ABO血型鉴定操作规程
检验科ABO及RH血型标准操作规程
检验科ABO及RH血型标准操作规程1.【目的】确保红细胞ABO及RH(D)血型鉴定试验的准确性，防止误定型，特制定本规程。
2.【职责】2.1实验室工作人员均应熟知并严格遵守本SOP，室负责人监督落实。
2.2本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：室负责人、科主任。
3.【样本类型及实验前准备】3.1样本类型：EDTA -K2抗凝管采集血液2ml (标本应新鲜，注意避免污染)3.2患者准备：患者处于安静状态精神、体力、情绪等因素的影响较小。
3.3容器添加剂类型：EDTA -K2抗凝管3.4实验试剂：1.ABO： 1. 1抗A、抗B和抗AB血型定型试剂。
1.25%A、B及O型试剂红细胞悬液。
1.3受检者血清。
1.4受检者5%红细胞盐水悬液。
2.RH 2.1IgG型抗D标准血清。
2.25%D阳性红细胞生理悬液。
2.3 5%D阴性红细胞生理悬液。
4.【测定原理】ABO血型鉴定：生理盐水凝集法一试管法常用盐水凝集法检测红细胞上存在的血型抗原，以及血清中存在的血型抗体，依据抗原抗体存在的情况判定血型。
常用的方法有：①正向定型：用已知抗体的标准血清检查红细胞上未知的抗原。
②反向定型：用已知血型的标准红细胞检查血清中的未知抗体。
结果判定：凡红细胞出现凝集者为阳性，呈散在游离状态为阴性。
RH鉴定：红细胞RH表型可用特殊的具有抗D、C、c、E和e抗血清来鉴定。
虽然Rh血型系不能在盐水介不能在盐水介质中与红统中有许多种抗原，但常规只用抗D血清检查有无D抗原。
Rh(D)抗体属于IgG类，细胞发生凝集，因此必须采用低离子强度盐水试验或酶介质法。
5.【操作步骤】ABO鉴定步骤：1.试管架每一竖排准备2只试管，分别为抗A，抗B试管。
2.标本接收后进行标号，对应相应的试管标号。
3.分别加入A，B型标准血清和受试者的红细胞悬液各两滴，混匀后离心2分钟。
4.取出试管后用手指轻弹试管底，若沉淀物成团漂起，表示发生凝聚现象；若试管内沉淀物恢复悬液状态，表示无凝集现象。
ABO血型鉴定操作规程
ABO血型鉴定操作规程ABO血型鉴定是一种常见的血液学检验方法，用于确定个体的血型类型。
ABO血型鉴定操作规程是指在进行ABO血型鉴定时应该遵循的步骤和操作规范，以确保检验结果的准确性和可靠性。
下面将介绍一份ABO血型鉴定操作规程，供参考。
一、实验室准备2.确保实验室环境清洁整洁，工作台面干净无异物。
3.检查试剂盒和试剂的有效期和保存条件，确保试剂的质量良好。
4.对实验室设备进行日常检查和维护，确保设备正常工作。
二、标本采集与处理1.根据要求收集患者的血样，确保标本采集过程无菌无误。
2.将标本装在标本采集管中并进行标注，确保标本不被混淆。
3.采用标本离心的方法分离血浆和红细胞，准备好把血浆和红细胞分开的离心管。
三、试剂的稀释与标记1.根据试剂盒的说明书和标准操作规程对试剂进行稀释和标记。
2.确保试剂的标记清晰明确，不混淆。
3.标记好试剂的试管，准备好用于分析的试管。
四、ABO血型鉴定实验过程1.将患者的血浆和稀释后的抗体试剂混合均匀。
2.通过凝集试验和沉淀试验等方法对混合后的血浆进行判断，确定患者的血型类型。
3.记录检验结果并进行复核，确保结果的准确性。
五、实验数据的记录和存储1.记录实验的时间、地点、操作人员等基本信息。
2.记录检验结果和分析过程，确保数据的完整和准确。
3.存储检验数据和样本，确保数据的可追溯性和保密性。
六、结果解读与报告1.根据实验结果进行血型鉴定，判断患者的血型类型。
2.根据实验结果填写并发放血型鉴定报告，包括患者姓名、血型类型、检验日期等信息。
以上就是一份ABO血型鉴定操作规程的简要介绍，希望对实验室工作人员在进行ABO血型鉴定时提供一定的参考。
在进行实验操作时要严格按照规程和标准操作程序进行，确保检验结果的准确性和可靠性。
ABO血型鉴定操作规程(试管法)
宁晋县中西医结合医院ABO血型鉴定操作规程一．项目名称ABO 血型鉴定（正定型）二．方法试管法三．检验原理根据红细胞上有无A抗原或（和）B抗原，以及血清中有无抗A或（和）抗B抗体，可以将红细胞血型分为A型、B型、O型和AB型。
根据抗A和抗B抗体与对应红细胞抗原的凝集反应，可以鉴定ABO血型。
四．试剂上海血液生物医药有限公司抗A血型定型试剂和抗B血型定型试剂（单克隆抗体）五．标本采集抗凝或不抗凝的末梢血或静脉血均可，用生理盐水做成2-5%红细胞悬液六．操作1 取试管2支并分别标注抗A和抗B。
2 抗A试管中加入抗A试剂一滴，在抗B试管中加入抗B试剂一滴。
3 在抗A、抗B试管中分别加入受检者2-5%的红细胞悬液一滴，混匀。
4 用离心机3400离心15秒。
5 检验是否有溶血（溶血可能是阳性结果，或者是细菌污染），然后轻轻摇晃，使细胞再悬浮。
6 观察凝集情况，并记录结果。
必要时借助显微镜。
7 许多红细胞亚型（如Ax）能在抗AB试剂的盐水中凝集，但与抗A不凝，在室温（23±3℃）中放置几分钟，可以增强反应，但放置时间不宜超过30分钟。
8 检验结果的解释ABO血型反应格局表正定型血型抗A试剂抗B试剂+ - A- + B- - O+ + AB七．检验方法的局限性与反定型一起进行，正反定型不一致须进一步检查。
八．注意事项1 对含有较多自身冷凝剂素的受检者，需要37℃的生理盐水溶液洗涤受检者红细胞2-3次，去除吸附在红细胞上的冷凝集素，然后在鉴定血型。
2 新生儿的血样中抗体含量较低，抗原发育不完全。
同时可能含有母亲血液中的抗A或抗B抗体，可能导致假阳性或假阴性的出现。
3 出现ABO正反定型不符，须查明原因并解决问题后在记录结果。
ABO血型鉴定操作规程
1 目的指导工作人员进行ABO血型实验。
2 适用范围血型检验岗位工作人员3 职责负责送检标本ABO血型的检测工作。
4 【原理】ABO血型鉴定,是根据IgM类特异性血型抗体与红细胞膜上特异性抗原结合能出现凝集反应的原理，用已知IgM类特异性标准抗A和抗B血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或/和B抗原。
同时用已知标准A型红细胞和B型红细胞来测定血清中有无相应的天然IgM类抗A或/和抗B。
【标本】1．静脉抗凝或不抗凝血1.5～2.0ml。
【器材】载玻片、滴管、小试管、台式离心机或微柱凝胶离心机、玻璃棒、蜡笔或记号笔、显微镜等。
【试剂】1.1 抗-A、抗-B试剂1.2 5%和10%A、B及O型试剂红细胞盐水悬液1.3 受检者血清1.4 受检者5%和10%红细胞盐水悬液1.5 10mm×60mm透明的玻璃试管或塑料试管【操作步骤】2.1 试管法2.1.1查抗原：取洁净小试管2支，分别标明抗-A、抗-B，用滴管加入抗-A和抗-B分型血清各 2滴于试管底部,再以滴管分别加入受检者5%红细胞盐水悬液1滴，混匀。
2.1.2查抗体：取洁净小试管3支，分别标明A型、B型和O型细胞。
用滴管分别加入受检者血清2滴于试管底部，再分别以滴管加入A、B、O型5%试剂红细胞悬液1滴，混匀。
2.1.3立即1000rpm离心(离心时间为离心机校准时间)。
2.1.4轻轻摇动试管,使沉于管底的红细胞浮起,先以肉眼观察有无凝集(或溶血)现象,如肉眼观察不见凝集,应将反应物倒于玻片上,再以低倍镜下观察有无凝集。
主题内容ABO血型鉴定操作规程生效日期：2010/10/23 第页共5页2.1.5 凝集强度判断标准4+=红细胞凝集成一大块,血清清晰透明；3+=红细胞凝集成几大块,血清尚清晰；2+=红细胞成中等大凝块,游离红细胞<1/2；1+=红细胞成小凝集块，游离红细胞>1/2；±=红细胞成微小凝集块，周围有很多游离红细胞。
ABO及RhD血型鉴定试验标准操作规程
ABO及RhD血型鉴定试验标准操作规程ABO及RhD血型鉴定试验标准操作规程(一)检验目的检测红细胞表面ABO血型抗原、RhD抗原及血清(或血浆)中抗A、抗B抗体，确定受检者ABO及RhD血型。
(二)检验原理1.手工试管法、玻片法或纸板法利用标准IgM抗A／B血清鉴定红细胞表面ABO抗原即正定型，利用已知ABO 血型反定型红细胞鉴定同一标本血清(或血浆)中的抗A／B 抗体即反定型，综合正反定型结果确定受检标本ABO血型；利用标准IgM抗D直接鉴定RhD血型。
2.微柱凝胶法ABO／RhD卡的微管中装填有葡聚糖凝胶颗粒和抗A、抗B、抗D标准血清，如果红细胞表面存在A或B或D抗原，就会与对应的抗体发生凝集反应，凝胶颗粒具有分子筛的作用，可以阻滞凝集的红细胞在离心力的作用下通过凝胶颗粒，使其悬浮在凝胶颗粒中，未凝集的红细胞则可以通过凝胶颗粒到达微管底部。
3.玻璃珠微柱法ABO／RhD卡的微管中装填有玻璃微珠和抗A、抗B、抗D标准血清，如果红细胞表面存在A或B或D抗原，就会与对应的抗体发生凝集反应，玻璃微珠具有分子筛的作用，可以阻滞凝集的红细胞在离心力的作用下通过玻璃微珠，使其悬浮在玻璃微珠层的上端，未凝集的红细胞则可以通过玻璃微珠之间的微小空隙到达微管底部。
(三)适用范围适用于手工、半自动、全自动ABO血型及RhD血型鉴定试验。
(四)设备性能参数各种血型检测系统性能指标参见相应血型检测系统说明书。
(五)器材与试剂1.器材WADiana全自动血型配血系统、SWING-SAXO 血型配血系统、Techno全自动血型配血系统、Othro AutoVue Innova全自动血型配血系统、B600-A型低速离心机、KA-2200血清学专用离心机、阅片灯箱、塑料软试管、塑料硬质试管(100m m×12mm和75m m×l2mm)、血型鉴定专用纸板、玻片、试管架、一次性塑料滴管、记号笔。
2.试剂Diana DG Gel ABO-CDE血型卡、DiaMed ABO／RhD血型卡、OTHROBiovueABO／RhD血型卡、2％氢氧化钠溶液、生理盐水、抗A／B标准血清、抗D标准血清、3％～5％反定型试剂红细胞、1％反定型试剂红细胞。
ABO鉴定操作规程
ABO血型鉴定标准操作程序
[方法原理]：利用抗原抗体反应的原理，用已知抗体型特异性的试剂血清检查红细胞表面的抗原（正向定型），从而确认病人的血型。
[样本要求]
1.抽取受血者静脉血3-4ml，于EDTA（2Na）抗凝的试管中。
2.受血者和供血者的血液样本必须密封，每次输血后，2-6℃保存7天。
1.试剂
4.1抗A、抗B分型血清
4.2保存条件：2-8℃保存2年
4.3使用条件：使用前试剂室温预温0.5小时。
4.4试剂提供：上海血液生物医药有限公司。
2.仪器和材料：
5.1血库专用离心机、37℃水浴箱。
5.2试管架、试管、吸管等。
3.操作程序：
制备RBC悬液：试管中加盐水1ml,压积RBC40ul，混合均匀。
取试管2支，分别加入抗A、抗B各2滴。
加样：在试管中分别加RBC悬液2滴，摇匀。
离心：将试管放入专用离心机中离心1000转/分，离心1分钟后判读结果。
结果判定：
ABO血型结果报告见下表：
8.1试管、滴管和玻片必须清洁干燥，防止溶血。
8.2离心时间不宜过长过短，速度不宜过快过慢，以防止假阳性或假阴性结
果。
8.3为防止冷凝集现象的干扰，一般在室温（20-24℃）内进行试验，37℃可
使反应减弱。
对含有较多自身冷凝集素的受血者，需用37℃NaCl溶液洗涤受检者红细胞2-3次，以去除吸附在红细胞上的冷凝集素.
8.4在有效期内使用，出现浑浊或变色不能使用。
2.临床意义：
输血是治疗与抢救生命的重要措施。
输血前必须检查血型，选择血型相同的供血者，进行交叉配血完全相和才能输血。
ABO血型测定标准操作规程
1.目的和适用范围：1.1.为保证原料血浆的质量，规范实验操作，特制定本操作规程。
1.2.适用于本公司检验科，全体工作人员都必须严格按照本操作规程进行操作。
2.术语：无。
3.职责：3.1.实验室工作人员都必须严格按照本操作规程进行操作。
4.工作程序4.1.操作说明4.1.1.实验原理：ABO系统中的血型是根据红细胞上有无A或B抗原及血清中有无抗A或抗B抗体来决定。
用抗A、抗B定型血清分别加入被测红细胞，以观察其抗原、抗体反应结果。
4.1.2.实验所需设备和材料：血型反应板、竹签、微量振荡器、被检测标本、抗A定型血清（效价1:128以上），抗B定型血清（效价1:64以上）亲和力应在15秒钟以内出现凝集现象，并在3分钟时凝集块的大小应不小于1mm4.2.实验操作步骤：4.2.1.方法：正定型法4.2.2.受检者全血和血型试剂在纸片上按1：1比例混合，摇匀，按照有无凝集判定结果。
4.3.结果判读：4.3.1.受检者红细胞与抗A血型试剂发生凝集反应而不和抗B血型试剂发生凝集反应为A型。
4.3.2.受检者红细胞与抗A血型试剂不发生凝集反应而和抗B血型试剂发生凝集反应为B型。
4.3.3.受检者红细胞与抗A、抗B血型试剂都不发生凝集反应0型。
注：“＋”=凝集；“－”=不凝集4.4.注意事项：4.4.1.如果由于受检者的红细胞抗原弱，或抗A、抗B血清凝集力低，需要充分时间方能判定结果，则要加做反定型。
4.4.2.A型及B型定型红细胞悬液，不能互相掺杂。
4.4.3.ABO血型测定必须两人交替核对报告单，确认无误，方可发出报告。
4.4.4.要严防搞错标本、加错标本或者加错定型血清。
5.记录表式：5.1.《血型测定记录表》（记录编号：PAFC-BXJY-SOP-LM04-07-R01A）6.相关文件：无7.相关记录：无8.附件：无9.文件履历血型测定记录表记录编号：PAFC-BXJY-SOP-LM04-07-R01A本记录保存至供浆期满后10年。
S006红细胞ABO血型(反定型)鉴定标准化操作规程
红细胞ABO血型（反定型）鉴定标准化操作规程一、目的为保证血液及血液成分的红细胞ABO血型在临床上同型输注，确保临床输血安全、有效，根据《临床输血技术规范》第十五条特制定本标准化操作规程。
二、方法采用试管法检测红细胞ABO血型（反定型）。
三、原理用已知的A1、B、O标准红细胞测定被检者血清中有无相应的抗A或抗B抗体，结合正定型结果判断ABO血型。
四、适用范围适用于输血前患者与献血者红细胞ABO血型(反定型)确认。
五、仪器设备普通离心机；血型专用离心机；六、试剂1、试剂名称：人ABO血型反定型用红细胞试剂盒；2、试剂生产厂家：上海血液生物医药有限公司；3、批准文号：国药准字S2*******；4、包装规格：A1、B、O试剂各1支， 10ml /支；5、贮藏条件；2-8℃保存，不能冰冻。
6、有效期：自检定合格之日起2个月；7、试剂性能：外观、溶血率%、特异性、抗原性均符合检定规程要求。
七、检测样本要求1、标本类型：静脉血(EDTA抗凝剂:血液=1:10)。
2、标本采集：见输血科标本管理标准化操作规程。
3、标本储存和运输：新鲜血2～8℃贮存时间不超过72小时。
4、标本拒收状态：标识不准确、标本稀释、细菌污染，严重溶血等不能测定。
八、操作步骤1、取10mmx60mm洁净小试管3支，分别标明A1型细胞、B型细胞、O型细胞，用滴管分别加入受检者血清1滴于试管，再分别用滴管加入A1、B、O型试剂红细胞悬液1滴。
2、，摇动试管，立即以1000rpm离心1min或3400rpm离心15s。
3．先观察是否有溶血，溶血可能是阳性结果，或者是细菌污染；将试管轻轻摇晃，使沉于管底的红细胞浮起，观察细胞扣情况，并判断凝集强度（见下表）。
如肉眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。
红细胞ABO血型（反定型）结果凝集强度判断对照表4、ABO血型（反定型）表现型反应格局表九、质量控制1、对新进批号的试剂应作亲和力与效价验定。
ABO血型鉴定标准操作程序
SOP_10-1 ABO血型鉴定标准操作程序一、目的：确保输血安全，严格检验质量标准，为临床提供及时、可靠的结果报告。
二、适用范围：血型鉴定。
三、操作人员：检验科授权工作人员四、操作步骤：1 原理：血清中常存在反应强的抗体，而红细胞上缺乏相应的抗原。
许多组织细胞上有规律地存在着A、B、H抗原，以及分泌型的分泌液中存在着A、B、H物质。
红细胞上的A/B /D抗原与抗B/A /D标准血清发生凝集反应。
ABO血型的分类及其与抗血清的反应：红细胞与抗血清反应表型红细胞上抗原血清中抗体抗A 抗BO 无抗A、抗B ――A A 抗B + ―B B 抗A ―+AB A、B 无+ +2 试剂：A、B、O标准血清；A、B、O定型红细胞；生理盐水。
3 方法：3.1 样本采集：真空抽血2ml至一次性抗凝管（EDTA－K2干粉）中，混匀后备用。
3.2 ABO血型盐水介质鉴定（试管法）：3.2.1制备患者3~5%的红细胞盐水悬液。
3.2.2 正定型：抗-A 抗-B 抗-A、B 标准血清(μl) 100 100 100受检者RBC悬液(μl) 50 50 503.2.3 反定型：Ac Bc Oc 定型红细胞(μl) 50 50 50受检者血清(μl) 100 100 1003.2.4混匀。
3.2.5 以1000r/min离心1min。
3.2.6 取出试管，轻摇，使沉管底的红细胞浮起，认真观察有无溶血和/或凝集。
3.3 ABO血型正反定型结果判断：分型血清+受检者红细胞受检者血清+试剂红细胞抗-A 抗-B 抗-A、B 受检者血型Ac Bc Oc + –+ A –+ ––+ + B + –––––O + + –+ + + AB –––3.4 正反定型不一致的原因：（1）技术和管理工作的错误①血样试管及玻片混淆②书写错误③红细胞过浓或过淡④未注意样品溶血现象⑤漏加试剂⑥未按试剂说明操作⑦试剂血清效价低、亲和力不强或污染/过期/失效⑧离心速度/温度改变（2）血清异常等其它原因①抗体：新生儿、老年人、白血病、肿瘤、免疫缺陷、骨髓移植、嵌合体双生子、异型输血交换、胎盘出血等引起的抗体改变。
ABO血型鉴定操作规程
ABO 血型鉴定操作规程1. 原理根据红细胞上和血清(或者血浆)中有无 A 抗原和(或者)B 抗原及其抗体，将血型分为A 型、B 型、AB 型及O 型。
可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型鉴定ABO 血型。
正定型是指用已知抗正定型-A、抗-B 血清来检测受检红细胞上有无相应的 A 抗原和(或者) B 抗原；反定型是指用已知反定型A1 型、B 型红细胞来检测受检血清 (或者血浆) 中有无相应的抗-A 和(或者)抗-B。
2. 原始样品要求5 mL 静脉全血。
3. 样品容器和添加剂样品容器和添加剂样品容器和添加剂样品容器和添加剂真空试管，EDTA.K2 抗凝/普通试管，不抗凝。
4. 检测环境要求检测环境要求检测环境要求检测环境要求温度：18℃~27℃，湿度：30%~70%。
5. 所需材料和设备所需材料和设备所需材料和设备所需材料和设备5.1 设备普通离心机、免疫血液学离心机、显微镜、恒温水箱、定时器。
5.2 材料抗-A、抗-B 血清、ABO 标准抗原红细胞试剂、移液器、加样吸头、生理盐水(NS)、干净空试管。
6. 检测操作过程检测操作过程检测操作过程检测操作过程6.1 将受检标本以1000g 离心5min，使标本血浆/血清与红细胞分离，吸取红细胞，用NS 洗涤三次后，配成3%~5%红细胞悬液。
6.2 取6 支小试管，分别标记“-A”、“-B”、“自身”、“Ac”、“Bc”、“Oc”。
6.3 在“-A”、“-B”管中分别加入抗-A 和抗-B 血清各50 μL ，其余管加入受检血浆/血清各100 μL 。
6.4 在“-A”、“-B”、“自身”管中加入受检者3%~5%红细胞悬液各50 μL ，摇匀。
6.5 在“Ac”、“Bc”、“Oc”管中分别加入A1、B、O 红细胞试剂各50 μL ，摇匀。
6.6 1000g 离心15sec，轻轻悬浮红细胞，观察结果并记录。
6.7 根据实验需要，除室温下观察结果外，另可增加在4℃、37℃下观察结果。
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中华人民共和国卫生部医政司编，全国临床检验操作规程（第四版）
抗-A 抗-B 抗- A+B A细胞 B细胞 O细胞
+ – + A – + –
– + + B + – –
– – – O + + –
+ + + AB – – –
注：+ = 凝集； — = 不凝集
【注意事项】
（1）红细胞试验中抗体试剂与待检红细胞产生3+～4+的凝集为阳性反应。血清与试剂红细胞的反应经常较弱。血清试验可以在室温孵育5～15分钟以上增强凝集反应，观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，有助于弱凝集的发现。
对象：全院职工
医疗药事制度
文件名称：ABO血型鉴定（4.19.2.1）
编写日期：2014.1
修订日期：2017.4
执行日期：2017.4
注：①本文件仅供本院人员使用，未经同意，不得翻印②本文件最终解释权归输血科
ABO血型鉴定
【原理】人类ABO血型系统包括四种主要的表现型：A、B、O和AB。ABO血型由红细胞上A和B抗原的有或无决定，ABO系统还以血清中存在自然发生的规则抗体为特点，即血清中含有针对自身红细胞所缺的A或B 抗原产生的同种凝集素（也称为“天然抗体”）。人类红细胞上A和B抗原的有或无与血浆中抗A和抗B抗体的产生存在着相反的互补关系。例如O型个体红细胞上缺少A和B抗原，其血清中含有抗A和抗B抗体。
表1-5-3
—A孔
—B孔
—D孔
对照
AC孔
BC孔
结果
+
—
—
—
+
A型
—
+
—
+
—
B型
+
+
—
—
—
AB型
—
—
—
+
+
O型
RH(D)血型判定：
+
阳性
—
阴性
【注意事项】微柱凝集试验技术是较新的血型血清学检测技术，具有易于操作标准化、自动化、判读客观和可靠、结果可长期保存、有利于大量样本操作等优点，但在检测过程中，红细胞悬液中如有颗粒物质，或血样本的血浆中存在冷抗体或蛋白异常，都会干扰检测结果的判读。微柱凝集血型卡有可能难于鉴别或漏检某些ABO亚型。
【结果判定】
（1）细胞试验中的凝集以及血清或血浆试验中的溶血或凝集均为阳性结果
（2）细胞扣重悬后表现为均匀的细胞悬液是阴性结果
（3）凝集强度判断标准参见表1-5-1
（4）ABO定型的血清或血浆试验以及红细胞试验的解释见表1-5-2
（5）如果红细胞定型试验与血清定型试验结果不一致，应通过进一步试验解决，然后才给出ABO血型结果
（2）试管法定型反应快，需时短，特别是紧急输血时，可立即离心观察结果；通过离心增强凝集，可发现亚型和较弱的抗原-抗体反应，结果准确可靠，是ABO定型的常规方法。
2.玻片法
【样本】用玻片法进行ABO正定型时，待检红细胞悬液的浓度是10%～15%。玻片法一般只能做正定型。
【试剂】（1）抗A
（2） 抗B
【操作】
+/— = 镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离红细胞。
MF = 混合凝集外观（mixed field）是指镜下可见少数红细胞凝集，而极大多数红细胞仍成分散分布。
— 表示阴性，镜下未见凝集，红细胞均匀分布。
表1-5-2 ABO血型正反定型结果
分型血清+受检者红细胞 受检者血型 受检者血清+试剂红细胞
（6）将配好的红细胞悬液分别加入—A、—B、—D孔各50微升。
（7）将血型卡置于免疫微柱孵育器（37度）孵育5分钟，取出置于血型血清学多用离心机离心5分钟。
【结果判定】根据红细胞在凝胶柱内的反应情况解释凝集强度。出现凝集和（或）溶血结果为阳性，不凝集为阴性。柱凝集法凝集强度判读表见表1-5-3及1-5-4
（2）反定型：检测血清或血浆中的抗体。①取2支洁净试管，分别标记A1和B，分别向其中滴加2～3滴血清或血浆；②加1滴A1试剂红细胞到标记A1的试管；③加1滴B型试剂红细胞到标记B的试管；④如果需要，加1滴A2试剂红细胞到一支已加入2～3滴血清或血浆的试管中，并做好标记；⑤轻轻混匀，按照校准速度和时间离心，通常（，然后轻轻重悬细胞扣，检查凝集情况；⑦观察、解释、记录试验结果，并与红细胞试验结果对照。
（6）读取，解释并记录所有玻片或白瓷板凹孔中的结果
【结果判定】
（1）任何ABO定型试剂与红细胞反应表现强凝集都是阳性结果
（2）在反应2分钟末红细胞仍呈现均匀悬液是阴性结果
（3）弱阳性或可疑结果应使用试管法进一步确认
3.柱凝集法
【样本】同玻片法和试管法
【试剂】（1）ABO试剂红细胞
（2）柱凝集血型卡
【操作】
（6）混合视野凝集的情况，应进一步找出原因：例如是否混合血样标本，近期有无输血史，是否白血病急性期或者ABO亚型等
表1-5-1凝集强度判读
4 + = 红细胞凝集成一大块，血清清晰透明。
3 + = 红细胞凝集成数小块，血清尚清晰。
2 + = 红细胞凝块分散成许多小块，见到游离红细胞。
1 + = 肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞。
1.试管法 试管法是ABO定型试验的经典方法。
【样本】抗凝或不抗凝的样本均可用于ABO鉴定试验。红细胞可悬浮在自身血清、血浆或盐水中，也可以洗涤后悬浮于盐水中。通常情况下，试管法正定型被检样本与反定型中试剂红细胞悬液浓度皆为2%～5%。
【试剂】（1）抗A血清
（2）抗B血清
（3）2%～5%的A1型、B型红细胞盐水悬液
（1）核对病人标本编码、病人信息与检验申请单是否一致。
（2）将标本置于离心机，转速1500三分钟。
（3）将病人信息写在对应的血型卡上，以防混淆。
（4）各吸取血浆50微升分别加入AC、BC孔中，再分别在AC、BC孔中加入ABO血型反定型试剂A1红细胞、B红细胞各一滴。
（5）汲取病人标本血球20微升加入已备好的生理盐水（2毫升）试管，配成红细胞悬液。
利用红细胞凝集试验，通过正反定型可以准确鉴定ABO血型。所谓正定型，也称红细胞定型试验，是指用标准抗A和抗B试剂来测定红细胞上的A抗原和B抗原；所谓反定型，也称血清定型试验，是指用标准A型和B型红细胞来测定血清中有无相应的抗A和抗B抗体。“天然抗体”的免疫原可能是肠道及环境中的细菌，例如在大肠埃希菌的脂多糖外壳中含有ABO类似结构。
（1）加1滴抗A到一洁净的玻璃片或白瓷瓶凹孔中，并做好标记
（2）加1滴抗B到一洁净的玻璃片或白瓷瓶凹孔中，并做好标记
（3）向以上玻片或白瓷瓶凹孔中的每一种试剂中分别加1滴充分混匀的待检红细胞悬液
（4）充分混匀抗体试剂和待检红细胞，用搅拌棒将混合物均匀分散开
（5）不断地从一边到另一边轻轻倾斜转动玻片或白瓷板，持续大概2分钟。在此期间不要将玻片或白瓷板放在热表面上
（4）如果需要，可增加抗A,B试剂和A2血型红细胞.
【操作】
（1）正定型：检测红细胞上的A或B 抗原。①加1滴抗A到一支洁净试管中并标记；②加1滴抗B到一支洁净试管中并标记；③如果需要，可选做加1滴抗A,B在第3支试管，并标记；④向每一支试管滴加1滴2%～5%的待检红细胞悬液；⑤轻轻混匀，按照校准速度和时间离心，通常（900～1000）×g离心15秒；⑥轻轻重悬细胞扣，检查凝集情况；⑦观察、解释、记录试验结果，并与血清（血浆）试验结果对照