食品中山梨酸、苯甲酸的测定
高效液相色谱法测定山梨酸、苯甲酸含量
分析检测高效液相色谱法测定山梨酸、苯甲酸含量字琴江1，杨 冲1，王 瑾2，左李美3，赵 芳1，罗桂槐1（1.洱源县检验检测院，云南洱源 671200；2.云南农业职业技术学院，云南昆明650031；3.昆明市城市排水监测站，云南昆明 650118）摘 要：本文采用高效液相色谱法对橙汁中的防腐剂山梨酸、苯甲酸含量进行测定，对方法的线性、加标回收率、精密度进行验证。
结果显示，山梨酸和苯甲酸浓度与峰面积在0.5～20.0 mg/L呈良好的线性关系，相关系数为0.999 6，样品的加标回收率为93.60%～95.90%，RSD为0.97%~1.96%。
该方法能准确测定橙汁中的防腐剂山梨酸和苯甲酸，且操作简单、准确度高，适用于大多数检测机构。
关键词：山梨酸；苯甲酸；高效液相色谱Determination of Sorbic Acid and Benzoic Acid by HPLC ZI Qinjiang1, YANG Chong1, WANG Jin2, ZUO Limei3, ZHAO Fang1, LUO Guihuai1(1.Eryuan County Inspection and Testing Institute, Eryuan 671200, China; 2.Yunnan V ocational and Techical College of Agriculture, Kunming 650031, China; 3.Kunming City Drainage Monitoring Station, Kunming650118, China)Abstract: In this paper, determination sorbic acid and benzoic acid in orange juice by high performance liquid chromatography (HPLC), and the linearity, recovery rate and precision of the method were verified. The results show that there is a good linear relationship between the concentration of 0.5～20.0 mg/L, and the correlation coefficient is 0.999 6, the recovery rate of the samples is between 93.60%～95.90%, and the relative standard deviation (RSD) ranged from 0.97%～1.96%. This method is suitable for accuracition of determination of the content of benzoic acid and sorbic acid in orange juice, which showed great prospect most institutions.Keywords: sorbic acid; benzoic acid; high performance liquid chromatography近年来，随着食品工业的快速发展，食品添加剂已被广泛应用于食品加工、储存中，防腐剂能抑制微生物繁殖，延长食品的保质期，防止食物变质、腐败，防腐剂的出现给人们生活带来极大便利[1]。
食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定
食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定1 范围本方法适用于食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠含量的测定。
2 依据GB/T 23495-2009《食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定 高效液相色谱法》。
3 原理不同样品经提取后，将提取液过滤，经反相高效液相色谱分离测定，根据保留时间定性，外标峰面积定量。
.4 试剂和材料除另有说明外，所用试剂均为分析纯，实验用水符合GB/T 6682要求。
甲醇，乙酸铵等。
苯甲酸标准储备液：称取0.0638g 苯甲酸，用少量乙醇溶解并用水定容至100mL 。
山梨酸标准储备液：称取0.0766g 山梨酸，用少量乙醇溶解并用水定容至100mL 。
糖精钠标准储备液：称取0.0766g 糖精钠，用水溶解并定容至100mL 。
混合标准使用液：分别吸取不同体积苯甲酸、山梨酸和糖精钠标准储备溶液，将其稀释成适当浓度，见附后标准曲线图谱。
5 分析步骤 5.1 样品处理称取适量样品（雪菜）于小烧杯中，用50mL 水分数次将样品移入100mL 容量瓶中，80℃水浴提取30min ，冷却后定容、过滤，滤液待上机分析。
5.2 色谱条件a) Agilent 高效液相色谱仪；b) 色谱柱：C 18柱，250mm ×4.6mm ，5μm ；c) 流动相：0.02mol/L 乙酸铵溶液+甲醇（90+10）； d) 流速：1mL/min ； e) 检测波长：230nm ； f) 进样量：20μL ； g) 柱温：25℃。
5.3 测定取处理液和混合标准使用液各20μL 注入高效液相色谱仪进行分离，以其标准溶液峰的保留时间为依据定性，以其峰面积求出样液中被测物质含量。
6 结果计算样品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的含量按下式计算： X =式中：X ——样品中待测组分含量，g/kg ；c ×Vm ×1000c ——由标准曲线得出的样液中待测物的浓度，μg /mL ； V ——样品定容体积，mL ； m ——样品质量，g 。
高效液相色谱测定食品中苯甲酸、山梨酸、糖精钠方法验证
中图分类号：TS207
XIANDAISHIPIN 现代食品 /137
分析检测 Analysis and Testing
1 实验材料
单位为 g。
1.1 试剂与仪器设备
3 结与结论
苯甲酸标准物质 [1.0 mg·mL-1，编号：GBW(E)100006， 中国计量科学研究院 ]、山梨酸标准物质 [1.0 mg·mL-1， 编号：GBW(E)100007，中国计量科学研究院 ]、糖精 钠标准物质 [1.0 mg·mL-1，编号：GBW(E)100008，中 国计量科学研究院 ]，电子天平、高速冷冻离心机、岛
1.2 仪器条件
3.2 检出限
色谱柱：Venusil C18 Plus 4.6 mm×250 mm，5 μm； 流动相：甲醇 + 乙酸铵溶液 =10+90，pH 为 8.5；流速： 1 mL·min-1；检测波长：230 nm；进样量：10 μL；柱 温：30 ℃。
苯甲酸在 0.25 mg·L-1 时，信噪比大于 3 ∶ 1，检出 限为 0.006 g·kg-1；山梨酸在 0.20 mg·L-1 时，信噪比大 于 3 ∶ 1，检出限为 0.005 g·kg-1；糖精钠在 0.50 mg·L-1 时，信噪比大于 3 ∶ 1，检出限为 0.012 5 g·kg-1。
关键词：山梨酸；苯甲酸；糖精钠；高效液相色谱
Abstract：With the rapid development of modern food industry, benzoic acid, sorbic acid and sodium saccharin are widely used in food. At the same time, excessive use of additives also brings harm to people’s food safety. Therefore, the detection method of additives is very important. Refer to GB 5009.28-2016 national food standards, sorbic acid, benzoic acid and sodium saccharin are widely used in food, the principle of saccharin sodium determination is to use high performance liquid chromatography to determine benzoic acid, sorbic acid and saccharin sodium in food. Through validation of the detection method, the repeatability, detection limit and recovery rate of the method are determined. Under the condition, all the three components were separated completely with a good linear relationship. The standard recovery rate was in the range of 89.4% ～ 102.7%, and the relative standard deviation was 0.02% ～ 0.10%. The adaptability of the laboratory environment and equipment to this method is better determined, which greatly reduces the personnel capacity. The inaccuracy caused by force, environment, equipment and other reasons.
高效液相色谱法测定食品中山梨酸_苯甲酸_糖精钠样品前处理方法(精)
【实验室检测】高效液相色谱法测定食品中山梨酸、苯甲酸、糖精钠样品前处理方法张宗辉[摘要 ]目的探讨高效液相色谱法测定食品中山梨酸、苯甲酸、糖精钠的样品前处理方法。
方法不同样品用不同前处理方法 , 用二极管阵列管检测品 (HPLC －DAD 分析测定 , 外标法定量。
结果该前处理方法线性关系良好 , 相对标准偏差分别为山梨酸 3. 18%、苯甲酸 2. 74%、糖精钠 2. 15%, 加标回收率均在 90% 100%之间。
结论该方法稳定性好、准确可靠、简单快速 , 适用于食品添加剂的测定。
[关键词 ]高效液相色谱法 ; 食品 ; 山梨酸 ; 苯甲酸 ; 糖精钠 [中图分类号 ]O657. 7[文献标识码 ]A[文章编号 ]1006－4028(2011 06－0480－03作者单位 :南充市疾病预防控制中心 (四川南充 637000作者简介 :张宗辉 , 男 , 副主任技师 , 医学检验Pretreatment Methods for Simultaneous Determination of Sorbic Acid , Benzoic Acid and Saccharin Sodium in Different Foods by HighPerformance Liquid ChromatographyZHANG Zong －huiNanchong Municipal Center for Disease Control and Prevention ,Nanchong 637000, Sichuan Province , China．Abstract Objective To establish pre －treatment methods for the simultaneous determination of sorbic acid , benzoic acid and saccharin sodium in different foods by high performance liquid chromatography (HPLC with DAD detection．Methods Different samples were pre －treated with different methods and detected by HPLC with the external standard quantification．Results There was a good linear relationship , the relative standard de-viations were 3. 18%for sorbic acid , 2. 74%for benzoic acid and 2. 15%for saccharin sodium．The recoveries ranged from 90%to 100%for the targeted components．Conclusion The method is simple , rapid , reliable and accurate , which is suitable for the determination of food additives．Key wordshigh performance liquid chromatography ; food ; sorbic acid ; benzoic acid ; saccharin sodium高效液相色谱法可以同时测定山梨酸、苯甲酸、糖精钠 , 方便简单快捷。
应用高效液相色谱法测定食品中3种防腐剂的含量
应用高效液相色谱法测定食品中3种防腐剂的含量摘要：近年食品抽检中发现食品防腐剂超标使用，因此了解常见食品中防腐剂含量，可为食品安全监管提供参考。
采用高效液相色谱法对糖果、中式糕点及酱卤肉制品中苯甲酸、山梨酸及脱氢乙酸含量进行测定分析。
结果表明，中式糕点均含有苯甲酸，属于违法添加苯甲酸类防腐剂的食品；酱卤肉制品山梨酸含量超过国家标准规定的限值；其他食品的苯甲酸、山梨酸和脱氢乙酸含量均符合国家标准规定。
可见，苯甲酸、山梨酸存在超标使用问题，需要加强抽样检查监督管理力度，增加食品安全水平。
关键词：苯甲酸；山梨酸；脱氢乙酸；高效液相色谱随着经济水平的发展和科技水平的提高，市场上不断出现各式各样、色彩鲜明、可口美味、形状各式的食品，而多数食品易受微生物影响发生腐败变质，但为了到达更好的贮藏效果，会人为的在食品中适量添加如苯甲酸、山梨酸、脱氧乙酸等常用的食品防腐剂已达到增加食品储存时间的目的。
在国家发布的GB2760《食品添加剂使用标准》中就对所有类型的防腐剂在各种食品中的最多用量设定了严苛的要求，在规定范围内添加可以有效保证食品安全问题，但化学防腐剂长期且大量被人体摄入则可能会对人体有影响，如诱发癌症、导致畸变、引起中毒及其他影响人体健康的潜在危害[1,2]。
因此通过合适的方法检测食品中防腐剂的含量对我们来说是非常必要的。
目前国家标准或地方标准中很少有能够同时检测苯甲酸、山梨酸和脱氢乙酸的方法，即使有同时检测的方法但检测过程过于复杂。
本文应用高效液相色谱法对6种食品中苯甲酸、山梨酸、脱氧乙酸3种防腐剂的含量进行测定。
1材料与方法1.1 仪器与试剂本次实验所用样品均采集于本市各镇商场超市、门店，实验所用主要仪器为QC系列超纯水机、离心机、数控超声波清洗器、涡旋混匀仪、电子天平；试验条件是高效液相色谱；试剂为甲醇、苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸。
1.2 实验方法1.2.1 苯甲酸、山梨酸及脱氢乙酸标准溶液配制依次从不同标准储备液中提取出一定数量的溶液，将其掺杂搅拌制作成混合标准液，其浓度是100μg/mL；接着，置于0-4℃环境内贮存备用，用水分别进行稀释，使其变成1μg/mL、5μg/mL、10μg/L、20μg/mL以及50μg/mL的混合标准工作溶液。
食品中苯甲酸和山梨酸的分析
食品中苯甲酸和山梨酸的分析苯甲酸和山梨酸是食品中常见的有机酸,它们可以提供食品的酸味和调味。
但这两种酸也有一定的毒性,因此在食品中的含量是有限制的。
为了对食品中苯甲酸和山梨酸进行分析,通常使用一些常见的分析方法,例如色谱分析、光度分析和红外光谱分析等。
具体来说,色谱分析是一种常用的分离和测定有机物的方法,可以将混合物中的各组分分离出来,并对各组分进行测定。
苯甲酸和山梨酸可以通过色谱分析进行测定,例如可以使用液相色谱法（HPLC）或气相色谱法（GC）等。
光度分析是另一种常用的分析方法,可以通过检测物质吸收光谱来测定有机物的浓度。
苯甲酸和山梨酸都可以通过光度分析进行测定,可以使用吸光度测定法或比色法等。
红外光谱分析是另一种常用的分析方法,可以通过检测物质吸收红外光谱来测定有机物的结构和浓度。
苯甲酸和山梨酸也可以通过红外光谱分析进行测定。
这些分析方法都具有一定的优点和局限性,在实际应用中,需要根据实际情况选择合适的分析方法进行分析。
通常,在对食品中苯甲酸和山梨酸进行分析时,需要结合多种分析方法的优势,以便提高分析的准确性和灵敏度。
此外,在进行食品中苯甲酸和山梨酸的分析时,还需要注意样品的前处理和样品的储存方式,以便保证分析的准确性。
苯甲酸和山梨酸在食品中的含量是有限制的,因为这两种酸都有一定的毒性。
例如,苯甲酸可能会对人体的呼吸系统和神经系统造成危害,而山梨酸可能会对人体的消化系统造成危害。
因此,在食品中苯甲酸和山梨酸的含量一般都有严格的限制。
通过进行食品中苯甲酸和山梨酸的分析,可以了解食品中这两种酸的含量,从而保证食品的质量和安全。
因此,食品中苯甲酸和山梨酸的分析是食品质量控制和食品安全管理中的重要环节。
新版食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定
一、编制目的为规范食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定方法，编制本指导书。
二、适用范围本指导书适用于食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定。
三、编制依据GB 5009.28-2016《食品安全国家标准食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定》四、实验原理样品经水提取，高脂肪样品经正己烷脱脂、高蛋白样品经蛋白沉淀剂沉淀蛋白，采用液相色谱分离、紫外检测器检测，外标法定量。
五、试剂和材料除非另有说明,所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。
5.1 试剂5.1.1 氨水（NH3˙H2O）。
5.1.2 亚铁氰化钾[K4Fe(CN)6˙3H2O]。
5.1.3 乙酸锌[Zn(CH3COON)2˙2H2O]。
5.1.4 无水乙醇（CH3CH2OH）。
5.1.5 正已烷（C6H14）。
5.1.6 甲醇（CH3OH）。
5.1.7 乙酸铵（CH3 C00NH4）：色谱纯。
5.1.8 甲酸（HCOOH）：色谱纯。
5.2 试剂配制5.2.1 氨水溶液（1+99）：取氨水1ml，加到99ml水中，混匀。
5.2.2 亚铁氰化钾溶液（92g/L）：称取106g亚铁氰化钾，加入适量水溶解，用水定容至1000ml。
5.2.3 乙酸锌溶液（183g/L）：称取220g乙酸锌溶于少量水中，加入30ml 冰乙酸，用水定容至1000ml。
5.2.4 乙酸锌溶液（20mmol/L）：称取1.54g乙酸锌，加入适量水溶解，用水定容至1000ml，经0.22um水相微孔滤膜过滤后备用。
5.2.5 甲酸-乙酸铵溶液（2mmol/L甲酸+20mmol/L乙酸铵）：称取1.54g 乙酸铵，加入适量水溶解，再加入75.2ul甲酸，用水定容至1000ml，经0.22um水相微孔过滤后备用。
5.3 标准品5.3.1 苯甲酸钠（C6H5COONa，CAS号：532-32-1），纯度≥99.0%；苯甲酸（C6H5COOH,CAS号：65-85-0），纯度≥99.0%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。
食品中苯甲酸山梨酸和糖精钠的测定-标准文本(食品安全国家标准)
食品安全国家标准食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定1 范围本标准规定了食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠含量的测定方法。
本标准第一法适用于食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定；第二法适用于酱油、水果汁、果酱中苯甲酸、山梨酸的测定。
第一法液相色谱法2原理样品经处理后，用液相色谱分离，紫外检测器检测，外标法定量。
3试剂和材料注：除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。
3.1 试剂3.1.1氨水（NH3•H2O）。
3.1.2氢氧化钠（NaOH）。
3.1.3硫酸（H2SO4）。
3.1.4亚铁氰化钾（K4Fe(CN)6•3H2O）。
3.1.5乙酸锌（Zn(CH3COO)2•2H2O）。
3.1.6氯化钠（NaCl）。
3.1.7酒石酸（C4H6O6）。
3.1.8硅酮树脂。
3.1.9磷酸二氢钠（NaH2PO4•12H2O）。
3.1.10磷酸二氢钾（KH2PO4）。
3.1.11中性氧化铝。
3.1.12甲醇（CH3OH）：色谱纯。
3.1.13乙酸铵（CH3COONH4）。
3.2 试剂配制3.2.1 氨水（1+1）：氨水与水等体积混合，经微孔滤膜过滤后备用。
3.2.2 氢氧化钠溶液（4 g/L）：称取4 g氢氧化钠，溶于水并稀释至1000 mL。
3.2.3硫酸溶液（0.5 mol/L）：移取30 mL浓硫酸（约70%）边搅拌边慢慢加入至500 mL水中，冷却至室温后，转移至1000 mL容量瓶中，用水定容至刻度。
3.2.4亚铁氰化钾溶液（92 g/L）：称取106 g亚铁氰化钾加水至1000 mL。
3.2.5 乙酸锌溶液（183 g/L）：称取220 g乙酸锌溶于少量水中，加入30 mL冰乙酸，加水稀释至1000 mL。
3.2.6 酒石酸溶液（15%）：称取15 g酒石酸，用水定容100 mL。
3.2.7的磷酸盐缓冲液（pH 7.2）：分别称取16.72 g磷酸二氢钠和2.72 g磷酸二氢钾，用水溶解后定容至1000 mL，经微孔滤膜过滤后备用。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
分析步骤
1 样品处理 1.1 汽水：称取5.00～10.0g样品，放入小烧杯中，微温搅拌除去二 氧化碳，用氨水1＋1调pH约7。加水定容至10～20mL，经滤膜 0.45μm过滤。 1.2 果汁类：称取5.00～10.0g样品，用氨水1＋1调pH约7，加水定 容至适当体积，离心沉淀，上清液经滤膜0.45μm过滤。 1.3 配制酒类：称取10.0g样品，放入小烧杯中，水浴加热除去乙醇， 用氨水1＋1调pH约7，加水定容至适当体积，经滤膜0.45μm过滤。 2 高效液相色谱参考条件 2.1 色谱柱：YWG－C184.6mm×250mm10μm不锈钢柱。 2.2 流动相：甲醇：乙酸铵溶液0.02m0l/L5：95。 2.3 流速：1mL/min。 2.4 进样量：10μL。 2.5 检测器：紫外检测器，波长230μm，灵敏度0.2AUFS。 根据保留时间定性，外标峰面积法定量。
计算
式中式中：X2——样品中苯甲酸或山梨酸的含量， g/kg； m3——进样体积中苯甲酸或山梨酸的质量，mg； V4——进样体积，mL； V3——样品稀释液总体积，mL； m4——样品质量，g。
注意事项
1.使用过程中应注意机器是否有异常情况的发生（声 音），压力是否过高（超过200Bar不可再做实验）， 流动相是否流空、废液瓶是否已满等等。 2.所需玻璃仪器和容器，每次临用前需要用纯水清洗干 净后，再用无水乙醇冲洗三次，阴（烤）干、冷却后 方可使用。 先抽滤、后超声（10-15分钟） 3.进样针每次改进不同样品或对照品时，需用色谱甲醇 涮洗五次以上，涮洗位置要超过进样量位置。 4.实验完毕后用甲醇冲洗一小时，如果流动相中含有酸 或缓冲盐，则先用新鲜纯水冲洗0.5小时，再用甲醇冲 洗一小时。
仪器与试剂（2）
6 山梨酸标准储备溶液：准确称取0.1000g山梨 酸，加碳酸氢钠溶液20g/L5mL，加热溶 解，移入100mL容量瓶中，加水定容至100mL， 山梨酸含量为1mg/mL，作为储备溶液。 7 苯甲酸、山梨酸标准混合使用溶液：取苯甲酸、 山梨酸标准储备溶液各10.0mL，放入100mL容 量瓶中，加水至刻度。此溶液含苯甲酸、山梨酸 各0.1mg/mL。经滤膜0.45μm过滤同时测定糖精 钠时可加GB/T 5009.28中3.4糖精钠标准储备溶 液。 仪器：高效液相色谱仪带紫外检测器
100902030
1001应有化学 罗琪
背景介绍
因为苯甲酸需在肝脏中进行分解，而过量食用对肝
脏功能会有不同程度的损害。而且无论哪种人工合 成的防腐剂，若长期过量摄入，都会对人体造成损 害，尤其是儿童和孕妇。因此对山梨酸，苯甲酸的 测定很有必要。
测定方法
目前山梨酸，苯甲酸的测定方法有气相色 谱法，高效液相色谱法，薄层色谱法，禁 用防腐剂定性试验等方法。本试验将采取 高效液相色谱法
原理
样品加温除去二氧化碳和乙醇，调pH至近 中性，过滤后进高效液相色谱仪，经反相 色谱分离后，根据保留时间和峰面积进行 定性和定量。
仪器与试剂（1)
试剂: 1 甲醇：经滤膜0.5μm过滤。 2 稀氨水1＋1：氨水加水等体积混合。 3 乙酸铵溶液0.02mol/L：称取1.54g乙酸铵，加水至 1000mL，溶解，经滤膜0.45μm过滤 4 碳酸氢钠溶液20g/L：称取2g碳酸氢钠优级纯，加水至 100mL，振摇溶解。 5 苯甲酸标准储备溶液：准确称取0.1000g苯甲酸，加碳 酸氢钠溶液20g/L5mL，加热溶解，移入100mL容量瓶中， 加水定容至100mL，苯甲酸含量为1mg/mL，作为储备溶 液。
具体操作
Hale Waihona Puke 1)． 过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜 2)． 对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。 3)． 打开HPLC工作站，连接好流动相管道，连接检测系统。 4)． 进入HPLC控制界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。 5)． 有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进 样阀。冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。冲洗进样阀， 需要在manual菜单下，先点击purge，再点击start，冲洗时速度 不要超过10 ml/min。 6)． 调节流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速 越大，压力越大，一般不要超过2000。点击injure，选用合适的流 速，点击on，走基线，观察基线的情况。 7)． 设计走样方法。点击file，选取select users and methods， 可以选取现有的各种走样方法。若需建立一个新的方法，点击 new method。选取需要的配件，包括进样阀，泵，检测器等，根 据需要而不同。选完后，点击protocol。一个完整的走样方法需要 包括：a.进样前的稳流，一般2-5分钟；b.基线归零；c.进样阀的 loading-inject转换；d.走样时间，随不同的样品而不同。 8)． 进样和进样后操作。选定走样方法，点击start。进样，所有 的样品均需过滤。方法走完后，点击postrun，可记录数据和做标 记等。全部样品走完后，再用上面的方法走一段基线，洗掉剩余 物。 9)． 关机时，先关计算机，再关液相色谱。