Pan T磁珠分选标准操作规程
磁选机安全技术操作规程
磁选机安全技术操作规程
1、检查电源是否接好,玻璃管往复移动是否畅通。
2、调整一玻璃管内的水位在磁场处保持5厘米左右,接通电源,达到预定的强度(大约在150-220毫特之间调整)。
3、称取粒度小于O.5mm,重量为20g试样,在烧杯中润湿后,通过给料斗慢慢倒入玻璃管中。
4、玻璃管中的水流速不易过大,磁选颗粒附于两极处的管壁内,其它排出管外。
5、在磁性物冲洗完毕后,关小清水阀门,断电,并排出磁性物质于烧杯中。
6、把装有磁性物质的烧杯放到干燥箱中干燥,称取磁性物质重量,计算含量。
磁珠分选步骤
磁性标记和分选步骤：1.制备无菌Buffers,冰上放置。
细胞染色缓冲液（cell-staining buffer）：含3%热灭活胎牛血清和0.1%叠氮化钠的PBS。
1×BD IMag™ buffer：按1:10稀释(10X)BD IMag™ Buffer ，用无菌蒸馏水或加有0.5% BSA，2 mM EDTA和0.1% 叠氮化钠的PBS稀释。
2.无菌操作，从外周淋巴组织内制备单细胞悬浮液。
然后用70μm的尼龙细胞过滤器滤除细胞簇和组织碎片。
用cell-staining buffer制备细胞悬浮液。
3.细胞计数：如果细胞浓度在10 x 106和20 x 106/ml之间进行第3步，如果浓度低于10 x106如，离心细胞，并用cell-staining buffer重悬细胞至终浓度20 x 106/ml。
4.可选：在细胞悬液内添加BD Mouse Fc Block纯化的抗小鼠CD16/CD32单克隆抗体2.4G2（BD Mouse Fc Block⇔ purified anti-mouse CD16/CD32 mAb 2.4G2），每1 x 106个细胞添加0.25μg，然后冰浴15min.5.添加生物素标记的小鼠树突状细胞富集混合物（Bioinylated Mouse Dendritic Cell EnrichmentCocktail），每1 x 106个细胞添加5μl ,冰浴15min.6.用10x过量体积的1X BD IMag™ buffer洗涤标记细胞，300 ⋅ g离心7分钟并小心吸去所有上清液。
7.彻底涡旋BD IMag™ Streptavidin Particles Plus – DM后，每1 x 106个细胞添加5μl。
8.混匀，然后6˚C - 12˚C冷藏30min.9.用1X BD IMag™buffer将标签量提高到20到80 x 106/ml。
10.把标记细胞转移到12 x 75 mm的圆底试管，添加的最大体积不超过1.0ml。
磁珠法核酸片段筛选
磁珠法核酸片段筛选
磁珠法核酸片段筛选是一种常用的分离和纯化核酸片段的方法。
该方法利用特定的磁性珠子，通过其与特定的核酸片段的亲和性，将目标核酸片段选择性地吸附到磁珠上，然后利用磁场将磁珠与其他非目标核酸片段分离，最终实现目标核酸片段的纯化和富集。
具体的步骤通常包括以下几个方面：
1. 选择合适的磁珠：根据目标核酸片段的特异性，选择具有相应亲和基团的磁珠，例如，可以选择具有亲和性标记（如生物素或抗体）的磁性珠子。
2. 将磁珠与亲和配对物结合：将具有特定亲和性的配对物（如生物素亲和剂或抗体）与磁珠进行结合，以便与目标核酸片段特异性结合。
3. 样品处理：将待处理的样品（如总DNA或RNA提取物）
与磁珠/亲和配对物复合物进行混合，目标核酸片段与磁珠上
的配对物发生相互作用并结合到磁珠上。
4. 分离与洗涤：通过施加磁场，将含有目标核酸片段的磁珠/
核酸复合物聚集起来，然后将非目标核酸片段溶液去除，进行洗涤步骤以去除杂质。
5. 脱附与洗脱：用适当的缓冲液使目标核酸片段与磁珠脱离，并以高纯度的核酸片段形式洗脱。
磁珠法核酸片段筛选具有选择性高、操作简便、高通量等优点，广泛应用于基因组学研究、基因诊断、药物开发等领域。
磁选操作规程
磁选操作规程磁选是一种常用的固体物料分离和提取技术，在矿石处理、废物回收、资源回收等领域都有广泛的应用。
为了保证磁选操作的安全和高效进行，需要制定相应的磁选操作规程。
以下是一份磁选操作规程的示例，共计1200字。
磁选操作规程一、目的和适用范围本操作规程的目的是确保磁选操作的安全、高效进行，保证工作人员的人身安全，防止设备损坏，并提供操作人员在磁选操作中的基本工作流程和注意事项。
本规程适用于所有进行磁选操作的人员。
二、操作人员要求1. 所有参与磁选操作的人员必须接受过相关的磁选操作培训，并持有相应的操作证书。
2. 操作人员必须熟悉磁选设备的结构、性能和工作原理，并了解磁选过程中可能出现的安全风险和事故处理方法。
3. 操作人员必须佩戴符合规定的个人防护装备，包括安全帽、防护眼镜、防护手套等，确保身体和头部的安全。
三、操作前的准备工作1. 确保磁选设备和工作场所的清洁，清除杂物和灰尘，保证设备的正常工作。
2. 检查磁选设备的运行状态，确保设备正常启动，各部位无异常。
3. 准备所需的磁选介质和被处理物料，确保介质和物料的质量和数量符合操作要求。
四、磁选操作流程1. 启动磁选设备，确认设备正常运行后，按照规定的工艺参数进行设备设置。
2. 将待处理的物料均匀投放到磁选设备的进料口处，并保持均匀投料的速度和量，避免过载。
3. 调节磁选设备的工作参数，如电流、磁场强度等，确保设备在最佳工作状态下进行磁选分离。
4. 确保磁选设备的排渣机构、气力输送装置等各部位正常工作，清理可能产生的堵塞。
5. 定期检查设备运行情况，如发现异常，及时停机进行检修或报告相关人员。
6. 根据工艺要求，及时收集和处理分离出的物料，包括磁性物质和非磁性物质。
五、安全注意事项1. 操作人员不得在设备运行过程中随意触摸磁选装置，以免发生触电事故。
2. 禁止将金属物体或其他易磁化物质靠近磁选装置，以免影响磁选过程和设备的寿命。
3. 禁止将手部、头部等部位靠近磁选装置，防止发生夹伤和危及人员的事故。
磁珠分选
1、取材：将两只C57\BL6成鼠处死，剖开腹腔，取脾，用HBSS（含10％FCS）研磨（注射器），300目滤布过滤用10mlHBSS（10％FCS）清洗细胞一次，离心200g×10min4℃加入4mlACK，室温作用10min，漩涡震荡，加入8mlPBS（细胞培养用）终止，离心，200g×10min，4℃2ml1×MagCellect Plus Buffer重悬，细胞计数，使用1×MagCellect Plus Buffer调整细胞浓度至100×10（6）\ml2、细胞分选步骤：配制2.5mlMagCellect Plus Buffer（250μl，10×MagCellect Plus Buffer＋2.25ml无菌去离子水）以重悬50×10（6）个细胞（4℃保存至多24h）制备小鼠淋巴细胞悬液，细胞分选前必须用冷的1×MagCellect Plus Buffer调整浓度至100×10（6）／ml）将50×10（6）个细胞（0.5ml）转移至5mlEP管中，加入50μl ×MagCellect Mouse NK Cell Biotinylated Antibody Cocktail轻轻混匀，避免产生气泡，4℃冰箱孵育15min向细胞悬液中加入100μl MvtaagCellect Streptavidin Ferrofluid轻轻混匀，4℃冰箱孵育15min孵育结束后加入1.35ml1×MagCellect Plus Buffer使体积到2ml，轻轻充分混匀，确保所有反应被重悬将反应管放入磁铁中，室温孵育6min，磁珠标记的细胞将会被吸附到磁铁上（非须细胞），细胞悬液剩余的目标细胞为NK细胞当反应管置于磁铁中时，轻轻取出细胞悬液，转移至另一个EP 管中，将磁铁中含有磁珠标记的EP管取出，弃掉重复6-7步骤一次，将细胞悬液转移至一新5mlEP管中，细胞计数，此为小鼠NK细胞。
磁珠分选柱式
磁珠分选柱式
磁珠分选柱式是一种常用的实验仪器，它在生物医学领域中扮演着重要的角色。
该装置通过利用磁珠的磁性特性，将样品中的目标物分离出来，实现对样品的快速分选。
磁珠分选柱式由磁珠分选柱和磁性材料组成。
磁珠分选柱内部填充有磁性材料，通常是强磁性材料。
当样品通过磁珠分选柱时，目标物会与磁珠结合，而非目标物则会被排除。
通过控制磁珠分选柱的磁性，可以实现对不同目标物的分离。
磁珠分选柱式的使用非常简便。
首先，将待分选的样品加入到磁珠分选柱中，然后利用外部磁场的作用，使磁珠与目标物结合。
接下来，将磁珠分选柱放置在磁性材料上，通过磁性材料的吸引力，将磁珠与目标物一起分离出来。
最后，将磁珠从磁珠分选柱上取下，即可得到纯净的目标物。
磁珠分选柱式在生物医学研究中具有广泛的应用。
例如，在肿瘤检测中，磁珠分选柱可以用于分离和富集肿瘤细胞，从而实现早期诊断和治疗。
此外，在基因测序中，磁珠分选柱可以用于从样品中分离和富集目标DNA，以便进一步分析。
磁珠分选柱式还可以应用于蛋白质纯化、细胞分离等领域。
磁珠分选柱式是一种重要的生物医学实验仪器，它通过利用磁性特性，实现对样品中目标物的快速分选。
该装置简便易用，广泛应用
于肿瘤检测、基因测序、蛋白质纯化等领域。
磁珠分选柱式的使用为科研人员提供了方便快捷的实验手段，对于推动生物医学研究具有重要的意义。
磁珠分选淋巴细胞sop
SOP for Magnetic Bead Separations (using “Positive Selection” of White Blood Cell Subsets from PBMCsBy Daniel Estes, 2006Modified: DJE, 2007GeneralUsing magnetic beads that attach to CD8 or CD4 on T-cells, or CD19 on B cells, is an effective way to positively select for and isolate white blood cell subsets with >97% purity from PBMCs. The method employs a magnet to “capture” cells with the magnetic beads, and when the magnet is removed, the cells are released. Note that these instructions are similar to those provided by Miltenyi biotech except for three changes: 1) separations occur at room temperature to avoid any sort of temperature “shock” to cells; 2) we use half the recommended amount of bead solution; and 3) for all buffers, we use the simplified wash buffer below instead of a specific magnetic bead buffer. The buffer below provides a total separation time of 15 minutes (of actually dripping through the columns), is reliable (we never have any clogging of the columns).BE CAREFUL: PBMCs as well as isolated T cells may contain bloodborne pathogens, so always wear appropriate laboratory attire, dispose of cells in appropriate manner, and follow general blood protocols (please see Mayer lab Bloodwork SOP).Materials- Wash buffer (98% dPBS (w/o Ca2+ and Mg2+), 2% FBS)- MicroBeads coated with antibodies to either human CD4 or CD8 (Miltenyi Biotec)- MACS MultiStand- MS Columns- MiniMACS MagnetProcedureGeneral notes: work quickly and wear appropriate protection attire (see bloodwork and cell culture SOPs). NOTE: if sterility is required, first wash all components of setup in 70% ethanol and do separations in laminar flow hood.1. Starting with PBMCs that have been thoroughly washed (obtained in our case after Histopaque separation)2. Determine cell count – please note that the amounts of bead solution indicated in step #4 are only good for a maximum of 50 million cells3. Spin-down cells (I usually use 300g’s for 5 min)4. Pour out supernatant and resuspend cells in the ~250 µL that are left with the pelleted cells5. Add 50 µL (to no more than 50 million cells) of bead solution (e.g. human CD8+ bead solution)6. Add 100 µL fresh wash buffer7. Incubate at 15 min at room temperature8. Wash cells – add buffer up to ~10 mL and pellet cells (300g for 5 minutes)9. Resuspend cells and add 500 µL wash buffer (we want total volume of suspension to be ~500 µL)10. Set up MS column on magnet – prime column by adding 500 µL wash buffer and let drip through completely11. Take cell suspension and add into column. Be sure to collect the cells that pass through the column (this is the “negative” suspension which contains cells NOT labeled with the magnetic beads. Please note: since we are not using special “depletion” columns, we will not select for 100% of a particular cell type, so some cells still labeled with magnetic beads may drip through the column. This fact may lower the purity of “second” separations, where a cell type is isolated from the negative fraction)12. Please note: whenever passing solutions through the column, be sure to let the solution COMPLETELY drip through. If you add wash buffer to the column when there is already a suspension of cells that has not passed through, some cells will end up not passing through the column.13. After letting the initial cell suspension pass completely through the column, add 2 mL wash buffer to the column and let drip through. Try to add the buffer such that any of the original cell suspension that might be on the sides of the column is washed down to the opening of the column.14. After letting the first wash drip through the column, again add 2 mL wash buffer the column and let drip through completely15. Now, we are going to collect the cells that are in the column (should be cells all labeled with magnetic beads). Take the column off of the magnet and place over a test tube. Add 3.2 mL wash buffer to the top of the column and IMMEDIATELY take plunger (in the same package as the column) and force the buffer through the column. The collected cells should all be the isolated subtype and will all have magnetic beads stuck to the cell surface (through antibodies on the beads).16. With the negative fraction, further magnetic bead selection may occur for a second cell type(e.g. after separating CD19+ B cells, you may be able to isolate dendritic cells)。
免疫磁珠分选步骤
免疫磁珠分选步骤
准备工作
1：用pH=7.2的P-8读BS配置0.5%的BSA和2mMEDTA,用以稀释分选缓冲液（1:20）
2：准备碎冰，让所有操作均在4-8℃完成
样本制备
1：制备单细胞悬液（用30um的尼龙网过滤，避免堵塞柱子）（过滤前先用缓冲液湿化过滤器）
2：加入缓冲液清洗细胞，并离心(300g,10min)( 4-8℃)
3:加入缓冲液重选细胞单细胞悬液，
4：再次用30um的尼龙网过滤，避免堵塞柱子）（过滤前先用缓冲液湿化过滤器）
5：细胞计数
6：离心(300g,10min)( 4-8℃)后去掉上清
9：加入80ul/107个细胞的缓冲液
10：加入20ul/107个细胞的CD117
11：4-8℃混匀放置15分钟
12：加入1ml/107个细胞的缓冲液清洗细胞并离心(300g,10min，4-8℃)
13：重选细胞加入500ul/108个细胞的缓冲液
14：准备好分离柱，并用缓冲液清洗MS用500ul.
15:把细胞悬液倒入柱子中
16：用500ul的缓冲液冲洗柱子，（每次液体无残留时再加入新的液体）共三次
17：将柱子移开磁场到一合适的容器中，用1mL缓冲液稍用力冲洗，。
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1. 目的
为规范磁珠分选T淋巴细胞，获取高纯度和高质量的T淋巴细胞。
2. 范围
适用于T细胞分选生产的操作过程。
3. 职责
3.1 生产部负责操作和清场。
3.2 质量管理部QA负责监督。
4. 仪器、试剂和耗材
4.1 仪器：生物安全柜；移液枪；离心机；细胞计数仪；QuadroMACS Starting kit(LS) 4.2 试剂：Pan T Cell Isolation Kit（Miltenyi）；PBS；RPMI1640；台盼蓝；AB血清；
4.3 耗材：15/50mL离心管；25mL移液管；10mL移液管；
5. 标准操作程序
5.1 打开生物安全柜，紫外灯照射灭菌30min，通风10min后待用。
5.2 缓冲液配制：PBS加0.5%人AB血清和2mM EDTA，用前去气泡；缓冲液放4度冰箱预冷。
全程保持低温。
5.3安装：将支撑架和分离器用酒精消毒后，放入生物安全柜。
将分离器平行贴到支撑架的垂直面上，移动分离器调整高度。
取出LS柱，安装到分离器的磁力槽中。
5.4 用细胞计数仪计数，计算细胞数目。
5.5 离心1000rpm，8min收集细胞，完全去掉上清。
5.6 按照每107细胞加40ul buffer的量加缓冲液重悬细胞。
5.7 每107细胞加10ul Pan T Cell Biotin-Antibody Cocktail。
5.8 混匀，4℃冰箱孵育5min。
5.9 每107细胞加30ul 缓冲液。
5.10每107细胞加20ul Pan T Cell Microbead。
5.11 混匀，4℃冰箱孵育10min。
5.12 加400 ul 缓冲液，混匀（至少500ul上柱）。
5.13 用3ml缓冲液润洗柱子。
5.14 把细胞悬液加入到柱子中。
收集流出的T细胞。
5.15 用3ml缓冲液洗涤柱子，收集流出的T细胞。
与5.14的合并。
5.16 从分离器上取下柱子，安放到合适的收集管中。
5.17 加入5ml 缓冲液到柱子中，立即将活塞插入柱子，用力将液体压出，即为非T细胞。
5.18 取样，台盼蓝染色后在细胞计数仪上计数。
5.19 关闭生物安全柜，进行清场操作。
5.20 填写相关记录文件。
6. 相关文件
无
7. 相关记录
7.1《T细胞分选生产记录》
8. 附件清单
无。