【CN109897797A】硫酸盐还原菌株的培养方法硫酸盐还原菌株及应用【专利】
硫酸盐还原菌的分离纯化及生长特性研究
硫酸盐还原菌的分离纯化及生长特性研究陈一鸣;吴雁;马远荣;许国超;曲韵滔;史素青【摘要】硫酸盐还原菌(SRB)是一类形态各异、营养类型多样,在缺氧或厌氧的条件下,能利用硫酸盐或者其他氧化态硫化物作为电子受体来氧化有机物的细菌或古菌,可以是革兰氏阴性或阳性.SRB所引起的微生物腐蚀受到了人们的广泛关注.本次实验是以西南石油大学附近的加油站淤泥为主要原料,采用叠皿夹层法对富集后的淤泥进行分离纯化,然后在不同的生长条件下(pH值,矿化度)对其生长特性分别进行研究.经实验研究得到如下结论:在pH值小于5.0和大于9.5时,硫酸盐还原菌是不能存活的,而在pH值为7.5时为硫酸盐还原菌最适生长pH值.SRB可以生长繁殖的矿化度范围是7.5～30 g//L,16 g/L时为其生长繁殖最适矿化度.【期刊名称】《河南化工》【年(卷),期】2011(028)002【总页数】4页(P29-32)【关键词】硫酸盐还原菌;分离纯化;pH值;温度;矿化度【作者】陈一鸣;吴雁;马远荣;许国超;曲韵滔;史素青【作者单位】西南石油大学,四川,成都,610500;西南石油大学,四川,成都,610500;西南石油大学,四川,成都,610500;西南石油大学,四川,成都,610500;西南石油大学,四川,成都,610500;西南石油大学,四川,成都,610500【正文语种】中文【中图分类】TQ420.6目前，我国多数油田已处于二次采油后期，注水量大，每年产生约7亿m3的污水，绝大部分需要处理后回注。
油田采出水系统中，广泛存在着各种细菌，对油田地面系统中危害最大的是硫酸盐还原菌(SRB)［1］。
SRB能将硫酸根还原为硫离子，硫离子可与管壁的铁形成硫化物，造成设备腐蚀。
SRB的腐蚀产物［2］主要为硫化亚铁和氢氧化亚铁，菌体本身和腐蚀产物被油污包裹造成管线和地层堵塞，造成注水量下降，直接影响原油产量，造成巨大经济损失。
SRB在设备、管线中大量繁殖而产生的腐蚀产物，悬浮在油水界面，在油田联合站脱水系统中形成黑色过渡层，主要成分为胶态硫化物［3］(包括硫化亚铁颗粒)，随着黑色过渡层厚度积累，导致电脱水器运行不稳、跳闸或直接造成电脱水器极板击穿的事故［4］，对油田安全生产构成威胁。
硫酸盐还原菌论文：硫酸盐还原菌硫酸盐还原重金属离子TTC-脱氢酶活性
硫酸盐还原菌论文：硫酸盐还原菌硫酸盐还原重金属离子TTC-脱氢酶活性【中文摘要】利用硫酸盐【英文摘要】Removal of heavy metals by sulfate-reducing bacteria（SRB）is a new and potential technology. In this paper, mixed SRB were domesticated from anaerobic sludge in an Internal Circulation anaerobic reactor of a paper mill by sulfate, some factors which affect SRB reducing capacity were observed. Based on that, Cu2+, Zn2+, Cd2+ and Pb2+ were the target object, their toxic effects on SRB were examined, and so did their removal effect by SRB, the mechanism for removal of heavy metals by SRB was finally preliminary investigated. This paper concludes as follows:（1）The optimum conditions of SO42- reduction by SRB were as follows: initial pH value 7.0, the ratio of COD/ SO42- 3, amount of Fe2+ 200 mg/L. When the initial pH value were at the range of 4-9, the SRB system has good buffer capacity, the pH maintained at 7.05-7.5, while the initial pH value was 3, the buffer capacity of this system was inferior.（2）SO42- reduction by SRB was observably inhibited by NO3-, and the inhibitory effect was strengthend with the increasing of NO3- concentration. In the reaction process, thepH value of systems containing NO3- was all higher than that of absence of NO3-.（3）Generally speaking, SO42- reduction by SRB was inhibited by Cu2+, Zn2+, Cd2+ and Pb2+, and the inhibitory effect was strengthend with the increasing of heavy metals concentration, the order was Cd2+>Cu2+>Zn2+>Pb2+. Pb2+ can promot SO42- reduction by SRB when its initial concentration was less than 25 mg/L.（4）In the process of SO42- reduction, under different concentration of heavy metals, the pH values increased slightly at the beginning, and then went steady. In the systems containing Cu2+ and Pb2+, whose concentration were low, the pH values were higher than that of control group at equilibrium point, when the concentration was higher, the pH values decreased. In the systems containing Zn2+ and Cd2+, the pH values were all lower than that of control group, and when the concentration was higher, the pH value was lower.（5）The inhibitory order of Cu2+, Zn2+, Cd2+ and Pb2+ to TTC-DHA was Cd2+>Cu2+>Zn2+>Pb2+. The concentration of Cu2+、Zn2+ and Cd2+ was higher, the TTC-DHA was lower, there was a resistance peak of TTC-DHA when the Pb2+ was 25 mg/L.（6）Cu2+, Zn2+, Cd2+ and Pb2+ could be effectively removed by SRB, and the effet of removal of Cu2+, Zn2+ and Pb2+ was higher than that of Cd2+. Different initial concentration of one heavy metal haddifferent removal rates. （7） Cu2+, Zn2+ and Pb2+ were removedin the form of sulfides, SO42- reduction forming H2S by SRBplayed a leading role in these processes; while Cd2+ was removedin the form of Cd（OH）2, which was in that Cd2+ reacted withOH- generating precipitation of hydroxide when the pH value increased.【关键词】硫酸盐还原菌硫酸盐还原重金属离子 TTC-脱氢酶活性【采买全文】1.3.9.9.38.8.4.8 1.3.8.1.13.7.2.1 同时提供论文写作一对一辅导和论文发表服务.保过包发.【说明】本文仅为中国学术文献总库合作提供，无涉版权。
硫酸盐还原菌及其在废水处理应用中的研究进展
硫酸盐还原菌及其在废水处理应用中的研究进展作者：徐曼付志敏来源：《山东工业技术》2014年第14期摘要：硫酸盐还原菌（SRB）是一类分布广泛，利用硫酸盐或者其他氧化态硫化物作为电子受体来异化有机物质的兼性厌氧菌。
本文在介绍了SRB的生理特性和代谢机理，阐明了SRB降解水中污染物原理，探讨了SRB在处理含重金属离子矿山酸性废水和有机废水中的应用现状及研究进展。
关键词：硫酸盐还原菌（SRB）；生理特性；微生物燃料电池（MFCs）；有机废水社会不断进步和人们生活水平的提高，使得各种废（污）水的产生量随之增多，由此带来的环境污染问题引起了人们的极大关注。
废水处理法中的生物法由于成本低、效果好而倍受青睐，以硫酸盐还原菌（Sulfate-Reducing-Bacteria，SRB）为代表的生物处理法作为一项新的实用技术应用前景广阔[1-4]。
本文针对近年来SRB的发展状况进行了综述，介绍了SRB的生理特性，分类和代谢机理，以及处理废水的机理、特点与研究现状，还有近来新兴的关于微生物燃料电池的应用，指出SRB处理废水作为一项新的实用技术极具潜力。
1 SRB的基本特性1.1 SRB的生理特性SRB是指一类在无氧或极少氧条件下，具有可把硫酸盐、亚硫酸盐、硫代硫酸盐等硫氧化物以及元素硫还原成硫化氢这一生理特性的细菌的统称。
近年来，国内外学者对SRB研究做了大量的工作，包括SRB的生态特性、毒理学研究及其污染与防治方法、分离及筛选、处理工艺及反应器等[1]。
SRB分布广泛，它们存在于含硫沉积物、厌氧污泥、污水、金属管道或容器，动物肠道或口腔等，还存在于土壤、水稻田、海水、盐水、自来水、温泉水、地热地区。
SRB属于异养微生物，生长代谢转化硫酸盐需要一定的碳源，碳源可以增加其生物量和作为电子供体进行硫酸盐还原，对于SRB的生长代谢和还原作用有直接影响。
研究表明SRB可以利用的有机基质有很多种类，最普遍的是利用C3、C4脂肪酸（乳酸盐、丙酮酸、苹果酸），国外也有研究者曾利用氨基酸、乙酸、丙酸、丁酸和一些长链脂肪酸以及初沉池污泥、剩余活性污泥、糖蜜[2]、经过气提的奶酪乳清和橡胶废水等作为碳源进行研究，还有学者发现SRB可以利用纯一氧化碳[3]，还有长链烷烃[4]。
硫酸盐还原菌培养基配方
硫酸盐还原菌培养基配方硫酸盐还原菌是一类能够利用硫酸盐作为电子受体进行能量代谢的微生物。
为了研究这类微生物的生理特性和代谢途径，科研人员需要设计合适的培养基来培养和繁殖硫酸盐还原菌。
本文将介绍硫酸盐还原菌培养基的配方和制备方法。
硫酸盐还原菌培养基的配方一般包括以下几个组分：无机盐、有机物、硫酸盐和其他添加剂。
无机盐提供微生物生长所需的常规元素，有机物提供碳源和能量源，硫酸盐作为电子受体参与代谢反应，其他添加剂则用于调节pH值和增加培养基的稳定性。
首先是无机盐部分。
常用的无机盐包括氯化钠、硫酸镁、磷酸氢二钠等。
这些无机盐提供了微生物所需的钠、镁、磷等元素，维持细胞内的离子平衡和结构稳定。
其次是有机物部分。
有机物一般选择易于分解和吸收的有机酸，如乳酸、琥珀酸等。
这些有机物可以作为微生物的碳源和能量源，促进细胞的生长和代谢。
硫酸盐是硫酸盐还原菌培养基中的关键组分。
通常使用硫酸钠作为硫酸盐的来源。
硫酸钠可以在培养基中提供硫酸根离子，作为微生物的电子受体参与代谢反应。
硫酸盐还原菌通过还原硫酸盐为硫化物来释放能量，从而完成能量代谢过程。
除了以上基本组分外，还可以根据需要添加其他的添加剂。
例如，可以添加胆碱盐、维生素和微量元素等，以满足微生物生长所需的特殊营养要求。
此外，为了维持培养基的稳定性，可以添加缓冲剂来调节pH值，如磷酸盐缓冲液等。
制备硫酸盐还原菌培养基的方法比较简单。
首先，按照配方将各种组分称量并溶解在适量的去离子水中。
然后，将溶液进行高压灭菌处理，以杀灭其中的有害微生物。
灭菌后，将培养基分装到无菌培养瓶中，密封好并进行高压灭菌处理。
最后，将培养瓶中的培养基冷却至室温，即可用于硫酸盐还原菌的培养。
总结起来，硫酸盐还原菌培养基的配方包括无机盐、有机物、硫酸盐和其他添加剂。
制备方法简单，只需按照配方将各种组分溶解并灭菌即可。
通过合理设计硫酸盐还原菌培养基的配方，科研人员可以为研究硫酸盐还原菌的生理特性和代谢途径提供重要的实验工具。
硫酸盐还原菌培养具体流程
硫酸盐还原菌培养具体流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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硫酸盐还原菌甘油保菌条件
硫酸盐还原菌甘油保菌条件
硫酸盐还原菌是一类能够利用硫酸盐作为电子受体进行呼吸作
用的微生物。
它们通常生活在缺氧或微氧环境中，因此在实验室中
进行培养时需要提供适当的保菌条件。
而甘油是一种常用的碳源和
能源供应物质，可以被一些硫酸盐还原菌利用。
因此，为了提供适
合硫酸盐还原菌生长的条件，需要考虑以下几个方面：
1. 缺氧环境，硫酸盐还原菌通常生长于缺氧环境中，因此在培
养硫酸盐还原菌时，需要使用密闭的培养瓶或培养皿，并采取适当
的气体置换措施，如用氮气或氩气替换空气，以确保培养环境中氧
气含量较低。
2. 无菌操作，在培养硫酸盐还原菌时，需要严格遵守无菌操作
规范，包括消毒培养器皿、培养基和实验室工作台面等，以防止外
源微生物的污染。
3. 适当的培养基，对于硫酸盐还原菌的培养，通常会选择含有
硫酸盐和其他必需营养成分的培养基，同时添加甘油作为碳源。
培
养基的配制需要根据具体的硫酸盐还原菌种类和生长要求进行调整。
4. pH和温度控制，硫酸盐还原菌对环境的pH和温度敏感，因此在培养过程中需要控制培养基的pH值和培养温度，以提供适宜的生长条件。
总的来说，为了成功培养硫酸盐还原菌并利用甘油作为碳源，需要提供无氧、无菌的培养环境，选择适当的培养基配方，并严格控制pH和温度等因素，以促进硫酸盐还原菌的生长和代谢活动。
希望这些信息能够帮助你更好地了解硫酸盐还原菌的培养条件。
硫酸盐还原菌纯菌种的分离及纯化新方法[发明专利]
![硫酸盐还原菌纯菌种的分离及纯化新方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/b81f2e06aeaad1f347933fb1.png)
专利名称：硫酸盐还原菌纯菌种的分离及纯化新方法专利类型：发明专利
发明人：方世杰,刘耀辉,王强,蒋磊,于思荣
申请号：CN200710055389.X
申请日：20070309
公开号：CN101050438A
公开日：
20071010
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：硫酸盐还原菌纯菌种的分离及纯化新方法涉及对硫酸盐还原菌这种非严格厌氧菌进行分离及提纯的一种新方法，本方法适用于微生物防腐、污水处理、矿物提冶、食品工业、医药品生产等工业领域和实验研究领域。
在保证快速、准确、简便地获得硫酸样还原菌的单个纯培养菌落的前提下，采用平皿固体培养基作为细菌生长的载体，用带针头的注射器将菌液以雾状喷溅在培养基的表面，以获得单个的细菌附着在培养基表面，经恒温恒湿无菌环境下培养，获得有单个细菌繁殖的菌落，然后挑取单个菌落放入液体培养基中繁殖，最终获得大量的、生物活性良好的，单一硫酸盐还原菌的纯菌种。
本方法的分离及纯化的准确率、效率要高于传统的细菌分离及提纯的方法。
申请人：吉林大学
地址：130012 吉林省长春市前进大街2699号
国籍：CN
代理机构：长春吉大专利代理有限责任公司
代理人：朱世林
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硫酸盐还原菌驯化实验方面的书籍
硫酸盐还原菌驯化实验方面的书籍一、引言硫酸盐还原菌（SRB）是一类广泛分布于土壤、水体等环境的微生物，具有重要的生态环境意义和应用价值。
SRB能够将硫酸盐还原为硫化氢，进一步转化为硫，从而降低环境中的硫酸盐含量。
近年来，关于硫酸盐还原菌驯化实验的研究越来越多，旨在提高SRB的降解效率和适应性，为解决我国环境污染问题提供新的技术支持。
二、硫酸盐还原菌驯化实验的原理硫酸盐还原菌驯化实验主要通过对菌株进行筛选、培养和驯化，以提高其在特定环境中的降解效率。
驯化过程包括适应性培养、筛选生长条件、优化菌株生理特性等环节。
1.驯化过程简介驯化过程通常分为以下几个阶段：首先，从环境中分离出硫酸盐还原菌；其次，通过筛选获得具有较高降解效率的菌株；然后，对筛选出的菌株进行驯化，使其在特定条件下具有更好的生长和降解能力；最后，评估驯化效果，筛选出最优的菌株。
2.实验方法与步骤（1）菌种的筛选与保存：采用稀释涂布法从环境中分离出硫酸盐还原菌，挑选具有较高降解能力的菌落进行纯化培养。
将纯化后的菌株保存于4℃的斜面培养基上，待用。
（2）培养条件控制：将保存的菌株接种至含有不同浓度硫酸盐的培养基中，控制温度、pH、溶解氧等条件，使菌株在特定环境下生长。
（3）驯化过程监测：通过测定菌落数量、硫酸盐降解速率等指标，监测驯化过程中菌株的生长状况和降解能力。
三、实验操作要点1.菌种的筛选与保存：要确保分离到的菌株具有较高的降解能力，可通过比较不同菌株的降解速率、生长状况等进行筛选。
菌种的保存至关重要，合适的保存方法可以延长菌株的使用寿命。
2.培养条件的控制：硫酸盐还原菌的生长受到多种因素的影响，如温度、pH、溶解氧等。
在实验过程中要充分考虑这些因素，确保菌株在适宜的条件下生长。
3.驯化过程的监测：驯化过程中，要定期测定菌落数量、硫酸盐降解速率等指标，以便及时了解菌株的生长状况和降解能力，为优化驯化条件提供依据。
四、实验结果与分析1.硫酸盐还原菌的生长曲线：通过测定不同时间点的菌落数量，可绘制出菌株的生长曲线，分析其在驯化过程中的生长状况。
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(74)专利代理机构 北京超凡志成知识产权代理 事务所(普通合伙) 11371
代理人 王术兰
(51)Int .Cl . C12N 1/20(2006 .01) B09C 1/10(2006 .01)
( 54 )发明 名称 硫酸盐还原菌株的培养方法、硫酸盐还原菌
2 .权利要求1所述的硫酸盐还原菌株在污染土壤的生物修复方面的应用。 3 .权利要求1所述的硫酸盐还原菌株在污染地下水的生物修复方面的应用。 4 .权利要求1所述的硫酸盐还原菌株在有机砷污染物降解转化方面的应用。 5 .权利要求1-4任一项所述的硫酸盐还原菌株的培养方法，其特征在于，包括如下步 骤：所述硫酸盐还原菌株在包含有Postgate B培养基的体系中培养； 优选地，培养的温度为25-35℃之间； 更优地，培养的温度为32℃。 6 .根据权利要求5所述的培养方法 ，其特征在于，所述Postgate B培养基的组成为 ：
CN 109897797 A
说 明 书
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硫酸盐还原菌株的培养方法、硫酸盐还原菌株及应用
技术领域 [0001] 本发明涉及微生物领域，具体而言，涉及一种硫酸盐还原菌株的培养 方法、硫酸 盐还原菌株及应用。
背景技术 [0002] 硫酸盐还原菌(Sulfate-Reducing Bacteria ,SRB) ，是在缺氧或无氧状态 下，用 乳酸或丙酮酸等有机物作为电子供体，用硫酸盐作为末端电子受体 而繁殖的一群厌氧微 生物，广泛存在于大田、水田、湖沼、河川底泥、海 底泥等缺氧环境中。 [0003] 近年来，战后掩埋的化学武器常常导致严重的环境污染事件，其中以 砷污染最为 普遍。二苯砷酸(DPAA)是含砷化学武器经一系列水解和氧化 过程后生成的一种新型环境 污染物。此外，工农业生产活动中大量使用的 含砷除草剂、杀虫剂等是环境中苯砷酸类污 染物的另一重要来源。研究发 现该类污染物难以被生物降解，并可以通过各种途径进入环 境中，尤其是 靠近水源地、居民区及农田土壤中高浓度的砷污染，严重危害人体健康及 生 态安全。 [0004] 因此，对有机砷类污染物的环境行为及对该类污染物的安全修复技术 亟待研究 开发 ，现如今针对有机砷类污染物还没有很好的 生物治理方法 ，普遍治理效果不佳 ，治理 效率低，限制了其进一步的扩展应用。 [0005] 有鉴于此，特提出本发明。
K2HPO4·3H2O 0 .5g/L，NH4Cl 1 .0g/L，Na2SO4 3g/L，CaCl2·2H2O 0 .05g/L，MgCl2·6H2O
0 .4g/L，乳酸钠3g/L，酵母提取物1g/L，调节pH 7 .0。 8 .根据权利要求5或6所述的培养方法，其特征在于，所述Postgate B培养基中添加二
K2HPO4·3H2O 0 .3-1g/L，NH4Cl 0 .5-1 .5g/L，Na2SO4 2-4g/L，CaCl2·2H2O 0 .02-0 .06g/L， MgCl2·6H2O 0 .2-0 .6g/L，乳酸钠2-4g/L，酵母提取物0 .5-1 .5g/L，调节pH 7 .0。
7 .根据权利要求5或6所述的培养方法，其特征在于，所述Postgate B培养基的组成为：
权利要求书1页 说明书6页 附图3页
CN 109897797 A源自CN 109897797 A
权 利 要 求 书
1/1 页
1 .一 种 硫 酸 盐 还 原 菌 株 ，其 特 征 在 于 ，所 述 硫 酸 盐 还 原 菌 株 的 拉 丁 文 名 称 为 Clostridium thiosulfatireducens，菌株名为SRB-2，保藏于中国微生物菌种保藏管理委 员会普通微生物中心，CGMCC No:14043；保藏时间为：2017年4月17日。
(10)申请公布号 CN 109897797 A (43)申请公布日 2019.06.18 C02F 3/34(2006 .01) A62D 3/02(2007 .01) C12R 1/145(2006 .01) C02F 101/30(2006 .01) C02F 103/06(2006 .01) A62D 101/24(2007 .01) A62D 101/28(2007 .01)
株及应用 ( 57 )摘要
本发明涉及微生物领域 ，具体而言 ，涉及一 种硫酸盐还原菌株的培养方法，该硫酸盐还原菌 株及应用。该菌株保藏于中国微生物菌种保藏管 理委员会普通微生物中心 ，保藏编号为 ：CGMCC No:14043 ；保藏时间为 ：2017年4 月17日 。该菌株 具有优异的降 解特性 ，对有机砷污染物 ，尤其是 二苯砷酸降解转化方面具有很广泛的应用，体系 中的DPAA降解转化率可达41 .8％，为二苯砷酸污 染地区土壤及地下水的生物修复提供了新资源 和思路，具有良好的应用前景。
苯砷酸。 9 .根据权利要求8所述的培养方法，其特征在于，所述二苯砷酸添加后的浓度控制在2-
10mg/L之间。 10 .根据权利要求5或6所述的培养方法，其特征在于，所述硫酸盐还原菌株接种到所述
Postgate B培养基培养，所述硫酸盐还原菌株的接种量体积百分比为2-10％，更优地接种 量为5％。
2
( 19 )中华人民 共和国国家知识产权局
( 12 )发明专利申请
(21)申请号 201910108278 .3
(22)申请日 2019 .01 .18
( 83 )生物保藏信息 CGMCC No .14043 2017 .04 .17
(71)申请人 中国科学院烟台海岸带研究所 地址 264000 山东省烟台市莱山区春晖路 17号 申请人 中国科学院南京土壤研究所
发明内容 [0006] 本发明通过提供新的硫酸盐还原菌株及应用、该硫酸盐还原菌株的培 养方法，以 及可用于污染物降解来解决前述需求，尤其是对于有机砷污染 物降解转化方面具有很好 的治理作用，该方法绿色环保，成本低，耗时时 间短，操作方便，通过采用这种生物治理的 方法，该菌株具有优异的降解 特性，为二苯砷酸污染地区土壤及地下水的生物修复提供了 新资源和思 路，应用前景非常广阔。 [0007] 为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案： [0008] 本发明涉及一种分离的硫酸盐还原菌株，其保藏于中国微生物菌种保 藏管理委 员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC No:14043；保藏时 间为：2017年4月17日。 [0009] 该菌株的菌落形态描述特征为：菌株经革兰氏染色显紫色，呈阳性，菌落的形状 为梭状，黑色球状菌落，表面光滑、边缘整齐，轮廓清晰。 [0010] 本申请提供的硫酸盐还原菌株(Clostridium thiosulfatireducens) ，菌株 名为 SRB-2，分离自淹水状态下的DPAA污染土壤，保藏于中国微生物菌 种保藏管理委员会普通 微生物中心，保藏编号CGMCC No:14043；保藏时 间为：2017年4月17日，检测为存活菌株并 保藏。