ABO血型鉴定的方法步骤与注意事项
ABO血型鉴定实验原理与方法步骤
ABO血型鉴定实验原理与方法步骤【实验目的】1．理解间接鉴定血型的原理。
2．掌握人体ABO血型鉴定的方法。
【实验原理】血型是指红细胞膜上特异性抗原的类型，通常红细胞血型即为血型。
将血型不相容的两个人的血液滴于玻片上红细胞将聚集成簇，这种现象称为凝集。
红细胞凝集的机制是抗原－抗体反应，即位于红细胞膜上的抗原与相应血清中的抗体（凝集素）发生免疫反应。
在ABO 血型系统中，血型鉴定就是将检测血液分别加入已知含有A或B凝集素的标准血液中，观察凝集现象是否发生，用以判断待检血液红细胞上含何种凝集原，由此确定待检血液的血型。
【实验对象】人。
【实验器材与药品】采血针，玻片，玻棒，棉球，消毒注射器，小试管，记号笔；标准A、B血清，生理盐水，75％酒精，碘酒。
【实验方法和步骤】1. 玻片法：用记号笔在玻片两端分别标上A、B，并各滴加一滴相应的已知标准血清。
用75％酒精棉球消毒耳垂或指端，以消毒针刺破皮肤，玻棒采血后分别滴于玻片A、B标准血清中。
2～5分钟后观察有无凝集现象，20～30分钟后再根据有无凝集现象判定血型（图9-1）。
2. 试管法：先用上述方法采血，滴加1～2滴血液于盛有1ml生理盐水的小试管中混匀，制成红细胞悬液（浓度约5％）。
然后取小试管两支，分别标明A、B字样。
各加入标准血清与受检红细胞悬液各1～2滴，混匀后低速离心1min（1000rpm），取出试管后轻弹管底，使沉淀物被弹起，在良好的光线下观察结果。
若有沉淀物成团飘起，表示发生凝集现象；若沉淀之物呈烟雾状逐渐上升，最后试管内液体恢复红细胞悬液状态，则表示无凝集现象。
【注意事项】1. 试管法较玻片法结果准确。
2. 若结果判断困难时，可借助显微镜。
3. 用玻璃棒蘸血时，都是只蘸一次，避免交叉污染。
4. 红细胞悬液及血清必须新鲜，加用标准血清的试管不能交叉使用，否则可能出现假阳性结果。
abo血型系统定型原则和实验方法
abo血型系统定型原则和实验方法
ABO血型系统定型原则是利用凝集试验技术，通过正定型（红细胞定型）和反定型（血清定型）两组试验来准确鉴定ABO血型。
具体步骤如下：
1. 正定型：取75×12mm干净小试管2支，分别标记抗A、抗B。
按标记滴加抗A、抗B试剂血清1滴。
再各滴加3-5%待检者红细胞悬液1滴，混匀。
2. 反定型：取75×12mm干净小试管3支，分别标记A细胞、B细胞、O 细胞。
3管各滴加待检者血清1滴。
按标记分别滴加混匀的A型、B型、O 型试剂红细胞1滴，混匀。
5管同时2档（3400转/分-15秒）离心。
3. 轻轻摇动试管，观察反应结果。
对于结果解释，如果被检红细胞膜上有与该试剂血清抗体相对应的抗原，或者被检血清中有与该试剂红细胞抗原相对应的抗体，则为阳性，即凝集为阳性。
如果不凝集，则为阴性。
以上是ABO血型系统定型原则和实验方法，仅供参考，建议查阅专业书籍或咨询专业人士获取更准确的信息。
ABO血型的鉴定
实验ABO血型的鉴定[实验目的] 学会用玻片法鉴定ABO血型，加深理解血型分型的依据。
[实验原理]血型是根据存在于红细胞膜外表面的特异性抗原确定的，这种抗原由遗传基因决定。
血清中的抗体可与红细胞膜上的不同抗原结合，产生凝集反应，最后发生红细胞的溶解。
A凝聚原+ A 凝集素→红细胞凝聚B凝聚原+ B 凝集素→红细胞凝聚ABO血型系统根据受试者红细胞上A、B凝集原的有无和种类，将血型分为A, B, O及AB型。
[实验用品]标准抗A和抗B血清一套，玻片、玻璃蜡笔、碘伏消毒液、牙签、采血针、显微镜等。
[实验方法]1.标记玻片：取干净玻片一张，擦干，不能留有水分，以防溶血；用玻璃蜡笔分别在两端表明A、B字样。
2.滴加血请：在载玻片A、B两端分别滴加标准抗A血清、抗B血清各一滴。
注意切不可混淆。
3.消毒采血：用棉签蘸取碘伏消毒液，消毒左手无名指指腹皮肤。
用消毒采血针垂直刺入消毒处皮肤采血1—2滴，将血液分别滴入标准抗A、抗B血清中，分别用牙签将血液与血清混匀，注意切不可用一根牙签在两侧血清中搅拌。
4.观察反应：静置10~15分钟后用肉眼观察有无凝集现象，肉眼不易分辨时用低倍镜观察。
5.结果判断：根据有无凝集现象判定血型。
（1）只在抗A血清中有凝集反应，则血型为A型；（2）只在抗B血清中有凝集反应，则血型为B型；（3）在抗A及抗B血清中均有凝集反应，则血型为AB型；（4）在抗A及抗B血清中均无凝集反应，则血型为O型。
6.[注意事项]（1）.采血针和皮肤必须严格消毒。
（2）滴加两种标准血清切不可混淆, 移动玻片时切勿将两种标准血清相混。
切不可用一根牙签在两侧血清中搅拌。
（3）注意区别凝集现象，肉眼分辨不清时使用低倍镜进行辨别。
7.实验记录：（1）实验现象：（2）实验结果：。
ABO血型及Rh血型鉴定-卡式法(审)
ABO血型及Rh血型鉴定操作规范（卡式法）
1、用抗凝（EDTA—K2）血，取40ul放入2ml生理盐水中，
配制成10%红细胞悬液，混匀备用。
2、取血型鉴定卡，撕开封条，编号。
3、分别取10ul 10%红细胞悬液，加入A、B和Rh孔。
注
意加红细胞悬液时不能直接加到孔内有试剂的液面。
4、将加好红细胞悬液的血型卡平衡放入专用离心机中，以
转/分的速度，离心5分钟。
5、5分钟后离心机提示音响，打开离心机，取出观察结果。
6、结果观察：
（1）A型：A试剂孔红细胞在试剂液面上端（凝集），B试剂孔红细胞沉降到试剂液面底端（不凝集）；
（2）B型：B试剂孔红细胞在试剂液面上端（凝集），A试剂孔红细胞沉降到试剂液面底端（不凝集）；
（3）AB型：A试剂孔红细胞在试剂液面上端（凝集），B试剂孔红细胞在试剂液面上端（凝集）；
（4）O型：试剂孔红细胞沉降到试剂液面底端（不凝集），B 试剂孔红细胞沉降到试剂液面底端（不凝集）；
（5）Rh阴性：Rh试剂孔位红细胞沉降到液面底端（不凝集）；
（6）Rh阳性：Rh试剂孔位红细胞在试剂液面上端（凝集）。
注意：观察结果时，要反复查对结果，以免报告错误。
7、打印结果，报告。
实训一 ABO血型的鉴定
1 实训一 ABO 血型的鉴定
【实验目的】学会用玻片法测定ABO 血型,根据测定结果确定血型。
【实验原理】用已知的凝集素（抗体）测定未知的凝集原（抗原）
【实验用品】抗A 诊断血清(从B 型血的血清中获得)、抗B 诊断血清(从A 型血的血清中获得)、双凹玻片、采血针、竹签、75％酒精棉球、干棉球、敷料罐、敷料镊、
低倍显微镜。
【实验步骤】
1．取干净双凹玻片一块，用玻璃蜡笔在两端分别标明A 、B 字样。
2．用75％酒精棉球消毒指端后，以消毒的采血
针刺破皮肤，将少许血置于双凹玻片中。
3．在A 侧凹内滴加抗A 诊断血清1滴，B 侧凹内
滴加抗B 诊断血清1滴，注意不可混淆。
3．取二支干净竹签，轻搅混匀，注意不可混淆。
4．放置10～15rnin 后用肉眼观察有无凝集现象，
肉眼不易分辨者用低倍显微镜观察。
5.根据图1有无凝集现象判定血型。
抗B 诊断血清侧 抗A 诊断血清侧
【注意事项】
1．采血针和采血时必须严格消毒，以防感染。
2．采血时勿将血液直接滴入双凹玻片的诊断血清
中，造成过浓不能检测。
3. 用竹签沾取血液注意适量，避免红细胞与诊断血清混悬液过浓或过稀，不易检测。
4．取血和作混匀用的竹签要专用，搅动血清时切不可使抗A 、抗B 两种血清发生混合。
5．注意区别凝集现象与红细胞叠连。
发生红细胞凝集时，肉眼观察呈朱红色颗粒，且液体变得清亮。
图1 ABO 血型鉴定抗A 标准血清抗B 标准血清B 型A 型AB 型O 型B A A A A B B B。
abo血型鉴定实验内容
abo血型鉴定实验内容
ABO血型鉴定是一种常见的实验方法，用于确定一个人的血型属于A型、B型、AB型还是O型。
该实验的内容主要包括以下几个步骤：
1. 血液采集：在实验开始前，需要使用适当的采血器具采集被测试
者的血液样本。
合理的消毒措施和采样技巧是确保实验结果准确性的
重要因素。
2. 血清和抗血清制备：在实验过程中，需要制备出几种关键的试剂，包括血清和抗血清。
血清是指经过离心等处理后分离出的含有抗体的
液体，而抗血清则是指针对某特定抗原产生的抗体。
3. 血型鉴定反应：将被测血液样本与A、B、AB、O型抗血清分别
混合，进行凝集反应观察。
如果血液样本中存在与抗血清相应的抗原（例如A型抗原与抗A血清），则会发生凝集反应，表明被测血液样
本中存在与该抗血清相对应的血型。
4. 结果判读：根据实验中的凝集反应结果，结合正反对照的观察，
可以判断被测血液样本的血型。
比如，如果被测血液样本与A型抗血
清和O型抗血清发生凝集反应，但与B型抗血清不发生凝集反应，则
可以判定该血液样本为A型血。
需要注意的是，在进行ABO血型鉴定实验时，实验操作人员务必
严格遵守实验室安全指导，并正确运用各种实验仪器和试剂。
同时，
实验者需要准确记录实验过程和结果，以便分析和总结实验数据。
ABO血型鉴定实验是一种简单而有效的方法，可用于临床血型鉴定、输血配型等实践中。
通过这种实验方法，我们能够更好地了解个体的
血型特征，为医学诊治以及研究提供有价值的信息。
abo血型鉴定注意事项
abo血型鉴定注意事项
ABO血型鉴定是一种重要的血型试验，以下是注意事项：
1.在进行ABO血型鉴定前，需要进行严格的洗手和消毒，以避免各种污染和交叉感染。
2.鉴定前需要准备好必要的实验室物品和试剂，保持其质量和洁净度。
3.抽取静脉血时，需要选择合适的采集部位和采集器具，避免对患者造成不必要的伤害或感染。
4.在进行ABO血型鉴定时，应严格按照试剂的使用方法和标准操作步骤进行操作，确保准确可靠。
5.在解读ABO血型鉴定结果时，需要仔细核对数据和记录，排除数据错误或录入失误的可能性。
6.对于特殊情况或不确定的结果，应及时与其他医务人员和专家进行交流和讨论，以避免对诊疗和治疗造成影响。
7.鉴定结果应妥善保存和管理，保护患者的隐私和数据安全。
实验指导ABO血型鉴定实验
实验指导ABO血型鉴定实验【实验目的】观察红细胞凝集现象。
学习ABO血型鉴定方法，掌握血型鉴定原理。
【实验原理】ABO血型是根据红细胞表面存在的凝集原决定的。
存在A凝集原的称为A血型，存在B凝集原的称为B血型。
而血清中还存在凝集素。
当A凝集原与抗A凝集素相遇或B 凝集原与抗B凝集素相遇时，会发生红细胞凝集反应。
一般A型标准血清中含有抗B凝集素，B型标准血清中含有抗A凝集素。
因此可以用标准血清申的凝集素与被测者红细胞反应。
以确定其血型。
【实验对象】正常人【实验药品】A型B型标准血清【仪器与器械】双凹玻片、采血针、竹签、75％酒精棉球、干棉球、玻璃蜡笔（记号笔）、尖头滴管、显微镜【实验方法与步骤】1．ABO血型的鉴定（1）取双凹玻片一块，在两端分别标上A和B，中央标记受试者的号码。
（2）在A端和B端的凹面中分别滴上相应标准血清少许。
（3）75％酒精棉球消毒环指指端，用采血针刺破指端，用消毒后的尖头滴管吸取少量血（也可用红细胞悬浮液，见下述），分别与A端和B端凹面中的标推血清混合，放置1～2 min后，能肉眼观察有无凝血现象，肉眼不易分辨的用显微镜观察。
（4）根据凝集现象的有无判断血型（图6.9－l）。
【注意事项】1．指端、采血针和尖头滴管务必做好消毒准备。
做到一人一针，不能混用。
使用过的物品（包括竹签）均应放人污物桶，不得再到采血部位采血。
2．经消毒部位自然风干后再采血，血液容易聚集成滴，便于取血。
取血不宜过少，以免影响观察。
3．采血后要迅速与标准血清混匀以防血液凝固。
【实验结果】报告你的血型。
【思考题】l．ABO血型分类标准是什么？请报告自己的血型。
2．除ABO血型外还有什么血型系统？分类标准是什么？3．为什么在交叉配血试验时，如果主侧发生凝集反应，不论次侧配血如何都不能输血？。
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ABO血型鉴定的方法步骤与注意事项
一. 原理
根据红细胞上有或无 A抗原或B抗原，将血型分为A型、B型、
AB型及O型4种。
可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABC血型。
所谓正定型，是用已知抗一 A和抗一B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或B抗原；所谓反定型，是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗一 A或抗一B。
二. 试剂和材料
1.抗一A（B型血）、抗一B（A型血）及抗一A十B（O型血）分型血清（制备方法见本节附注）
2.5%A B及O型试剂红细胞盐水悬液，制备方法见本节附注；
3.受检者血清；
4.受检者 5%红细胞盐水悬液，制备方法见本节附注。
三. 方法
1 .试管法
（1）取洁净小试管3支，分别标明抗一A、抗一B和抗一A十B,用滴管分别加抗一A抗一B和抗一A十Bo分型血清各I滴于试管底部，再以滴管分别加入受检者 5%红细胞盐水悬液 1 滴，混和。
（2）另取洁净小试管3支，分别标明A、B和O细胞。
用滴管分别加入受检者血清I滴于试管底部，再分别以滴管加入A B和O型5% 试剂红细胞悬液I滴，混和。
（3）立即以 1000r ／min 离心 1mino
(4)将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以内眼观察有无凝集(或溶血)现象。
如内眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。
(5)观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，此有助于A、
B亚型、类B或cisAB的发现。
(6)凝集强度判断标准
2.玻片法
(1)取清洁玻片1张(或白瓷板1块)，用蜡笔划成方格，标明抗
-A、抗-B和抗-A十B,分别用滴管滴加抗-A、抗-B和抗-A十B分型血清I滴于标明的方格内，再各加受检者2%红细胞悬液1滴，混和。
(2)另取洁净玻片一张(或白瓷板1块)，用蜡笔划成方格，标明 A 细胞、B细胞和0细胞，用滴管各加受检者血清1滴，再分别用滴管
滴加A、B和O型试剂红细胞悬液1滴
（3）将玻片（或白瓷板）不断轻轻转动，使血清与细胞充分混匀，连续约15min,以肉眼观察有无凝集（或溶血）反应。
如以玻片作试验时, 也可用低倍镜观察结果。
四. ［结果判定］
ABO血型正反定型结果
注；“十”为凝集；“-”为不凝集。
五•附注及注意事项
1.分型血清质量性能符合要求，用毕后应放置冰箱保存，以免细菌污染。
2.试剂红细胞以3个健康者同型新鲜红细胞混和，用生理盐水洗涤1次，以除却存在于血清中的抗体及可溶性抗原。
3.试管、滴管和玻片必须清洁干燥，防止溶血。
4.操作方法应按规定，一般应先加血清，然后再加红细胞悬液，以便容易核实是否漏加血清
5.按理IgM抗-A和抗-B与相应红细胞的反应温度以4C为最强，但为了防止冷凝集现象的干扰，一般仍在室温（20 —24C）内进行试验，37 C可使反应减弱。
6.离心时间不宜过长或过短，速度不宜过快或过慢，以防假阳性或假阴性结果。
7.观察时应注意红细胞呈特异性凝集、继发性凝固以及缗钱状排列的区别。
8.判断结果后应仔细核对、记录，避免笔误。
正反定型结果不一致的原因
六. 常见有技术性问题或红细胞和血清本身的问题
1.分型血清效价太低、亲和力不强。
如抗— A 血清效价不高，可将A亚型误定为O型，AB型误定为B型。
2.红细胞悬液过浓或过淡，抗原抗体比例不适当，使反应不明显，误判为阴性反应。
3.受检者红细胞上抗原位点过少（如亚型）或抗原性减弱（见于白血病或恶性肿瘤：以及类B或cisAB等。
4.受检者血清中蛋白紊乱（高球蛋白血症），或实验时温度过高，常引起红细胞呈缗钱状排列。
5.受检者血清中缺乏应有的抗-A及或抗一B抗体，如丙种球蛋白缺乏症。
6.各种原因引起的红细胞溶解，误判为不凝集。
部分溶血时，可溶性血型物质中和了相应的抗体 .
7．由细菌污染或遗传因素引起多凝集或全凝集往往是正反定型不符的原因。
8．血清中有意外抗体，如自身抗 -I ，常引起干扰。
9．老年人血清中抗体水平大幅度下降正反定型结果不一致的解决办法如发现ABO正反定型结果不一致，先要重复作试验1次。
严格执行操作规程，使用质量合格的试剂以及细心观察和解释试验结果，就可解决明显的问题，对一些疑难问题月必须进一步研究。
[ 检查步骤 ]
1．另从受检者采取 l 份新鲜血液标本这样可以纠正因污染或搞错样本造成的不符合。
2 .将红细胞洗涤数次，配成5%盐水细胞悬液，用抗一A、抗一B 抗一Al，抗一A十B及抗H做试验可以得到其它有用的信息。
3.对受检红细胞作直接抗球蛋白试验，如结果呈阳性，表示红细胞已被抗体致敏。
4 .用Al、Az、B、O红细胞及自身红细胞检查受检血清。
如果怀疑是抗一I，用O型（或ABO相合的）脐血红细胞检查。
5.如果试验结果未见凝集，应将细胞及血清试验至少在室温和 4C 放置30min,用显微镜检查核实。
6.如疑为 A 抗原或 B 抗原减弱，则可将受检红细胞与抗— A 或抗—B 血清作吸收及放散试验以及受检者唾液作A B、H血型物质测定。
后者只对80% HAB分泌型的人有用。
7.如试验结果红细胞呈绢钱状排列,加等渗盐水 l 滴,混和,往往可使绢钱现象消失。
应注意不应先加盐水 l 滴于受检者血清中而后和红细胞作试验，以免使血清中抗体被稀释。
8如受检者为A型血而疑为有类B抗原时，可用下列方法进行鉴
别：
(1)观察细胞与抗一A及抗一B的凝集强度，与抗一A的反应要比与抗一B的反应强。
这种区别用玻片法作试验更为明显。
(2)用受检者红细胞与自身血清作试验，血清中的抗— B 不凝集自身红细胞上的类B抗原。
(3)检查唾液中是否有A、B物质，如果是分泌型，可检出A物质而无 B 物质。
(4)核对患者的诊断，类 B 抗原的形成与结肠癌、直肠癌、革兰阴性杆菌感染有关。
9．如发现多凝集现象，应考虑由遗传产生的Cad 抗原活性；被细
菌酶激活的T或丁K受体；或产生机制不太明了的丁 n受体所引起。
多凝集红细胞具有以下特点：
(1)能被人和许多家兔的血清凝集。
(2)能与大多数成年人的血清凝集，不管有无相应的同种抗体。
(3)不被脐带血清凝集。
(4)通常不与自身的血清凝集。