芽孢染色液使用说明
实验四细菌的芽孢染色
实验四细菌的芽孢染色细菌的芽孢是指在环境恶劣时，细菌会形成内部有严密壳层保护的休眠结构。
芽孢可以存活在高温、低温、干旱和化学物质等极端环境中，具有极强的耐受性。
因此，了解细菌的芽孢形态和染色技术对于临床医学和微生物学研究具有重要意义。
一、理论知识芽孢染色是一种特殊的细菌染色方法，该方法是通过将细菌在特定的温度和时间条件下培养，诱导细菌形成芽孢。
然后用特殊染剂染色，可以使芽孢呈现出特定的颜色。
这种染色方法可以将细菌分为两类：芽孢形成阳性细菌和芽孢形成阴性细菌。
在芽孢染色实验中，需要用到以下染剂：1. 碘液：可以使细菌和芽孢的细胞质和内浆颜色变成深蓝色。
2. 芽孢绿：能够将芽孢染成绿色。
二、实验步骤1. 准备玻璃片。
取两块无菌的玻璃片，用酒精灼烧消毒，并晾干备用。
2. 细菌培养。
取一株待检测的细菌，接到含有适当营养成分的琼脂平板上。
在适当的温度下，通常是30-37℃，使细菌生长至需要形成芽孢的生长阶段。
3. 热处理。
将培养好的细菌涂在一块玻璃片上，然后将其放置在巴氏杀菌器中，用高温（通常是80℃）处理大约5分钟。
这里的处理过程可以模拟极端环境，诱导细菌形成芽孢。
4. 染色涂片。
将热处理后的细菌涂片放置在滴定瓶中，加入碘液，在室温下静置几分钟。
不要让碘液干燥，否则会影响后续染色效果。
之后，用酒精洗去多余的碘液。
5. 脱色处理。
将染色过的细菌涂片放入酸酒精溶液中，脱色1-2秒钟。
这一步会去除多余的染料，使芽孢显现出绿色。
6. 水洗和固定。
用自来水清洗脱色后的涂片，然后用火焰进行烘干和固定。
三、实验结果与分析芽孢染色的阴性和阳性结构特点如下：芽孢阳性：芽孢位置不定，涂片颜色为绿色。
四、注意事项1. 操作前请认真研究操作步骤并准备好所有必需的实验器材。
2. 涂片需要在室温下进行，但不宜长时间暴露于室外，以免可能的污染干扰实验结果。
3. 涂片需要在染色后及时清洗和固定，否则会有失真或污染的风险。
4. 在过程中要注意无菌操作，以避免其他微生物污染涂片。
实验五细菌芽孢染色法
革兰氏染色
1.涂片
2.固定 按常规方法加热固定。 3.染色
(1) 初染 用草酸铵结晶紫染色液染1分
钟，水洗。 (2) 媒染 滴加卢戈氏碘液，冲去残水， 并覆盖约1分钟，水洗。 (3) 脱色 滴加95％酒精，脱色时间约 为30秒，立即水洗。 (4) 复染 用番红复染液染色1～2分钟， 水洗。 4.镜检 干燥后，用油镜观察。
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二、实验原理：
芽孢具有厚而致密的壁，透性差，不易着 色，而一旦染上颜色，脱色也比较困难。因此芽 孢染色法的基本原则是：采用着色力强的染料， 在加热条件下，延长染色时间以促进标本着色。 然后采用脱色的方法使标本脱色，菌体颜色褪去， 而芽孢上的颜色仍然保留。再用对照的染料进行 复染，使菌体染上复染液的颜色，和芽孢形成鲜 明的对比，容易辨认。
三、实验器材
• 显微镜，酒精灯，火柴，试管夹，载玻片， 接种环，双层瓶，吸水纸，擦镜纸，蒸馏水； • 孔雀绿染液，沙黄（番红）水溶液； • 巨大芽孢杆菌(Bacillus megatherium)， 37℃培养20小时；
四、实验步骤
1 ．制备菌悬液 加2滴水于空试管中，用接种环挑取3环菌苔于试管中，搅拌 均匀，制成浓的菌悬液． 2. 染色 加孔雀绿染液2滴于小试管中，将试管置于沸水浴的烧杯中， 加热染色15~20 min 。 3. 涂片固定 用接种环挑取试管底部菌液数环于洁净载玻片上，涂成薄膜， 然后将涂片通过火焰3 次温热固定。 4. 脱色 水洗．直至流出的水无绿色为止． 5 ．复染 用沙黄水溶液染色2~3min ，倾去染液稍微用水冲去染液并 用滤纸吸干残液． 6 ．镜检 干澡后用油镜观察． 芽孢呈绿色，芽孢囊及营养体为红色．
制备菌悬液加2滴水于空试管中用接种环挑取3环菌苔于试管中搅拌均匀制成染色加孔雀绿染液2滴于小试管中将试管置于沸水浴的烧杯中加热染色1520min涂片固定用接种环挑取试管底部菌液数环于洁净载玻片上涂成薄膜然后将涂片通过火焰3次温热固定
芽孢染色液
组成：
名称
编号 DM0028 DM0028 Storage3×20ml Nhomakorabea×50ml
试剂(A): 石碳酸复红染色液 试剂(B): 脱色液 试剂(C): 碱性美蓝染色液
20ml 20ml 20ml
50ml 50ml 50ml
RT 避光 RT RT 避光
使用说明书
1份
操作步骤(仅供参考)：
1、 常规涂片。 2、 滴加石碳酸复红染色液于涂片上，缓缓加热使染液冒蒸汽但丌沸腾，并继续滴加热液丌
使涂片上的染液蒸干，这样维持。 3、 待涂片自然冷却至室温，倾去染液。用脱色液脱色至无红色染液流出为止，水洗。 4、 滴加碱性美蓝染色液复染。 5、 轻轻水洗。 6、 用滤纸沿涂片边缘吸干水分，镜检。
染色结果：
芽孢
红色
菌体
蓝色
注意事项：
1、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
北京雷根生物技术有限公司
芽孢染色液
简介：
芽孢又称芽胞是特殊性质的细菌，是某些细菌在其生长发育后期，在细胞内形成的一 个圆形或椭圆形的厚壁的含水量低的休眠体构造。芽孢染色原理在于芽胞折光性很强，用 着色力强的石碳酸复红，在加热条件下染色，使染料丌仅进入菌体也可进入芽胞内，进入 菌体的染料经脱色液被脱色，而芽胞一经着色后则难以被脱色液脱掉，再经碱性美蓝液复 染，芽胞仍保留红色，而菌体被染成蓝色，使芽胞和菌体更易于区分。该试剂比较稳定， 操作简单，结果判断可靠。
芽孢染色方法
芽孢染色方法
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方法1
(1)将培养24小时左右的枯草芽孢杆菌或其他芽孢杆菌，作涂片、干燥、固定。
(2)滴加3—5滴孔雀绿染液于已固定的涂片上。
(3)用木夹夹住载玻片在火焰上加热，使染液冒蒸汽但勿沸腾，切忌使染液蒸干，必要时可添加少许染液。
加热时间从染液冒蒸汽时开始计算约4—5min。
这一步也可不加热，改用饱和的孔雀绿水溶液(约7.6%)染10min。
(4)倾去染液，待玻片冷却后水洗至孔雀绿不再褪色为止。
(5)用番红水溶液复染1min，水洗。
(6)待干燥后，置油镜观察，芽孢呈绿色，菌体呈红色。
方法2
(1)取二支洁净的小试管，分别加入0.2ml无菌水，再往一管中加入1-2环的蜡状芽孢杆菌的菌苔，另一管中加入1-2环的生孢梭菌的菌苔，两管各自充分混合成浓厚的菌悬液。
(2)在菌悬液中分别加入0.2ml苯酚品红溶液，充分混合后，于沸水浴中加热3-5min。
(3)用接种环分别取上述混合液2-3环于两片载玻片上，涂薄，风干后，将载玻片稍倾斜于烧杯上，用95%乙醇冲洗至无红色液流出。
(4)再用自来水冲洗，滤纸吸干。
(5)取1-2环黑色素溶液于涂片处，立即展开涂薄，自然干燥后，油镜观察，在淡紫灰色背景的衬托下，菌体为白色，菌体内的芽孢为红色。
芽孢染色液(Scharffer-Fulton 法)说明书
芽孢染色液(Scharffer-Fulton法说明书
本产品仅供体外研究使用，不得用于临床诊断
产品简介：
又称芽胞染色液,观察菌体芽孢结构染色后菌体为红色，芽孢为绿色。
细菌是否有芽孢以及芽孢的形状和位置都是细菌的重要特征，细菌的芽孢壁比营养细胞的细胞壁结构复杂、致密、通透性低，着色和脱色都比营养细胞困难。
芽孢有很强的抗热和抗化学物质的特性，当采用碱性染料并加热或延长染色时间时，使菌体和芽孢都能着色，再用蒸馏水冲洗脱去菌体颜色，但芽孢的颜色仍然可以保留，可以在显微镜下明显区分芽孢和营养体的形态。
芽孢染色法详细步骤
芽孢染色法详细步骤
芽孢染色法详细步骤如下：
1.涂片、固定：滴半滴生理盐水在载玻片中央，挑取少量菌体于生
理盐水混匀并均匀涂布，室温自然晾干或用电吹风吹干后，涂片朝上，通过火焰2-3次固定。
2.初染：滴加数滴5%孔雀绿染液于涂片上，用木夹夹住载玻片在微
火上加热至染液冒蒸汽时计时5min（注意：加热过程中要及时添加染色液，切勿让标本干涸）。
3.水洗：待载玻片冷却后，用缓流自来水冲洗至流出的水无色为止。
4.复染：滴加数滴5%番红染色液，复染2min。
5.水洗：待载玻片冷却后，用缓流自来水冲洗至流出的水无色为止。
6.干燥：室温自然晾干或电吹风吹干（也可用吸水纸吸干）载玻片
上的水。
7.镜检：干燥后用显微镜观察。
芽孢染色常用方法
芽孢染色是一种常用的微生物实验室技术，用于观察和鉴定细菌的孢子形态和结构。
以下是芽孢染色的常用方法：
1. 热锡烙法（Heat-fixed smear）：将含有芽孢的菌落用细火加热，使其附着在玻璃片上固定。
2. 革兰氏染色法（Gram staining）：首先用洗涤液将玻璃片上的菌落冲洗，接着用紫晶染液染色，再用碘液做固定，用乙醇洗去多余的染色剂，最后用洗涤液冲洗，接着用红素染液染色，最后用洗涤液冲洗干净。
3. 铁血素染色法（Iron-hematoxylin staining）：将菌落固定在玻璃片上，然后用铁血素溶液浸泡一段时间，最后用去离子水冲洗干净。
4. 格拉姆染色法（Spore staining）：将菌落固定在玻璃片上，然后用绿基（Malachite Green）染液浸泡，将玻璃片放入蒸汽中加热，再用水洗去多余染液，最后用红素染液进行反染。
以上是几种常用的芽孢染色方法，具体使用哪种方法取决于实验目的和需求。
芽孢染色法实验报告
芽孢染色法实验报告芽孢染色法实验报告引言：芽孢染色法是一种常用的微生物实验方法，用于鉴定和观察细菌的芽孢形态和结构。
本实验通过对芽孢的染色和显微镜观察，旨在了解芽孢的特征和鉴定微生物。
实验材料和方法：材料：培养基、细菌液、石蜡刀、石蜡、石蜡刷、显微镜等。
方法：1. 取一片培养基，加入细菌液并充分混合。
2. 将混合液倒入培养皿中，并在培养皿中心划出一条刀口。
3. 将培养皿置于恒温箱中，在适当的温度下培养一段时间，使菌落生长并形成芽孢。
4. 取一片玻片，将石蜡刀预热至适当温度，刮取培养皿中的芽孢。
5. 将刮取的芽孢涂在玻片上，并用石蜡刷均匀涂抹。
6. 将玻片放入石蜡中，使其固定。
7. 将固定的玻片放入显微镜下观察和拍摄。
结果与讨论：通过芽孢染色法，我们观察到了芽孢的形态和结构，并进行了鉴定。
芽孢的形态：芽孢是一种细菌的生殖结构，通常呈椭圆形或圆柱形。
在显微镜下观察，芽孢的外部有一个坚硬的壳，内部则是细胞质和核酸物质。
芽孢的大小和形状可能因不同的细菌而异。
芽孢的结构：芽孢的结构包括中心小体、核心区、内外壳等部分。
中心小体是芽孢的核心，含有DNA和其他重要的细胞质成分。
核心区是由中心小体周围的细胞质组成，其中包含了细胞的各种酶和营养物质。
内外壳是芽孢的保护层，能够抵抗外界环境的压力和不良条件。
鉴定微生物：通过观察芽孢的形态和结构，可以初步鉴定微生物的种类。
不同种类的微生物芽孢在形态和结构上可能存在差异，因此可以通过对比已知的芽孢特征，来判断未知微生物的种类。
此外，芽孢染色法还可以帮助鉴定微生物的生长条件和适应性。
实验中的注意事项：在进行芽孢染色实验时，需要注意以下几点：1. 实验操作要严格遵守无菌操作规范，以避免外界细菌的污染。
2. 实验过程中要注意安全，避免接触有害物质和高温设备。
3. 实验前要熟悉显微镜的使用方法，并保持显微镜的清洁和调试。
4. 实验后要及时清洗和消毒实验器材，以防止细菌的传播和感染。
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芽孢染色液使用说明
货号：G1132
规格：50ml×2/100ml×2/250ml×2
保存：室温干燥保存，有效期1年。
试剂盒组成：
染色液A：石炭酸复红染液
染色液B：碱性美蓝染色液
产品说明：
芽胞具有高度的折光性，外膜致密，渗透性低，着色和脱色均较困难。
在加热条件下进行染色时，染料不仅进入菌体也可进入芽孢内，进入菌体的染料可被酒精脱色，而芽胞上的染料仍保留，经复染剂复染后，菌体和芽胞呈现出不同的颜色。
操作步骤：
1、制作一适当厚度的细菌涂片，自然干燥，通过火焰加热固定。
2、滴加适量染色液A于涂片上，在酒精灯上加热，使染液冒蒸汽但不沸腾。
必要时可续加染液以免干涸。
维持4-5分钟。
3、待标本冷却后以95%酒精冲洗至无红色染液脱出为止，水洗。
4、滴加染色液B复染约2-3分钟，水洗至无染液脱出为止。
5、待干后油镜观察。
预期结果：
菌体呈蓝色，芽孢呈红色。
注意事项：
1、供芽孢染色用的培养物应控制菌龄，要求大部分芽孢仍保留在菌体内为宜。
2、加热染色时必须维持在染液冒蒸汽的状态，加热沸腾会导致菌体或芽孢囊破裂，加热不够则芽孢难以着色。
3、请穿实验服并戴一次性手套操作。
相关试剂：
G1010姬姆萨工作液
G1020瑞氏-姬姆萨复合染液
G1060革兰氏染色液
G1160石炭酸复红染液。