纯合体鉴定的原理及方法_
纯合体和杂合体名词解释
纯合体和杂合体名词解释基因是生命的基本单位，它控制着所有生物的遗传性状。
基因的不同形式被称为等位基因。
当一个生物体内的两个等位基因相同，就称为纯合体；当两个等位基因不同，就称为杂合体。
本文将从基本概念、遗传规律、应用等方面对纯合体和杂合体进行详细解释。
一、基本概念1.纯合体纯合体是指一个生物体内的两个等位基因相同。
例如，如果一个植物体内的两个等位基因都是AA，就称为纯合体。
纯合体的遗传性状是稳定的，因为它只有一种基因型，所以只能产生一种表现型。
2.杂合体杂合体是指一个生物体内的两个等位基因不同。
例如，如果一个植物体内的两个等位基因是Aa，就称为杂合体。
杂合体的遗传性状是不稳定的，因为它有两种基因型，所以可以产生两种表现型。
二、遗传规律1.孟德尔遗传规律孟德尔是遗传学的奠基人之一，他通过对豌豆的研究，发现了遗传规律。
孟德尔遗传规律包括单因素遗传规律和双因素遗传规律。
单因素遗传规律是指一个基因控制一个性状的遗传规律。
例如，豌豆的花色只受一个基因的控制。
双因素遗传规律是指两个基因控制一个性状的遗传规律。
例如，豌豆的籽形和籽色都受两个基因的控制。
在孟德尔遗传规律中，纯合体和杂合体的遗传规律是不同的。
纯合体的后代都是同一基因型，所以它们的表现型也相同；而杂合体的后代有两种基因型，所以它们的表现型也有两种。
2.硬连锁和松连锁硬连锁和松连锁是指基因在染色体上的位置关系。
如果两个基因在同一染色体上且靠得很近，就称为硬连锁；如果两个基因在同一染色体上但距离较远，就称为松连锁。
硬连锁和松连锁对杂合体的后代产生不同的影响。
如果两个基因硬连锁，它们很难分离，所以它们的遗传规律就像是一个基因控制一个性状。
如果两个基因松连锁，它们容易分离，所以它们的遗传规律就像是两个基因控制两个不同的性状。
三、应用1.杂交育种杂交育种是利用纯合体和杂合体的遗传规律，选育出优良品种的方法。
通过对不同的纯合体和杂合体进行杂交，可以产生具有优良性状的杂种。
拟南芥T-DNA插入突变纯合体的鉴定
拟南芥T-DNA插入突变纯合体的鉴定余振洋（高山山、潘红芳）、09级生技1班、200900140156、2011/12/14摘要本实验通过CTAB法提取目的拟南芥的DNA，再用三引物法PCR扩增所需的目的基因后，用电泳检测该拟南芥是否为转基因的拟南芥，并判断其是纯合突变还是杂合突变。
关键词拟南芥;T-DNA；突变纯和体1．引言T-DNA是根癌农杆菌Ti质粒上的一段DNA序列，它能稳定地整合到植物基因组中并稳定地表达。
T—DNA在植物中一般都以低拷贝插入，多为单拷贝。
单拷贝T-DNA一旦整合到植物基因组中，就会表现出孟德尔遗传特性，在后代中长期稳定表达，且插入后不再移动，便于保存。
T—DNA插入突变在反向遗传学和功能基因组学研究中发挥着重要作用。
，T—DNA插入突变能方便地进行正向和反向遗传学研究，因而受到重视。
同时，基因组测序工作的完成使得从位点到表型的反向遗传学研究成为可能，从而使通过T—DNA插入技术构建突变体来研究功能的反向遗传学技术逐渐取代了传统的化学诱变、图位克隆等技术。
借助于农杆菌介导的遗传转化技术，T—DNA插入技术已被广泛应用于拟南芥等模式植物的突变体库构建中。
以T—DNA作为插入元件，不但能破坏插入位点基因的功能，而且能通过插入产生的功能缺失突变体的表型及生化特征的变化，为该基因的研究提供有用的线索。
由于插入的T—DNA序列是已知的，因此可以通过已知的外源基因序列，利用反向PCR、TAIL-PCR、质粒挽救等方法对突变基因进行克隆和序列分析，并对比突变的表型研究基因的功能。
还可以利用扩增出的插入位点的侧翼序列，建立侧翼序列数据库，对基因进行更全面的分析。
由此可见，T—DNA 插入标签技术已成为发现新基因、鉴定基因功能的一种重要手段。
CTAB法提取植物叶片中的DNA是我们常用的方法。
通常采用机械研磨的方法破碎植物的组织和细胞，由于植物细胞匀浆含有多种酶类(尤其是氧化酶类)对DNA的抽提产生不利的影响，在抽提缓冲液中需加入抗氧化剂或强还原剂(如巯基乙醇)以降低这些酶类的活性。
一、显性纯合体、杂合体的判断
一、显性纯合体、杂合体的判断：
自交法：让某些显性性状的个体进行自交，若后代能发生性状分离则亲本一定为杂合体，若后代无性状分离，则可能为纯合体。
此法适合于植物，而且是最简便的方法，但不适合对于动物。
测交法：让待测个体与隐性类型测交，若后代出现隐性类型，则一定为杂合体，若后代只有显性性状，则可能为纯合体。
待测对象若为雄性动物，要求与多个隐性雌性个体交配，以使后代产生更多的个体，使结果更有说服力。
花粉鉴定法：非糯性与糯性水稻的花粉遇碘呈现不同颜色，杂种非糯性水稻的花粉是减数分裂的产物，遇碘液呈现两种不同的颜色，且比例为1：1，从而直接证明了杂种非糯性水稻在产生花粉过程中，等位基因彼此分离。
同时也可检验出亲本个体是纯合体还是杂合体。
单倍体育种法：用花药离体培养形成单倍体植株并用秋水仙素处理加倍后获得的植株为纯合体，根据植株性状进行判断。
二、相对性状中显隐性的判断：
方法1杂交的方式：A与B杂交后代只表现一个性状，则出现的性状即为显性性状，未出现性状的即为隐性性状（A、B为一对相对性状得个体）；若杂交后代只表现出两个亲本性状，可再进行自交，出现性状分离的为显性，不出现性状分离的为隐性。
方法2自交的方式：A、B分别自交，若能发生性状分离，其亲本一定为显性；不发生性状分离则无法确定，有可能为隐性性状，也有可能为显性性状，若要确定，可再进行杂交，后代表现出的性状为显性，未表现出的为隐性。
方法3将A、B分别种植，取其花粉粒进行单倍体育种，取两种相对性状的植株进行杂交，表现出的性状为显性，未表现出的性状为隐性。
亲本杂合体（Aa）获取显性纯合体（AA）的方法：用亲本植株（Aa）连续自交，直到所需的性状不再发生性状分离为止。
高中生物 遗传类实验题判断方法归纳与应用
遗传类实验题判断方法归纳与应用一方法归纳二应用例1已知果蝇的直毛与非直毛是一对等位基因，若实验室有纯合的直毛和非直毛雌、雄果蝇亲本，你能否通过一代杂交试验确定这对等位基因是位于常染色体上还是位于X染色体上？请说明推导过程。
分析：假设直毛与非直毛是一对相对性状，受一对等位基因控制（A和a）,且直毛为显性（或非直毛为显性结果一样）。
（1）若该等位基因位于常染色体上，则不论正交还是反交，结果是一样的，都表现出显性性状。
（2）若该等位基因位于X染色体上，则亲本的基因型有：雌的有：X A X A和X a X a ，雄的有 X A Y 和X a Y。
则正反交为：正交亲本 X A X A（♀）× X a Y（♂）直（或非直）↓非直（或直）子代 X A Y X A X a直（或非直）杂交后代不论雌雄都表现为直或都为非直。
反交亲本 X a X a （♀）× X A Y（♂）非直（或直）↓直（或非直）子代 X A X a X a Y直（或非直）非直（或直）杂交后代雌雄个体表现型不一致，雌性个体全部表现父本的显性性状，雄性个体表现出母本的隐性性状。
答案：取直毛雌雄果蝇与非直毛雌雄果蝇，进行正交和反交（即♀直毛×♂非直毛，♀非直毛×♂直毛），若正、反交后代性状表现一致，则该等位基因位于常染色体上；若正、反交后代性状表现不一致，则该等位基因位于X染色体上。
点拨：此类试题若限制进行一代杂交实验，可考虑进行正交和反交。
例2 已知果蝇控制灰身黑身、长翅残翅的基因位于常染色体上，你如何确定灰身黑身,长翅残翅的遗传是否符合基因的自由组合定律。
分析：对杂交得到的子代灰身长翅果蝇雌雄交配，若后代灰身长翅：灰身残翅：黑身长翅：黑身残翅＝9:3:3:1，则符合基因的自由组合规律。
例3 果蝇的性染色体X和Y有非同源区和同源区。
非同源区上的X和Y片段上无等位基因或相同基因；同源区上的X和Y片段上有等位基因或相同基因。
验纯的方法
验纯的方法如今，大多数化学物质都是以混合物的形式提供给消费者，因此它们必须经过验纯来确保它们的质量。
因此，了解验纯方法对化学科学家和消费者来说都是非常重要的。
验纯是一种对物质的纯度进行检查的过程，它涉及到从混合物中分离出不同成分的过程，以检查这些成分的比例和纯度。
此外，它还可以用来确定混合物中特定成分的数量。
有许多种不同的验纯方法，例如蒸馏、溶剂沉淀和色谱等。
蒸馏是一种分离混合物中的成分的常用方法。
它通过将混合物加热，使某种成分被蒸发，然后冷却附近的环境，使这种成分凝结成液体的形式，从而分离出不同的成分。
蒸馏已被用于分离混合物中的水分和有机溶剂。
另一种常用的验纯方法是溶剂沉淀法。
该方法利用溶剂之间的溶解度差异来分离混合物中的成分。
在这种方法中，溶剂被加入到混合物中，使某些成分溶解，而其他成分则不溶解，从而可以把它们分开。
溶剂沉淀法已被用于分离混合物中的溶剂和有机溶剂。
第三种常见的验纯方法是色谱法。
色谱技术的基本原理是利用物质的溶解度和物质的分子量差异来分离混合物中的各种成分。
它利用液-固相色谱技术可根据成分的溶解度和分子量把混合物成分分离出来，从而确定特定成分的纯度。
此外，还有一些定性和定量的验纯方法，如比色法、示踪剂定性检查、熔点测定法、X射线衍射法和质谱法等，这些方法可用于确定混合物中特定成分的数量。
最后，可以总结出，验纯是确保物质的质量的重要过程，存在多种验纯方法，可以应用于分离和定量检测混合物中的物质。
通过使用不同的验纯方法，可以确保检测到的物质符合要求，确保它们的质量。
而这些验纯方法可以在实验室中都得到应用，并且也可以被用于实际生产过程中，从而确保生产出来的化学物质质量达标。
合成玉石鉴别方法
合成玉石鉴别方法
合成玉石可以用高温法鉴定，将玉石放进水里煮，合成的玉石会变得浑浊。
也可以观察玉石的特征，合成玉石的光泽不是很好。
还可以测试玉石的硬度，合成玉石的硬度比较差，容易留下摩擦的印记。
1、高温
将玉石放入水中长时间煮，若原本通透的玉石变得浑浊，且发生了褪色现象，就表示这块玉石是合成的。
因为天然的玉石经过水煮，只会将其表面的蜡层煮消失，对玉石并没有什么影响。
2、观察
合成的玉石没有天然玉石那种油润感，光泽也不太好，纹理也比较单一，且颜色过于浓艳。
而天然玉石表面油润，具有很好的光泽，其表面的纹理没什么规律，颜色看上去比较自然。
3、硬度
合成玉石的硬度相对而言比较差，用坚硬的物体在其表面进行摩擦，会留下摩擦的印记。
而天然玉石的硬度比合成玉石的硬度要好，表面无论如何进行摩擦，都不会轻易的留下痕迹来。
初中生物纯合体知识点归纳总结
初中生物纯合体知识点归纳总结纯合体是指其基因由两个相同基因型的亲本传给后代时所表现的现象。
在初中生物学中，掌握纯合体的概念和相关知识点对于理解遗传和进化等内容至关重要。
下面将对初中生物纯合体的知识点进行归纳总结。
1. 纯合体的定义纯合体是指基因型由两个相同等位基因组成的个体。
在纯合体中，父母个体不一定是纯合体，但它们的基因型必须是相同的。
2. 纯合体的形成纯合体的形成是由于两个亲本个体的基因型相同并且产生配子时，将相同的等位基因传递给后代。
这种基因传递方式有助于保持种群基因的稳定性。
3. 纯合体的特征纯合体具有以下特征：（1）纯合体的个体在性状上表现出稳定性和一致性。
（2）纯合体的子代继承了父母个体的基因型，且基因型一致。
（3）纯合体的个体通常在进化过程中难以适应环境变化。
4. 纯合体的优点和缺点纯合体具有一定的优点和缺点：（1）优点：- 固定优良性状：纯合体的个体在性状上表现出一致性，有助于固定优良的性状。
- 适宜研究：由于个体的基因型一致，纯合体适合用于遗传研究和实验。
（2）缺点：- 缺乏适应性：纯合体的个体在进化过程中难以适应环境变化。
- 遗传易失：由于缺乏基因的多样性，纯合体容易由于不利的突变导致基因的丧失。
5. 纯合体和杂合体的关系纯合体与杂合体是遗传学中的两个重要概念，两者有着密切的关系：（1）纯合体：纯合体是指基因型由两个相同基因组成的个体。
（2）杂合体：杂合体是指基因型由两个不同基因组成的个体。
纯合体和杂合体之间的基因型差异导致了性状表现上的差异，这也是遗传多样性的来源之一。
6. 纯合体的应用纯合体在生物学研究和实际应用中有着广泛的应用：（1）研究遗传规律：纯合体的个体基因型一致，适合用于研究遗传规律和进行实验验证。
（2）良种选育：通过纯合体的配对，可以固定和增加优良性状，用于农业植物和畜禽的选育。
（3）疾病研究：纯合体的个体有助于研究单基因遗传疾病的发生和机制。
综上所述，初中生物纯合体是指基因型由两个相同等位基因组成的个体。
实验五 拟南芥TDNA插入突变纯合体的鉴定
0.5 ml dNTP〔10 mmol/L〕
1 ml 046 5’引物〔10 mmol/L〕
1 ml 046 5’引物〔10 mmol/L〕
1 ml LBa 引物〔10 mmol/L〕
1 ml LBa 引物〔10 mmol/L〕
135号突变体的鉴定〔7-11组〕
30ml反响体系1：
30ml反响体系3：
实验五 拟南芥TDNA插入突变 纯合体的鉴定
实验目的
1．熟练掌握植物基因组DNA快速提取的方法； 2．掌握利用PCR方法鉴定拟南芥T-DNA插入突
变体的方法。
T-DNA插入鉴定的原理
突变体鉴定的步骤
1. T-DNA插入基因的基因组序列； 2. T-DNA插入方向确实定； 3. T-DNA插入位置确实定； 4. 引物设计； 5. PCR扩增； 6. 电泳检测。
条件下，离心5分钟； 〔6〕弃上清后，用70%乙醇润洗沉淀，并在室温下枯燥沉淀； 〔7〕100 ml TE溶解沉淀，将制备好的样品在4℃保存备用。
〔此方法提取的基因组DNA只适用于PCR的鉴定，不适合酶切和大片段基因的扩增〕
PCR鉴定
30ml反响体系： 2ml 植物基因组DNA样品 3ml 10×扩增缓冲液 ml Taqase 〔5U/ml〕 0.5 ml dNTP〔10 mmol/L〕 1ml 引物1〔10 mmol/L〕 1ml 引物2〔10 mmol/L〕
1ml 135 5’引物〔10 mmol/L〕
1ml 135 3’引物〔10 mmol/L〕
1ml 135 3’引物〔10 mmol/L〕
30ml反响体系2：
30ml反响体系4：
2ml 植物基因组DNA样品〔WT〕 2ml 植物基因组DNA样品〔111〕
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1.T-DNA插入突变体的鉴定
T-DNA插入突变体从拟南芥资源中心（Ohio State University，Columbus）索要。
种子被播种在含有卡那霉素（Kan＋）的MS筛选培养基上，待萌发后10天左右，把生长正常的幼苗移置营养土中。
然后取10天后的叶片提取DNA，PCR进一步鉴定。
其原理如下图所示（图5-1）：
LP，RP分别为基因的左边界和右边界，LB为T-DNA上的序列。
用三条引物进行PCR扩增，结果如右图所示。
用LP和RP扩不出条带，而用RP和LB能扩出条带的为突变体纯合株。
图5-1 突变体鉴定原理图
纯合体鉴定的原理及方法
图1：T-DNA插入的位置
图2：纯合体鉴定所示条带
By using the three primers (LBb1.3+LP+RP) for SALK lines, users for WT (Wild Type - no insertion)
should get a product of about 900-1100 bps ( from LP to RP ), for HM (Homozygous lines - insertions in both chromosomes) will get a band of 410+N bps ( from RP to insertion site 300+N bases, plus 110 bases from LBb1.3 to the left border of the vector), and for HZ (Heterozygous lines - one of the pair chromosomes with insertion) will get both bands. The product size should be 200 base larger if using LBa1 instead of LBb1.3. However, the protocol requires the same or similiar TM values for all the LB, LP and RP primers.
纯合体鉴定共需两次才能判定是否是真正的纯合体。
1.以LP+RP为引物：结果显示WT＆HZ（杂合体）能扩出如上图2示900BP的带
2.以LBa1+RP/LBb1+RP为引物：结果显示HZ（杂合体）＆HM（纯合体）能扩出如上图2
示410+N的带
3.对比两次结果，以LP+RP为引物无条带而以LBa1+RP/LBb1+RP为引物能扩出条带的植株
为纯合体。
也可以先以LP+RP为引物选出那些无条带所对应的植株再以LBa1+RP/LBb1+RP为引物检测看能否扩出带，能扩出的表示为纯合体。