马铃薯A病毒复制相关蛋白研究进展
杭州郊区马铃薯A病毒分离物的基因组3‘—末端序列测定及系统进行分析

组 3- 端 1 8 '末 6 7棱 苷 酸序列 , 包括 № , P和 3 . T 3 一 端含 P ( ) , 传基 序 DA 它 C ’u R, ’末 由 A尾 蚜 G位 于 多 聚 蛋 白第 25~2 7氪 基酸 。B A T分 析 表 明 该 病 毒 为 马铃 薯 A病 毒 ( A) 它 与 已报 道 的 1 1 1 LS Ⅳ , 9个
作者 简 介 : 程哗 ( 99一) 女 . 1 6 , 浙江 永 摩人 . 理研 究 员 , 曲 主 要 从 事线 状植 物 病毒 鉴定 。 通讯 作者 : 陈剑 平 .- i 1 n .z 衄 E啪 I p :  ̄e @m I h
w si tf d a tep s a21・ 7 ai oy r ̄i a  ̄ t e Ih oi 521 a n p ipoen.c 呷 ∞n t t i i  ̄ 0 o } 1 s lts 9 i ae o Ha n i s 0 w l fI rt ^ c ioae ∞ ∞ l  ̄ i l o J slt te Nel ln s h t a d ,舯 d ter m0嘟  ̄r hi l
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马铃薯抗晚疫病和病毒病转基因研究现状与展望

Ha i 白 是 We 等 … 首 先 从 梨 火 疫 病 菌 r n蛋 p i
( r ii myooa 中发 现 的 一 个 激 发 过 敏 反 应 的 Ew naa l r ) v 蛋 白 , 由 hp ( y esniv rso s a d r H p r si e t e ep ne n
调控下 ,将会引起寄主被侵染细胞 的过敏性坏死 ,
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中国马铃薯 ,第 2 卷 ,第 2 ,20 0 期 06
从 而 限制 病原 菌 的扩散 ,达到抗 病 的 目的 。这个 系
且 还 能激 活抗 病基 因表 达 ,如 植物抗 毒 素及 诱 导病 原相 关 蛋 白( R) 基 因 的表 达 【】 P 等 1 0 。wu等…] G 将 O 基 因放 在 3 成 型 启 动 子 下 表 达 得 到 较好 的抗 5s组 病效 果 ,但 是 D kI】 oe 的研 究 发现 ,在 细 胞 内可 以 经过 催 化 生 成 自由基 ,它 能 引起 细胞 内酶 活 性 的 降低 及 细胞 的衰 老 死亡 ,对 植物 有一 定 的伤 害 。 甄伟 等 【 利用 P R技 术从 黑 曲霉 (priu i r I 3 C S eg l ng ) ls e 中 扩增 并 克 隆 了葡 萄 糖 氧 化 酶 ( lcs xds, Guoeoiae 简 称 G 基 因 ,并将 马 铃薯 病原 诱 导型 启动 子 (w— O) p l
万以马铃薯为主食 的爱尔兰人饱尝饥饿的蹂躏。2 0
世纪 8 年代 ,马铃薯 晚疫病又卷土重来 ,在全球 p toeii ) 因家 族 成 员 hp 0 a gncy 基 h t rN基 因 编 码 ,纯 化 各冷 凉 的马铃 薯 产 区频 频 发生 ,再 次引 起 了人们 的 的 Ha i 白在 烟 草 、番 茄 等 茄 科 植 物 的细 胞 问 r n蛋 p
烟草抗病毒基因工程研究

烟草抗病毒基因工程研究烟草作为一种重要的经济作物,在全球范围内广泛种植。
然而,烟草病毒病是烟草生产中面临的重要问题,给烟农带来巨大经济损失。
传统抗病毒方法如化学防治和物理防治等存在诸多弊端,而烟草抗病毒基因工程作为一种新型的防控技术,具有高效、安全、环保等优势,近年来备受。
本文将介绍烟草抗病毒基因工程的基本概念、研究现状、研究方法及实验结果与分析,并展望未来发展趋势。
烟草抗病毒基因工程是通过基因克隆、表达和分析等技术,将外源抗病毒基因导入烟草,使其在体内表达出抗烟草病毒的蛋白质,从而提高烟草对病毒的抗性。
该技术可有效解决传统抗病毒方法存在的问题,为烟草生产带来新的防控策略。
自20世纪90年代以来,随着分子生物学技术的迅速发展,烟草抗病毒基因工程研究取得了一系列重要成果。
例如,植物抗病毒基因的克隆与功能分析、抗病毒基因的转化与表达、抗病毒基因工程品种的选育与应用等。
然而,在实际应用过程中,仍存在转化效率低、基因沉默现象严重等问题。
烟草抗病毒基因工程研究的主要方法包括基因克隆、表达、分析等。
基因克隆技术通过对植物抗病毒基因的筛选、克隆和鉴定,为抗病毒基因的表达提供基础。
在基因表达方面,采用农杆菌介导、基因枪轰击、微注射等转化方法,将抗病毒基因导入烟草细胞中,实现基因的高效表达。
同时,利用分子生物学技术如RT-PCR、Southern blot等,对转基因烟草进行分子水平上的检测与鉴定。
通过基因克隆、表达和分析等技术,研究人员已成功获得多个具有抗病毒活性的转基因烟草品种。
这些品种在田间试验中表现出良好的抗病毒效果,有效降低了病毒对烟草的侵染和危害。
研究人员还发现,导入的抗病毒基因在烟草中能够稳定遗传,为抗病毒烟草品种的大规模繁殖和推广奠定了基础。
然而,在实际应用过程中,仍存在转化效率低、基因沉默现象严重等问题。
为了解决这些问题,研究人员尝试通过优化转化条件、筛选高效转化方法、选用适当的启动子等方式,提高抗病毒基因的表达水平和转化效率。
马铃薯抗卷叶病毒基因工程研究现状

毒属 ( oeo iu ) 分 布 广 泛 , 染 马 铃 薯 植 株 P lr vr s , 侵
引起 黄 化 、 缩 、 叶 、 化 及 块 茎 网状 坏 死 等 症 矮 卷 僵 状… , 严重 影 响 马 铃 薯 的产 量 和 品质 。P R 是 L V
一
毒转录、 翻译 有 关 ; 端 UTR 长 1 1b ; 3末 4 p 在 ( F b和 0 3之间存 在 长 1 7b ) 2 R RF 9 p的 非编 码 基
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图 2 马 铃 薯 卷 I 病 毒 基 因组 和 正 义 RNA 的 简 图 1 - r
收 稿 日期 : 0 10 3 2 l — 50 基 金项 目 : 家 自然 科 学 基 金 资 助项 目( 0 6 0 3 国 38 0 3 ) 第 一 作者 简 介 : 云 ( 9 3) 女 , 南 省 郑 州 市 人 , 读 硕 李 18一, 河 在 十 , 事作物育种学研究 。 从 通 讯 作 者 : 其 能 ( 9 8) 男 , 西 省 宜 春 市 人 , 士 , 授 , 卢 16一, 江 博 教
R NA 中 还 有 数 个 小 O , OR 6和 (R 7等 , RF 如 F )F
P 粒体为 等 轴对 称二 十 面球状 体 , 包 膜 , I RV 无 直 径 为 2 ~2 m¨ , 3 5n 3 其基 因组 为 S ( ) J S + RNA, 长
约 6 0k , 子 量 为 2 1 5端 共 价 相 连 7k . b 分 × OD, D
种 严格 由蚜 虫 以持 久 、 环 增 殖 方 式 传 播 的马 循
植物病毒病检测及防治的研究进展

植物病毒病检测及防治的研究进展摘要:植物病毒病又称植物癌,给农作物及经济作物带来了严重危害,降低了农作物产量和质量,每年仅在我国因病毒感染农作物造成的损失就可达200亿美元,植物病毒病造成的损失是世界人口生存的威胁之一。
关键词:植物病毒病;检测;防治一、植物病毒病的检测技术病毒有两种,以DNA为遗传物质的病毒称为DNA病毒,以RNA为遗传物质的病毒称为RNA病毒,90%的植物病毒是RNA病毒。
早期RNA植物病毒病的检测一般采用传统的生物学方法(指示植物检测法),即通过汁液摩擦接种或嫁接传染方式,将待测带毒植株汁液接种到一株或多株指示植物上,从而观察其在指示植物上的症状。
指示植物是对某一种或某几种病毒和类病毒敏感的植物,感染后可迅速出现明显症状。
传统生物学方法鉴定谱广,操作简单,但需培育大量指示植物,检测速度慢,易受外界环境影响。
随着电子显微镜的出现,病毒的真实形态才得以展现。
电子显微镜观察结果直观、准确,还能观察病毒引起的寄主细胞病变及内含体特征,是深入研究病毒病机理的重要手段之一。
但仪器设备昂贵,制片及操作技术复杂,难以掌握,对操作人员技术水平要求高。
由于每一种植物病毒产生的抗血清各有特性,人们研发一种利用抗原抗体外特异性免疫反应检测植物病毒的方法。
酶联免疫吸附法(ELISA)是通过酶催化颜色反应将抗原抗体结合起来的一种方法,其具有灵敏、快速、特异性强、分析率高、成本低等优点,可用于大规模样品检测,是血清学中应用最广泛的方法,已成为检测植物病毒的关键技术。
随着生物体遗传物质研究的逐步深入,人们发现通过核酸能准确、快速地鉴定植物、动物和微生物的物种和种群。
基于核酸检测的分子生物学方法比血清学方法具有更宽的检测范围、更高的灵敏度、更强的特异性,适用于大批量样本检测,在植物病毒检测中得到了迅速而广泛的应用。
包括核酸杂交技术(Nucleic acid hybridiza-tion)、反转录PCR技术(RT-PCR)、荧光定量PCR技术(real-timePCR)、DNA微阵列技术(DNA microarray)。
马铃薯A病毒

病毒及类病毒1.检疫对象:马铃薯A病毒图片:拉丁学名: Potato virus A, PV A英文名称:国内外分类:进境检疫对象检疫分类: 病害分类地位:寄主名称:茄属植物, 如马铃薯、洋酸浆、醋栗番茄、枸杞、普通烟、香料烟、假酸浆、毛曼陀罗、野生马铃薯等, 主要危害马铃薯分布地区:马铃薯A 病毒分布于欧洲各国、日本、美国、新西兰以及中国的福建、黑龙江、云南等危害症状:根据品种和气候的不同, 感染该病毒的马铃薯病叶会表现为黄化、斑驳、药叶、叶表面粗糙、边缘波浪状或不显症, 一些敏感的品种可表现为顶端坏死。
感病的叶子通常是发光的, 叶缘向叶背卷曲成线状。
植株枝条向外弯曲, 茎一般不受影响, 偶尔表现为矮化。
该病毒经常和其他病毒如PVY, PVX, PVM 等复合侵染马铃薯, 表现为皱缩状。
虽然当其单独侵染时, 对马铃薯影响较小, 但常与PVY 或PVX复合侵染, 引起叶片斑驳皱缩, 严重时早期枯死, 减产十分严重。
此病于1975 年在黑龙江省克山种植的马铃薯白头翁品种田里表现轻花叶症植株中发现。
传播途径:该病毒病至少由7 种蚜虫以非持久性的方式传播, 如桃蚜(Myzus p ersicae)、百合新瘤蚜(Aphisf rangu lae)、鼠李马铃薯蚜( A. nasturtii )、棉蚜(A. gossyp ii)、大戟长管蚜(Macrosiphum euphorbiae)等, 介体传播不需辅助病毒。
其中, 桃蚜是最主要的传毒介体, 桃蚜获毒和接种只各需20s, 并可保毒20m in, 具有很高的传毒效率。
PVA 还可通过汁液机械摩擦接种。
薯块可持久带毒, 因此PVA可随种薯传播和定殖生物学特征:该病毒一般在寄主活体上越冬。
在气候温和地区, PVA 病毒在木本植物上(如桃树)越冬, 在非木本植物上越夏。
也可在马铃薯种薯上及另外一些茄属植物上越冬鉴别特征:马铃薯A病毒病的病原PVA 是马铃薯Y病毒属(Po tyvirus)成员, 异名为马铃薯轻花叶病毒(Potatom ildmosaic virus)、茄科病毒3号( Solanum virus3)。
马铃薯卷叶病毒基因功能的研究进展

e c d d y L n o e b P fV.T e e e PL n ce t e s q e c a d p oen e pe s d r ie s y tm s i s h f  ̄s o f RV u loi e u n e n r tis x rs e o l s a e s mp o .vr d d u
p s iit lm a eo ed v lp n fh c n lg f r n g o i re igf ie s e it n eo o t . o sblywewi i l k nt e eo me t et h oo yo a s en ssb e dn ds a erssa c f t o h ot e t or pa Ke o d : ’e r n I e u n e vr I rt i e o e 1 k d; rt i u cin yW r s 5 t r a q e c : i o eng n m .i e p enf n t s ni s a p n o o
1 基 因组稳定 性、变异性、致病性
不同来源 的 P R L V基因组具有很高的同源性和
稳 定 性 。 由 图 2可 以 看 出 ,除 了 澳 大 利 亚 株 系
毒( e a o oa i s病毒粒体混合后可以机 Pa ntnm si v u) e i c r 械传播f 1 1 。田间常现 P R L V和 P Y混合侵染 ,症状 V
马铃薯 卷叶病毒基 因功能的研究进 展——刘俊莹 ,张剑峰 ,张华鹏 ,等 中图分类号 :¥3 52
文献标识码:A
文章编号 :17 —6 52 1) 6 0 7 - 6 6 2 3 3 (0 0 - 3 0 1 1
马铃薯 卷叶病毒基 因功 能的研 究进展
马铃薯A病毒云南分离物外壳蛋白基因的克隆与序列分析

西
南
农
业
学
报
20 0 6年 1 9卷 6期
V0. 9 】1 No 6 .
S uh e tChn o ra fA c l rlS in e o tw s iaJ un l o ut a ce c s u
文 章 编 号 :0 1— 8 9 20 )6—17 0 10 4 2 (0 6 0 0 8— 4
Cl ni n e ue i ft o tp o en g ne o o ng a d s q ncng o he c a r t i e f
Po a o vr s A r m u na t t iu f o Y n n
D N n F G Q , H N ih n u igr gD NGJahn ,H GZ o gk i I G Mi AN iZ A G L— e . Tn—n , O i—ogZ AN hn —a g, z i
P R扩增得到长约 8 0b C 0 p的 目的片段。将 目的片段克隆至 p E - a 载体并进行 了序列测定 , G MTEs y 测得 全长为 8 7b 0 p的 P A C V P
基 因。测序结果 与 P A其他分 离物 c V P基 因序列比较 , 其氨基酸同源性最高可达 9 . 8 5%。根据 G n a k中 P A C e Bn V P氨基 酸序 列 建 立 了病毒的系统进化树 并对 P A不 同分离物 c V P氨基酸序列差异性进行 了分析。 关键词 : 马铃薯 A病毒 ; 云南分离物; 外壳蛋 白基 因; 序列分析 中圈分类号 :5 2 s3 文献标识码 : A
马 铃 薯 A病 毒 云 南 分 离 物 外 壳 蛋 白基 因 的克 隆 与序 列 分析
丁 铭 , 方 琦 , 张丽珍 , 李婷婷 , 家红 , 董 张仲 凯
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成 。多 聚 蛋 白 中有一 个 P l的酶切 位 点 和 一个 HC —
Po r 的酶切位点 ,它们通过水解 自身的 c端而从多
聚蛋 白中分离出来 ,其余蛋 白的裂解均由 Na I 蛋白 酶催 化 】 。 Nar 蛋 白酶是 核 内含体 蛋 白 Na的 c端 , I o P I
的水 解 速度 较慢 ,可 能在病 毒 的复 制循 环 中发 挥 一 定 的功能 f V 中 NIPo对 P — K1 水解 位 点 8 ] 。P A ar 36 间
关于 P A的研 究极其缓慢 。迄今为止 ,P A分子 V V 生物 学 方 面 的研 究 在 国 内报道 极 少 l。本 文 对 P A 2 l V
C 、6 2间 切 割 位 点 的 有 效 处 理 仅 发 生 6 2 V g I K K 一 P 间 的水 解 被 阻 止 时 ,说 明 C 、6 2间 切 割 位 点 的 I K 水 解是 采用 顺 式模 式 【 】 。
1 核 内含体蛋 白 aN a ( I)
P A基 因组含有 一 个 开放 阅读 框 ( F) V OR ,可 表 达 产 生 一 个 大 的 多 聚 蛋 白 ,含 有 3 5 ~0 9个 氨 0835 基 酸 ,分 子 量 约 为 30k 。 多 聚 蛋 白再 被 切 割 成 4 u 小 的成 熟 蛋 白 ,从 N一 到 C 端 分 别 为 P 、H — 端 一 1 C
吴兴泉 ,谭 晓荣 ,陈士华
(河南工业大学生物工程学院,河南 郑州 40 5 5 0 2)
摘 要 :马铃薯 A病毒侵染寄主后的复制主要 由推测 的复 制复合体 参与 完成 ,复 制复合体蛋 白包括 R A解 N
螺旋酶 C 、病毒基 因组结合 蛋白 V g I 白酶部 分 N a r 和 R A依 赖性 R A聚合 酶 N b I P 、N a蛋 IPo N N I。近年 来关于 P A V
端l ,是病毒粒体 中的第二种结构蛋 白质 。V g l 0 】 P 功 能较多 ,它可以通过与 R A聚合酶互作而作为病 N
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中国马铃薯 ,第 2 卷 ,第 4 ,20 0 期 06
毒 R A复制酶的引物参 与病毒复制[ 1,也可参 N 13 1] - 与病毒的细胞间运动和长距离系统侵染[1,因此 18 4] - 在病毒侵染循环中发挥着重要作用【 ] l 。 n
2 病毒基 因组结合蛋 白( P ) V g
V g 由 N ar 白酶 从 N a蛋 白的 N端 水 P是 IPo蛋 I 解 下 来 的 ,它 可 通 过共 价 键 结 合 在 病 毒 R A的 5 N
作 者简介:吴兴泉( 9 0 ) 17 一 ,男 ,副教授 ,博士 ,主要从 事植
物病理学 与分子生物学研 究。
水解活性 ,水解位点 的序列及其邻近序列均或影响 水解效率 】 。研究发现 N ar 对 多聚蛋 白的水解 I o P 可产 生一 系 列 中间产 物 ,它 们被 释 放 的速 度及 存 在 的半衰期都各不相同。Na r 对 3 I o P 个蛋白水解位点 即:P — K1 、C一 K 36 间 I6 2间及 Na性 ,说 明 V g P 可作引物启始病毒 R A的复 N 制 。除了与病毒 R A共价结合外 ,V g N P 或它的前 体蛋 白 Na i均表现出细胞内定位于核上的现象【3, 32 】] - 这种现象与 V g P 功能的关 系尚不清楚 。
复制复合体 蛋白的研 究取得 了一定的进展 ,很 多蛋白在 病毒 系统侵染过程发挥 的作 用及各种蛋 白间的互作关 系等 方 面已明确。本文对近年 来在 P A病毒复制相 关蛋 白的结构与功 能方面的研 究进展进行评述 。 V
关键词 :马铃 薯 A病毒 ;复制相关蛋 白;结构与功能
马铃薯 A病毒是马铃薯 Y病毒属成员 ,在世 界各马铃薯种植区均有广泛分布 ,严重危害马铃薯 生产。该病毒可随种薯传播,并随种薯的种植而定
Po 3 K1 I K 、VP 、N a Po r、P 、6 、C 、6 2 g I ' r 、N b和 I
C 。多 聚蛋 白 的裂 解 主要 通 过 3个 具有 蛋 白酶 活 P 性 的蛋 白( 1 P 、HC Po — r、和 N aPo 协 调作 用 来 完 I— r)
收稿 日期 :2 0 — 2 2 0 5 1— 0 基金项 目:河南工业 大学校基金项 目( 0 3 0 201)
可催 化切 割 多聚 蛋 白 。NIPo具有顺 式 和 反式 蛋 白 ar
毒 ,而这些蚜虫在我国又很普遍 ,因此该病毒的扩 散可能性很大 ,具有较高流行风险,并具一定的检 疫重要性… 。目前我国马铃薯 A病毒 的相关研 究报 道极少 ,其原 因可能是由于我 国马铃薯病毒的检测
主要 采用 国际马铃 薯 中心 提供 的免疫 学检 测试 剂进 行 ,而 此 试 剂 中 无 P A 的抗 血 清 ,直 接 导致 我 国 V
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马铃薯 A 毒复制相关蛋 白研究进展—— 吴兴泉 , 晓荣 ,陈士华 病 谭
中图分类号:¥ 3 52
文献标识码 :A
文章编号 :t7 — 6 5 2 0 ) 4 0 3 一 4 6 2 3 3 (0 6 0 — 2 t0
马铃薯 A病毒 复制相关 蛋 白研 究进展
复制 相关 蛋 白研 究进 展进 行 了综 述 ,为 开展相 关研 究 提供 理论 支持 。
的部分或缓慢的处理特点与 P V的相关报道相似 。 P 在 P V中 ,即使 P — K 间切割位点的七肽序列与 P 36 1 切割效率较 高的 N b P间序列相似 ,也不会增加 I/ C 切割效率 ,这表明在保守的七肽序列 区以外的某个 序 列 或某 种 构象 也 参 与 了 Na r 化 反 应 的调 节 。 IPo催