HPLC测定川芎药材和饮片中游离阿魏酸和总阿魏酸的含量及其质量评价指标
RP-HPLC法测定川芎愈伤组织中阿魏酸的含量
水浴蒸干， 残渣用 ３ｍ Ｌ甲醇溶解， ０ ４ ｍ微孔滤膜过滤， 用 ．５ Ｉ ａ 取
续 滤 液， 备用 。另取 Ｊ芎 对 照药 材 ０ ５ ， Ｉ Ｉ ． 同法 制成 对 照药 材 溶液 。 ｇ
Ｘｉｇｘｎ ， ＨＥ ｎ（ｃｏ ｌｆ ｉ ｃ ｎ ｅＡ ｈ ｉ ｎｖｒｉ， ｎ ｕ ｅ ａ ｏａｏｙｏ ｈｎｓ ｄｃｎ ｅｅｒｈａ ｄ ｎ —ｉｇ Ｃ Ｎ Ｑｉ Ｓｈ ｏ Ｌ ｅ ｉ ｃ， ｎ ｕ Ｕ ｉｅｓｙ Ａ ｈ ｉ ｙＬ ｂ ｒｔｒ Ｃ ｉ ｅ ｏ ｆＳｅ ｔ Ｋ ｆ ｅ Ｍｅ ｉ ｅ ｓａ ｃ ｎ ｉ Ｒ Ｄｅｅ ｐ ｎ， ｆ ｉ ３ ０ ９ Ｃ ｉ ） ｖｌ ｍｅｔＨｅ ０ ３ ， ｈｎ ｏ ｅ２ ａ Ａ ｂ ｌ：Ｏｂｅｔ ｅＴ ｓａ ｌ ｈ ａ ＨＰ Ｃ ｍｅｈ ｄ ｆｒ ｔ ｅ ｄ ｔｒ ｎ ｔ ｎ ｏ ｅｕ ｃ ａ ｉ ｎ ｃ ｌ ｓ ｏ ＝ Ｉ ｊ ｉ ｏ ｅｔ ｂｉ Ｌ ｔ ｏ ｏ ｅｅｍｉ ａｉ ｆＦ ｒ ｌ ｃｄ ｉ ａｌ ｆ ｃｖ ｓ ｈ ｏ ｉ ｕ
阿魏酸在 ０９ ～４ ６ ｇ ｍ ． ． ７￣ ／Ｌ范围内线性 关 系良好 ， ＝ ． ９ 平均加样 回收率为 ９ ． ８ ，Ｓ ＝１ ６％ ３ ｒ Ｏ９ ９ ， ８ ９ ９ ％ Ｒ Ｄ ． ３。
结论
该 方法快速 简便 、准确 可靠， 可用 于川芎愈 伤组织 中阿魏酸 的含量测定 。 关键词 ：川芎；愈伤 组织；阿魏酸； 高效液相 色谱 法
５ ｔ ｃ ｌ ｍｎ ｕｓ ｇａ ｅｏ ｉ ｉ 一 ％ ｔｉｔ ｙａ ｎ １ ８ ） ｓｍｏ ｉ ｈ ｓ ， ｅｅ ｔｄ ａ ２ ｎ ． ｈ ｏ ｍ） ｏｕ ， ｉ ｃ ｔｎｔ ｌ １ ｒ ｈ ｌｍｉｅ（５： ５ ａ ｂｌ ｐ ａ ｅ ｄ ｔｃｅ ｔ ０ｎ ２ Ｔ ｅｆ ｗ ａ ｎ ｒｅ ｅ ｅ ３ ｌ ｒ ｔ ｓ １０ ｍＬ ｍｉ ｔ ｅｃ ｌｍｎ ｔｍｐ ｒ ｔ ｒ ｓ２ ℃．Ｒ ｌ ｈ ｎ ａ ａ ｇ ｆＦ ｒ ｌ ｃｄ ｗａ ａｅｗａ ． ／ ｎ． ｏｕ ｅ ｅａｕ ｅｗａ ７ ｈ 翻｜ ｂ Ｔ ｅｌ ｅ ｒｒｎ ｅ ｏ ｅｕｉ ａ ｉ ｓ Ｉ ｉ ｃ ０９ ～４６ ／ ，ｒ Ｏ９ ９８ ｔ ｅ ａ ｅａ ｅ ｒ ｃ ｖ ｒ ｓ ９ ．８ ａ ｄ Ｒ Ｄ ｗａ １６ ％． ．３ ．７ ｐｇ ｍＬ ＝ ．９ ， ｈ ｖ ｒ ｇ ｅ ｏ ｅｙ ｗａ ９９ ％ ｎ Ｓ ｓ ．３ ０嘲ｄｕ 叽 Ｔ ｅ ｄ ｈ
川芎质量综合评价研究
川芎质量综合评价研究龚菊梅;张慧;谢媛媛;陈卫东;王义明;罗国安【摘要】目的:综合考察国产川芎药材质量.方法:用HPLC法测定32批川芎药材中洋川芎内酯Ⅰ、洋川芎内酯A、3-正丁烯苯酞、阿魏酸和藁本内酯等5种指标成分的含量,并考察药材TLC鉴别和饮片水分、总灰分、酸不溶性灰分和醇浸出物等药材常规理化项目.结果:除购自新绿色药业有限公司山川芎药材未检测出洋川芎内酯A,其他样品均能检测出5种指标成分的色谱峰,但含量差异较大,在川芎药材常规理化试验结果中,水分含量和醇浸出物含量符合药典要求,但总灰分测定中有4批大于6％的含量限度,酸不溶性灰分中有2批大于2％,有2批未检测出酸不溶性灰分.结论:实验结果表明不同基原、产地和药用部位的药材间品质差异较大.本实验为川芎药材综合评价体系的建立提供理论和实验依据.【期刊名称】《中药与临床》【年(卷),期】2015(006)004【总页数】6页(P1-5,8)【关键词】川芎;含量测定;阿魏酸;藁本内酯;洋川芎内酯;高效液相色谱法【作者】龚菊梅;张慧;谢媛媛;陈卫东;王义明;罗国安【作者单位】安徽中医药大学,安徽合肥230031;清华大学化学系,北京100084;清华大学化学系,北京100084;清华大学化学系,北京100084;安徽中医药大学,安徽合肥230031;清华大学化学系,北京100084;清华大学化学系,北京100084【正文语种】中文【中图分类】R284.1川芎是伞形科（Umbelliferae）藁本属植物川芎（Ligusticum chuanxiong Hort）的干燥根茎，具有活血行气，祛风止痛之功，为活血化瘀中药复方制剂中常用药材；主要化学成分为内酯类、有机酸和酚类化合物[1,2]。
研究表明：川芎嗪配伍阿魏酸可保护心肌细胞缺血再灌注大鼠心肌，明显降低其血清CK[3]；川芎内酯A可保护缺血/复氧损伤心肌微血管内皮，提高细胞存活率，减轻损伤[4]；川芎生物碱蒿本内酯对子宫平滑肌痉挛具有解痉作用[5]。
中药川芎中阿魏酸稳定性的研究
中药川芎中阿魏酸稳定性的研究
徐自升;蔡宝昌;张弦
【期刊名称】《现代中药研究与实践》
【年(卷),期】2004(018)002
【摘要】目的研究川芎中阿魏酸的稳定性,为其提取、浓缩及干燥等工艺参数的制定提供依据.方法反相HPLC法测定阿魏酸峰面积进行比较.结果实验结果显示,在湿热条件下,阿魏酸很不稳定.当温度超过80 ℃时,阿魏酸峰面积急剧下降,且时间越长降低越多.但川芎药材在干燥条件下,其中的阿魏酸含量相当稳定.结论在有关川芎药材的提取、浓缩及干燥过程中,为了获得较高的阿魏酸转移率,相关工艺的温度不宜超过80 ℃,加热时间不宜超过12 h.
【总页数】3页(P25-27)
【作者】徐自升;蔡宝昌;张弦
【作者单位】南京中医药大学,江苏,南京,210029;南京中医药大学,江苏,南
京,210029;江苏省中药质量控制工程中心,江苏,南京,210029;南京中医药大学,江苏,南京,210029
【正文语种】中文
【中图分类】R284.2
【相关文献】
1.川芎嗪、阿魏酸微透析体外回收率及体内稳定性的研究 [J], 王利胜;石宗丰;郭琦;刘宏伟;赖宝林
2.川芎中阿魏酸和川芎嗪的提取及检测方法研究 [J], 李艳清;周良芹;王蓉;于海莲;邹时英
3.超声辅助提取川芎中阿魏酸工艺研究 [J], 杨敏;邹结晶
4.煎煮时间对川芎中阿魏酸稳定性影响的研究 [J], 陈倩洁;孙明;梁瑞雪;贾元印
5.阿魏酸的稳定性及其在川芎和当归药材中的存在形式 [J], 丁明玉;马帅武;刘德麟因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
HPLC测定温肾调经颗粒中阿魏酸的含量
HPLC测定温肾调经颗粒中阿魏酸的含量闫建坤;李红英;于得才;杨丽【摘要】目的:建立温肾调经颗粒中阿魏酸含量的高效液相色谱测定方法.方法:采用Kromasil C18色谱柱(250 ×4.6mm,5μm),以甲醇-5％醋酸(20:80)为流动相,流速为1.0 mL/min,检测波长323 nm,柱温35℃.结果:阿魏酸含量测定的线性范围为2.50～20.001μg/mL,r=0.9999,平均加样回收率为98.54％,RSD为1.22％(n=5).结论:该方法操作简单,准确可靠,重复性好,可作为温肾调经颗粒的质量控制方法.【期刊名称】《包头医学院学报》【年(卷),期】2014(030)002【总页数】2页(P9-10)【关键词】温肾调经颗粒;阿魏酸;高效液相色谱【作者】闫建坤;李红英;于得才;杨丽【作者单位】包头医学院职业技术学院,内蒙古包头014030;山东威高药业股份有限公司;包头中药有限责任公司;包头中药有限责任公司【正文语种】中文温肾调经颗粒主要由当归、川芎、杜仲、菟丝子、肉苁蓉等药物组成，其处方来源于临床验方，具有温肾养血，利温化浊，祛瘀调经之功效，临床上用于肾阳不足，冲任血虚，湿浊瘀阻所致之月经后期，经量稀少，甚或经闭不通的治疗，效果显著，是我国在多囊卵巢综合征研究领域唯一进入临床阶段研究的中药制剂。
由于当归、川芎为方中君药，其有效成分均为阿魏酸。
作为一种指示性的化合物［1］，阿魏酸在药材中含量相对较易测定。
有关阿魏酸含量测定报道的方法有薄层扫描法［2］、高效毛细管电泳法［3］和高效液相色谱法［4］。
本研究旨在建立温肾调经颗粒制剂中阿魏酸含量的高效液相色谱测定方法。
1 仪器与试剂1.1 仪器岛津SCL-10AVP液相色谱仪;SPD-10AVP检测器;Class-VP工作站;KQ3200DE型医用超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);优普超纯水机UP-Ⅱ-10T(成都超纯科技有限公司);1/10万电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)。
高效液相色谱在中药含量测定中的应用
高效液相色谱在中药含量测定中的应用白梓静【摘要】The components contained in traditional Chinese medicine and traditional Chinese medicine preparation containing composition are complicated ,and their interference is serious .With the continuous improvement of people’s living standard ,and health carereforming ,pharmaceutical analysis is playing a more and more important role .The high performance liquid chromatography because of its characteristics of high efficiency ,high speed ,high sensitivity ,is used widely in drug analysis .This article reviews the principles of high performance liquid chromatography ,composition and its determination in terms oftradi‐tional Chinese medicine study ,and prospects HPLC applications in pharmaceutical analysis .%中药材和中药制剂所含成分复杂，相互干扰较为严重。
随着人民生活水平的不断提高，医疗卫生的改革，药品分析正发挥着越来越重要的作用。
而高效液相色谱法以其高效、高速、高灵敏度的特点，在药品分析中的应用越来越广泛。
反相高效液相色谱法测定不同溶媒川芎提取物中阿魏酸的含量
时 珍 国医 国 药 ２０ ０ ７年 第 １ 第 ７期 ８卷
Ｌ ＨＺ Ｅ Ｅ ＩＩＥＡ ＤＭ Ｔ ＲＡＭ ＤＣ Ｅ Ｅ Ｒ Ｈ２０ Ｏ ．８ Ｏ７ Ｉ ＩＨ ＮＭ ＤＣＮ Ｎ Ａ Ｅ Ｉ Ｅ ＩＡＲ ＳＡ Ｃ ０７ Ｌ１ ． Ｓ Ｖ Ｎ
稳定 。 取绿原酸对照品进行紫外扫描 （０ ４０ ｎ ， ２０— ０ ｍ） 结果在 ３７ ２． ２ ６ 重复性 实验 精 密量 取 同一样 品 （ 都市 湔江 制药 厂 ） ０ｎ ． 成 ３ ｍ波长处有最大吸收 ， 实验选择 ３７ｎ ２ ｍ作 为检测波长。 份 ， ２２ ２ 项 下操作 ， 照“ ．． ” 测得 含量平均值为 ８ ０ ｇ‘ 一， Ｓ ．３ｍ ｇ Ｒ Ｄ 本文参照银黄 １服 液的色谱条件进行检测 ， ３ 其流动相 中乙腈 为 ０ ６ （ ４ 表 明 本法 重 复 性 好 。 ． ％ ｎ＝ ） 的比例不得大于 １ ％， Ｏ 否则样 品色谱 图的分离效果差 。 ２ ７ 回收率实验 精密 称取 同一 已知含量 样品 （ ． 成都 市湔江制 由表 ２可 见 不 同厂 家 的 样 品 中绿 原 酸 的 含 量差 异 太 大 ， 现 而 药 厂 ） ０ ５ｇ ４份 ， 量 加 入 适 量 的绿 原 酸 对 照 品 ， “ ． ． 约 ． 共 定 照 ２２ 在对其含量没有统一 的限度标准 ， 作者建议今后在修改标准时应 ２ 项下操作 ， ” 并按上述色谱 条件测 定。结 果见表 １ 平均 回收率 ， 考虑增加含量 测定 项 ， 以确保 药 品 的质 量 ， 证 临床 用药 安 全 保
积 （ 进 行 线 性 回归 ， 回归 方 程 为 Ａ＝ ９ ２５７ ３０ ５２ ｒ 进 行 测 定 ， 果 见 表 ２ Ａ） 得 ６ ．８ Ｃ一 ．９ （ ： 结 。 １ｎ＝ ） ． ６ 。结果表明绿原酸在 ０ １４— ．８ ｇ・ ｌ 范围 内线 ．６ ０ ９ ４ ｍ 表 ２ 样 品 测 定 结 果 性 关 系 良好 。
RP-HPLC法测定川芎中阿魏酸的含量
ｍｉ～ ， 温 ： 温 结 果 当阿 魏 酸 的 浓度 在 ２５ ￣４ ．０ ｎ 柱 室 ． ３ ０ ４ ｇ・ｍｌ 范 围 时 ， 峰 面积 与 浓度 的 线 性 关 其 系 良好 （一０ ９ ９ 一 ６ ； 均 回 收 率 ９ ． ７ ， Ｄ— １ ８ 。 结论 方 法 准 确 ， 靠 ， ｒ ． ９９ｎ ） 平 ９６ Ｒｓ ． 可 可作 为 川 芎 原 药 材 或 含 有 川 芎 的 中成 药 建 立 对 阿魏 酸 含 量 测 定 方 法 时应 用 。 【 键 词 】 反 相 高 效 液 相 色谱 法 川 芎 阿 魏 酸 关 川 芎 系伞 形 科 植 物 （ ｉｕ ｔ ｕ ｃ ｕ ｎ ｉｎ ｒ ） 干 Ｉ Ｌｇ ｓｉ ｍ ｈ ａ ｘｏ ｇ Ｈｏｔ 的 ｅ ． 材 为 市 售 （ 号 ：０ ７ ３ １ ２ ０ ０ １ ， ０ ７ ６ １ 。流 动 相 所 批 ２０００ ，０７３５２００２ ）
男性 Ｃ ＨＤ患 者 与 男 性 健 康 人 的 ＨＣ 水 平 进 行 了 比较 ， 存 Ｙ 也 在 显 著 性 差 异 。但 目前 ＨＣ 与 ＣＨＤ 相关 的机 制 还 不 清 楚 ， Ｙ 有 学 者 认 为 ＨＣ 水 平 升 高 引起 冠 心 病 的 机 制 可 能 有 以 下 几 Ｙ 种 Ｉ ： ） Ｙ 具 有 内皮 细 胞 毒 性 作 用 ， 引起 内 皮 细 胞 损 伤 ， ６ １ ＨＣ ］ 可 这 主要 是 由 于 ＨＣ 自身 氧 化 作 用 产 生 氧 自由 基 ， 起 蛋 白 Ｙ 引 质 损 伤 ， 受 体 功 能 障 碍 以 及 ＨＣ 使 一 氧 化 氮 合 成 酶 受 到 酶 Ｙ 抑 制 ， 而 内 皮依 赖 性 血 管 舒 张 因 子减 少 ， 内皮 依 赖 性 血 管 从 使
当归、川芎不同配比中阿魏酸的含量测定
极不稳定，特别是具有光不稳定性，配制时应存放在棕色容量瓶
里。 方法学实验表明，该法线性关系良好，回收率、精密度高，具有
准确、灵敏的特点。 本实验结果表明，当归与川芎配比为 1∶5 时，
阿魏酸的含量最高，而随着配比的变化，阿魏酸含量也发生了
不同程度降低， 这为当归-川芎的复方方剂分析和临床药物检
测提供了质量依据。
浓度范围内线性关系良好，平均加样回收率 97.55%，RSD 为 2.10%。 结论 当归与川芎配比 1∶5 时阿魏酸的含量最高。
关键词：当归；川芎；不同配比；阿魏酸；HPLC
中图分类号：G424.31
文献标识码：B
文章编号：1671-1246（2015）22-0158-02
当归-川芎是临床常用补血活血之药对。 当归为伞形科植 物当归的根，性温味甘辛，归心、肝、脾经，具有补血活血、调经 止痛、润燥滑肠之功效，用于血虚萎黄、眩晕心悸、月经不调、经 闭痛经、虚寒腹痛、风湿痹痛、跌仆损伤、痈疽疮疡，有养血而不 滋腻、活血而不伤正的优点。 川芎为伞形科草本植物川芎的根 茎，性温味辛，归肝、胆经，具有行气开郁、祛风燥湿、活血止痛 的功效，用于头痛、风湿痹痛、月经不调、经闭痛经、疮疡肿痛、 症瘕腹痛、跌仆肿痛等，为“血中之气药”。 二者均可用来治疗月 经不调、痛经、疮疡肿痛等，其主要成分均为阿魏酸，配伍使用， 可增强养血调经、行气活血的功效[1-2]，均为妇科要药。 王欢等[2] 应用数据与方法对当归-川芎在古方中的使用频次统计表明， 当归、川芎在治疗妇科疾病时，使用频次 1 622 次，配伍使用频 次在 10 次以上，且药对川芎-当归组成的佛手散长期以来被用 于治疗动脉粥样硬化和高血压病[3]。 近年来，就当归和川芎药理 作用的研究具有相似点， 主要集中在抗血小板聚集和血栓形 成、扩血管、清除氧自由基、保护脏器的缺血损伤、抗肿瘤、调节 免疫系统等方面[4-5]。
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HPLC 测定川芎药材和饮片中游离阿魏酸和总阿魏酸的含量及其质量评价指标吕光华1,2*,程世琼3,陈金泉2,梁士贤2,赵中振2(11成都中医药大学药学院中药材标准化教育部重点实验室,四川成都611137;21香港浸会大学中医药学院,香港九龙塘;31四川省食品药品检验所,四川成都610036)[摘要] 目的:建立H PLC 测定川芎药材和饮片中游离阿魏酸和总阿魏酸的方法,测定不同来源的川芎样品,以期研究其质量评价指标。
方法:用甲醇-甲酸(95B 5)和甲醇-0124mo l #L -1碳酸氢钠水溶液(95B 5)分别提取川芎样品中的游离阿魏酸和总阿魏酸。
HPLC 采用A llti m a C 18(416mm @250mm,5L m)色谱柱,保护柱为C 18(416mm @715mm ,5L m );以乙腈和1%冰醋酸水溶液为流动相,梯度洗脱;流速为110mL #m i n -1;柱温为30e ;测定波长为320n m;进样量为10L L;以外标法测定样品中游离阿魏酸和总阿魏酸的含量。
结果:游离阿魏酸和总阿魏酸分别在0101~0120L g 和0105~0146L g 呈线性关系,回收率分别为9517和9815%(n =6)。
32份川芎药材和饮片中总阿魏酸与游离阿魏酸的含量之比为1103~4198,平均值为2138(n =32);1份川芎栽培苓子中二者之比值达1916。
15份从川芎主产区收集的根茎药材中总阿魏酸的平均质量分数为1142m g #g -1,按平均值的80%和药材含水量10%计算,则川芎药材中总阿魏酸的含量以干燥品计为1125m g #g -1。
结论:本方法可测定稳定、具有可比性的阿魏酸含量,操作简便,适合于川芎药材和饮片中游离阿魏酸和总阿魏酸的含量测定。
阿魏酸在川芎样品中以游离和结合型共同存在,但以后者为主,并以总阿魏酸的量发挥药效,故应以总阿魏酸为川芎药材和饮片质量评价的指标。
[关键词] 川芎;游离阿魏酸;总阿魏酸;高效液相色谱法;含量测定;质量评价[收稿日期] 2009-08-10[基金项目] 四川省科技支撑计划项目(2009FZ0053)[通信作者] *吕光华,T e:l (028)61800231;E-m ai:l l ugh cd@ya -hoo 1co m 1cn川芎为常用的活血化瘀药,来源于伞形科植物川芎L i g usticum chuanxoing H ort 1的干燥根茎[1]。
现代化学和药理研究结果表明,川芎的活性成分主要包括苯酞类、酚酸类和生物碱类成分[2-3]。
虽然对川芎中藁本内酯(li g ustilide )、阿魏酸(ferulic ac i d )和川芎嗪(li g ustrazi n e)含量测定的文献报道较多[4-10],但是在5中国药典6(2005年版)中川芎仍然没有质量控制的指标成分[1]。
作者研究了大量的相关文献,认为其原因在于藁本内酯不稳定,对照品难以保存,纯度下降;阿魏酸对照品稳定,但报道的测定方法准确性差,结果误差大;川芎嗪被认为是川芎药材的特征性成分,但具有升华性,供试液制备的步骤多,定量分析结果的误差大。
作者曾对当归中藁本内酯和阿魏酸的测定方法进行过深入研究[11-13],认为阿魏酸可最先作为川芎药材和饮片质量评价的指标性成分。
台湾5中华中药典6(2004年版)中将阿魏酸大于0107%规定为川芎药材的质量控制指标[14]。
为此,本研究建立了准确、快速地用H PLC 测定川芎药材和饮片中游离阿魏酸和总阿魏酸含量的方法,并测定了33份不同来源的川芎药材、饮片和栽培苓子样品,分析了川芎药材和饮片的质量与阿魏酸含量的相关性,提出了评价川芎药材质量的总阿魏酸含量指标,以期为制定川芎药材的质量标准提供科学依据。
1 材料Ag il e nt 1100型高效液相色谱仪(美国),配置G1322A 真空在线脱气机,G1312A 四元梯度泵,G1329A 自动进样仪,G1316A 柱温箱,G1315A 二极管阵列检测器。
电子分析天平为德国Satori u s (1/1万,CP224S)和瑞士M ettler To ledo (1/10万,MT5)。
超声提取器为Branson 5510E -MTH 型(美国)。
阿魏酸对照品购于中国药品生物制品检定所(北京),其纯度用H PLC 色谱峰的面积归一化法计算大于9810%。
甲醇(分析纯)和乙腈(色谱纯)为Lab -scan (泰国),分析纯的甲酸、冰醋酸和碳酸氢钠为Un-i che m (波兰);纯净水由M illi p o re 净水器#194#(美国)产生。
33份川芎样品从川芎的道地产区四川省都江堰市、彭州、崇州和非地道产区以及香港不同公司收集(表1),由香港浸会大学中医药学院赵中振教授鉴定。
2 方法211 色谱条件 A llti m a C 18色谱柱(416mm @250mm ,5L m );C 18保护柱(416mm @715mm,5L m );流动相由乙腈和1%冰醋酸水溶液组成,梯度洗脱,0~18m i n 乙腈19%,18~60m i n 乙腈19%~100%;流速110mL #m in -1;柱温为30e ;测定波长为320nm,H PLC -DAD 在线收集紫外光谱的范围为200~400nm;进样量为10L L 。
在该色谱条件下,阿魏酸峰达到基线分离。
对照品和川芎供试液的色谱图见图1。
A 1对照品;B 1供试品;a 1游离阿魏酸的测定;b 1总阿魏酸的测定;11阿魏酸;21阿魏酸松柏酯。
图1 对照品及样品H PLC 图212 对照品溶液制备及线性范围考察21211 制备测定游离阿魏酸的对照品溶液 精密称取215m g 阿魏酸对照品,置25mL 棕色量瓶中,加甲醇-甲酸(95B 5)稀释至刻度,摇匀,制得100mg #L -1的对照品贮备液。
分别精密吸取对照品贮备液100,300,500,700,900L L,112,115,210mL 于10mL 量瓶中,加甲醇-甲酸(95B 5)稀释至刻度,摇匀。
21212 制备测定总阿魏酸的对照品溶液 精密称取510m g 阿魏酸对照品,置10mL 棕色量瓶中,加甲醇-0124m ol #L -1碳酸氢钠水溶液(95B 5)稀释至刻度,摇匀,制得500m g #L -1对照品贮备液。
分别精密吸取对照品贮备液100,200,300,500,700,900L L 于10mL 量瓶中,加甲醇-0124m o l #L -1碳酸氢钠水溶液(95B 5)稀释至刻度,摇匀。
21213 线性范围考察 依选定的色谱条件进样测定,以峰面积与对照品进样量(L g )进行线性回归,得测定游离阿魏酸和总阿魏酸的回归方程分别为Y =554212X-11829(r =019998,n =8)和Y =558817X-91999(r =019996,n =6)。
结果表明,用甲醇-甲酸(95B 5)和甲醇-0124mo l #L -1碳酸氢钠水溶液(95B 5)分别配制的阿魏酸溶液,进样量在0101~0120L g 和0105~0146L g 分别与其峰面积呈良好的线性关系。
本研究中将测定游离阿魏酸和总阿魏酸的对照品溶液分别制备的目的是与供试液相对应,尽量减小分析误差。
用这两种溶剂制备的对照品溶液,阿魏酸的保留时间一致,紫外光谱相同;将二者的进样量(L g )与峰面积合并在一起计算,回归方程为Y =558218X-61526(r =019997,n =14),线性仍然良好。
213 供试液的制备 取样品粉末(20目)015g ,精密称定,置60mL 具密封盖的棕色瓶中,精密加入甲醇-甲酸(95B 5)25mL ,密闭,称定质量;超声提取90m i n 后取出,称重,补足失重;摇匀,静置;取上清液经0120L m 微孔滤膜过滤,即得游离阿魏酸的供试液。
重复1次,制备1份平行供试液。
以甲醇-0124m ol #L -1碳酸氢钠水溶液(95B 5)为溶剂,同法制得总阿魏酸的供试液。
214 精密度试验 以对照品溶液连续进样和样品粉末重复测定的结果分别评价仪器的重复性和分析方法的重复性。
取用甲醇-甲酸(95B 5)和甲醇-0124m ol #L -1碳酸氢钠水溶液(95B 5)配制的对照品溶液各1份,依选定的色谱条件连续进样6次,测定峰面积,其RSD 分别为112%和111%(n =6)。
取药材粉末,分别用上述两种溶剂制备6份供试液,测定游离阿魏酸和总阿魏酸的含量,其RSD 分别为117%和0185%(n =6)。
215 回收率试验 取已知阿魏酸含量的川芎药材粉末约0125g ,各6份,精密称定。
分别精密加入游离阿魏酸量(012m g)和总阿魏酸量(0185m g)的对照品溶液,甲醇-甲酸(95B 5)或甲醇-0124m ol #L-1碳酸氢钠水溶液(95B 5)溶液。
按照供试液制备方法制成供试液,测定游离阿魏酸和总阿魏酸的含量。
其平均回收率分别为(9517?3185)%( x ?s ,n =6)和(9815?1164)%(n =6)。
216 样品测定 每份样品粉末称取2份,按照供试液的制备方法制成供试液,各进样测定2次。
根据回归方程计算样品中游离阿魏酸和总阿魏酸的含#195#量。
33份川芎样品中游离阿魏酸和总阿魏酸的质量分数及其比值见表1。
表1不同来源的川芎样品中游离阿魏酸和总阿魏酸的质量分数mg#g-1 No1样品类型来源游离阿魏酸1)总阿魏酸1)总阿魏酸/游离阿魏酸1根茎四川都江堰01409115431762根茎四川都江堰01472115131203根茎四川都江堰01351115841504根茎四川都江堰01379117041495根茎四川都江堰01679112411826根茎四川彭州01565110911937根茎四川彭州01410117941388根茎四川彭州015050189811789根茎四川彭州017691135117610根茎四川彭州015911162217311根茎四川彭州014621142310712根茎四川崇州015691127212313根茎四川崇州013011150419814根茎四川什邡015221113211715根茎四川苍溪014911162313116根茎云南015311145217317根茎陕西南郑0139401519113218根茎香港公司10151601814115819根茎香港公司20144201616113920根茎香港公司30154801658112021根茎香港公司40126701298111221小块(约1c m)四川都江堰0128901385113323小块(约1c m)四川汶县0143001745117324小块(约1c m)云南019051112112325小块(约1c m)云南019121120113126小块(约1c m)陕西0154201801114827小块(约1c m)福建017421111114928饮片四川都江堰013381134319629饮片四川彭州014991100210130饮片四川彭州012581109412131饮片香港公司50121901225110332饮片香港公司60133301352110633栽培用苓子四川茂县0110221001916注:1)此数值( x,n=2)为测定计算值,未以干燥品计。