细胞传代实验
细胞传代
细胞传代
提前将超净台的紫外灯打开，灭菌30分钟后待用；
提前将DMEM、PBS和胰酶放入37℃水浴，待用；
从细胞培养箱中，取出细胞，显微镜下观察细胞状态；
轻轻吸出原来的培养液，加入5ml预热的PBS轻轻晃动，进行清洗细胞；弃PBS，重复上述步骤一次，尽可能吸干净培养瓶中的PBS;
加入适量的胰蛋白酶，以覆盖瓶底为好；
消化过程中，轻轻晃动瓶身，在显微镜下观察；
消化好之后，吸出胰蛋白酶，加入含有FBS的DMEM终止消化反应；
反复吹吸细胞，直至制备成单细胞悬液；
按照一传二，将细胞悬液平均分到三个细胞培养瓶中；
放入细胞培养箱，继续培养。
细胞传代、换液、给药和种板
[实验器材] 0.25%胰酶、胎牛血清、F-12培养基、PBS、培养瓶、5ml白枪头、15ml、50ml离心管[实验步骤]1、取出细胞，显微镜下观察细胞形态和密度，确定细胞生长状况，是否需要传代或换液；2、将培养基、PBS、胰酶培养基等预热及超净台消毒结束后，将试剂及细胞等喷酒精后移入超净台，将废液缸喷足酒精移入超净台，取酒精棉放入超净台；3、点燃酒精灯，将瓶口拧松，过火消毒；4、在确定细胞生长状况良好且没有污染的情况下，5、用适量PBS清洗细胞表面，并弃去PBS；6、加入适量胰酶消化细胞，此时可将细胞置于37°C细胞培养箱内消化；待消化完全后，用胰酶2倍体积的完全培养基中止消化，将细胞移入离心管1000rpm，5min离心；7、弃上清，加适量完全培养基吹打混匀细胞(沿壁轻轻吹打24次左右)，按合适比例进行细胞传代，在盖上标记好细胞名称、代数及传代日期并放入孵箱；8、收拾物品，整理实验台，做试验记录，打开超净台和细胞间紫外，30min后关闭细胞的换液[实验器材]培养基、胎牛血清、50ml离心管、5ml白枪头、PBS(白枪头、离心管提前高压)[实验步骤]1、将培养基、PBS、离心管放入超净工作台，紫外灯照射30min。
将胎牛血清从-20℃放入37℃水浴锅内，完全溶解后拿出。
2、用50ml离心管配置适当浓度的血清培养基。
3、将细胞拿出，吸去培养基，用3mlPBS洗2次，各瓶加入4ml血清培养基。
4、整理洁净台！细胞的给药[实验器材]培养基、胎牛血清、50ml离心管、5ml白枪头、PBS(白枪头、离心管提前高压)、皮质酮、咖啡因[实验步骤]1.将培养基、PBS、离心管放入超净工作台，紫外灯照射30min。
将胎牛血清从-20℃放入37℃水浴锅内，完全溶解后拿出。
2.用50ml离心管配置适当浓度的血清培养基。
3.在15ml离心管中配置皮质酮及咖啡因浓度梯度。
4.按2ml/孔加入6孔板中，做好标记。
细胞传代培养实验步骤
细胞传代培养是生物学研究中常用的实验技术，用于保持细胞系的稳定性和活力。
以下是细胞传代培养的一般步骤：
培养基准备：准备适当的培养基，包括生长因子、营养物质和抗生素（如果需要）。
确保培养基的配制符合细胞系的特殊需求。
细胞检查：使用显微镜检查细胞的形态、数量和健康状态。
确保细胞处于适当的生长状态，没有受到感染或其他异常。
细胞收获：从之前的培养瓶中将细胞收获下来。
这通常涉及用胰酶等酶类来解离细胞，使其从培养瓶表面脱离。
细胞计数：使用血球计数板或自动细胞计数仪等工具，计算细胞的数量。
这有助于确定传代时应该用多少细胞。
传代操作：将收获的细胞按照既定的比例重新分配到新的培养瓶中。
传代的目的是dilution 细胞，以确保它们能够继续健康地生长。
培养新的细胞群：将传代后的细胞放入培养箱中，提供适当的环境条件（温度、湿度、CO2浓度等），促使细胞继续生长。
观察细胞生长：在培养过程中，通过定期使用显微镜观察细胞的形态和生长状态。
确保它们没有发生异常变化。
培养基更替：根据需要，定期更换培养基，以提供新的营养物质和保持适当的环境条件。
细胞冻存（可选）：如果需要，可以将一部分细胞冻存起来，以备将来的实验使用。
冻存细胞是为了防止细胞系的丧失或污染。
以上步骤是一般细胞传代培养的基本流程，具体操作可能会根据不同的细胞系、实验目的和实验室条件而有所调整。
在进行实验前，请确保你了解所使用细胞系的特性和培养条件。
细胞传代实验报告
细胞传代实验报告一、引言细胞传代是指将细胞培养液中的细胞进行连续传递培养的实验方法。
通过细胞传代，可以研究细胞的生长特性、生长速率以及细胞衰老等现象。
本次实验旨在观察细胞在不同代数下的形态变化和生长情况，并分析不同代数下细胞传代的规律。
二、材料与方法1.材料：①HEK293细胞株② 培养基：DMEM（Dulbecco's Modified Eagle Medium）培养基、FBS（Fetal Bovine Serum）胎牛血清③杯底培养瓶、培养皿、离心管、吸管等2.方法：1）准备工作：①消毒实验台、各种培养器皿和材料。
②消毒培养箱，并预热至37℃。
2）细胞接种：①将细胞株取出并加入培养基中，进行离心，去除培养液。
②加入新鲜的细胞培养基，分散均匀后分装于培养皿中。
③放入预热的培养箱中培养。
3）细胞传代：① 将培养皿中的细胞培养液倒入离心管中，离心3000rpm，收集细胞沉淀。
②去除上清液，加入新鲜的培养基，分散均匀后分装于培养皿中。
③放入培养箱中培养。
三、结果与讨论1.形态变化观察：通过显微镜观察发现，细胞在不同代数下的形态发生了一定的变化。
初始细胞形态呈长椭圆形，细胞体积较大，呈单层排列。
经过传代培养，细胞在第5代开始形成更明显的丛状结构，并且细胞体积较小。
随着代数的增加，细胞簇的数量也逐渐增加。
这说明细胞在连续培养中会发生增殖，细胞数量逐渐增加。
2.细胞生长情况观察：每代细胞的生长情况如下表所示：代数细胞数（个）11×10522×10534×10548×105516×105通过观察实验数据①细胞呈指数增长；②细胞传代的代数越高，细胞数增加的速度越快。
3.细胞传代规律分析：通过细胞传代实验的结果分析，可以看出细胞在连续培养中会不断增殖，但增殖速率随着代数的增加而减缓。
这是由于细胞在连续培养中会持续分裂，细胞数量呈指数增长，但由于培养条件的限制，包括有限的营养物质和空间，导致细胞生长速度逐渐减慢。
细胞传代实验报告
细胞传代培养一.实验目的初步掌握哺乳动物细胞的原代培养与传代培养的基本操作过程，为生物技术在医学上的应用打下基础。
二、原理从生物体中取出某种组织或细胞，模拟体内生理条件，在人工培养条件下使其生存、生长、繁殖或传代，这一过程称为细胞培养。
细胞培养技术的最大优点是使我们得以直接观察活细胞，并在有控制的环境条件下进行实验，避免了体内实验时的许多复杂因素，还可以与体内实验互为补充，可同时提供大量生物性状相同的细胞作为研究对象，耗费少，比较经济，因此成为生物学研究的重要手段。
细胞培养可分为原代培养和传代(继代)培养。
直接从体内获取的组织细胞进行首次培养为原代培养；当原代培养的细胞增殖达到一定密度后，则需要做再培养，即将培养的细胞分散后，从一个容器以1：2或其他比率转移到另一个或几个容器中扩大培养，为传代培养，传代培养的累积次数就是细胞的代数。
细胞培养是一种程序复杂、要求条件多而严格的实验性工作。
所有离体细胞的生长都受温度、渗透压、ph值、无机盐影响，消毒、配液等均有严格的规X和要求，特别是无菌操作是细胞培养成败的关键。
三、材料和试剂1、细胞：293细胞株2、试剂：0.25％胰酶、1640培养基〔含10％小牛血清〕3、仪器和器材：倒置显微镜，培养箱、电动枪，培养板，吸液枪，5ml玻璃吸管、酒精灯等四、操作步骤1、将长满细胞的培养板中原来的培养液吸去。
2、加入1~2ml 0.25％胰酶溶液，使板底细胞都浸入溶液中。
3、马上吸走胰酶液，再次加入2ml左右的胰酶，同样马上吸去，再加入几滴胰酶放入培养箱中消化几分钟4、用吸管将贴壁的细胞反复吹打成悬液，再按照观察的生长情况确定的传代比例传代5.根据确定的比例来取需要的量〔剩余的细胞拿来做细胞计数〕，加入4ml左右的培养液6.前后左右的来回震荡使细胞分散均匀后，将培养板放入培养箱7.收拾整理超净台附：消化液配制方法：称取2.5克胰酶蛋白酶，加入100ml10xpbs+纯水溶解到1l，滤器过滤除菌，4℃保存，用前可在37℃下回温。
传代培养实验报告
传代培养实验报告传代培养实验报告摘要：本实验旨在通过传代培养的方式观察细胞在不同世代中的生长和变化情况。
通过连续传代培养，我们可以了解细胞在不同世代中的遗传稳定性和生长能力。
本实验选取了人类纤维母细胞作为研究对象，通过观察细胞形态、增殖速率和染色体结构的变化，得出了一些有意义的结论。
引言：传代培养是细胞生物学中常用的实验方法之一，通过将细胞从一代转移到下一代，可以观察到细胞的生长和变化。
传代培养实验对于了解细胞的遗传稳定性、生长能力以及细胞老化等方面具有重要意义。
本实验选取了人类纤维母细胞进行连续传代培养，通过观察细胞形态、增殖速率和染色体结构的变化，探讨细胞在传代培养过程中的变化。
材料与方法：1. 实验材料：- 人类纤维母细胞- 培养基- 细胞培养器具2. 实验步骤：1) 将人类纤维母细胞接种于含有培养基的培养皿中。
2) 培养细胞至80%的收缩度。
3) 用胰酶消化细胞，将细胞转移到新的培养皿中。
4) 每隔一定时间进行一次传代，重复步骤2和步骤3。
5) 观察细胞的形态变化，记录细胞增殖速率。
6) 取样染色体，观察染色体结构的变化。
结果与讨论：通过连续传代培养，我们观察到了人类纤维母细胞的生长和变化。
在初始培养的早期，细胞呈现出较小的椭圆形状，细胞质量较小。
随着传代的进行，细胞逐渐增大，形状变得更加扁平。
这可能是由于细胞在培养基中的营养供应充足，导致细胞生长迅速。
另外，我们观察到细胞增殖速率逐渐减慢。
在初始培养的早期，细胞的增殖速率较高，每天细胞数量呈指数增长。
随着传代的进行，细胞增殖速率逐渐减慢，最终趋于平稳。
这可能是由于细胞的寿命有限，随着传代次数的增加，细胞进入老化期，增殖速率减慢。
此外，我们还观察到染色体结构的变化。
在初始培养的早期，细胞染色体结构完整，染色体呈现出正常的形态。
随着传代的进行，我们观察到染色体的断裂和异常，染色体结构变得不规则。
这可能是由于传代过程中染色体的损伤和突变导致的。
单层培养细胞的一般传代步骤
单层培养细胞的一般传代步骤引言：单层培养细胞是生物学实验中常用的一种方法，用于研究细胞的生理功能、病理机制以及药物筛选等。
传代是维持细胞活性的重要步骤之一。
本文将介绍单层培养细胞的一般传代步骤，帮助读者了解如何正确进行细胞的传代工作。
一、准备工作在进行细胞传代之前，需要做好以下准备工作：1. 清洗培养皿：使用含有酒精的消毒液对培养皿进行清洗，确保无菌。
2. 准备培养基：根据细胞类型的不同，选择适当的培养基，并添加适量的血清和抗生素。
3. 预热培养基：将培养基倒入培养皿中，放入恒温培养箱预热至37摄氏度。
二、收获细胞1. 培养皿检查：检查培养皿中细胞的生长情况，确保细胞达到传代的要求。
2. 倒出培养液：将培养皿中的培养液倒掉，注意避免将细胞吸出。
3. 洗涤细胞：加入足够的无菌生理盐水或PBS缓冲液，轻轻摇晃培养皿，使细胞悬浮于液体中。
4. 吸取细胞：使用吸管或移液器吸取细胞悬浮液，并转移到新的培养皿中。
三、传代细胞1. 稀释细胞：根据细胞密度和传代比例，将细胞悬浮液稀释至适当浓度。
2. 播种细胞：将稀释后的细胞悬浮液均匀地滴在预热的培养基上，确保细胞均匀分布。
3. 培养细胞：将培养皿放入恒温培养箱中，维持适宜的温度、湿度和二氧化碳浓度，细胞继续生长。
4. 观察细胞：每天观察细胞的生长情况，注意观察细胞数量、形态和健康状况。
5. 细胞分裂：当细胞达到合适的密度时，进行下一次传代，重复以上步骤。
四、细胞培养的注意事项1. 操作无菌：在进行细胞培养的每一步骤中，都要保持无菌操作，避免细胞被细菌或真菌污染。
2. 避免细胞过度生长：细胞过度生长会导致细胞凋亡或突变，因此要根据细胞类型和实验需求，合理控制细胞的传代次数。
3. 注意细胞状态：观察细胞形态和生长情况，及时发现细胞异常或污染情况，以便进行相应的处理。
4. 避免细胞冻存：细胞传代过程中，尽量避免频繁的细胞冻存，以免对细胞产生不良影响。
5. 定期更换培养基：培养基中的营养物质和生长因子会逐渐耗尽，因此要定期更换新鲜的培养基，以提供足够的营养物质。
细胞培养—传代—冻存—western blot等实验相关步骤
围绕siRNAs的相关实验详细步骤及总结实验一: 细胞传代培养材料: 15ml离心管、枪（头1ml、200ul、10ul）、无菌吸管、培养瓶、含10%FBS 的RPMI—1640(OVCAR-3)、M5A(SKOV-3)、PBS、trypsin等1、步骤: （以下均在超净台内, 酒精灯旁操作）（SKOV-3）2、打开超净台, 将离心管、枪（头）、吸管等工具置于紫外线下照射30min；含10%FBS的RPMI—1640、trypsin、PBS放在37°C水浴恒温箱中预热。
取一个生长良好的细胞培养瓶（密度适中, 细胞成梭形连接, 贴壁良好）, 弃旧培养基, PBS 2ml 清洗2次（切勿用力吹打）。
用移液枪取trypsin 1ml沿细胞生长壁对侧壁注入, 然后放平培养瓶, 使贴壁细胞与trypsin充分接触, 置于CO2培养箱2min左右（时间不能太长, 以免损伤细胞）。
4.往培养瓶中加入1640 1~2ml, 随后用移液枪将悬液移到15ml离心管中, 离心1000 r/min, 5min。
5.弃上清液, 加入少量10%FBS的1640培养基使成细胞悬液。
6、分装, 按1:2~3传代, 每瓶4~5ml。
倒置显微镜下观察（细胞突起消失变圆形, 细胞间隙等距）, 标记。
7、放入CO2培养箱中培养, 第二天观察生长状况。
总结: 1.在用离心机时, 看清楚是RCF还是RPM；调节Temp.以及Time。
2.在用移液枪吸出trypsin充分消化后的细胞后, 须知用少量培养液清洗一下培养瓶, 并将清洗液移入离心管中。
3、每取用一个容器, 拧开或者拧上盖子时, 注意在酒精灯上旋转一圈。
另外, 记住用酒精棉球经常擦拭台面。
4、在用移液枪或者吸管混匀细胞悬液过程中, 动作轻柔, 避免产生气泡等。
实验二: 细胞冻存材料: 15ml离心管、枪（头1ml、200ul、10ul）、无菌吸管、冻存管、RPMI —1640(OVCAR-3)、M5A(SKOV-3)、FBS、PBS、trypsin、DMSO等步骤: （以下均在超净台内, 酒精灯旁操作）（OVCAR-3）1.打开超净台, 将离心管、枪（头）、吸管等工具置于紫外线下照射30min；FBS、RPMI—1640、trypsin、PBS放在37°C水浴恒温箱中预热。
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细胞传代实验操作
一．实验目的：
将293FT细胞传代，提供足够的细胞供实验使用
二．实验原理：
细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上饱和，为使细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大，就必须进行传代
三．实验材料：
293FT细胞，DMEM+10%小牛血清，D-hanks液，胰酶-EDTA液
四．实验步骤：
293FT细胞传代：细胞培养采用DMEM+10%小牛血清，当细胞密度达80-90%的时候可以进行细胞传代，具体步骤如下：
●弃培养瓶中培养基，直接加入1滴管胰酶-EDTA，室温孵育1min左右，（时间不要太长，否则细胞会
消化过度），加入4滴管完全DMEM中和，轻轻吹打细胞瓶，将细胞从瓶底吹下来；
●将细胞悬液转入10ml的试管中，800rpm，离心3min；
●弃上清，加入6ml左右D-Hank`s至试管中，轻轻重悬细胞；
●800rpm，离心3min；
●弃上清，加入6ml左右D-Hank`s至试管中，轻轻重悬细胞；
●800rpm，离心3min；
●弃上清，加入4ml完全DMEM重悬细胞后记数；
五．注意:
1.无菌操作
2.胰酶消化时间控制好，不宜过长。