术不断发展，但其存在一些问题需要解决。
例如，市场需要知道组织培养植物是否与野生植物有所差别。
植物组织培养(1)
0.1.3 植物组织培养的研究类型和任务
• 组织培养：分生组织、形成层组织、薄壁组织、韧皮部组 织等。
• 器官培养：根、茎、叶、花、果实、种子。 • 胚胎培养：幼胚、成熟胚、胚乳、胚珠、子房等。 • 细胞培养：单细胞或较小细胞团，如性细胞、叶肉细胞、
1. Thimann和Wickson
• 1958年，他们发现腋芽（当顶芽存在时为休眠状态） 的生长，可以通过外源细胞分裂素的应用而启动。这 样，将茎段培养在含有细胞分裂素的培养基上，就可 以在一个具有完整顶芽的生长中的茎上诱导侧芽的形 成。这将消除顶端优势，得到大量不定芽。
Thimann
2. Morel－脱毒、快繁商业化
• 1922 年 ， 植 物 离 体 组 织 培 养 取 得 了 一 些 进 展 。 德 国 人 Kotte和美国人Robbins两人同时分别独立地将分生组织作 为外植体。Kotte研究切下的根尖，如豌豆、玉米根尖， 将它们放在含有Knop溶液盐成分、葡萄糖、含氮化合物 如天冬酰氨酸、丙氨酸以及肉汁的各种营养液中。Kotte 观察到根尖生长持续了2周，但他没有进行继代培养。另 一方面Robbins通过继代，将玉米根尖离体培养了更长的 时间，但随着时间延长，生长量减少，最后消失。
• 1952年， Morel和Martin提出了植物脱毒（virus free）技 术，通过分离已被病毒感染的大丽花个体的根尖，并将其 离体培养，重新获得了无病毒的大丽花。
• 1960年，Morel利用兰花茎尖培养，实现了脱毒和快速繁殖 （rapid clone propagation）的两个目的。这一技术导致欧 洲、美洲和东南亚许多国家“兰花工业”的兴起。
0.2 植物组织培养的形成和发展
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（三）、植物组织培养的类型
根据培养方式：固体培养、液体培养
固体培养：将培养物放在含有琼脂等固化剂的培养基表面进行 培养。 液体培养：将培养物放在未加固化剂的培养基内培养，一般需 进行震荡，又称液体震荡培养。
固体培养
液体培养
固体培养、液体培养的特点：
(1)固体培养法
是最常用的方法。该方法简单，易行，但养
组织培养实验室的 设计与主要设备
二、仪器设备和器皿用具
（
1、超净工作台或接种箱 2、空调
一
3、除湿机或加湿器
）
4、恒温培养箱
常 见 仪
5、高压灭菌锅 6、冰箱 7、天平 8、显微镜
器
9、水浴锅
设
10、摇床与转床
备
11、蒸馏水发生器 12、酸度计
13、离心机
组织培养实验室的 设计与主要设备
（二）各类玻璃器皿
脱分化（dedifferentiation)：将已分化的不分裂的静止细 胞，放在培养基上培养后，细胞重新进入分裂状态。一个成 熟的细胞转变为分生状态的过程叫脱分化。
再分化（redifferentiation):经脱分化的组织或细胞在一定 的培养条件下可转变为各种不同的细胞类型，形成完整植株 的过程。
植物组织培养学
植物组织培养实验室 构建及操作技术
本节教学目的与要求：
(1)掌握组织培养实验室的设计； (2)掌握组织培养常用的实验仪器设备及其使用
方法； (3)掌握调控组织培养的主要环境条件。 (4)掌握灭菌和消毒的区别； (5)掌握灭菌的不同方法和具体操作过程；
本节主要内容
商业性组织培养实验室和小工厂的 设计与主要设备 培养基及其配制 外植体的选择与培养 试管苗的驯化与移栽
3、植物组织培养过程
合适的外植体 离体的植物器
脱分化
愈 伤
再分化
根 移栽
再 生
官、组织、细
组
植
胞
织
芽
株
外植体（explant)：由活体（in vivo)植物体上切取下来的，用于组织培
养的各种接种材料。包括各种器官、组织、细胞或原生质体等。即能 被诱发产生无性增殖系的器官或组织切段。
愈伤组织（callus）在人工培养基上由外植ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ上形成的一团无 序生长状态的薄壁细胞。指经细胞与组织培养产生的可传代 的未分化细胞。
本节目的要求： (1)一般掌握培养基的种类、特点； (2)掌握基本培养基的配方； (3)一般掌握培养基的组成成分和适宜的剂量； (4)掌握培养基母液和常用培养基的配制方法； (5)熟练掌握培养基的灭菌方法； (6)一般掌握培养基的筛选办法。
培养基及其配制
一、培养基的成分
其它添加物
无机营养物
培养基组成
（1）碳水化合物 最常用的碳源是蔗糖，葡萄糖和果糖也是较好的碳
源。 使用浓度在1%—5%，常用3% 作用：碳源；维持培养基渗透压。
培养基及其配制
（2）维生素(vitamin)
在细胞里主要是以各种辅酶的形式参与多种代谢活动。 种类：VBl(盐酸硫胺素)、
VB6(盐酸吡哆醇)、 Vpp(烟酸)、 Vc（抗坏血酸）、 VH(生物素)、 VB11(叶酸)、 VB12（钴胺素)等。 使用浓度：一般用量为0.1—1.0mg／L。
➢ (2)类型：按照外植体的不同，分为植株培养、胚胎培养、 器官培养、细胞培养和原生质体培养5种类型。
➢ (3)组织培养特点：培养条件可以人为控制；生长周期短， 繁殖率高；管理方便，利于工厂化生产的突出特点，因而 发展迅速。
➢ (4)组织培养技术在农业生产上的应用主要体现于以下几个 方面：快速繁殖优良苗木；获得脱毒苗；育种上应用；工 厂化育苗。
三、应用领域
1、快速繁殖 2、种苗脱毒 3、远缘杂交 4、突变育种
5、单倍体育种 6、种质保存 7、基因工程 8、植物性药物和生物制品的生产
四、植物组织培养在技术上的发展
研究材料范围逐步扩大 培养方法逐步完善 培养基不断改进 实验手段逐步完备
植物再生植株的途径
小结：
➢ (1)植物组织培养是指分离单个或多个细胞或植物体的一部 分，在人工配制的培养基上进行培养，使之长成一株完整 植物体的过程。
1939年：Gautherete培养胡萝卜根小外植体成功
1939年：White培养烟草种间杂种幼茎切段原形成层成功
1939年：Nobecourt培养胡萝卜根块茎薄壁组织成功
组织培养的奠基人
3、快速发展和应用阶段（从20世纪50年代末至今）
1958年，英国科学家Steward 等用胡萝卜根的愈伤组织 细胞进行悬浮培养，成功诱导出胚状体并分化为完整的小植 株。这是第一次实现人工体细胞胚，是植物组织培养的第一 个突破。
器官（organ)：根、茎、叶、花、果实、种子
组织（tissue)：花药、胚珠、胚、胚乳、形成层等
植物组织培养特点 Characteristics of Plant Tissue Culture Techniques
①培养条件可以人为控制
②生长周期短，繁殖率高
③管理方便，利于工厂化生产和自动化控制
培养基及其配制
4、植物生长调节物质(hormone)
生长素类(auxin) 细胞分裂素类 ( cytokinin ) 赤霉素（gibberellic acid）
培养基及其配制
（1）生长素类
*作用：主要被用于诱导愈伤组织形成；促
种类：最常用的是甘氨酸，其他的如精 氨酸、谷氨酸，谷酰胺、天冬氨酸、天 冬酰胺、丙氨酸等。
使用浓度：为10—200mg／L。
培养基及其配制
3、有机附加物 （天然复合物）
有机附加物 椰乳 香蕉 马铃薯
酵母提取液
浓度： 10%—20% 150-200ml／L 150—200g／L 0.01%-0.05%
一 商业性组织培养实验室和小工厂的 设计与主要设备
一般组织培养的操作工序： 1、培养器皿的清洗； 2、培养基的配制、分装和高压灭菌； 3、无菌操作——材料的表面灭菌和接种； 4、将培养物放到培养室培养； 5、试管苗的驯化、移栽和初期管理。
一、设计：
准备室 温室
缓冲室 实验室组成
驯化室
无菌操作室 培养室
种反复多次移植的培养，称为继代培养。
二、植物组织培养发展简史
1、萌芽阶段：(从20世纪初到30年代中）
➢ 1838-1839年，德国科学家Schleide 和Schwann发表了细胞 学说，奠定了组织培养的理论基础。 ➢1902年，德国植物学家Haberlandt 根据细胞学说，提出植物 细胞全能性（totipotency）理论。 ➢1904年，Hanning 最先成功地培养了萝卜和辣根菜的胚。 ➢1922年，Knudson 采用胚培养法获得大量兰花幼苗。克服其种 子发芽困难的问题 ➢1925年：Laibach亚麻种间杂交幼胚培养得到杂种
1960年英国学者Cocking用酶法分离原生质体成功。这是 植物组织培养的第二个突破。
1962年，Murashinge 和Skoog 在烟草培养中筛选出至今 仍被广泛使用的MS培养基。
1964-1966年，印度科学家Guha 和Maheswari 在曼陀罗花 药培养中首次由花粉诱导得到了单倍体植株。 1972年，Carlson 通过两个种的烟草原生质体融合培养， 获得了第一个体细胞杂交的杂种植株。……
玉米成熟胚的培养
Haberlandt：
观点：
高等植物的组织和器官可 以分割成单个细胞
贡献： 提出细胞全能性
首次进行离体细胞培养
小野芝麻和凤眼兰的栅栏细胞和虎眼万年青属表皮细胞 Knop+蔗糖
无分裂
细胞高度分化+培养基中无生长激素
2、奠基阶段（从20世纪30年代末到50年代中）
1934年，美国植物生理学家White 用番茄根尖建立起第一个活跃 生长的无性繁殖系，从而使非胚器官的培养首先获得成功。 1934年：Gautherete培养山毛杨、黑杨形成层组织产生了Callus 1937年：White发现3种B族维生素和IAA对植物生长有用
1、培养器皿：试管、三角瓶、培养皿、 圆形培养瓶、果酱瓶
2、分注器 3、离心管 4、刻度移液管 5、细菌过滤器 6、实验器皿：量筒、烧杯、容量瓶、
试剂瓶、塑料瓶、酒精灯等。
组织培养实验室的 设计与主要设备
（三）器械用具
1、镊子：尖头镊子、枪形镊子 2、剪子 3、解剖刀 4、接种针 5、钻孔器
二 培养基及其配制
脱
外植体
分 化
再 分 化
胚状体
再生植株
2）、器官发生途径： 由愈伤组织或外植体诱导形成不定根或
不定芽，再获得再生植株的方法。
外植体器官发生途径
百合鳞叶培养
愈伤组织器官发生途径
小 麦
愈伤组织
芽分化
胚状体
再生苗
器官发生途径
脱分化 再分化
外植体
高生长素(1,2-D)
愈伤组织 芽 根
低(生长素/细胞分裂素) 高(生长素/细胞分裂素)
根据培养过程中是否需光： 光培养、暗培养
根据培养方法的不同： 平板培养、微室培养、悬浮培养等
（三）、植物组织培养的类型
按培养过程分为:初代培养和继代培养
初代培养（Primary culture）： 指外植体的最初培养。
继代培养（Subculture）： 将初代培养得到的培养体移植于新鲜培养基中这
再生植株
愈伤组织
（三）、植物组织培养的类型
按培养材料分为（Gamborg等)：
愈伤组织培养 器 官培养 细 胞培养 原生质体培养
最为常见的组织培养 胚、胚乳、珠心、子房、根、茎、叶、 花和幼果的部分组织的培养
悬浮细胞培养 单细胞培养
（三）、植物组织培养的类型