基因工程作业
1、DNA载体经HindⅢ切割后产生粘性末端，能发生载体自连，影响载体与外源DNA的连接效率，常用的防止载体自连的方法有碱性磷酸酶处理使5’磷酸基团羟基化。
2、切口平移是指在DNA聚合酶Ⅰ的作用下，使5’磷酸基团带上放射性标记。
在酶切缓冲液中，一般需加入BSA，请问加入BSA的作用是提高蛋白质浓度防止酶失活。
3、下列哪一种酶作用时需要引物（B）反转录酶在作用时需要DNA聚合酶，而后者需要引物A、末端转移酶B、反转录酶C、DNA 连接酶D、限制酶4、下列DNA片段，最可能含有SstI 酶切位点的是（A）ＡGGAGAGCCTCT ＢGAGCACA TCT ＣCCCTGTGGGAＤA TCCTACATG ＥAACCTTGGAADNA连接酶的作用特点有哪些？1、DNA 3’端有游离的-OH，5’端有一个磷酸基团（P）2、需要能量、Mg2+3、被连接的DNA链必须是双螺旋的一部分4、只封闭双螺旋DNA骨架上的nick大肠杆菌DNA聚合酶I有哪些不同的酶活力特性，各有何利用价值。
1、5’—3’聚合酶活性：以DNA为模板利用四种dNTP合成DNA链2、3’—5’外切酶活性：主要起校对作用3、5’—3’外切酶活性：从5’端降解DNA分子何谓Star activity？简述Star activity 的影响因素及克服方法？限制性内切酶的识别和酶切活性一般在一定的温度、离子强度、pH等条件下才表现最佳切割能力和位点的专一性。
当条件改变时，许多酶的识别位点会改变，导致识别与切割序列的非特异性，称为星号（*）活性。
（1）高甘油含量（>5％, v／v）；（2）限制性内切核酸酶用量过高（>100U／ugDNA）；（3）低离子浓度（<25 mmol／L）；（4）高pH（8.0以上）；（5）含有机溶剂，如DMSO（二甲基亚砜），乙醇等；（6）有非Mg2+的二价阳离子存在（如Mn2+，Cu2+，Co2+，Zn2+等）。
举例说明在基因工程中修饰性工具酶具有的重要用途1、末端转移酶：同聚物加尾克隆DNA片段，再生酶切位点便于回收克隆片段，标记DNA 片段的3’末端2、多核苷酸激酶：催化5’羟基末端磷酸化便于DNA分子连接标记DNA或RNA的5’段3、碱性磷酸酶：去除DNA或RNA分子的5’末端磷酸基团，防止线性化的载体分子自我连接；与多核苷酸激酶共同作用，标记DNA5’末端用 T4 phage DNA polymerase 可进行末端标记，试简述其原理？用3’—5’外切酶活性作用于所有末端形式的3’端制造出3’隐蔽端，再利用它的5’—3’聚合酶活性补平，并加入放射性标记的32P-dNTP。
标记的dNTP逐渐取代被删除掉的原有的核苷酸，因此叫做取代合成。
1、下列哪种克隆载体对外源DNA 的装载量最大（B）A、粘粒B、酵母人工染色体（Y AC)C、质粒D、λ噬菌体2、pUC18 与pUC19 的区别在于（B）A、二者的选择标记不同B、二者MCS方向相反C、pUC18 无lacZ 基因D、pUC19 无lacZ 基因3、M13 单链噬菌体的复制分为三个阶段，以下哪一项不属于此（C）A、SS→RFB、RF→RFC、RF→SSD、SS→SS4、下列有关质粒分子生物学的叙述，错误的是（B）Ａ、质粒是共价环状的双链DNA 分子Ｂ、天然质粒一般不含有限制性内切酶的识别序列Ｃ、质粒在宿主细胞内能独立于染色体DNA 自主复制Ｄ、松弛复制型的质粒可用氯霉素扩增Ｅ、质粒并非其宿主细胞生长所必需5、带有多个不同种复制起始区的质粒是（A）Ａ、穿梭质粒Ｂ、表达质粒Ｃ、探针质粒Ｄ、整合质粒Ｅ、多拷贝质粒6、考斯质粒（cosmid）是一种（B）Ａ、天然质粒载体Ｂ、由DNA 的cos 区与一质粒重组而成的载体Ｃ、能裂解受体细胞的烈性载体Ｄ、具有溶源性质的载体Ｅ、能在受体细胞内复制并包装的载体7、下列各常用载体的装载量排列顺序，正确的是（A）Ａ、Cosmid > DNA > PlasmidＢ、DNA > Cosmid > PlasmidＣ、Plasmid > DNA > CosmidＤ、Cosmid > Plasmid > DNAＥ、DNA > Plasmid > Cosmid8、下列载体常用选择性标记中属于营养缺陷型的是（E ）Ａ、tsr Ｂ、Apr Ｃ、lacZ Ｄ、Tcr Ｅ、Trp-9、载体质粒pBR325 共有三个选择性标记：Apr、Tcr、Cmr 。
它们分别含有一个单一酶切位点：PstI、SphI和EcoRI。
若将一外源基因取代此载体上不含Cmr标记基因的PstI-SphI 限制性DNA片段，那么用于转化子和重组子筛选的试剂应是（D）Ａ、Ap Ｂ、Tc Ｃ、Cm Ｄ、Ap + Tc Ｅ、Ap + Cm10、构建GST蛋白表达系统的载体是为了是目标蛋白以（A）方式表达？A、融合表达B、分泌表达C、独立表达D、包含体表达1、λ噬菌体根据接受外源DNA的方式不同，可以分为插入型和置换型两种类型载体。
2、黏粒载体是由质粒和噬菌体DNA共同构成的。
3、就一个基因（DNA片段）来说，最简单的质粒载体也必需包括三个部分：复制起始位点（ORI）、多克隆位点（MCS）、选择性标记基因。
另外，一个理想的质粒载体必需具有低分子量。
4、原核表达载体的表达元件主要包括启动子、核糖体结合位点和终止子。
5、基因工程构建基因重组体是指将目的基因与载体进行连接重组载体：在基因工程操作中，把能携带外源DNA进入受体细胞复制、整合或表达的工具质粒的不相容性：在没有选择压力的情况下，两种亲缘关系密切的不同质粒，不能在同一宿主细胞中稳定地共存的现象柯斯载体：柯斯质粒是人工建造的的含有λDNA的cos序列和质粒复制子的特殊类型的质粒载体人工染色体载体：利用染色体的复制元件来驱动外源DNA片段复制的载体称为人工染色体基因打靶：通过DNA同源重组，使细胞特定的内源基因被破坏而造成其功能丧失，或在基因组特定的位点插入外源基因RNAi：当细胞中导入与内源性mRNA编码区同源的双链RNA（dsRNA）时，该mRNA发生降解而导致基因表达沉默的现象，什么是克隆载体，克隆载体必需满足哪些基本条件？能够通过限制性内切酶将目的基因片段整合进去，并且能够转入宿主细胞内进行表达的生物生物DNA1、对受体可转移性，2、宿主细胞内能独立复制3、有一段多克隆位点，供外源DNA插入4、具有合适的选择标记性，用于含有重组质粒的宿主细胞的筛选表达载体需要的基本元件及其作用？ORI：结合用于复制起始的酶选择性标记：用于筛选重组克隆体MCS：用来插入外源基因表达调控元件（启动子，核糖体结合位点RBS，终止子）：使外源基因表达蛋白产物简述RNAi的作用机制外源dsRNA 进入细胞后产生的小分子干扰RNA（small interfering RNA, siRNA）的反义链和多种核酸酶形成了沉默复合物(RNA-induced silencing complex，RISC)，RISC具有结合和切割mRNA的作用而介导RNA干扰的过程1、Southern bloting 杂交能够检测外源基因是否整合进受体细胞基因组；外源基因的转录表达需要通过Northern bloting来揭示；而外源基因蛋白质水平的表达则需通过免疫学检测或Western杂交才能揭示，其使用的探针是特异性抗体。
2、碱变性抽提法提取质粒DNA的原理是利用染色体与质粒DNA的变性与复性存在着差异达到分离的目的。
3、分离DNA时使用金属离子螯合剂，如EDTA和柠檬酸钠等，其目的是Mg2+、Ca 2+的螯合剂，可抑制DNA酶的活性，防止DNA被酶降解。
4、确定分离的基因是否具有与天然基因相同序列的唯一方法，也是最准确的方法是基因测序。
5、下列哪种PCR技术不能根据已知部分序列获得未知序列（D）A、RACEB、TAIL-PCRC、反向PCRD、巢式PCR6、免疫印迹法筛选重组体的原理是（D）A、根据载体抗性基因的表达B、根据载体报告基因的表达C、根据DNA与mRNA的杂交D、根据外源基因的表达1、反向PCR ：扩增已知DNA片段两侧的未知序列2、实时定量PCR：在PCR体系中加入荧光基团，利用荧光信号的积累实时监测整个PCR 进程，最后通过标准曲线对模板中特定基因进行定量分析的方法。
3、斑点印迹杂交：在Southern印迹杂交的基础上发展而来,通过特殊的加样装置将变性的DNA或RNA样品，直接转移到适当的杂交滤膜上，然后与核酸探针分子进行杂交，以检测核酸样品中是否存在特定的DNA或RNA4、RT-PCR：利用反转录酶，把mRNA反转录成cDNA，再以cDNA为模板进行PCR扩增。
5、菌落或噬菌斑杂交：将标记的核酸探针直接与细胞或组织中的核酸进行杂交，称为原位杂交2、什么是简并引物？设计简并引物时如何降低简并度？简并引物：一个氨基酸可对应一个到多个密码子，因此一段氨基酸序列可以有多个可能的编码序列，合成这一段序列作PCR扩增体系的引物既为简并引物。
（1）在选取氨基酸序列时往往优先选择对应密码子较少的残基；（2）选取氨基酸序列的长度一般为5个，对应一段15个碱基的核苷酸序列；（3）放弃最后一个氨基酸对应密码子的第三位碱基，合成14个碱基的简并引物。
3、在PCR反应的后期，反应体系中就会出现一种所谓的平台效应（Plateau effect），请问什么叫Plateau effect？产生Plateau effect的原因有那些？PCR反应经过一定数量的循环后，随着产物的对数累积趋于饱和，DNA片段不再呈指数积累，而是进入线性增长期或静止期，此过程成为平台效应。
①dNTP、引物浓度降低，掺入速度变慢②随产物增加，酶与模板比例下降③非特异性产物或引物二聚体与反应物的竞争④产物的再结合1、经典RACE克隆的原理是什么？有何意义？原理：3’RACE：由含有oligo（dT）的接头引物引发合成cDNA第一链，根据中间核心序列设计出上游引物，与3’引物扩增第一链cDNA，可得到全长cDNA的3’末端序列。
5’RACE：先用oligo（dT）引发合成cDNA第一链，然后在第一链cDNA的3’端加上人工锚定序列，利用5’锚定引物及3’特异性引物进行扩增，得到全长cDNA的5‘末端序列。
意义:根据已得到的不完整cDNA序列设计引物对3’和5’端进行克隆从而获得全的cDNA 克隆2、什么是Genomic library？与cDNA library有何区别？基因组文库：将某一生物基因组DNA片段化并全部克隆后所获得的重组子群体的总称。
理论上讲，这些重组载体上带有了该生物体的全部基因。
《基因工程的基本工具》 作业设计方案
《基因工程的基本工具》作业设计方案一、作业目标1、帮助学生深入理解基因工程中三种基本工具（限制性内切酶、DNA 连接酶、运载体）的作用和特点。
2、培养学生运用所学知识解决实际问题的能力。
3、增强学生对基因工程技术的兴趣，激发其探索科学的热情。
二、作业内容1、知识梳理（1）让学生总结限制性内切酶的来源、作用部位、作用特点，并举例说明其在基因工程中的应用。
（2）要求学生阐述 DNA 连接酶的种类、作用部位和作用结果，比较不同种类 DNA 连接酶的异同。
（3）使学生明确运载体的种类、具备的条件以及常见的运载体有哪些。
2、案例分析提供一些基因工程的实际案例，如利用基因工程生产胰岛素、转基因抗虫棉等，让学生分析在这些案例中基本工具是如何发挥作用的。
3、实践操作（1）给定一段含有特定序列的 DNA 片段，要求学生模拟限制性内切酶的切割过程，并画出切割后的结果。
（2）给出两段已被限制性内切酶切割的 DNA 片段，让学生尝试用DNA 连接酶将它们连接起来，并写出连接后的序列。
4、拓展思考（1）假如没有限制性内切酶，基因工程还能实现吗？为什么？（2）随着科技的发展，未来可能会出现哪些新型的基因工程工具？三、作业形式1、书面作业（1）完成知识梳理部分的内容，以填空、简答的形式呈现。
（2）针对案例分析，撰写一份详细的分析报告。
2、实践作业（1）在纸上完成模拟切割和连接的过程，并拍照上传。
（2）通过网络搜索或阅读相关资料，回答拓展思考的问题，并以文档形式提交。
四、作业难度作业难度分为基础、提高和拓展三个层次。
1、基础层次主要涵盖知识梳理部分的内容，让学生对基本工具的概念和作用有初步的了解。
2、提高层次包括案例分析和实践操作中的部分内容，需要学生运用所学知识进行分析和操作。
3、拓展层次涉及拓展思考部分，鼓励学生发挥想象力和创新思维，探索基因工程的未来发展。
五、作业时间本次作业预计总时长为一周。
1、知识梳理和书面作业：2 3 天。
(0589)《基因工程》网上作业题及答案
（0589）《基因工程》网上作业题及答案1：第一次作业2：第二次作业3：第三次作业4：第四次作业5：第五次作业1：[论述题]一、名词解释1、限制性核酸内切酶；2、基因文库；3、cDNA文库；4、RFLP；5、核酸探针；6、转录二、简答题1、试回答影响限制性内切核酸酶切割效率的因素？2、何为载体？一个理想的载体应具备那些特点？3、什么叫基因工程（Gene Engineering），试从理论和技术两个方面谈谈Gene Engineering 诞生的基础？4、抗性基因是目前使用的最广泛的选择标记，常用的抗生素抗性有哪几种？并举两例说明其原理？5、Y AC 载体具有什么样的功能性元件？为什么它在克隆大片段时具有很大的优越性？三、论述题1、分析比较琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳的异同点？参考答案：一、名词解释1、DNA重组：是指用酶学方法将不同来源的DNA进行切割、连接，组成一个新的DNA 分子的过程。
2、克隆：原指一个亲本细胞经无性繁殖产生无数个相同细胞的子代群体的过程。
3、DNA克隆：是指将重组DNA分子导入到合适的受体细胞中，使其扩增和繁殖，以获得大量的相同的DNA分子，又称分子克隆或基因克隆。
4、目的基因：要分离和克隆的相应基因常称为目的基因。
因目的基因片段需插入载体，导入宿主细胞内进行复制或表达，所以对宿主细胞DNA而言，又称它为外源性基因或外源性DNA。
5、基因载体：能够携带外源DNA进入受体细胞内进行复制或表达的DNA分子，被称为基因载体。
6、质粒：是独立于细菌染色体之外，能自主复制的共价闭合环状双链DNA。
二、简答题1、答：（1）限制性核酸内切酶：识别并特异切割DNA碱基序列；（2）DNA polⅠ：催化缺口平移，制备高比度DNA探针；（3）Klenow片段：合成cDNA第二条链，补齐或标记双链DNA3′端；（4）TaqDNA聚合酶：DNA体外扩增(PCR)；（5）逆转录酶：催化合成cDNA；(6) T4DNA 聚合酶：聚合补平或标记DNA平末端或3′凹端等；（7）DNA连接酶：催化2条DNA链之间形成磷酸二酯键；（8）大肠杆菌DNA连接酶：应用于黏端DNA或切口间连接；（9）T4DNA连接酶：应用于黏性或平末端DNA的连接；（10）末端脱氧核苷酸转移酶：给载体或cDNA加上互补的同聚尾、加标记物；（11）碱性磷酸酶：防止载体自身连接、32P标记5′端；（12）T4多核苷酸激酶：5′端磷酸化、5′端标记放射性核素。
最新基因工程作业题及答案
最新基因工程作业题及答案基因工程作业题及答案第二章1. 名词解释：核酸内切酶、核酸内切限制酶、同裂酶、同尾酶、核酸外切酶、末端脱氧核苷酸转移酶答：核酸内切酶：是一类从多核苷酸链的内部催化磷酸二酯键断裂的酶。
核酸内切限制酶：是一类能够识别双链DNA分子中的某种特定核苷酸序列（4—8bp），并由此处切割DNA双链的核酸内切酶。
同裂酶：识别位点的序列相同的限制性内切酶。
同尾酶：识别的序列不同，但能切出相同的粘性末端。
核酸外切酶：是一类从多核苷酸链的一头开始催化降解核苷酸的酶。
末端脱氧核苷酸转移酶：可以不需要模板，在单链DNA或突出的双链DNA3’-OH端随机添加dNTPs的酶2. 限制性内切核酸酶的命名原则是什么？答：限制性内切核酸酶按属名和种名相结合的原则命名的，即：属名+种名+株名+序号；首字母：取属名的第一个字母，且斜体大写；第二字母：取种名的第一个字母，斜体小写；第三字母：(1)取种名的第二个字母，斜体小写；(2)若种名有词头，且已命名过限制酶，则取词头后的第一字母代替。
第四字母：若有株名，株名则作为第四字母，是否大小写，根据原来的情况而定，但用正体。
顺序号：若在同一菌株中分离了几种限制酶，则按先后顺序冠以I、Ⅱ、Ⅲ、…等，用正体。
3．部分酶切可采取的措施有哪些？答：1）缩短保温时间2）降低反应温度3）减少酶的用量4. 在序列5'-CGAACATATGGAGT-3'中含有一个6bp的Ⅱ类限制性内切核酸酶的识别序列，该位点的序列可能是什么?答：回文序列是：5'-CATATG-3，5．什么是限制性内切核酸酶的星号活性? 受哪些因素影响?答：Ⅱ类限制酶虽然识别和切割的序列都具有特异性，但是这种特异性受特定条件的限制，即在一定环境条件下表现出来的特异性。
条件的改变，限制酶的特异性就会松动，识别的序列和切割都有一些改变，改变后的活性通常称第二活性，而将这种因条件的改变会出现第二活性的酶的右上角加一个星号表示，因此第二活性又称为星活性。
中图版选修3 基因工程 作业
1．(2014·山东理综)人组织纤溶酶原激活物(htPA)是一种重要的药用蛋白，可在转htPA基因母羊的羊乳中获得。
流程如下：(1)htPA基因与载体用________切割后，通过DNA连接酶连接，以构建重组表达载体。
检测目的基因是否已插入受体细胞DNA，可采用________技术。
(2)为获取更多的卵(母)细胞，要对供体母羊注射促性腺激素，使其________。
采集的精子需要经过______，才具备受精能力。
(3)将重组表达载体导入受精卵常用的方法是________________。
为了获得母羊，移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行________。
利用胚胎分割和胚胎移植技术可获得多个转基因个体，这体现了早期胚胎细胞的________。
(4)若在转htPA基因母羊的羊乳中检测到________，说明目的基因成功表达。
【解析】(1)将目的基因和载体用同一种限制酶切割后能产生相同的黏性末端，便于构成表达载体。
检测目的基因是否成功插入的技术为DNA分子杂交技术。
(2)利用促性腺激素可促进母羊超数排卵。
采集的精子必须利用获能液处理后才具备受精能力。
(3)将重组表达载体导入动物受精卵的常用方法是显微注射法。
为了获得母羊，需对胚胎进行性别鉴定，性染色体组成为XX类型才能发育为母羊。
利用胚胎分割和移植技术可获得多个个体，体现了早期胚胎细胞可发育成个体的全能性。
(4)基因成功表达的标志是产生了相应的蛋白质，因此htPA基因成功表达的标志是在转基因母羊的羊乳中检测到htPA(或人组织纤溶酶原激活物)。
【答案】(1)同种限制性核酸内切酶(或同种限制酶) DNA分子杂交(或核酸探针) (2)超数排卵获能(处理) (3)显微注射法性别鉴定全能性(2分) (4)htPA(或人组织纤溶酶原激活物)(2分)2．(2014·日照模拟)我们日常吃的大米中铁含量极低；科研人员通过基因工程等技术，培育出了铁含量比普通大米高60%的转基因水稻，改良了稻米的营养品质。
2023届一轮复习人教版基因工程作业
练案［38］选择性必修3第十单元生物技术与工程第38讲基因工程一、选择题1.质粒是基因工程中最常用的载体，下列关于质粒的叙述，错误的是（B ）A.质粒是具有自我复制能力的双链环状的DNA分子B.质粒存在于细菌拟核之中，与拟核一起控制细菌的生命活动C.作为载体的质粒上有限制酶的切割位点D.作为载体的质粒存在特殊的标记基因［解析］由分析可知，质粒是具有自我复制能力的双链环状的DNA分子，A正确；拟核DNA是细菌的主要遗传物质，包含控制细菌生命活动的遗传信息，没有了它细菌就无法存活、繁殖，质粒DNA是独立于原核细胞拟核DNA之外的遗传物质，使细菌表达一些特殊的性状, 没有了它细菌依然可以正常生活、繁殖，B错误；作为载体的质粒上有限制酶的切割位点，这是质粒作为运载体的条件之一，C正确；作为载体的质粒存在特殊的标记基因，以便对目的基因进行检测，D正确。
2. OsGLOK EcCAT. EcGCL和TSR四个基因分别编码四种不同的酶，研究人员将这些基因分别与叶绿体转运肽（引导合成的蛋白质进入叶绿体）基因连接，构建多基因表达载体（载体中部分序列如下图所示），利用农杆菌转化法转化水稻，在水稻叶绿体内构建了一条新代谢途径，提高了水稻的产量。
下列叙述正确的是（A ）|潮毒索抗性基因卜*$$|反诟口|_M 0sCΔ01那毒索抗性基因卜T-DNA -----注：U＞启动子［终止子咫叶绿体转运肽A.可用抗原一抗体杂交技术检测四种酶在转基因水稻中的表达量B.四个基因转录时都以DNA的同一条单链为模板C.应选用含卡那霉素的培养基筛选被农杆菌转化的水稻细胞D.四个基因都在水稻叶绿体内进行转录翻译［解析］可用抗原一抗体杂交技术检测四种酶在转基因水稻中的表达量，杂交带相对量越多，表明目的基因翻译成的蛋白质含量越高，A正确；由题图可知，在同一个T—DNA中OsGLOl启动子启动转录的方向与其他三个基因的不同，四个基因转录时不都以DNA的同一条单链为模板，B错误；卡那霉素抗性基因不在T-DNA中，而潮霉素抗性基因在T-DNA 中，应选用含潮霉素的培养基筛选被农杆菌转化的水稻细胞，C错误；由题意知，利用农杆菌转化法转化水稻，可使目的基因插入到水稻细胞中染色体的DNA上，所以与叶绿体转运肽基因连接的四个基因，在水稻细胞核内进行转录，在核糖体中进行翻译，D错误。
基因工程作业(引物设计)讲解
口腔鳞癌组织中肿瘤转移相关基因1（MTA1）一、选择原因及应用口腔鳞癌组织中肿瘤转移相关基因1（MTA1）在蛋白和mRNA的表达水平，揭示其与口腔鳞癌（OSCC）发生、发展的关系。
方法采用免疫组织化学法和原位杂交技术检测46例OSCC标本、15例口腔黏膜白斑与20例正常口腔黏膜标本中MTAl 基因的表达水平，并分析其与OSCC临床病理学参数的关系。
结果MTA1蛋白和MTA1mRNA在OSCC组织中的表达水平显著高于口腔黏膜白斑和正常口腔黏膜（P 〈0．05），口腔黏膜白斑中MTA1蛋白和MTA1mRNA表达水平显著高于口腔正常黏膜（P〈0．01），MTA1蛋白和MTA1mRNA表达与肿瘤浸润深度和淋巴结转移密切相关（P〈0．05）。
结论MTA1基因在蛋白和mRNA的表达水平在OSCC发生、发展及浸润转移过程中起一定促进作用，有望成为判断OSCC预后及选择治疗方案的一个新肿瘤标志物。
二、2查阅NCBI得到MTA1相关信息并获得目的基因PREDICTED: Gorilla gorilla gorilla metastasis associated 1 (MTA1), mRNANCBI Reference Sequence: XM_004055801.1FASTA GraphicsLOCUS XM_004055801 2872 bp mRNA linear PRI 03-DEC-2012DEFINITION PREDICTED: Gorilla gorilla gorilla metastasis associated 1 (MTA1),mRNA.ACCESSION XM_004055801VERSION XM_004055801.1 GI:426378238KEYWORDS .SOURCE Gorilla gorilla gorilla (western lowland gorilla) ORGANISM Gorilla gorilla gorillaEukaryota; Metazoa; Chordata; Craniata; Vertebrata; Euteleostomi;Mammalia; Eutheria; Euarchontoglires; Primates; Haplorrhini;Catarrhini; Hominidae; Gorilla.COMMENT MODEL REFSEQ: This record is predicted by automated computationalanalysis. This record is derived from a genomic sequence(NW_004005914) annotated using gene prediction method: GNOMON,supported by mRNA and EST evidence.Also see:Documentation of NCBI's Annotation Process##Genome-Annotation-Data-START##Annotation Provider :: NCBIAnnotation Status :: Full annotationAnnotation Version :: Gorilla gorilla Annotation Release 100Annotation Pipeline :: NCBI eukaryotic genome annotation pipelineAnnotation Method :: Best-placed RefSeq; Gnomon Features Annotated :: Gene; mRNA; CDS; ncRNA##Genome-Annotation-Data-END##FEATURES Location/Qualifierssource 1..2872/organism="Gorilla gorilla gorilla"/mol_type="mRNA"/sub_species="gorilla"/db_xref="taxon:9595"/chromosome="14"gene 1..2872/gene="MTA1"/note="Derived by automated computational analysis usinggene prediction method: GNOMON. Supporting evidence/codon_start=1/product="metastasis-associated protein MTA1"/protein_id="XP_004055849.1"/db_xref="GI:426378239"/db_xref="GeneID:101134898"/translation="MAANMYRVGDYVYFENSSSNPYLIRRIEELNKTANGNVEAKVVC FYRRRDISSTLIALADKHATLSVCYKAGPGADNGEEGEIEEEMENPEMVDLPEKLKHQ LRHRELFLSRQLESLPATHIRGKCSVTLLNETESLKSYLEREDFFFYSLVYDPQQKTL LADKGEIRVGNRYQADITDLLKEGEEDGRDQSKLETKVWEAHNPLTDKQIDQFLVVAR SVGTFARALDCSSSVRQPSLHMSAAAASRDITLFHAMDTLHKNIYDISKAISALVPQG GPVLCRDEMEEWSASEANLFEEALEKYGKDFTDIQQDFLPWKSLTSIIEYYYMWKTTD RYVQQKRLKAAEAESKLKQVYIPNYNKPNPNQISVNNVKAGVVNGTGAPGQSPGAGRA CESCYTTQSYQWYSWGPPNMQCRLCASCWTYWKKYGGLKMPTRLDGERPGPNRSNMSP HGLPARSSGSPKFAMKTRQAFYLHTTKLTRIARRLCREILRPWHAARHPYLPINSAAI KAECTARLPEASQSPLVLKQAVRKPLEAVLRYLETHPRPPKPDPVKSVSSVLSSLTPA KVAPVINNGSPTILGKRSYEQHNGVDGNMKKRLLMPSRGLANHGQTRHMGPSRNLLLN GKSYPTKVRLIRGGSLPPVKRRRMNWIDAPDDVFYMATEETRKIRKLLSSSETKRAAR RPYKPIALRQSQALPLRPPPPAPVNDEPIVIED" ORIGIN1 tcctcctctt cctctcccgc ccgcgccgcg gccctcccgt ccctgcgcgg cctcggcggc61 ctcggcggcg gcggcggcgg cggcggcagc agcgcggccc ctttaaacgc ctgcggcgccgcgccgagcg ccgcgcccgcaacatgtaca gggtcggaga241 ctacgtctac tttgagaact cctccagcaa cccatacctg atccggagga tcgaggagct301 caacaagacg gccaatggga acgtggaggc caaagtggtg tgcttctacc ggaggcggga361 catctccagc accctcatcg ccctggccga caagcacgca accctgtcag tctgctataa421 ggccggaccg ggggcggaca acggcgagga aggggaaata gaagaggaaa tggagaatcc481 ggaaatggtg gacctgcccg agaaactaaa gcaccagctg cggcatcggg agctgttcct541 ctcccggcag ctggagtctc tgcccgccac gcacatcagg ggcaagtgca gcgtcaccct601 gctcaacgag accgagtcgc tcaagtccta cctggagcgg gaggatttct tcttctattc661 tctagtctac gacccacagc agaagaccct gctggcagat aaaggagaga ttcgagtagg721 aaaccggtac caggcagaca tcaccgactt gttaaaagaa ggcgaggagg atggccgaga781 ccagtccaag ttggagacca aggtgtggga ggcgcacaac ccactcacag acaagcagat841 cgaccagttc ctggtggtgg cccgctctgt gggcaccttc gcacgggccc tggactgcag901 cagctccgtc cgacagccca gcctgcacat gagcgccgca gctgcctccc gagacatcac961 gctgttccac gccatggata ctctccacaa gaacatctat gacatctcca aggccatctc1021 ggcactggtg ccgcagggcg ggcccgtgct ctgcagggac gagatggagg agtggtctgc1081 atcagaggcc aaccttttcg aggaagccct ggaaaaatat gggaaggatt tcacggacat1141 tcagcaagat tttctcccgt ggaagtcgct gaccagcatc attgagtact actacatgtg1201 gaagaccacc gacagatacg tgcagcagaa acgcttgaaa gcagctgaag ctgagagcaa1261 gttaaagcaa gtttatattc ccaactataa caagccaaat ccgaaccaaa tcagtgtcaa1321 caacgtcaag gccggtgtgg tgaatggcac gggggcgccg ggccagagcc ctggggctgg1381 ccgggcctgc gagagctgtt acaccacaca gtcttaccag tggtattctt ggggtccccc1441 taacatgcag tgtcgtctct gcgcatcttg ttggacatat tggaagaaat atggtggctt1501 gaaaatgcca acccggttag atggagagag gccaggacca aaccgcagta acatgagtcc1561 ccacggcctc ccagcccgga gcagcgggag ccccaagttt gccatgaaga ccaggcaggc1621 tttctatctg cacacgacga agctgacgcg gatcgcccgg cgcctgtgcc gtgagatcct1681 gcgcccgtgg cacgctgcgc ggcaccccta cctgcccatc aacagtgcgg ccatcaaggc1741 cgagtgcacg gcgcggctgc ccgaagcctc ccagagcccg ctggtgctga agcaggcggt1801 acgcaagccg ctggaagccg tgcttcggta tcttgagacc cacccccgtc cccccaagcc1861 tgaccccgtg aaaagcgtgt ccagcgtgct cagcagcctg acgcccgcca aggtggcccc1921 cgtcatcaac aacggctccc ccaccatcct gggcaagcgc agctacgagc agcacaacgg1981 ggtggacggc aacatgaaga agcgcctctt gatgcccagt aggggtctgg caaaccacgg2041 acagaccagg cacatgggac caagccggaa cctcctgctc aacgggaagt cctaccccac2101 caaagtgcgc ctgatccggg ggggctccct gcccccagtc aagcggcggc ggatgaactg2161 gatcgacgcc ccggatgacg tgttctacat ggccacagag gagaccagga agatccgcaa2221 gctgctctca tcctcggaaa ccaagcgtgc tgcccgccgg ccctacaagc ccatcgccctgcgcccgtca acgacgagccgccccccgcc cctcgcccgc2401 ccacacggcc ccttcccagc cagcccgccg cccgcccctc agtttggtag tgccccacct2461 cccgccctca cctgcagaga aacgcgctcc ttggcggaca ctgagggagg agaggaagaa2521 gcgcggctaa cttattccga gaatgccgag gagttgtcgt ttttagcttt gtgtttactt2581 tttggctgga gcggagatga ggggccaccc cgtgcccctg tgctgcgggg ccttttgccc2641 ggaggccggg ccctaaggtt ttgttgtgtt ctgttgaagg tgccgtttta aattttattt2701 ttattacttt ttttgtagat gaacttgagc tctgtaactt acacctggaa tgttaggatc2761 gtgcggccgc ggccggccga gctgcctggc ggggttggcc cttgtctttt caagtaattt2821 tcatattaaa caaaaacaaa gaaaaaaatc ttataaaaag gaaaaaaacc aa//三、表达载体的选择我所选用的原核表达载体为质粒pBR322；pBR322 是一种常用的E. coli 克隆载体（1），为4,361 bp 的环状双链DNA（2）。
高中生物选修三基因工程作业
1．苏云金杆菌(Bt)能产生具有杀虫能力的毒素蛋白。
图21是转Bt 毒素蛋白基因植物的重组DNA 形成过程示意图；图22是毒素蛋白基因进入植物细胞后发生的两种生物大分子合成的过程，据图回答下列问题。
（1）将图21①的DNA 用Hind Ⅲ、BamH Ⅰ完全酶切后，反应管中有 种DNA 片段。
过程②需要用到 酶。
（2）假设图21中质粒原来BamH Ⅰ识别位点的碱基序列变为了另一种限制酶Bcl Ⅰ的碱基序列，现用Bcl Ⅰ和Hind Ⅲ切割质粒，则该图21中①的DNA 右侧还能选择BamH Ⅰ进行切割，能获得所需重组质粒吗？并请说明理由 。
（3）若上述假设成立，并成功形成重组质粒，则重组质粒A ．能被BamH Ⅰ也能被Hind Ⅲ切开B ．能被BamH Ⅰ但不能被Hind Ⅲ切开C ．不能被BamH Ⅰ也不能被Hind Ⅲ切开D ．能被Hind Ⅲ但不能被BamH Ⅰ切开 （4）图22中α链是 。
不同组织细胞的相同DNA 进行过 程③时启用的起始点 （在“都相同”、“都不同”、 “不完全相同”中选择），其原因是 。
（5）要想检测导入的Bt 毒素蛋白基因是否表达，在分子水平上可 用 进行检测，如果出现杂交带，说明目的基因已经表达 蛋白质产品，转基因植物培育成功。
2．基因工程又叫做基因拼接技术。
该技术能够通过对生物的基因进行改造和重新组合，产生出人类所需要的基因产物。
自20世纪70图1和图2示基因工程部分操作过程：⑴从表中四种酶的切割位点看，可以切出平末端的酶是__________。
⑵将目的基因与质粒DNA 缝合时，两条链上的磷酸、脱氧核糖在__________酶的作用下连接起来，形成磷酸二酯键；两条链间的碱基对通过__________连接起来。
⑶图2中的质粒分子可被表中__________酶切割，切割后的质粒含有_____个游离的磷酸基团。
⑷若对图中质粒进行改造，插入的Sma I 酶切位点越多，质粒的热稳定性越_____。
基因工程作业1
基因工程作业1.同尾酶和同裂酶有何区别？同尾酶是指许多不同的限制性内切酶切割DNA长生的末端是相同，且是对称的，即它们可以产生相同的粘性末端，这些酶统称为同尾酶。
同裂酶是识别相同序列的限制酶称同裂酶，但它们的切割位点可能不同，他切割的位点有以下几种①：同序同切酶，这些酶识别位点和切割位点都相同②：同序异切酶，识别的序列是相同的但它们的切割位点不同。
③：同功多位许多识别简并序列的限制酶包含了另一种限制酶的功能。
④：其他，识别的序列有交叉。
2.简述书上各种酶的催化活性与用途，上网查查是否还有其他工具酶，请在作业上用红色标明。
①：限制性内切酶：是一类能够识别双链DNA分子中的某一种特定的核苷酸序列，并在此处切割DNA双链的核酶作用：自我保护作用（细菌的修饰和保护系统）、在制备重组载体时经常用到限制性内切酶长生相同的粘性末端。
②：甲基化酶原核生物和真核生物中存在大量的甲基化酶，原核生物中的甲基化酶作为限制与修饰系统中的一员，用于保护宿主DNA不被相应的限制酶切割，甲基化酶可以在腺嘌呤或者嘧啶上引入甲基。
在转录修复系统中有依赖甲基化的错配修复。
③：DNA聚合酶主要活性是催化DNA的合成（在具备模板、引物、dNTP的情况下）及其向辅的活性。
用途：合成大量的DNA、进行末端标记、补平末端。
④：连接酶就是将两段核酸连接起来的酶，主要作用是连接双链DNA中的缺口，及切口。
⑤：核酸酶有核酸内切酶和核酸外切酶核酸外切酶是一类从多核苷酸链的一头开始按序催化降解核苷酸的酶。
分为单链核酸外切酶和双链核酸外切酶主要用途是催化单链DNA/RNA的降解，切掉双链中的单链区。
⑥反转录酶即依赖于RNA的DNA聚合酶，有5'-3'聚合酶活性,但没有有3'-5'的外切酶活性，主要作用：cDNA克隆中第一条链的合成、合成cDNA探针。
⑦琼脂糖酶：琼脂糖酶英文名称：agarase定义：催化琼脂糖的1，3-β-D-半乳糖糖苷键水解的酶。
基因工程作业
⏹1、何为载体?一个理想的载体应具备那些特点？
⏹2、由于基因工程是人为改变遗传信息的操作，因此必须注意被操作基因的安全，
进行严格的监控，质粒载体的安全性是十分重要的。
请问质粒载体的安全条件包括哪几个方面?
⏹3、为什么野生型的 噬菌体DNA不宜作为基因工程载体?
⏹4、什么是蓝白斑筛选法? 蓝白斑筛选法会有假阳性吗，为什么?
⏹5、M13系列载体具有哪些优缺点?
⏹6、黏粒载体具有哪些特点与不足?
⏹7、辅助噬菌体DNA和相应的噬菌粒是如何协同工作的?
⏹8、抗性基因（Resistant gene）是目前使用的最广泛的选择标记，常用的抗生素抗
性有哪几种？并举两例说明其原理？
⏹9、用λ噬菌体载体进行gene cloning时，主要利用λ噬菌体的生物学特性作选择标
记，其中有cI失活和Spi筛选，请问什么叫cI筛选？什么叫Spi筛选
⏹10、Cosmid的工作原理是什么？
⏹11、双元载体的概念及其构件原理？
⏹12、反转录病毒载体的基本结构元件是什么？腺病毒载体系统作为哺乳动物细胞表
达载体，基因治疗载体等有何优点？。
课时作业36 基因工程(含答案详解)
因进入酵母菌细胞内，并且在其细胞内维持稳定和表达的过程，称为 转化 。在
表达过程中，启动子需与 RNA 聚合酶 识别和结合，从而驱动转录过程。
(3)在体液免疫过程中，白细胞介素是由 T 淋巴 细胞分泌的，为了能成功
表达出白细胞介素，不使用细菌，而使用酵母菌细胞作为受体细胞，可能原因
是 细菌细胞中无内质网和高尔基体等加工白细胞介素的细胞器
据图回答下列问题：
(1)在该实验中为构建基因表达载体，用 Sac Ⅰ、Xba Ⅰ切下 CBFl 基因后，对质 粒载体进行切割的限制酶是 Sac Ⅰ、Xba Ⅰ ，理由是 用 相 同 限 制 酶 切 割 来
源不同的 DNA 后，可产生相同的末端
。
(2) 连 接 CBFl 基 因 到 该 质 粒 载 体 后 ， 作 为 基 因 表 达 载 体 的 组 成 还 必 须 有 启动子和终止子 。将重组质粒导入香蕉细胞最常用的方法是 农杆菌转化法 。
6．(2021·河南洛阳联考)回答下列与基因工程相关的问题： (1)自然界中原核生物容易受到外源 DNA 的入侵，但依然可以达到保护自身的目 的，这为人们寻找 限制酶 (答基因工程的操作工具)提供了启示。质粒作为基因 工程的载体，应具备的基本条件：能够自我复制、具有标记基因和一个至多 个 限制酶切割位点 。 (2)利用 PCR 技术扩增蜘蛛丝基因前，需根据目的基因的核苷酸序列设计 2 种引 物，进行 PCR 时需加热至 90～95 ℃，然后冷却至 55～60 ℃，此操作的目的 是 将 DNA 解链，然后使引物结合到互补 DNA 链上 。
解析：本题考查基因工程的有关知识。根据“八氢番茄红素合酶(其基因用 psy 表示) 和胡萝卜素脱饱和酶(其基因用 crtl 表示)参与 β－胡萝卜素的合成”可知，重组质粒中的 目的基因含有 psy 和 crtl，A 正确；构建重组质粒需要限制酶、DNA 连接酶，不需要核酸 酶，B 错误；可通过基因枪法、花粉管通道法将目的基因导入水稻受体细胞，C 错误；PCR 技术可扩增特定基因，但要检测目的基因是否表达应该用抗原—抗体杂交法，D 错误。