甲苯胺蓝染色
甲苯胺蓝染色渗透试验
甲苯胺蓝染色渗透试验
1.目的
根据ASTM F1929-2012标准方法采用染色渗透法检测无菌包装封口泄漏性能2.设备及工具、材料
天平（万分之一）10mL注射器，甲苯胺蓝、曲拉通X-100（氚X-1004）、纯化水、烧杯、试管
3.配制方法
3.1.用天平称量0.5g Triton X-100，与20ml纯化水混合，搅拌或摇动容器，混合二者。
待Triton X-100分散后。
再加入纯化水定容至100ml。
3.2.用天平称量0.05g甲苯胺蓝，加入混合了Triton X-100的溶液中,搅拌或摇动容器混合均匀，即成0.05%甲苯胺蓝染色液。
4.试验方法
4.1.把已灭菌产品包装在试验开始之前，放置于大气温度23±2℃（73.4±3.6oF）和相对湿度50±2%环境中进行存贮24小时。
4.2.依据ASTM F1929-2012标准，将足够的染料渗透液注入包装中，覆盖最长的封边，深度约5mm（0.25英寸）（注入方法：可以使用带有软管的注射器通过切口送入染料渗透剂）使染料渗透液与封边保持接触最少5s最多20s的时间，旋转包装使每道封边都能接触渗透液，如有需要可以补充染色液，确保每道封边都能接触足够量的染色液。
通过包装的透明面目力检测密封区，看有无泄漏或者通道出现，也可使用放大镜进行细致的观察。
5.检验标准
在包装透明的一边，用肉眼检测封口区域。
即可看见封口区的通道。
检查染色液有无透过密封区到达另一侧或染色液有无通过确定的通道进入密封区内部的迹象。
6.注意事项
染色渗透液与包装材料封边的作用时间不应超过20秒。
甲苯胺蓝染色方法改进
【】 １ 杜卓民． 实用组织学技术【 ． Ｍ】北京 ： 人民卫生出版社 ，９ ８ １９ ．
［ 陆 云， ２ 】 汤美 蓉． 甲苯胺蓝快染肥大 细胞的体会叨． 皖南 医学院学报 ，
１ ９ ，０ ４ ：８ ． ９ １ １ （ ）２ ９
［ 闭慎金． ３ ］ 幽门螺杆菌 甲苯胺蓝法在 胃黏膜免疫组化复染中的应用叨．
异染性 （ 弱阳性 ）为紫色或紫红 色 ； 异染性 （ ， 一 阳性 ） 为红色。 ，
但此种异染性染色后 经酒精脱水时 ， 又转变成正色性『 １ １ 。此染料 特点是对于 神经元 的尼 氏体染 色效果好 ， 还可染黏液 、ຫໍສະໝຸດ 软骨基 质、 大细胞等。 肥
甲苯胺 蓝在组 织学 、 病理 学 中应用较 为广 泛。具 文献报 道， 甲苯 胺 蓝可 快速 染 肥大 细胞 【； 胃黏膜 免 疫组 织 化学 在 １ 反应 中 ， 甲苯 胺蓝 复染 后 ， 经 胃黏膜 组织 内的幽 门螺旋 杆菌
被染 为 蓝 色 ； 早期 识 别活 体 中无 症状 的 口腔 鳞 癌 ， 可 良性
溃疡 通 常具 有非 常 明确 的边缘 着 色 ，而癌前 病变 或恶 性病
变 的 边 缘 是 弥 散 的【； 口服 甲 苯 胺 蓝 胃 内 染 色 有 助 于 胃 癌 的
冲洗 ， 尼氏体着色效果更佳 。 可能是 由于尼 氏体为嗜碱性物质，
即出现形态变化甚 至溶解 因此实验用水 ｐ 。 Ｈ值对实验结果非 常重要 ， 其在 临床病理诊 断中 ， 尤 一定要排 除实验条件对实验
结 果 的干 扰 。
参考文献：
细胞 核 着蓝 色 ， 此法 简便 易行 、 果好 ， 只限 于宫 颈 癌 的 效 但
早期诊 断 『 ６ １ 氏体位 于神 经元 的核周 部 ， 。尼 由大量 平行 排列 的粗 面 内质 网 和游离 核糖 体组 成 ，为 易被碱 性染 料着 色 的 嗜染 质 。笔 者就 甲苯胺 蓝 显示 神经 元尼 氏体 的方 法进 行 了 改进 ， 体如 下 。 具
两种固定液对甲苯胺蓝染色效果的影响
显 微镜下 清晰 分辨 出肥大 细胞 ， 呈紫 红色 颗粒 ， 背景 呈 淡 蓝 色 甲 苯 胺 蓝 染 色 的 方 法 不 断 被 研 究 人 员 改 良， 以求得 到更 好 的染 色效 果 ， 有关 不 同固定 液对 但
文 献 标 识 码 ： Ｂ
文 章 编 号 ： ５ ９６ ０ （ ０ ０ ０ — ０ ５０ ０ ２ ０ ５ ２ １ ） ９０ １ — ２
一
甲苯 胺 蓝 染 色 法 是 目前 观 察 肥 大 细 胞 最 常 用 的 种细胞 化学 染 色方 法 。由于 该 方 法 简单 便 捷 ， 还
酸 二 氢 钠 （ Ｈ Ｏ ・ Ｈ Ｏ） ， 酸 氢 二 钠 Ｎａ Ｐ ４ｇ 磷
研 制 其 生 物 制 剂 奠 的 以
抗病 效果 。 参 考文 献 ：
［ ］ Ｌ ｂ ｎＡ，Ｔｏ ｇ ｄＦ ｉｋ ｅｗｅｎｉｎ ｔ ｎ ｄ ｐｉｅｉ １ ｅｏ ｕ ｈ ．Ｌｎ ｓｂ ｔ ｅ ｎ ａｅａ ｄａａ ｔ ｍ— ｖ ｍｕ ｉ ｉｔｐ ｉｔｒ ｒｎ［］ ｕ ｒｎ ｉｉｎｉ Ｉ ｎｔ ｖａ ｙ ｅＩｎｅｆ ｏ Ｊ．Ｃ ｒｅｔ ｎｏ ｍｍｕ ｏ ｙ ｅ Ｏｐ ｎ ｎｌ
（ ２ Ｏ ６ ５ ｇ， 蒸 馏 水 至 １０ ０ ｍＩ。 Ｎａ ＨＰ ） ． 补 ０
被 广 泛 运 用 于 卡 式 肺 孢 子 虫 囊 壁 上 的 圆 括 号 状 小 体 、 涂 片及骨髓 涂 片 中嗜 碱性 粒 细胞 、 颈 癌 、 血 宫 幽 门螺杆菌 等 的检 测＿ ］ １ 。通 过 甲 苯 胺 蓝 染 色 可 以 在
水 中 ； 已溶解 的 Ａ液 煮 沸 １ ｎ 再 将 已溶解 的 将 ０ｍｉ，
Ｂ液 逐 滴 加 入 Ａ 液 中 ， 煮 沸 １ ｎ 用 蒸 馏 水 补 再 ０ｍｉ ，
肥大细胞PAS-甲苯胺蓝染色法(教学课件)
讨论
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3. 通过PAS-甲苯胺蓝染色显示肥大细胞 形态结构典型，胞质内嗜碱性颗粒清 晰。显示肥大细胞中颗粒是识别和判 断及其功能状态提供的研究方法，也 为科研提供了较好的方法。
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• 在组织学观察中，我们怎样能够显示肥大 细胞的结构及特征呢？
学习任务 结果分析
镜检
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取材 固定
染色
组织取材
取皮下组织铺片
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组织固定
AFA固定液配制:
95%酒精 85ml 甲醛 15ml 冰醋酸 5ml
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染色
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PAS-甲苯胺蓝染色
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肥大细胞PAS-甲苯胺蓝染色法
Mast cell PAS- Toluidine blue staining
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这张照片中我们能看 到什么现象？
• 就是过敏（a添加标题
• 当肥大细胞受到过敏原刺激时，体内浆细 胞，生成IgE抗体，IgE与肥大细胞的IgE受 体结合后，机体对该过敏原便处于致敏状 态，作为过敏原与肥大细胞表面的IgE结合 使其激活脱颗粒，引起过敏反应。
取出固定好组织放入蒸馏水洗净， 置于氧化剂放置6min，自来水 冲洗1次，蒸馏水浸洗2次，放入 Schiff试剂，置于室温阴暗处，
浸染色10min，取出组织玻片在蒸 馏水洗净，将洗净的组织玻片放入
0.5%甲苯胺蓝液，其染色时间 只需30秒。
甲苯胺蓝染色
甲苯胺蓝染色液
产品号 401002 401041 401081 401032
产品 细胞周期检测试剂盒 线粒体膜电位试剂盒(JC-1) Caspase 3 活性检测试剂盒 AO/EB 双染试剂盒
产品号 401033 401072 401052 401037
-1-
-2-
产品组成：
甲苯胺蓝染色液(细胞专用)
产品编号 甲苯胺蓝染色液(细胞专用)
BB-44527-1 20ml
BB-44527-2 50ml
储存条件： 室温避光保存。
有效期： 一年。
产品简介： 甲苯胺蓝(Toluidine Blue O)是一种常用的人工合成染料，属于醌亚胺染料类，这类染
料主要含有胺基和醌型苯环两个发色团，从而成色原显色。甲苯胺蓝中的阳离子有染色作用， 组织细胞的酸性物质与其中的阳离子结合而被染色。甲苯胺蓝还含有两个助色团，能促使染 料产生电离成盐类，帮助发色团对组织产生染色力，使切片上的组织细胞着色，可染细胞核 使之呈蓝色。另外，肥大细胞胞质内含有肝素和组织胺等异色物质，遇到甲苯胺蓝可呈异染 性紫红色，临床上经常用于肥大细胞染色。
贝博甲苯胺蓝染色液(细胞专用)适用于细胞内酸性黏液多糖染色，尤其适用于含硫用方法：
使用注意事项： ● 为了证实染色效果，可选用慢性粒细胞白血病血片(嗜酸性粒细胞)或再生障碍性贫血骨髓涂片(组
织嗜酸性粒细胞)作对照。 ● 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
细胞涂片染色 1、细胞涂片后，立即放入 95%的乙醇中固定 15s，取出放在纸巾上； 2、滴加甲苯胺蓝染色液进行滴染 5min； 4、滴加等量蒸馏水于涂片上混匀，染色 15min； 5、水洗、晾干、镜检。
结果分析： 细胞内酸性黏液多糖呈红色。
甲苯胺蓝染色液(0.5%,硼酸盐法)
甲苯胺蓝染色液(0.5%,硼酸盐法)简介：甲苯胺蓝(Toluidine Blue O)是一种常用的人工合成染料, 属于醌亚胺染料类, 这类染料主要含有胺基和醌型苯环两个发色团，从而成色原显色。
甲苯胺蓝中的阳离子有染色作用, 组织细胞的酸性物质与其中的阳离子相结合而被染色。
甲苯胺蓝还含有两个助色团，能促使染料产生电离成盐类, 帮助发色团对组织产生染色力, 使切片上的组织细胞着色，可染细胞核使之呈蓝色。
另外，肥大细胞胞质内含有肝素和组织胺等异色性物质，遇到甲苯胺蓝可呈异染性紫红色，临床上经常用于肥大细胞染色。
Leagene 甲苯胺蓝染色液(Toluidine Blue,1%,硼酸盐法)由于硼酸盐缓冲液呈强碱性，更利于组织细胞的着色。
组成：操作步骤(仅供参考)：(一)肥大细胞染色1、脱蜡至蒸馏水。
2、根据切片厚度和组织的不同，浸染于甲苯胺蓝染色液。
3、蒸馏水或去离子水轻轻冲洗。
4、冰乙酸分化，直到细胞核和颗粒清晰可见。
5、快速和无水乙醇脱水。
6、 二甲苯透明，封固。
染色结果：肥大细胞呈紫红色；背景呈淡蓝色。
(二)软骨染色1、 石蜡切片入二甲苯。
2、 系列乙醇各。
3、 自来水洗。
4、 入Toluidine Blue O Stain ，浸染。
5、 自来水洗，滤纸吸干水分。
6、 丙酮分化至软骨细胞呈紫蓝色清楚可见。
7、 逐级乙醇脱水。
编号 名称 DA0059 Storage Toluidine Blue O stain (0.5%,硼酸盐法) 100ml RT 避光 使用说明书 1份8、二甲苯透明，中性树胶封固。
染色结果：软骨、成骨细胞呈紫红色；背景呈淡蓝色。
(三)细胞涂片染色1、用乙醇溶液稀释甲苯胺蓝染色液, 一般要求稀释即可。
2、细胞涂片后，立即放入乙醇中固定，取出放在纸巾上。
3、滴加稀释后的甲苯胺蓝染色液进行滴染，加盖玻片让染料渗透到细胞中。
4、将玻片竖起，稍加压力，使多余染料被纸巾吸去。
5、无需干燥，直接镜检。
PH1040 软骨染色液 甲苯胺蓝法实验方法 Phygene
PH1040|甲苯胺蓝染色液（软骨专用）
Cartilage Staining Solution with Toluidine Blue
Catalog No：PH1040Size：☐50mL|☐100mL Store at RT
试剂简介
甲苯胺蓝(Toluidine Blue O)是一种常用的人工合成染料,属于醌亚胺染料类,这类染料主要含有胺基和醌型苯环两个发色团，从而成色原显色。
甲苯胺蓝中的阳离子有染色作用,组织细胞的酸性物质与其中的阳离子相结合而被染色。
甲苯胺蓝还含有两个助色团，能促使染料产生电离成盐类,帮助发色团对组织产生染色力,使切片上的组织细胞着色，可染细胞核使之呈蓝色。
另外，肥大细胞胞质内含有肝素和组织胺等异色性物质，遇到甲苯胺蓝可呈异染性紫红色，临床上经常用于肥大细胞染色。
软骨染色液(甲苯胺蓝法)呈强碱性，更利于软骨组织的着色。
该试剂仅用于科研使用，不得应用于其他领域使用。
试剂存储
常温保存，12个月有效；
使用参考
1、常规脱钙，包埋、固定。
2、石蜡切片入二甲苯2次，每次15min。
3、系列乙醇各1min，自来水洗2min。
4、入软骨染色液，浸染15～20min。
根据不同组织，染色时间不完全相同。
5、自来水洗2min，滤纸吸干水分。
6、丙酮分化至软骨细胞呈紫蓝色清楚可见。
7、逐级乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。
染色结果：软骨、成骨细胞呈紫红色；背景呈淡蓝色。
注意事项
1、针对于较难着色组织的染色，浸染的时间应相应延长。
2、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
细胞核染色方法及原理
细胞核染色方法及原理
细胞核染色是生物学领域中常用的实验技术之一，用于研究细胞核的结构和功能。
目前常用的细胞核染色方法包括苏木精-
伊红染色法、甲苯胺蓝染色法和荧光染色法等。
苏木精-伊红染色法是最常见的细胞核染色方法之一。
其原理
是将标本固定后，用苏木精染料染亮细胞核，然后用伊红染料染暗胞质细胞器。
染色后的样本可以通过显微镜进行观察。
苏木精主要染色DNA，使细胞核呈现为紫红色，而伊红主要染
色胞质蛋白质，使胞质呈现为粉红色。
甲苯胺蓝染色法主要用于观察细胞核的细胞形态和染色体结构。
其原理是将标本固定后，用甲苯胺蓝染料染色，然后对其进行脱水、透明化等处理，最后用显微镜观察。
甲苯胺蓝染料可以与DNA结合，使细胞核呈现出深蓝色。
荧光染色法是一种利用荧光染料标记细胞核的方法。
其中，常用的荧光染料有荧光素、荧光素同工异构体和DAPI等。
这些
染料可以与DNA结合，在荧光显微镜下观察细胞核。
荧光染
色法可以提供更高的分辨率和更准确的定位信息，常用于细胞核的三维结构研究和基因表达等研究领域。
细胞核染色方法的选择要根据实验的目的和需要来决定，不同的染色方法有不同的优缺点。
细胞核染色的目的是为了更好地观察和研究细胞核的结构、功能和变化，从而揭示细胞核在生物体内扮演的关键角色。
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软骨细胞甲苯胺蓝染色
1%甲苯胺蓝配制
原液：1g甲苯胺蓝粉末+10ml 70%酒精溶解（据说可保存6个月）
工作液：取上述原液1ml+9ml 1% NaCl 溶解，滤纸过滤（用时新鲜配制）
1% NaCl：1gNaCl + 100ml 蒸馏水（用时新鲜配制）
染色步骤：
（1）爬片用PBS洗2次，直接用4% 多聚甲醛固定于6孔板中1h或更长时间（4度）（2）自来水洗15分钟，最好不要直接冲爬片，易脱片
（3）蒸馏水洗5分钟
（4）加1%甲苯胺蓝浸染2h
（5）去除多余染液，我觉得可以用注射器从6孔板中吸走。
有人说用90%酒精的，但一定要慎重。
否则时间稍长，就会将颜色洗脱。
当然洗脱后仍然可以从（4）开始重复。
（6）镜下观察，满意后晾干，中性树胶封片（或者镜下观察）。