高中生物《大肠杆菌培养和分离》教研公开课PPT课件

实验内容：
1 细菌培养：将大肠杆菌接种到LB液体培 养基扩大培养。 2 细菌分离：将大肠杆菌从液体培养基中 接种到LB固体培养基，形成单菌落。目 的为了分离纯化。
实验内容：
1 细菌培养：用LB液体培养基扩大培养大肠杆菌。 2 细菌分离：用LB固体培养基划线分离，形成菌落。
实验过程
Ⅰ 准备阶段：1 培养基配制 2 灭菌和消毒
琼脂？
凝固剂
红藻中提取的多糖,在98 ℃以上熔化，44 ℃以 下凝固，常温下凝结成有弹性的凝胶。
培养基配置步骤
计算称量：配固体培养基时还需加琼脂
溶化：加热溶化，定容
调节PH 灭菌
细菌 6.5-7.5 中性偏碱 真菌 5.0-6.0 中性偏酸
培养基的灭菌方法： 高压蒸汽灭菌法。 121℃，1kg/cm2
1.培养基灭菌后，需要冷却到60 ℃左右时， 才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的 温度？
答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶， 感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可 以进行倒平板了。
2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？
答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物 污染培养基。
实验过程：
准备阶段：1培养基的配制，2灭菌和消毒
平板划线分离法
原理：接种环沾菌液后再固 体培养基划线，划线过程中 菌液逐渐减少，细菌也减少， 最后，细菌间距离增大，培 养后形成单菌落。
稀释涂布平板法
1稀释
2 涂布
固体培养基：涂布分离形成的菌落
微生物的恒温培养 微生物的恒温培养
1平板进行恒温培养时，需要将平板倒置，原因是？
答：培养基的水分会以水蒸气的形式蒸发，倒 放培养皿会是水蒸气凝结成水滴留在盖上；如果 正放培养皿，则水分形成的水滴回落到培养基的 表面并且散开。如果培养皿已形成菌落，则菌落 中的菌会随水扩散，菌落相互影响，很难再分成 单菌落，达不到分离的目的。因此，恒温培养时， 培养皿必须倒置。
什么是微生物呢？
微生物：形体极小，结构简单，凡 是肉眼看不见的生物。 只有在光 学显微镜和电子显微镜下才能看清 楚的生物。
微生物的类群
非细胞 1病毒 结构
原核细胞:
2原核生物界(单C)： 细菌、蓝藻、放线菌
3真菌界(单或多C) ： 例如酵母菌 、霉菌 、真菌
细胞 结构 真核细胞: 4单细胞动植物
1、100℃煮沸5-6min 2、巴氏消毒法
70-75 ℃下煮30min或 80 ℃ 下煮15min 3、用75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒 4、氯气消毒水源 5、紫外线消毒 ……
消毒与灭菌
（1）消毒： 利用化学或物理方法，杀死大部份致病微生
物的过程。
（2）灭菌：
以化学剂或物理方法消灭所有微生物，包括 所有细菌的繁殖体、芽孢、霉菌及病毒，而达到 完全无菌的过程。
进行 4 避免已灭菌处理的材料用具和周围物品的接触
灭菌的方法
1、高压蒸汽灭菌（最常用）
培养基，培养皿，无菌水，各种玻璃制品
2、灼烧灭菌 接种环，试管口等 3、干热灭菌（160-170 ℃下加热1-2h。） 金属制品
4.过滤灭菌法(不能高温加热的物质)
玻 璃 砂 漏 斗
葡萄糖，尿 素，抗生素 等
消毒的方法
大肠杆菌模式图 大肠杆菌电镜图
菌落：
单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就 会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子 细胞群体，叫做菌落。
菌落是鉴定菌种的 重要依据。

大肠杆菌菌落
不 同 细 菌 菌 落 不 同
实验一 大肠杆菌的培养与 分离
大肠杆菌是异养兼性厌氧的肠道杆菌，在 肠道中一般对人体无害，但进入泌尿系统就会 对人体产生危害。在基因工程技术中广泛的应 用，它的质粒是最常见的运载体，它也是基因 工程中最常用的受体细胞。
LB培养基的配方
培养基成分
各成分的量
蛋白胨 酵母提取物
0.5g 0.25g
NaCl
0.5g
H2O
加至50ml
称量
酵母提取物
蛋白胨
按照物理性质划分培养基
培养基的种类 固体培养基（加琼脂）
液体培养基
固体培养基
能形成菌落， 用途：微生物的分 离、鉴定、保存等
液体培养基
主要用于扩大培养
固体LB培养基 每100ml 液体LB培养基中加入2g琼脂，摇匀，灭菌。
灭菌与消毒技术是微生物有关工作中最 普通也是最重要的技术。
实验1 大肠杆菌的培养和分离
超净台上紫外灯和过滤风
实验过程：
准备阶段：1培养基的配制，2灭菌和消毒 操作阶段：1倒平板： 将已灭菌的固体培养基倒入培养皿的过
程。

分装培养基：1倒平板：
将灭菌后的固体培养基倒入培养皿
培养基冷却到60度时倒入
Ⅱ 操作阶段：
培养基成分（culture media）
按照微生物对营养物质的不同需求， 配制出的供其生长繁殖的营养基质。 营养成分： 碳源、氮源、生长因子、水和无机盐。
培养基成分
细菌:
“喜荤”,蛋白胨,牛肉膏,酵 母提取液,Nacl等
真菌:
“喜素”,无机物或蔗糖溶液
实验准备工作 1配制培养基
15分钟.
高压蒸汽灭菌锅
灭菌Biblioteka 高压蒸汽灭菌法高压蒸汽灭菌法为湿热灭菌法，其优点有三： 1、湿热灭菌时菌体蛋白容易变性； 2、湿热穿透力强； 3、水蒸汽变成水时可放出大量热增强杀菌效果， 因此，它是效果最好的灭菌方法。
实验准备工作
2 灭菌和消毒 无菌操作目的：为了避免被杂菌污染。
1 对实验操作空间，操作者衣服和手进行清洁和消毒 2培养基，培养器皿，接种用具进行灭菌 3为避免周围微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰旁
例如草履虫、变形虫，单C藻
微生物的新陈代谢类型
同化作用：自养型，异养型 异化作用：需氧型，厌氧型，兼性厌氧型。
自养需氧型：光合细菌（蓝藻），硝化细菌等 异养需氧型：醋杆菌，真菌，固氮菌等 异养厌氧型：乳酸菌，假丝酵母菌等 异养兼性厌氧型：酵母菌，大肠杆菌。
一、细菌结构
细胞壁，细胞膜，细胞溶胶，拟核DNA，核 糖体，质粒，鞭毛等
操作阶段：1倒平板： 将已灭菌的固体培养基倒入培养皿的过 程。

2扩大培养：将大肠杆菌接种到LB液体培养基中，
37℃，摇床培养12小时。

3 分离纯化：将大肠杆菌从液体培养基接种到固体培
养基，并形成单菌落。

大肠杆菌扩大培养
条件： 37℃ 恒温培养箱 摇床振荡培养
分离纯化大肠杆菌的方法 两种：稀释涂布平板法和平板划线法