2006锦鲤疱疹病毒病的研究进展_刘宗晓
１前言锦鲤疱疹病毒（ＫＨＶ），属于疱疹病毒科，是双链ＤＮＡ病毒，有囊膜，与其同科的ＣＨＶ、ＣＣＶ之间有免疫交叉反应［１］。
ＷａｌｔｚｅｋＴＢ等［２］通过比较疱疹病毒的主要囊膜蛋白基因、衣壳蛋白基因、ＤＮＡ聚合酶基因、螺旋酶基因４个基因，认为，ＫＨＶ与ｃａｒｐｐｏｘｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓ（Ｃｙｐｒｉｎｉｄｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓ１，ＣｙＨＶ－１）和ｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｎｅｃｒｏｓｉｓｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓｏｆｇｏｌｄｆｉｓｈ（Ｃｙｐｒｉｎｉｄｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓ２，ＣｙＨＶ－２）十分相近，而与ｃｈａｎｎｅｌｃａｔｆｉｓｈｖｉｒｕｓ（Ｉｃｔａｌｕｒｉｄｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓ１，ＩｃＨＶ－１）也有在相近之处，因此建议将ＫＨＶ隶属于ＣｙＨＶ－３。
目前ＫＨＶ的主要囊膜蛋白基因、衣壳蛋白基因、ＤＮＡ聚合酶基因、螺旋酶基因、胸苷激酶基因及某些未知功能的蛋白基因的部分或完整的核苷酸序列已有报道，但关于ＫＨＶ的其他基因的研究未见报道，其完整的基因组序列及基因图谱还有待于进一步研究和完善。
ＫＨＶ的感染谱较小，仅感染锦鲤和鲤鱼；死亡率高达８０％￣１００％，且很快死亡；研究表明，该病毒的致病性具有水温依赖性，该病毒的最适生活温度为１８￣２７℃，其发病水温主要在２３￣２８℃之间；ＫＨＶ的潜伏期长，一般为１４天，甚至更长。
２国内外流行现状１９９８年在以色列的ＭａｇａｎＭｉｃｈａｅｌ地区的首次暴发锦鲤疱疹病毒病，但以色列官方宣称这次发作是来源于欧洲，也许是从英国非法进口的鱼及渔场设备所致。
在１９９８年夏至１９９９年春的发病导致渔场主损失肉用鲤鱼６００ｔ，出口损失近４００万美元，但直到１９９９年才确认ＫＨＶ为其真正的病原。
自１９９８年以来该病在英国、欧洲大陆、美国及以色列等国家和地区暴发流行。
日本也于２００３年１０月首次证实了该病的存在［４］。
自１９９８年以来，ＫＨＶ在英国每年夏天都要流行一次。
另外，１９９８年南非也有此病的报道。
２００１年４月在以色列的Ｈａｚｏｒｅａ地区再次暴发流行ＫＨＶ，且由于这次ＫＨＶ的暴发流行，ＫＨＶ被列入以色列水生动物疾病名录，作为以色列必须向官方报告的水生动物疾病。
但目前还不能明确判断ＫＨＶ的危害在生产实践中所占的地位。
随后该病在美国、德国、中国台湾均有报道，据分析该病的流行和蔓延主要通过外贸出口及观赏鱼类的交流所造成。
２００２年４月，广东省某养殖场进口的锦鲤（Ｃｙｐｒｉｎｕｓｃａｒｐｉｏ）出现了暴发性疾病，死亡率高达８０％以上，刘荭［５］等人用ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ证实了本次流行的主要病原可能是ＫＨＶ，同时伴有副溶血弧菌和嗜水气单胞菌的继发感染。
究其原因，ＫＨＶ可能是从进口的观赏锦鲤中传入我国的。
这提示，ＫＨＶ随着进口锦鲤进入我国的风险极大，并且有可能对我国养殖锦鲤及锦鲤出口贸易造成严重的影响。
３临床症状ＫＨＶ感染锦鲤后，临床症状主要表现为：停止游泳；鱼皮肤上出现苍白的块斑与水泡；鳃出血，产生大量的粘液或组织坏死；鳞片有血丝；鱼眼凹陷，类似寄生虫感染和细菌感染，出现症状后２４￣４８ｈ死亡；有些鱼表现神经症状，极小的刺激能引起较强烈的反应，然后是不活跃期［６］。
４诊断方法研究进展锦鲤疱疹病毒病的临床表现与许多普通的细菌感染和寄生虫侵袭相似，这些现象会掩盖病毒所致的危害。
不能单纯通过观察鱼的外部特征或临床表现来进行决定性的判断，因此，确诊还需必要的实验室诊断。
目前的诊断方法有细胞培养分离技术、电镜技术、ＰＣＲ、ＥＬＩＳＡ、原位杂交技术及ＬＡＭＰ法等，聚合酶链式反应（ＰＣＲ）和细胞培养技术是ＯＩＥ推荐的诊断方法。
４．１常规的临床诊断如果出现下列情况，再结合临床特征，则可怀疑ＫＨＶ的感染：１）仅有鲤鱼（包括锦鲤）及其普通变种能被感染锦鲤疱疹病毒病的研究进展刘宗晓刘荭江育林（华中农业大学水产学院，湖北武汉，４３００７０）（深圳出入境检验检疫局动植中心，广东深圳，５１８００１）作者简介：刘荭（１９７１－），女，毕业于华中农业大学，博士，高级兽医师，已发表文章４０多篇。
致死。
其他种类如金鱼和草鱼在同一系统中，甚至可与锦鲤保持长期接触而不被感染，这一特点可有助于ＫＨＶ的诊断。
２）水温在１８￣３０℃间有大量死亡，水温升高或降低，死亡率下降或停止。
３）死亡极快，一条健康鱼从病到死只有２４￣４８ｈ。
４）死亡率极高，如果疾病暴发１０天内死亡率可达８０％￣１００％。
这些常规的诊断只能作为一种有意义的参考，确诊还要依靠灵敏特异的诊断方法。
４．２细胞培养分离技术细胞培养分离技术是最准确的诊断方法，是ＯＩＥ推荐的首选方法。
但研究发现，ＫＨＶ非常特殊，只能在源自原始宿主细胞中生长，即只能在锦鲤鳍细胞中生长，病毒接种这种细胞后，可观察到特征性的细胞病变。
Ｃａｌｌｅ等［７］报道，常用的鱼类细胞系都难以分离到ＫＨＶ，刘荭等也证实了ＫＨＶ不可能在ＣＯ、ＣＫ和ＥＰＣ等３种鱼类细胞上复制。
最近，美国的研究者已经建立起锦鲤鳍原代细胞系，可用以分离ＫＨＶ。
英国的研究者们也正在紧张地进行ＫＨＶ敏感细胞系的建立。
因此尽早建立对ＫＨＶ敏感的细胞系，并研究该细胞系的生物学特性，从而更有效的诊断和控制ＫＨＶ的流行。
４．３分子生物学诊断方法４．３．１ＰＣＲ法ＰＣＲ是目前较为精确检测ＫＨＶ感染的方法。
在过去的几年里，运用ＰＣＲ方法确定了ＫＨＶ的阳性病例，其中英国至少有１６例、德国４５例、荷兰１例、美国２例，而以色列报道的病例也应用此技术。
Ｇｉｌａｄ等用ＫＨＶ的１个保守片段，建立了可用来区别ＫＨＶ和鲤鱼疱疹病毒（ＨｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓｃｙｐｒｉｎｉＣＨＶ）和叉尾鱼回病毒（Ｃｈａｎｎｅｌｃａｔｆｉｓｈｖｉｒｕｓ，ＣＣＶ）的ＰＣＲ方法。
ＩｓｈｉｏｋａＴ等［８］运用ＰＣＲ技术对２００４年发生于日本的４３份ＫＨＶ可疑病例进行了分子流行病学调查，他们根据ＫＨＶ的ＤＮＡ聚合酶基因和主要囊膜蛋白基因的核苷酸序列设计引物，进行ＰＣＲ扩增，结果表明，检测阳性率为８６％（３７／４３），且两个基因的最小检测量分别为１００ｆｇ和１０００ｆｇ，这说明以主要囊膜蛋白基因为模板检测ＫＨＶ更加灵敏。
另外基因进化分析表明，日本的流行株和其他国家的毒株在基因进化上有很近。
ＢｅｒｃｏｖｉｅｒＨ等［９］基于ＫＨＶ的胸苷激酶基因建立了ＰＣＲ方法，研究表明，该方法能够区分ＫＨＶ与Ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓｃｙｐｒｉｎｉ（ＣＨＶ）ａｎｄｔｈｅｃｈａｎｎｅｌｃａｔｆｉｓｈｖｉｒｕｓ（ＣＣＶ），且较为敏感，最小检测线为１０ｆｇ，这与ＩｓｈｉｏｋａＴ等报道的不一致，可能与基于不同的基因所造成的。
刘荭等建立了ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ，并初步证实了２００２年发生于广东省某养殖场进口的锦鲤（Ｃｙｐｒｉｎｕｓｃａｒｐｉｏ）出现了暴发性疾病的病原为ＫＨＶ，从而说明通过进出口贸易及进口观赏锦鲤引进ＫＨＶ的极大风险，为我国有效预防和控制该病在我国的流行提供了技术支持。
乌日琴等［１０］通过对从组织中提取ＫＨＶＤＮＡ的方法和ＰＣＲ引物的探讨，建立了快速、灵敏和操作简便的ＫＨＶ的ＰＣＲ检测方法，并提高检测的准确率和简化操作程序。
但目前，检测ＫＨＶ的ＰＣＲ并没有预期的精确，该方法只能在已经表现出了疾病临床症状的鱼体内检测出ＫＨＶ，即只能从深度感染并表现出临床症状的鱼中检出，对看似健康的鱼却无法确定是否有病毒存在，也就是无法检测潜在的病毒，而且很有可能出现假阳性或假阴性。
因此进一步研究灵敏、特异、能检出潜在病毒感染的检测技术，是当务之急，势在必行。
４．３．２ＬＡＭＰ法ＬＡＭＰ（Ｌｏｏｐ－ＭｅｄｉａｔｅｄＩｓｏｔｈｅｒｍａｌＡｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ）法是一种新式恒温核酸扩增方法，采用能特异识别靶序列上６个位点的４条引物及一种具有链置换活性的ＤＮＡ聚合酶在６５℃左右进行核酸的指数级扩增，其扩增效率可达到１０－９￣１０－１０个拷贝数量级。
在扩增反应中产生茎环结构，保证引物与其杂交启动新一轮核酸合成，反应副产物焦磷酸镁沉淀可用肉眼观测到，或加入ＳＹＢＲＧｒｅｅｎＩ，根据颜色由黄到绿的变化，来判断是否发生扩增。
该扩增法具有简便、快速、准确、廉价、易检测等特点。
ＧｕｎｉｍａｌａｄｅｖｉＩ等［１１］基于胸苷激酶（ｔｈｙｍｉｄｉｎｅｋｉｎａｓｅ，ＴＫ）基因设计引物，建立了快速检测ＫＨＶ的ＬＡＭＰ法，其灵敏度与ＰＣＲ法相当。
ＳｏｌｉｍａｎＨ等［１２］设计３对引物建立了快速、灵敏、廉价的检测ＫＨＶ的ＬＡＭＰ法，该方法可在９０ｍｉｎ内判定结果，并在产物中加入ＳＹＢＲＧｒｅｅｎＩ，根据其颜色的变化来判定，从而更加直观。
另外该方法不需要特殊的仪器设备，适合现场诊断。
因此ＬＡＭＰ法表现出了良好的应用前景。
除了上述方法外还有ＥＬＩＳＡ方法、电镜技术及原位杂交技术等。
ＥＬＩＳＡ方法检测ＫＨＶ的背景值高，与ＣＣＶ和ＣＨＶ之间具有较高的交叉免疫反应。
另外，鱼类的血清抗体水平较低，不易检出，因此，ＥＬＩＳＡ的应用受到了一定的限制。
电镜技术及原位杂交技术等需要昂贵的仪器设备，不适宜推广应用。
因此，要进一步研究更加敏感、特异、易于基层推广应用的诊断方法，为更好的确诊和控制ＫＨＶ在全球的暴发流行提供技术手段，从而减少经济损失。
５综合防制措施防制病毒性传染病的有效方法是疫苗免疫，但目前尚无有效的ＫＨＶ疫苗，因此对该病的防制应采用综合防制措施加以控制和消灭。
５．１免疫预防ＰｅｒｅｌｂｅｒｇＡ等［１３］认为可以通过变温的方法或在细胞上连续传代获得不致病的突变株，作为疫苗株免疫锦鲤，但有效的ＫＨＶ疫苗还有待于进一步研究。
有很多方法可以启动锦鲤对ＫＨＶ的免疫应答，如将感染鱼饲养于２０℃￣２８℃间一段时期，然后降低或升高温度使病毒失活，类似于疫苗免疫，从而使机体获得免疫力，达到免疫的目的。
另外，可以通过基因工程的方法缺失或突变毒力基因，获得基因工程疫苗，还可以将ＫＨＶ保护性抗原重组于嗜单胞菌中，构建基因工程活载体疫苗。
５．２综合防制措施在目前缺乏有效的疫苗之前，采用积极有效的综合防制措施是必要的，如加强饲养管理，提高机体的免疫力；建立和健全疫情上报制度；加强口岸检疫，不从疫区引种等。
５．２．１加强饲养管理要采取以防为主的措施。
包括：控制和消灭病原体，切断传播途径；改善和优化养殖环境；提高养殖种群和养殖群体的免疫力等全面综合预防措施，防止病毒病的发生。
５．２．２建立隔离制度一旦发生传染性疾病，首先必须采取严格的隔离措施，以免疫情传播蔓延。
实施隔离，即对已发病的池塘或地区首先进行封锁，对池内的养殖动物不向其它池塘和地区转移，不排放池水。
工具未经消毒不在其它池使用。
与此同时，饲养人员要勤于清除发病死亡尸体，及时掩埋、销毁。
对发病鱼类及时做出诊断，确立对策指导疾病防治和控制疫情流行。
５．２．３加强口岸检疫，不从疫区引进苗种通过贸易进口和观赏鱼的交流可将ＫＨＶ传入我国，因此，要加强进出口口岸检疫，增强ＫＨＶ的防范意识，不从疫区引进苗种。
锦鲤疱疹病毒病的研究进展
锦鲤疱疹病毒病的研究进展作者：吕大成来源：《吉林农业》2011年第09期我国是水产养殖大国，近30年来水产业发展尤为迅速，目前水产养殖产量已经超过捕捞产量，约占养殖业的70%以上。
但是，随着水产养殖业的迅速发展，一些水产疾病的爆发也越来越频繁。
据统计，至2002年全国水产病害达到185种，直接造成经济损失141亿元。
目前，水生动物疾病种类繁多，且发病时间延长、传播速度快，危害程度大，发病后死亡率高。
更严重的是已经有所控制的严重疾病有返强趋势，近年来，在吉林、辽宁等地区的网箱养殖发展迅速。
随着淡水养殖业的迅速发展，各种疾病造成的损失也迅速上升。
尤其是近年来发生的锦鲤疱疹病毒病，给鲤鱼养殖业带来了巨大的经济损失。
2007年，我国质检总局要求停止从日本和印尼进口锦鲤和鲤鱼，将锦鲤疱疹病毒作为必检项目。
锦鲤疱疹病毒病是由锦鲤疱疹病毒（KHV）引起的锦鲤、鲤鱼及其普通变种发生鳃坏死和间质性肾炎的一种高致病性和高死亡率的疾病。
该病多发生在水温为18℃～28℃的春秋季节，但目前有低温下发病的趋势。
该病具有高度传染性，发病率和死亡率均高达80%～100%。
在锦鲤和鲤鱼的国际贸易中，由于缺乏相关的检疫制度，促使了该病在世界范围内暴发性流行，给锦鲤和鲤鱼养殖业带来了破坏性影响。
1.国内外流行现状自从锦鲤疱疹病毒病暴发以来，各个国家和地区几乎每年都发生。
2003年以来，我国东北地区的框镜鲤和普通鲤鱼发生暴发性疾病，死亡率高达80~90%，经PCR检测为KHV阳性；近两年来，KHV检测也均为阳性。
另外，有报道，近年来在菲律宾非法进入的锦鲤中检测到KHV。
2008年，中国台湾地区检测KHV阳性率为7%；据2010年鱼病统计结果显示，泰国也有KHV的发生。
锦鲤疱疹病毒病的全球性暴发，给锦鲤观赏业、鲤鱼养殖业以及国际贸易等造成了极大的经济损失，并引起了各国的高度重视，因此，各国家和地区应加强合作，严格控制KHV的发生与流行。
PCR方法快速检测锦鲤疱疹病毒基因
PCR方法快速检测锦鲤疱疹病毒基因乌日琴;刘中勇;黄宝春【期刊名称】《检验检疫学刊》【年(卷),期】2005(015)002【摘要】[目的] 建立锦鲤疱疹病毒的PCR检测方法,并提高检测的准确率和简化操作程序.[方法] 分别利用蛋白酶K-酚/氯仿抽提、异硫氰酸胍(GuScN)抽提法从组织样品中提取KHV病毒DNA,并设计两对特异性引物进行PCR检测.[结果] 异硫氰酸胍抽提法可以有效地去除样品中的影响因素,而蛋白酶K-酚/氯仿抽提法提取的DNA中不能检测到病毒的DNA片段.同时评价了两对特异性引物,选择灵敏性高和操作简便的引物PQDS和PQDV作为快速检测的引物.[结论] 本实验初步建立了快速、灵敏和操作简便的KHV病毒的PCR检测方法.【总页数】3页(P6-8)【作者】乌日琴;刘中勇;黄宝春【作者单位】广州白云机场出入境检验检疫局;广东出入境检验检疫局;广州白云机场出入境检验检疫局【正文语种】中文【中图分类】S9【相关文献】1.多重PCR方法快速检测牛乳中金黄色葡萄球菌及其肠毒素基因型 [J], 李荔枝;张军;胡萍;周国君;王晓静;朱建荣2.快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌mecA基因的PCR方法学评价 [J], 陈宇明;胡婷婷;倪洁;王蓓;蒋晓飞;关明;徐峰;刘维薇3.快速检测肺炎链球菌recA、ply及16S rRNA基因的多重降落PCR方法建立及应用 [J], 侯艳娇;罗欲承;邵晨;倪颖;邵世和4.多重PCR方法检测锦鲤疱疹病毒基因 [J], 乌日琴;陈芳;张艺宜;刘芸莉;刘中勇;林志雄5.利用PCR方法检测锦鲤疱疹病毒3个主要靶基因 [J], 孟庆峰;张琼;宋战昀;肖成蕊;刘阳;蔡阳;张艳;钱爱东;王伟利因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
锦鲤疱疹病毒流行病学及诊断防治技术研究进展
ＤＡ Ｎ 病毒 ，有囊膜 ，与其 同科的 Ｃ Ｖ Ｃ 之 间有 免疫 Ｈ 、Ｃ Ｖ 鱼苗腹胀 大 ， 呈球状 漂浮于水 面 ，下风 处居 多 ， 病鱼失去游泳能力 、肚皮朝上 ，肛 门红肿 ，鳃 完整但 苍 白色 。死亡 率 ３％ ０ 以上 ，用小手术剪解剖可见 ０ ￣４％ 肠 内充满许多溶血性小气泡 ，内脏模糊不清 与肠 溶在
的感 染谱较 小 ，仅感 染锦鲤 、鲤 鱼 以及 鲤鱼 的普 通
变种 。
３ 传 播 途 径 ．
Ｋ Ｖ自 ２ ０ 年 在 我 国 首 次 发 现 后 ， 得 以迅 速 传 Ｈ ０２
播 ，至今 已遍布全 国各地 。Ｋ Ｖ Ｈ 被怀 疑可 以藉 由被 污 染 的水 、 网具 、鱼 池 、鱼 缸 或 工 作 人 员 来携 带 传 播 ，但 是有关 此病 是如 何传播 ，以及是 否有其 他保 毒 者或 传播媒 介 皆没有 确切 的 了解 。并 且很 多遭 到
１ Ｋ Ｖ的 临床 症 状 ．Ｈ
起 ，腹腔 内有 淡红色液体 。
２ 防 治 方 法 ．
ห้องสมุดไป่ตู้
①排 去 １３ 水 ，加注 新水保持水质 清新 。②每 ／老 亩 平均 １ 米水深 ，用食 盐 ４ 千克 ，化水均匀 泼洒 。③ 每立 方米水体用 亮剑 （ 氟苯 尼考） ． ２ ＋大蒜素 ０ ３ ００ 克 ．
本研 究就 该病 毒 的流行及 检测 技术 等方 面作 一 概述 ， 以期为 国 内的流行病 学 调查及疾 病监 控提 供
参考 。
一
、
ＫＶ 性 Ｈ特
锦鲤 疱疹 病毒 ，又称 为鲤 鱼 间质性 肾 炎及鳃坏
死 性 病 毒 （ａ ｐ ｉ ｔｒ ｔｔ ａ ｎ ｐ ｒ ｔ Ｓ ａ ｄ Ｃ ｒ ｎ ｅ ｓ ｉ ｉ Ｉ ｅ ｈ ｉ ｉ ｎ ｇ １ ｅｒ ｓ Ｓ ｖ ｒ ｓ Ｃ Ｇ ） 该 病 毒 为 线 形 双 股 ｉ １ ｎ ｃｏ ｉ ｉｕ ， Ｎ Ｖ 。
锦鲤疱疹病毒病的研究进展
Ａｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ：Ｔｈ ｅ ａ ｃ ｈ ｉ ｅ ｖ ｅ ｍｅ ｎ ｔ ｓ ｏ ｆ ｅ ｔ ｉ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ， ｅ ｐ ｉ ｄ ｅ ｍｉ ｏ ｌ ｏ ｇ ｉ ｅ ａ ｌ ｃ ｈ ａ ｒ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｉ ｓ ｔ ｉ ｃ ｓ ，ｃ ｌ ｉ ｎｉ ｃ ａ ｌ ｓ ｙ ｍｐ ｔ ｏ ｍｓ ，ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｍｅ ｔ ｈｏ ｄ， ｔ ｈ ｅ ｐ ｒ ｅ ｖ ｅ ｎ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ ｃ ｏ ｎ ｔ ｒ ｏ ｌ ｔ ｅ ｃ ｈ ｎ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ｆ ｏ ｒ ｔ ｈ ｅ ｋ ｏ ｉ ｈ ｅ ｒ ｐｅ ｓ ｖ ｉ ｒ ｕｓ ｄ ｉ ｓ ｅ ａ ｓ ｅ ｗｅ ｒ ｅ ｓ ｕ ｍｍａ ｒ ｉ ｚ ｅ ｄ ｔ ｏ ｐ ｒ ｏ ｖ ｉ ｄ ｅ ａ ｒ ｅ ｆ ｅ ｒ ｅ ｎ ｃ ｅ ｆ ｏ ｒ ｒ ｅ ｓ ｅ ａ ｒ ｃ ｈ ａ ｎ ｄ ｐ ｒ ｅ ｖ ｅ ｎ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｋ ｏ ｉ ｈｅ ｒ ｐｅ ｓ ｖ ｉ ｒ ｕｓ ｄ ｉ ｓ ｅ ａ ｓ ｅ ． Ｋｅ ｙ ｗｏ ｒ ｄ ｓ：ｋ ｏ ｉ ｈｅ ｒ ｐｅ ｓ ｖ ｉ ｒ ｕ ｓ；ｍｏ ｌ ｅ ｃ ｕ ｌ ａ ｒ ｂ ｉ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ；ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ；ｐ ｒ ｅ ｖ ｅ ｎ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ ｃ ｏ ｎ ｔ ｒ ｏ ｌ ｔ ｅ ｃ ｈ ｎｏ ｌ ｏ ｇ ｙ
中 国兽 药 杂 志
２ ０ １ ５ ， ４ ９ （ ５ ） ： ６ ２ ～ ６ ５ ／ 袁海延 ， 等
锦鲤疱疹病毒病的诊断及防治措施
2018.4在的技术手段是可以定性、定量检测的，无论是养殖水体、底泥等环境中的病原，还是养殖动物组织中的病原。
我们需要定量监测，因为病原生物也是健康生态系统的一部分，简单定性发现了病原而据此判断其就是致病病原是不科学的，防治过程中也不能一味抱着将病原生物杀灭干净、以营造无病原的养殖环境，这不仅不现实，且这种无病原的养殖生境未必是健康的。
绒螯蟹肝胞虫早在2007年就被王文老师发现并鉴定，但河蟹养殖直到2015年才出现了“水瘪子”的暴发，且绒螯蟹肝胞虫在入侵英国的河蟹中也被检出，但迄今未报道“水瘪子”，这也能部分说明绒螯蟹微孢子虫的感染并不是“水瘪子”发生的元凶。
当然，本文发现的绒螯蟹肝胞虫与河蟹“水瘪子”不相关，离“水瘪子”的防控还有很大的距离，仅仅为“水瘪子”再次出现时的防控对策研究时排除了一个可能而已。
鲤鱼是品种最多、分布最广、养殖历史最悠久、年产量最高的淡水养殖鱼类之一，具有极高的经济价值。
由于锦鲤的进出口及鲤鱼的国际贸易，目前锦鲤疱疹病毒病已在世界范围内传播，严重威胁鲤和锦鲤产业发展。
我国养鲤业同样深受该病困扰。
本文对锦鲤疱疹病毒的病原、流行病学、发病机制、诊断方法及防治措施进行整理，以期为有效鉴定锦鲤疱疹病毒病并及时控制治疗提供一定的指导方法。
一、锦鲤疱疹病毒(KHV)简要介绍1.病原学锦鲤疱疹病毒病(Koi herpesvi-rus disease，KHVD)是由锦鲤疱疹病毒(Koi her-pesvirus ，KHV，又称鲤疱疹病毒3型CyHV-3)引起的一种恶性传染病，死亡率高达80%～100%。
KHV 为线形双股DNA 病毒，分子量大小为295kb，有囊膜，与其同科的斑点叉尾 病毒(CCV)、鲤鱼痘疱疹病毒(CHV)之间有免疫交叉反应。
已经确定了来自不同地理位置的四种CyHV-3毒株的完整DNA 序列：以色列(CyHV-3I)、日本(CyHV-3J)、美国(CyHV-3U)和中国(CyHV-3GZ11)四种基因型。
鲤疱疹病毒1型(CyHV-1)
鲤
病原名称：鲤疱疹病毒1型（CyHV-1）
感染对象：主要危害鲤、鲫及圆腹雅罗鱼
发病症状：发病初期，体表出现乳白色小斑点，覆盖着很薄的一屋白色粘液。
随着病情的发展，白色斑点的数目和大小逐渐增加和扩大，以致蔓延全身。
由于患病部位的表皮增厚而形成石蜡状的＂增生物＂，这些＂增生物＂增长到一定大小后，可自动脱落，接着在原位置重新出现新的＂增生物＂，增生物可高出体表1-5毫米，其表面原为光滑，后来变为粗糙，质地也由柔软变软骨状致密续结缔组织，内有一些微血管，其成分主要是胶原纤维。
流行病学：此病在西欧十六世纪就有记载，发病的主要是二龄以上的鲤鱼，发病率为１０％，水温低时（10—18度）最易发生，发病期间，同池的草，青，鲢，鳙等通常不会感染。
危害性：蜡质增生物数量不多时，对病鱼特别是大鱼，没有多大危害；但如增生物占鱼体表面积的大部分，就严重地影响鱼的正常生长发育，使鱼体消瘦，游动迟钝，甚至发生死亡。
可检样品：鲤、鲫及圆腹雅罗鱼
样品要求：有临床症状的鱼，如是体长小于等于 4c m 的鱼苗取整条鱼，体长 4c m-6c m 的鱼苗取内脏(包括肾)；体长大于 6 cm 的鱼
则取脑、肝、肾、脾。
而对无症状的鱼要取肾、脾、鳃和脑组织，成熟雌鱼还需取卵巢液，鱼卵则取卵壳
建议检测节点：投苗前、恶劣天气后或有明显症状时、无症状建议定期监测。
锦鲤疱疹病毒病的流行特点、诊断及防治的研究进展
验及消杀处理，不可擅自用药[21]或转移运输。对病
毒进行攻毒，发现胆汁酸不仅能促进其生长，还
鱼的来源和销售情况进行溯源跟踪，开展流行病
能提高异育银鲫的抗病能力。随着研究的逐渐深
学调查，及早发现并切断传播路径，降低损失。
入，相信在不久的将来会有针对疱疹病毒病的抗
4.2
穿心莲的饲料的异育银鲫死亡率仅为 15%；何杰
毒饲料问世。
3.2
无害化处理
捞出死鱼和病危鱼，用生石灰处理后深埋。
4.3
加强养殖人员培训
目前，我国水产养殖行业多以家庭作坊式小
隔离消毒
锦鲤疱疹病毒还可存在于病鱼的分泌物中在
规模饲养为主，存在文化水平不高、饲养随意、
水中传播[22]，应注意对染病鱼池的隔离，不得将水外
对设施设备的投入较低等特点，很多养殖户在养
国是渔业大国，据 2020 年中国渔业统计年鉴数据
检测鲤浮肿病毒和锦鲤疱疹病毒的三重 PCR 检测
2019 年全国淡水养殖总产量的 9.6%，因此对锦鲤
便捷地对该疫病进行确诊。
显示，2019 年我国鲤鱼养殖总产量约 289 万 t，占
方法，相信随着检测技术的进步，可以更快速、更
疱疹病毒病的防治研究非常重要，本文对目前研究
Abstract: Koi herpesvirus disease is an epidemic disease that is easy to invade Cyprinidae fish. It has the
characteristics of strong infectivity, rapid onset and high mortality. It was first found in the 1990s. At present, it has
鲤疱疹病毒(cyhv-3)及抗病选育研究现状与进展
收稿日期：２０１９－０１－０４基金项目：本研究由所级基本业务费（ＨＳＹ２０１７１Ｚ）；国家大宗淡水鱼类产业技术体系鲤种质资源与品种改良（ＣＡＲＳ－４５－０６）；农业部财政专项物种资源保护（２１３０１３５）．作者简介：孙佳鑫（１９９３－），女，硕士研究生，从事遗传育种与生物技术研究．Ｅ－ｍａｉｌ：ｓｊｘｙｕｚｕ＠１６３．ｃｏｍ通信作者：贾智英（１９７６－），女，研究员，从事鱼类遗传学和新品种选育研究．Ｅ－ｍａｉｌ：Ｚｙｊｉａ２０１０＠１６３．ｃｏｍ文章编号：１００５－３８３２（２０１９）０６－００６９－０６Vol.32，No.6Dec.2019第３２卷第６期２０１９年１２月水产学杂志CHINESE JOURNAL OF FISHERIES 鲤疱疹病毒（ＣｙＨＶ－３）病是由锦鲤疱疹病毒（ＫｏｉＨｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓ，ＫＨＶ）引起的鲤Cyprinus carpio 和锦鲤传染并致死性病毒病。
锦鲤疱疹病毒又称鲤疱疹病毒Ⅲ型（Ｃｙｐｒｉｎｉｄｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓ３，ＣｙＨＶ－３），也有文献称为鲤间质性肾炎及鳃坏死病毒（Ｃａｒｐｉｎｔｅｒ－ｓｔｉｔｉａｌｎｅｐｈｒｉｔｉｓａｎｄｇｉｌｌｎｅｃｒｏｓｉｓｖｉｒｕｓ，ＣＮＧＶ）。
ＫＨＶ主要感染锦鲤和普通鲤及其变种，死亡率高达７５％￣９５％［１］，是威胁鲤和锦鲤养殖业安全的一种病毒性疾病，引起了世界动物卫生组织（ＯＩＥ）的高度重视，于２００６年将锦鲤疱疹病毒病（ＫＨＶＤ）列为必须报告的疾病［２］。
２００１年该疾病在香港首次爆发，被中国农业部列在《一、二、三类动物疫病病种名录》中的二类疫病［３］。
１病原学鲤疱疹病毒Ⅲ型（ＣｙＨＶ－３）与ＣｙＨＶ－１和Ｃｙ－ＨＶ－２同属于疱疹病毒目中的疱疹病毒科［４］。
２００９年国际病毒分类委员会（ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＣｏｍｍｉｔｔｅｅｏｎ鲤疱疹病毒（ＣｙＨＶ－３）及抗病选育研究现状与进展孙佳鑫１，２，石连玉１，贾智英１（１．中国水产科学研究院黑龙江水产研究所，黑龙江哈尔滨１５００７０；２．上海海洋大学水产与生命学院，上海２０１３０６）摘要：鲤疱疹病毒（ＣｙＨＶ－３）是高度传染性锦鲤疱疹病毒病的病原，最早上世纪发现于德国以来，陆续在澳洲、英国、美国、日本、南非、欧洲大陆等国家以及地区流行性爆发，持续流行感染，给鲤Cyprinus carpio 及锦鲤养殖业造成了无法估量的经济损失。
锦鲤疱疹病毒感染鲤鱼的动态病理损伤及病原组织分布
锦鲤疱疹病毒感染鲤鱼的动态病理损伤及病原组织分布
锦鲤疱疹病毒感染鲤鱼的动态病理损伤及病原组织分布*
何汶璐1#，李根1#，康慧敏1，何嘉乐1，杨壮志2，阳瑞雪1，汪开毓1，耿毅1，欧阳萍1 **
【摘要】摘要：【⽬的】研究锦鲤疱疹病毒(CyHV-3)感染鲤鱼的侵染规律与动态病理损伤，为CyHV-3致病机理的研究奠定实验基础，同时为有效防控锦鲤疱疹病毒病提供参考。
【⽅法】采⽤浸泡法对鲤鱼进⾏⼈⼯感染试验，于不同时间点剖检采样，进⾏动态病理学观察和荧光定量PCR检测，选择具有代表性的外部(鳃)和内部器官(肾脏)进⾏动态病理学观察。
【结果】鳃⼩⽚呼吸上⽪细胞增⽣严重并伴有⼤量炎症细胞浸润，肾脏主要表现为间质性肾炎，肾⼩管上⽪细胞变性坏死。
试验鱼在感染前期病毒含量最⾼的是鳃组织，肠道中未检测到病毒，随着感染时间的延长，各组织内的病毒含量逐步增加。
病毒感染10 d 后，鳃、肾脏以及脑组织的病毒含量达到最⾼值，随后病毒量保持稳定。
脾脏、肝脏和肠道中病毒含量的最⾼值出现在感染第14天。
【结论】CyHV-3在鲤鱼体内先⼊侵鳃组织，随后到达肾脏、脾脏等全⾝各组织器官中。
【期刊名称】云南农业⼤学学报
【年(卷),期】2018(033)005
【总页数】7
【关键词】锦鲤疱疹病毒；鲤鱼；病理损伤；病原组织分布
修回⽇期：2018-05-06 ⽹络出版时间：2018-10-13
*基⾦项⽬：中国博⼠后科学基⾦（2015M582563）；教育部留学回国⼈员科研启动基⾦[教外司留（2015）311号]。
⽹络出版地址：http：///doc/5917835637.html
/10.12101/j.issn.1004-。
鲤鱼疱疹病毒病的诊断及防控
３ ） ，也称 为锦 鲤疱 疹病毒 （ Ｋ Ｈ Ｖ ） 。近 几年来 中 国养 殖
鲤 鱼 的锦 鲤 疱 疹 病 毒 病 危 害 十 分 严 重 ，全 国 主 要 鲤 鱼
养殖地 区都有流行 ，从池塘养殖 、网箱养殖 到小型湖
泊养殖等 各种养殖模式发病率 、死亡 率都很高 。该病 每年有 两个主要 的发病阶段 ，一 是春 夏交接期 、水温 初 步上升 的时候 ，大约 １ 个月 ；二是夏秋转 换期 、水 温 逐步下 降 时。每 当夏初 雨水 多、长期低 温 的年份 ， 水温 长期处在鱼类发病适温 ，发病 更严重 ，发病水温
二 、 症 状
毒 ＋板蓝根等 ，尤 以季节转换 时需加 强添 加。
３ ． 生 预 防 不在发病严重地 区购 买鱼种；发病 期谨慎注水 ，有条件 的尽量选择机井 水，不注入容 易
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增多 ，眼睛及头 部上 方凹陷 ，鳃盖 出现 明显条 纹，鳃 丝末端腐烂 。解 剖发现 病鱼见脾脏肿大 ，发 黑；肾脏 肿大 ，像含水 ；肝脏颜 色鲜艳 ，有 出血或是淤 血 。有
一
部分发病鱼肠 道 内壁呈均匀 的大面积 出血 ，肠 内有
疱疹病毒病是普通鲤鱼和 观赏锦鲤经常暴发 的一
发新 型基因疫苗 以期 能取得 突破 性进展 ，从而使得该
病 的预防得 到有效解决 。 ２ ． 药物预 防 药物 预 防 主要 是遵 循 定 期投 喂 药 饵 ，确保鲤鱼体质 强壮 、活力强 、免疫力 强等 。主要 包括定期投 喂免疫 增强剂＋保肝利胆 ＋外用碘制 剂消
大 。２ ０ １ ５ 年６ 月１ ０日其 中一家 养殖 户 发现鲤 鱼 开始 出现 死亡 ，第一天死亡几十尾 ，没有引起养殖户 的足 够 重 视 ，６ 月１ １ 日其他 几 家 也 陆续 出现 死 亡 ，６月 １ ３ —１ ６日达到高峰 ， 日死亡约 １ ５ ０ ０ 尾。