肥大细胞染色液(甲苯胺蓝法) 使用说明
甲苯胺蓝染色
软骨细胞甲苯胺蓝染色
1%甲苯胺蓝配制
原液：1g甲苯胺蓝粉末+10ml 70%酒精溶解（据说可保存6个月）
工作液：取上述原液1ml+9ml 1% NaCl 溶解，滤纸过滤（用时新鲜配制）
1% NaCl：1gNaCl + 100ml 蒸馏水（用时新鲜配制）
染色步骤：
（1）爬片用PBS洗2次，直接用4% 多聚甲醛固定于6孔板中1h或更长时间（4度）（2）自来水洗15分钟，最好不要直接冲爬片，易脱片
（3）蒸馏水洗5分钟
（4）加1%甲苯胺蓝浸染2h
（5）去除多余染液，我觉得可以用注射器从6孔板中吸走。
有人说用90%酒精的，但一定要慎重。
否则时间稍长，就会将颜色洗脱。
当然洗脱后仍然可以从（4）开始重复。
（6）镜下观察，满意后晾干，中性树胶封片（或者镜下观察）。
肥大细胞染色液(阿利新蓝沙黄法)
肥大细胞染色液(阿利新蓝沙黄法)简介：肥大细胞(Mast cell)是疏松结缔组织内常见的细胞，常成群的沿着小血管和淋巴管分布，也常见于支气管和胰腺的小叶间导管周围，一般细胞较大，直径约为20-30μm ，呈圆形或椭圆形，胞核较小、胞质内充满粗大且具有异染性嗜酸性颗粒。
Leagene 肥大细胞染色液(阿利新蓝沙黄法)能够区分不同类型的异染颗粒，染色后幼稚型肥大细胞颗粒呈蓝色，成熟型肥大细胞颗粒呈红色，对比较为清楚。
组成：操作步骤(仅供参考)：1、 取新鲜组织立即固定于10%中性福尔马林固定液中，常规脱水包埋。
2、 切片厚度5-6μm ，常规脱蜡至水。
3、 用阿利新蓝沙黄染色液滴染。
4、 稍微水洗。
5、 Csaba 脱水剂反复脱水。
6、 二甲苯透明，中性树胶封固。
染色结果：幼稚型肥大细胞颗粒 蓝色 成熟型肥大细胞颗粒红色注意事项：1、 肥大细胞染色时，应注意组织要新鲜，取出后立即固定。
2、 如无10%中性福尔马林固定液，可用4%的甲醛生理盐水代替。
3、 如果Csaba 脱水剂不够，可用乙醇替代，但片子易于脱色。
4、 分色后应快速入95%乙醇、无水乙醇、二甲苯的时间不宜过久，否则容易导致褪色。
编号 名称DA0049 3×50ml Storage试剂(A): Csaba 酸化液 50ml RT 试剂(B): 阿利新蓝沙黄染色液 100ml 4℃ 避光 试剂(C): Csaba 脱水剂 250mlRT 避光 使用说明书1份有效期：12个月有效。
相关：编号名称DC0032 Masson三色染色液DF0111 中性福尔马林固定液(10%)DG0005 糖原PAS染色液DJ0001 普鲁士蓝染色试剂盒(核固红法)PS0013 RIPA裂解液(强)PW0053 Western抗体洗脱液(碱性)TE0002 碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒(PNP微板法)。
肥大细胞PAS-甲苯胺蓝染色法(教学课件)
谢谢
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肥大细胞PAS-甲苯胺蓝染色法
Mast cell PAS- Toluidine blue staining
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这张照片中我们能看 到什么现象？
• 就是过敏（allergic）
单击此处添加标题ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
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• 当肥大细胞受到过敏原刺激时，体内浆细 胞，生成IgE抗体，IgE与肥大细胞的IgE受 体结合后，机体对该过敏原便处于致敏状 态，作为过敏原与肥大细胞表面的IgE结合 使其激活脱颗粒，引起过敏反应。
取出固定好组织放入蒸馏水洗净， 置于氧化剂放置6min，自来水 冲洗1次，蒸馏水浸洗2次，放入 Schiff试剂，置于室温阴暗处，
浸染色10min，取出组织玻片在蒸 馏水洗净，将洗净的组织玻片放入
0.5%甲苯胺蓝液，其染色时间 只需30秒。
甲苯胺蓝染色
• 将固定好的组织放入 • 0.5%甲苯胺蓝液，进行染色。
2. 在制作肥大细胞时，可用皮下组织或 取肠系膜铺片，组织铺片时，不能太 用力拉，如果用力太大，细胞被拉破 坏；如果拉力不够，铺片太厚，组织 不平，细胞被结缔组织覆盖，不利于 标本镜下观察。
讨论
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3. 通过PAS-甲苯胺蓝染色显示肥大细胞 形态结构典型，胞质内嗜碱性颗粒清 晰。显示肥大细胞中颗粒是识别和判 断及其功能状态提供的研究方法，也 为科研提供了较好的方法。
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• 在组织学观察中，我们怎样能够显示肥大 细胞的结构及特征呢？
学习任务 结果分析
镜检
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取材 固定
染色
组织取材
取皮下组织铺片
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甲苯胺蓝染色液
产品号 401002 401041 401081 401032
产品 细胞周期检测试剂盒 线粒体膜电位试剂盒(JC-1) Caspase 3 活性检测试剂盒 AO/EB 双染试剂盒
产品号 401033 401072 401052 401037
-1-
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产品组成：
甲苯胺蓝染色液(细胞专用)
产品编号 甲苯胺蓝染色液(细胞专用)
BB-44527-1 20ml
BB-44527-2 50ml
储存条件： 室温避光保存。
有效期： 一年。
产品简介： 甲苯胺蓝(Toluidine Blue O)是一种常用的人工合成染料，属于醌亚胺染料类，这类染
料主要含有胺基和醌型苯环两个发色团，从而成色原显色。甲苯胺蓝中的阳离子有染色作用， 组织细胞的酸性物质与其中的阳离子结合而被染色。甲苯胺蓝还含有两个助色团，能促使染 料产生电离成盐类，帮助发色团对组织产生染色力，使切片上的组织细胞着色，可染细胞核 使之呈蓝色。另外，肥大细胞胞质内含有肝素和组织胺等异色物质，遇到甲苯胺蓝可呈异染 性紫红色，临床上经常用于肥大细胞染色。
贝博甲苯胺蓝染色液(细胞专用)适用于细胞内酸性黏液多糖染色，尤其适用于含硫用方法：
使用注意事项： ● 为了证实染色效果，可选用慢性粒细胞白血病血片(嗜酸性粒细胞)或再生障碍性贫血骨髓涂片(组
织嗜酸性粒细胞)作对照。 ● 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
细胞涂片染色 1、细胞涂片后，立即放入 95%的乙醇中固定 15s，取出放在纸巾上； 2、滴加甲苯胺蓝染色液进行滴染 5min； 4、滴加等量蒸馏水于涂片上混匀，染色 15min； 5、水洗、晾干、镜检。
结果分析： 细胞内酸性黏液多糖呈红色。
甲苯胺蓝染色液(0.5%,硼酸盐法)
甲苯胺蓝染色液(0.5%,硼酸盐法)简介：甲苯胺蓝(Toluidine Blue O)是一种常用的人工合成染料, 属于醌亚胺染料类, 这类染料主要含有胺基和醌型苯环两个发色团，从而成色原显色。
甲苯胺蓝中的阳离子有染色作用, 组织细胞的酸性物质与其中的阳离子相结合而被染色。
甲苯胺蓝还含有两个助色团，能促使染料产生电离成盐类, 帮助发色团对组织产生染色力, 使切片上的组织细胞着色，可染细胞核使之呈蓝色。
另外，肥大细胞胞质内含有肝素和组织胺等异色性物质，遇到甲苯胺蓝可呈异染性紫红色，临床上经常用于肥大细胞染色。
Leagene 甲苯胺蓝染色液(Toluidine Blue,1%,硼酸盐法)由于硼酸盐缓冲液呈强碱性，更利于组织细胞的着色。
组成：操作步骤(仅供参考)：(一)肥大细胞染色1、脱蜡至蒸馏水。
2、根据切片厚度和组织的不同，浸染于甲苯胺蓝染色液。
3、蒸馏水或去离子水轻轻冲洗。
4、冰乙酸分化，直到细胞核和颗粒清晰可见。
5、快速和无水乙醇脱水。
6、 二甲苯透明，封固。
染色结果：肥大细胞呈紫红色；背景呈淡蓝色。
(二)软骨染色1、 石蜡切片入二甲苯。
2、 系列乙醇各。
3、 自来水洗。
4、 入Toluidine Blue O Stain ，浸染。
5、 自来水洗，滤纸吸干水分。
6、 丙酮分化至软骨细胞呈紫蓝色清楚可见。
7、 逐级乙醇脱水。
编号 名称 DA0059 Storage Toluidine Blue O stain (0.5%,硼酸盐法) 100ml RT 避光 使用说明书 1份8、二甲苯透明，中性树胶封固。
染色结果：软骨、成骨细胞呈紫红色；背景呈淡蓝色。
(三)细胞涂片染色1、用乙醇溶液稀释甲苯胺蓝染色液, 一般要求稀释即可。
2、细胞涂片后，立即放入乙醇中固定，取出放在纸巾上。
3、滴加稀释后的甲苯胺蓝染色液进行滴染，加盖玻片让染料渗透到细胞中。
4、将玻片竖起，稍加压力，使多余染料被纸巾吸去。
5、无需干燥，直接镜检。
甲苯胺蓝染色液(软骨专用)
北京雷根生物技术有限公司
甲苯胺蓝染色液(软骨专用)
简介：
甲苯胺蓝(T oluidine Blue O)是一种常用的人工合成染料, 属于醌亚胺染料类, 这类染料主要含有胺基和醌型苯环两个发色团，从而成色原显色。
甲苯胺蓝中的阳离子有染色作用, 组织细胞的酸性物质与其中的阳离子相结合而被染色。
甲苯胺蓝还含有两个助色团，能促使染料产生电离成盐类, 帮助发色团对组织产生染色力, 使切片上的组织细胞着色，可染细胞核使之呈蓝色。
Leagene 甲苯胺蓝染色液(软骨专用)呈强碱性，更利于软骨组织的着色。
组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、 常规脱钙，包埋、固定。
2、 石蜡切片入二甲苯2次每次。
3、 系列乙醇各1min ，自来水洗。
4、 入Toluidine Blue O Stain 浸染。
根据不同组织，染色时间不完全相同。
5、 自来水洗，滤纸吸干水分。
6、 丙酮分化至软骨细胞呈紫蓝色清楚可见。
7、 逐级乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。
染色结果：软骨、成骨细胞呈紫红色；背景呈淡蓝色。
注意事项：
1、 针对于较难着色组织的染色，浸染于甲苯胺蓝染色液的时间应相应延长。
2、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期： 12个月有效。
编号 名称 DA0054 Storage Toluidine Blue O stain (软骨专用) 50ml RT 避光 使用说明书 1份。
甲苯胺蓝染色渗透试验
甲苯胺蓝染色渗透试验
1.目的
根据ASTM F1929-2012标准方法采用染色渗透法检测无菌包装封口泄漏性能2.设备及工具、材料
天平（万分之一）10mL注射器，甲苯胺蓝、曲拉通X-100（氚X-1004）、纯化水、烧杯、试管
3.配制方法
3.1.用天平称量0.5g Triton X-100，与20ml纯化水混合，搅拌或摇动容器，混合二者。
待Triton X-100分散后。
再加入纯化水定容至100ml。
3.2.用天平称量0.05g甲苯胺蓝，加入混合了Triton X-100的溶液中,搅拌或摇动容器混合均匀，即成0.05%甲苯胺蓝染色液。
4.试验方法
4.1.把已灭菌产品包装在试验开始之前，放置于大气温度23±2℃（73.4±3.6oF）和相对湿度50±2%环境中进行存贮24小时。
4.2.依据ASTM F1929-2012标准，将足够的染料渗透液注入包装中，覆盖最长的封边，深度约5mm（0.25英寸）（注入方法：可以使用带有软管的注射器通过切口送入染料渗透剂）使染料渗透液与封边保持接触最少5s最多20s的时间，旋转包装使每道封边都能接触渗透液，如有需要可以补充染色液，确保每道封边都能接触足够量的染色液。
通过包装的透明面目力检测密封区，看有无泄漏或者通道出现，也可使用放大镜进行细致的观察。
5.检验标准
在包装透明的一边，用肉眼检测封口区域。
即可看见封口区的通道。
检查染色液有无透过密封区到达另一侧或染色液有无通过确定的通道进入密封区内部的迹象。
6.注意事项
染色渗透液与包装材料封边的作用时间不应超过20秒。
肥大细胞-甲苯胺蓝
肥大细胞-甲苯胺蓝目的：此细胞广泛分布于结缔组织中。
胞质含有异染性颗粒，由肝磷脂和组胺构成。
原理：肥大细胞被染成红-紫色(异染质着染)和蓝色的背景(正染质着染)。
异染性组织染色原理是一种染液染出不同的颜色。
是因为碱性染料的PH值、染料浓度和温度。
蓝色和紫色染料可显出红色，红色染料可显出黄色异染色组织原理。
对照：皮肤固定：10%甲醛技术：4μ石蜡切片设备：染色，蒸馏水稍洗。
试剂：甲苯胺蓝原液：甲苯胺蓝Toluidine Blue O 1.0 gm70%酒精alcohol 100.0 ml混合溶解，保存期6个月。
警告：避免接触和吸入。
工作液：甲苯胺蓝Toluidine blue, Stock 5.0 ml1%氯化钠Sodium chloride 45.0 ml新鲜配制，用后丢弃。
警告：避免接触和吸入。
1%氯化钠：氯化钠Sodium chloride 0.5 gm蒸馏水Distilled water 50.0 ml新鲜配制。
安全：穿戴手套、护目镜和白大衣。
在通风场所进行。
避免接触和吸入。
甲苯胺蓝O：有引起人的胃肠道和血液紊乱报导。
程序：1. 脱蜡至蒸馏水。
2. 甲苯胺蓝工作液1-2 minutes。
3.蒸馏水稍洗×3。
4. 快速95%和无水乙醇脱水。
5. 二甲苯透明和封固。
结果：肥大细胞紫红色背景蓝色参考文献：Sheehan D, Hrapchak B, Theory and practice of Histotechnology, 2nd Ed, 1980, pp282,Battelle Press, OhioLuna L, Manual Of Histologic Staining Methods from the AFIP, 3rd Ed, 1968,pp 162-163, McGraw-Hill, NYCrookham,J, Dapson,R, Hazardous Chemicals in the HistopathologyLaboratory, 2nd ED, 1991, Anatech肥大细胞-甲苯胺蓝对照：皮肤技术：4μ石蜡切片程序：1. 脱蜡至蒸馏水。
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肥大细胞染色液(甲苯胺蓝法)使用说明
货号：G3670
规格：100mL
保存：室温避光保存，有效期12个月。
产品说明：
甲苯胺蓝(Toluidine Blue O)中的阳离子有染色作用,组织细胞的酸性物质与其中的阳离子相结合而被染色。
甲苯胺蓝还含有两个助色团，能促使染料产生电离成盐类,帮助发色团对组织产生染色力,使切片上的组织细胞着色，可染细胞核使之呈蓝色。
临床上，经常用甲苯胺蓝对软骨细胞和肥大细胞进行染色。
操作步骤(仅供参考)：
1、石蜡切片入二甲苯2次，每次15min。
2、系列乙醇各1min。
自来水洗2min。
3、入Toluidine Blue O Stain，浸染10～15min。
4、自来水洗2min，滤纸吸干水分。
5、95%乙醇分色至肥大细胞呈紫蓝色，背景呈淡蓝色。
6、95%乙醇1min。
无水乙醇2次，每次2min。
二甲苯透明，中性树胶封固。
染色结果：
肥大细胞颗粒紫蓝色
背景淡蓝色
注意事项：
1、针对于胃粘膜组织、软骨组织等较难着色组织的染色，浸染于甲苯胺蓝染色液的时间应相应延长。
2、固定液最好采用Carnoy固定液。
3、甲苯胺蓝染色后不宜采用低浓度乙醇脱水，否则容易导致褪色。
4、分色后应快速入95%乙醇、无水乙醇、二甲苯的时间不宜过久，否则容易导致褪色。