洋葱内表皮细胞骨架的观察
观察洋葱表皮细胞实验报告
观察洋葱表皮细胞实验报告一、实验目的1、学习制作洋葱表皮细胞临时装片的方法。
2、观察洋葱表皮细胞的形态结构。
3、认识植物细胞的基本结构。
二、实验材料和用具1、实验材料：新鲜洋葱。
2、实验用具：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、刀片、滴管、碘液、吸水纸、纱布等。
三、实验方法和步骤1、准备用干净的纱布将载玻片和盖玻片擦拭干净。
在载玻片中央滴一滴清水。
2、取材用刀片在洋葱鳞片叶的内表皮划一个“井”字，用镊子撕取一小块洋葱鳞片叶的内表皮。
3、制片将撕取的洋葱表皮放入载玻片的水滴中，用镊子展平。
用镊子夹起盖玻片，使它的一边先接触载玻片上的水滴，然后缓缓放下，盖在要观察的材料上，避免盖玻片下出现气泡。
4、染色把一滴碘液滴在盖玻片的一侧。
用吸水纸从盖玻片的另一侧吸引，使碘液浸润标本的全部。
5、观察取镜和安放：一只手握住镜臂，另一只手托住镜座，将显微镜放在实验台上略偏左的位置。
安装好目镜和物镜。
对光：转动转换器，使低倍物镜对准通光孔。
把一个较大的光圈对准通光孔。
左眼注视目镜内，右眼睁开。
转动反光镜，使光线通过通光孔反射到镜筒内。
通过目镜可以看到白亮的圆形视野。
观察：把制作好的临时装片放在载物台上，用压片夹压住，标本要正对通光孔的中心。
转动粗准焦螺旋，使镜筒缓缓下降，直到物镜接近玻片标本为止（此时眼睛一定要看着物镜）。
左眼向目镜内看，同时逆时针方向转动粗准焦螺旋，使镜筒缓缓上升，直到看清物像为止。
再略微转动细准焦螺旋，使看到的物像更加清晰。
四、实验结果在低倍显微镜下，可以看到洋葱表皮细胞呈长方形，排列紧密。
细胞壁清晰可见，为无色透明的结构。
细胞核呈圆形或椭圆形，位于细胞的中央，被碘液染成棕黄色。
细胞质为无色透明的胶状物质。
细胞膜很薄，在普通光学显微镜下不易观察到。
五、实验分析1、制作临时装片时，要注意保持细胞的完整性和形态。
取材不宜过大，否则不易展平，且细胞重叠会影响观察效果。
2、盖盖玻片时，要防止产生气泡。
如果有气泡，会影响对细胞结构的观察。
实验三 细胞骨架的光学显微镜观察
实验三细胞骨架的光学显微镜观察一、实验目的掌握植物细胞骨架的光镜标本制作方法。
细胞骨架是指细胞质中纵横交错的纤维网络结构，按组成成分和形态结构的不同可分为微管、微丝和中间纤维。
它们对细胞形态的维持、细胞的生长、运动、分裂、分化和物质运输等起重要作用。
光学显微镜下细胞骨架的形态学观察多用1% Triton X-100处理细胞，可使细胞膜溶解，而细胞骨架系统的蛋白质被保存，再用考马斯亮兰R250染色，使得胞质中细胞骨架得以清晰显现。
二、材料、试剂和仪器1．材料新鲜洋葱鳞茎、人口腔上皮细胞2．试剂1）M缓冲液（pH 7.2）各成分终浓度为：50mmol/L咪唑(MW:68.08),50mmol/L KCl(MW:74.55),0.5mmol/L MgCl2?6H2O(MW:203.30),1mmol/L EGTA(MW:380.36),0.1mmol/L EDTA-Na2(MW:372.24),1mmol/L DTT(MW:154.3)2）6mmol/L PBS磷酸缓冲液（pH 6.5）:KH2PO4 : Na2HPO4?2H2O = 7:3 (见附录3 查磷酸缓冲液的配置)3）0.7% NaCl生理盐水4）1% Triton X-100(聚乙二醇辛基苯基醚) 溶于M-缓冲液5）3% 戊二醛100mL: 25% 戊二醛取12mL ,PBS 88mL6）0.2% 考马斯亮蓝R250染液200mL:考马斯亮蓝R250 0.2g,甲醇46.5mL,冰乙酸7mL,蒸馏水46.5 mL3．仪器光学显微镜，镊子，剪刀，试管，表面皿，滴管，载玻片，盖玻片,灭菌牙签，1.5mL离心管，1mL 吸头，1mL取液器，酒精灯，染色缸细胞骨架动画三、实验程序四、结果与分析洋葱鳞茎外层与内层的表皮细胞比较（放大倍数10×20）五、思考题1．光镜下观察到的细胞骨架有何形态特征？2．对实验成功或失败的原因进行讨论。
实验中的注意事项和关键步骤。
不同处理条件对洋葱鳞茎表皮细胞骨架形态影响的研究
第19卷 第3期茂名学院学报Vol.19 No.3 2009年6月JOURNAL OF MAOMING UNI VERSI TY Jun.2009不同处理条件对洋葱鳞茎表皮细胞骨架形态影响的研究马云,张妍妍,王启钊,王伍,张巧玉,陈改红(信阳师范学院生命科学学院,河南信阳464000)摘要:细胞骨架是活细胞的重要结构,研究细胞骨架的形态对于进一步研究其功能具有重要意义。
本研究以洋葱为材料,设置了4个不同的1%Tri ton X-100抽提非骨架蛋白时间(10min、15min、25min、40min)对洋葱细胞骨架显微观察的关键条件进行了优化,同时分析了细胞环境温度(-18 、4 、20 、50 ),紫外线照射活细胞(0min、60min),0.1mol L Ca2+处理及0.1%秋水仙素处理对洋葱细胞骨架形态观察效果的影响。
结果表明:1%Triton X-100抽提非骨架蛋白25min观察效果较好;-18 、50 ,紫外线辐射60min,0.1mol L Ca2+和秋水仙素处理均会影响细胞骨架的观察。
关键词:细胞骨架;温度;紫外线;洋葱鳞茎;显微观察中图分类号:Q245文献标识码:A文章编号:1671-6590(2009)03-0015-050 引言细胞骨架(C ytoskeleton)是指真核细胞中的蛋白质纤维网架体系。
细胞骨架不仅在维持细胞形态、保持细胞内部结构的有序性方面起重要作用,而且还与细胞运动、物质运输、能量转换、信息传递、细胞分裂和分化、细胞凋亡、细胞癌变、基因表达等生命活动密切相关[1-3]。
因此细胞骨架的研究成为当前生物学中最为活跃的领域之一,而细胞骨架形态的显微观察是则更深层次地认识和研究其结构、功能、作用机制的基础。
目前关于洋葱细胞骨架形态学研究的报道甚少。
为此,笔者以洋葱为实验材料,对洋葱细胞骨架制备的关键条件(Triton X-100抽提非骨架蛋白时间)进行了优化讨论,进而从形态上就紫外线、低温、高温, Ca2+处理和秋水仙素处理对细胞骨架的影响进行了研究,并对这些影响因素进行分析讨论,以期能够为与细胞骨架相关的实验教学和科研提供参考。
实验五 植物细胞骨架的光学显微镜观察
实验五植物细胞骨架的光学显微镜观察一、实验目的：掌握植物细胞骨架处理及染色方法。
二、实验原理：用适当浓度的TritonX-100处理时，可将细胞内蛋白质破坏，但细胞骨架系统的蛋白质却被保存，后者用考马斯亮蓝R250染色，可在光学显微镜下观察到细胞骨架的网状结构。
三、实验试剂：1、M-缓冲液；2、pH6.8磷酸缓冲液；3、1% TritonX-100，用M-缓冲液配制；4、0.2%考马斯亮兰R250；5、3%戊二醛，用pH6.8磷酸缓冲液配制；四、实验步骤：1、撕取洋葱鳞茎内表皮细胞约1cm2大小若干片，置于装有pH6.8磷酸缓冲液的培养皿中使其下沉(约1-2min)；2、吸去pH6.8磷酸缓冲液，用1% TritonX-100处理30min；3、吸去1% TritonX-100，用M-缓冲液洗三次，每次5min；4、3%戊二醛固定30min；5、pH6.8磷酸缓冲液洗三次，每次5min；6、0.2%考马斯亮蓝R250染色10min；7、用蒸馏水洗1-2次，将内表皮细胞平铺于载玻片上，加盖玻片，于显微镜下观察。
五、实验结果：在光学显微镜下，可以清晰的看到细胞骨架呈淡蓝色。
六、分析与讨论：1、洋葱表皮细胞中，质膜下，核周，胞质中的细胞骨架的分布有无不同？答: 核周细胞骨架分布紧密，向外基质出延伸时明显变得稀疏，质膜下维持细胞的外部形态。
因此显微镜下看到的细胞骨架形态基本与细胞形态相似。
胞质中细胞骨架呈现纤维状向质膜发射，质膜处的细胞骨架围成细胞固有形态。
2、为什么试验中所看到的洋葱表皮细胞中细胞骨架有的成纤维状，有的成串球状？答: 细胞骨架有运输细胞内物质的作用，细胞内物质沿着细胞骨架的通路进行运输，因此细胞骨架成串珠状可能是由于被运输物质停留在纤维的某一位置上使纤维状的细胞骨架成串珠状。
《观察洋葱表皮细胞》显微镜下的洋葱皮
《观察洋葱表皮细胞》显微镜下的洋葱皮在生物学的世界里，微观的细胞世界总是充满着无尽的奥秘和惊喜。
而洋葱表皮细胞，作为我们在生物实验中常见的观察对象，为我们打开了一扇窥探微观生命的窗口。
准备工作是实验成功的关键。
首先，我们需要一个新鲜的洋葱。
将洋葱切成两半，用镊子撕下一小片洋葱内表皮，这看似简单的操作其实需要一些技巧。
洋葱表皮不能太厚，否则在显微镜下会看不清楚；也不能太薄，否则容易破裂。
然后，将撕下的洋葱表皮放在载玻片上，滴上一滴水，用镊子或解剖针将其展平，避免出现褶皱。
接着，盖上盖玻片，注意不能有气泡产生。
如果有气泡，会影响观察效果。
接下来，就是显微镜登场的时候了。
显微镜是我们探索微观世界的神器。
调整显微镜的粗准焦螺旋，使镜筒上升，将制作好的装片放在载物台上，用压片夹固定住。
然后，眼睛看着物镜，转动粗准焦螺旋，使镜筒缓缓下降，直到物镜接近玻片标本为止。
这个过程要特别小心，避免物镜压坏玻片。
从目镜中观察，此时看到的图像可能是模糊的。
我们需要转动粗准焦螺旋，慢慢升起镜筒，直到看到较为清晰的图像。
如果图像还不够清晰，可以转动细准焦螺旋进行微调。
当图像清晰地呈现在我们眼前时，一个神奇的微观世界就展现在了我们面前。
在显微镜下，洋葱表皮细胞呈现出规则的长方形或正方形。
细胞壁就像是细胞的“围墙”，将细胞内部与外界分隔开来，为细胞提供了稳定的结构支持。
细胞壁清晰可见，呈现出较为明亮的线条。
细胞膜则紧紧地贴附在细胞壁内侧，由于它很薄，在普通光学显微镜下不太容易分辨清楚。
细胞核是细胞的控制中心，通常位于细胞的中央或者一侧。
它看起来就像是一个深色的小圆点，里面包含着细胞的遗传物质。
细胞质则充满了整个细胞内部，其中有着各种细胞器。
细胞质呈现出较为均匀的状态，没有明显的结构。
洋葱表皮细胞之间排列紧密，彼此相互连接。
相邻的细胞之间通过细胞壁上的小孔进行物质交换和信息传递。
通过观察洋葱表皮细胞，我们不仅能够看到细胞的基本结构，还能感受到生命的精巧和奇妙。
解剖洋葱实验报告
一、实验目的1. 通过解剖洋葱，了解植物的基本结构。
2. 学习使用解剖工具，提高动手操作能力。
3. 培养观察和记录实验结果的能力。
二、实验材料1. 洋葱2. 小刀3. 解剖盘4. 纱布5. 显微镜6. 碘液7. 载玻片8. 盖玻片9. 吸水纸10. 实验记录表三、实验步骤1. 洋葱剥皮：用小刀将洋葱剥去外皮，留下内表皮。
2. 洋葱切片：将洋葱内表皮切成薄片，厚度约为0.5mm。
3. 观察洋葱表皮：将洋葱表皮片放在解剖盘上，用显微镜观察其结构。
4. 洋葱纵切：用小刀将洋葱纵切成两半，观察其内部结构。
5. 洋葱横切：将洋葱横切成薄片，观察其横截面结构。
6. 洋葱细胞染色：将洋葱表皮片放在载玻片上，滴加碘液，用吸水纸吸去多余碘液，然后盖上盖玻片，观察染色后的细胞结构。
四、实验结果1. 洋葱表皮结构：洋葱表皮细胞呈长方形，细胞壁明显，细胞质较厚，细胞核位于细胞中央，液泡较大。
2. 洋葱内部结构：洋葱内部由多层组织构成，包括表皮、叶肉、叶脉等。
叶肉细胞呈柱状，排列紧密，叶脉中含有大量的导管和筛管。
3. 洋葱横截面结构：洋葱横截面呈圆形，由多层细胞组成，细胞排列紧密，细胞壁明显。
五、实验分析1. 洋葱表皮细胞是植物的基本单位，具有细胞壁、细胞膜、细胞质、细胞核和液泡等结构。
2. 洋葱内部组织包括表皮、叶肉、叶脉等，各组织具有不同的功能。
3. 通过解剖洋葱，可以了解植物的基本结构，为后续学习植物生物学打下基础。
六、实验总结本次实验通过解剖洋葱，让我们了解了植物的基本结构，学习了使用解剖工具，提高了动手操作能力。
同时，培养了观察和记录实验结果的能力。
在实验过程中，我们注意观察洋葱的不同部位，分析其结构特点，为后续学习植物生物学奠定了基础。
七、注意事项1. 在解剖洋葱时，要小心操作，避免割伤手指。
2. 使用显微镜观察时，要保持显微镜的清洁，避免污染标本。
3. 实验过程中要注意观察，记录实验结果，以便分析实验现象。
细胞实验课件植物细胞骨架的显示与观察
根据细胞骨架成份的蛋白质性质及其抗去垢 剂抽提的特点，用戊二醛在室温下固定细胞后， 经非离子型去垢剂TritonX-100处理除去膜结构 和可溶性蛋白质，留下抗抽提的细胞骨架成份， 用考马斯亮兰R250染色显示。
植物细胞骨架的显示与观察
实验目的 １．加深了解细胞骨架成份的化学性质、形态
分布与功能。 ２．掌握用考马斯亮兰显示细胞骨架系统的原
理与方法。
植物细胞骨架的显示与观察
１．仪器、用具 显微镜、载玻片、盖玻片、剪刀、镊子
２．材料 新鲜的洋葱鳞茎பைடு நூலகம்表皮
３．试剂 （１）3%戊二醛固定液 （２）1%TritonX-100抽提剂 （３）0.2%考马斯亮兰R250染色液
植物细胞骨架的显示与观察
植物细胞骨架的显示与观察
１．洋葱鳞茎内表皮要选取新鲜的。 ２．材料在载玻片上要确保展平，并且
是单层细胞。 ３．要保证材料充分和药品接触。
植物细胞骨架的显示与观察
作业：实验报告，观察到的图像要画图。
植物细胞骨架的显示与观察
观察时，先用低倍镜观察，可以看见细胞的核 区及细胞质中的细胞骨架成份被染成兰色，成束 的细胞骨架成份从核周围呈现放射状地向细胞质 中延伸，找到典型的图像后，转用油镜细心观察 ，注意调节显微镜的工作状态，尽可能达到最佳 分辨效果和清晰度，并仔细地调节细调旋钮，在 立体细胞的不同水平面进行观察。这时候，可以 看到细胞骨架结构的立体情况，并在细胞膜下见 到由很细的纤维构成的网格结构，此外，还可以 明显观察到横穿细胞壁的胞间连丝存在的部位。
1 取材：新鲜内表皮。 2 固定：3%戊二醛固定液，15min。水洗干净，
吸干水分。 3 抽提：1%TritonX-100抽提剂，20min。水洗
观察细胞骨架实验报告
观察细胞骨架实验报告篇一：洋葱鳞片叶表皮细胞的细胞骨架观察实验报告洋葱鳞片叶表皮细胞的细胞骨架观察实验报告吴若自然科学大类单周四 119 XX/11/17一、实验目的:1. 掌握用光学显微镜观察植物细胞骨架的原理及方法。
2. 认识细胞骨架的形态，联系细胞骨架的功能。
二、实验原理：细胞骨架是指真核细胞中的蛋白纤维网架体系。
广义的细胞骨架包括细胞核骨架、细胞质骨架、细胞膜骨架和细胞外基质。
根据蛋白质纤维的直径、组成成分和组装结构的不同可分为微丝、微管和中间纤维。
细胞骨架对于维持细胞的形态结构及细胞运动、物质运输、能量转换、信号传导和细胞分裂等有重要的作用。
本试验采用去垢剂TritonX-100 的缓冲液处理植物材料时，可将细胞的膜结构和大部分蛋白质抽提掉，但细胞骨架系统的蛋白却被保存下来，后者用考马斯亮蓝R250 染色，在光学显微镜下可见一种网状结构。
三、操作步骤：1. 取洋葱内皮表层膜1cm2(可多取两片)左右置于含2mlPBS液的小皿中湿润5min后，吸去PBS2. 向小皿中加入1.5mlTritonX-100(1%)，浸没20min后，吸走TritonX-1003. 向小皿中加入2mlMbuffer浸没置于摇床上5min，重复两次后，吸走Mbuffer4. 向小皿中加入105ml戊二醛（3%），浸没30min后，吸走戊二醛5. 向小皿中加入2mlPBS，浸没置于摇床上5min，重复两次6. 取出表皮平铺于载玻片上，滴加100微升，静置100min后吸取染料7. 向表面滴加蒸馏水洗涤后用纸巾洗去液体，重复两次8. 盖上盖玻片，擦去残余液体，用光学显微镜观察并拍照记录四、实验结果：如图所示，洋葱内表皮细胞轮廓清晰可见，细胞壁及其分界明显可见。
可观察到线性纤维交织而成的网状结构，同一细胞内各处骨架密集度不均匀，细胞核区域纤维较密集，蓝色较重。
调节显微镜焦距可观察到细胞不同横切面的网络结构的变化，表明细胞骨架以三维立体结构的形式分布在整个细胞内。
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洋葱内表皮细胞骨架的观察
一、实验目的
1、掌握植物细胞骨架显示的原理及染色方法. 2、观察光学显微镜下细胞骨架的网状结构
二、实验原理
①、细胞骨架的概念
细胞骨架 （cytoskeleton） 是指真核细 胞中的纤维 蛋白所组成 的网络结构。
红：微丝 绿：微管
微管 ▪ 主要成分微管蛋白 ▪ 微管主要分布在核周围，
注意微丝微管和中间丝都是直径很小的结构，最大的单根
微管才25nm左右，只能在电镜下观察。 本实验用普通光镜是 因为骨架纤维成束分布，染色后有夸大作用。由于细胞经抽提 后剩下的主要是细胞骨架，使之显现更清晰。
M缓冲液
▪ M缓冲液使细胞骨架中的微丝保持稳定。在M缓冲 液中，其中咪唑是缓冲剂EGTA 和EDTA螯合 Ca 离子，溶液并提供Mg离子，在低钙条件下，骨架 纤维保持聚合状态并且较为舒张，便于观察。
二、实验原理
②细胞骨架的功能
维持细胞形态
分裂、 分化
能量转换 信息传递
基因表达
细胞生长、 运动
物质运输
二、实验原理
③细胞骨架组成及分类
细胞膜骨架
细胞核骨架
广义
细胞骨架
狭义
细胞外基质 细胞质骨架
细胞质骨架
根据组 成成分 及形态 结构
微管 微丝 中间丝
二、实验原理
④细胞骨架观察方法 组织化学
电镜
观察方法
▪ 表面活性剂分子结构具有两亲性： 一端为亲水基团，另一端为疏水 基团。溶解于水中以后，表面活 性剂能降低水的表面张力，并提 高有机化合物的可溶性。
考马斯亮蓝G-250
▪ 考马斯亮蓝有G-250和R-250两种。其中考马斯亮 蓝G-250由于与蛋白质的结合反应十分迅速，常用 来作为蛋白质含量的测定。
Triton X-100
▪ （聚乙二醇辛基苯基醚) 是一种非离子型表面活性剂（或 称去污剂）。分子量为646.86（C34H62O11）。它能溶 解脂质，以增加抗体对细胞膜的通透性。非离子型表面活 性剂它在水溶液中不产生离子的一种表面活性剂。它在水 中的溶解是由于它具有对水亲和力很强的官能团。
▪ 表面活性剂
酶标
间接免疫荧光
二、实验原理
⑤试剂选用原因
1
2
Triton X-100可 溶解抽提细胞中 的蛋白质和脂质， 但不破坏细胞骨 架系统，因此显 得更清晰
戊二醛固定能较 好保存骨架成分、 考马斯亮蓝R250 染色，使骨架蛋 白着色，胞质背 景着色弱，有利 于骨架显示
3
M-缓冲液洗涤 细胞，可以提高 骨架稳定性
丝。直径 5-7nm，长短不一。 在细胞中，微丝可 成束、成网或纤维状分散分布，主要分布与细胞 质膜的内侧。
在具有运动功能的细胞中比较发达。
化学成分
肌动蛋白 肌动蛋白结合蛋白
中间丝
直径介与微管与微丝之间，故得名中间丝 （中间纤维 IF） 8——10nm。中间纤维则 分布在整个细胞中。
IF结构稳定：既不受秋水仙素也不受细胞 松弛B素影响，并且也没有极性。
用蒸馏水洗 1—2次，材 料置于载玻 片上，加盖 玻片，即可 镜检。
光镜下内表皮 细胞的轮廓可 见，可粗略观 察到蓝色纤维、 团块形成的网 状结构
LOGO
3%-戊二醛
▪ 作为一种有机交联剂 ▪ 戊二醛在一定条件下能将单体、线型高分子或预聚物转变
成三维网状结构的物质。 戊二醛在1%浓度时，交联度已 达到很高的程度，在此浓度以下，随浓度下降，交联度下 降，溶胀度和降解率增加。浓度超过1%时，各指标无明显 变化。 ▪ 交联剂是一种能在线型分子间起架桥作用，从而使多个线 型分子相互键合交联成网状结构的物质。促进或调节聚合 物分子链间共价键或离子键形成的物质。
呈放射状向四周扩散
电镜下的微管
（一）微管的化学组成
1.微管蛋白
微
微管蛋白
管
蛋 白
微管蛋白
异二 聚体
2个鸟嘌呤核苷酸 （GTP)结合位点 。 可与秋水仙素、长春 花碱结合。
微管蛋白 微管蛋白
聚合 异二 聚体
首位 相连
原纤维 （13）
微管
微丝
微丝的形态与组分
形态：是一类由蛋白纤维组成的实心纤维细
三、实验用品
1、材料
洋 葱 鳞 茎
2、器材
3、试剂
显微镜、小 烧杯、滴管、 载玻片、盖 玻片、镊子
⑴ M-缓冲液 ⑵ 6mmol/L磷酸缓冲 液 ⑶ 1% Triton X-100 ⑷ 0.2%考马斯亮蓝
R250 ⑸ 3%戊二醛
三、实验用品
4、试剂配制
①1% Triton X-100：一般配成30%储备液，通 常Triton X-100与M-缓冲液以所需比例混合置于 30-40 ℃ 水浴2-3小时，以便液体充分混匀。使 用时将30%储备液临时稀释成1%。
②3.0%戊二醛：用0.2mol/L磷酸盐缓冲液配制
③0.2％考马斯亮蓝R250：甲醇46.5ml，冰乙酸 7ml，蒸馏水46.5ml
③M-缓冲液
四、实验方法
1、撕取 2、抽提 3、冲洗
撕取洋葱鳞茎内表皮细胞约1cm2大小若 干片，置于磷酸缓冲液的培养皿中，使其 下沉，（1~2min)
吸去缓冲液，用1%TritonX-100 处理洋葱 表皮25 min。
吸去Triton X—l00，用M一缓冲液洗3次， 每次5分钟
4、固定 3％戊二醛固定30min
四、7、制片
8、观察
PH6.8磷 酸缓冲液 洗3次，每 次5分钟
用0．2％ 考马斯亮 蓝R250 染10min