亚硒酸钠对肝癌细胞发生自噬的影响

[13]Lunoe K，Gabel-Jensen C，Stump S，et a1．Investigation of the selenium metabolism in cancer cell lines fJ．Metallomics，201 l， 3(2)：162—8． [14]Qi Y Schoene NW’Lartey FM，et a1．Selenium compounds activate ATM-dependent DNA damage response via the mismatch repair protein hMLHI in colorectal cancer cells．J Biol Chem，2010，285(43)： 33010-7． [15]Suzuki M，Endo M，Shinohara F’et a1．Differential apoptotic response of human cancer cells to organoselenium compounds[J]．Cancer Chemother Pharmacol，20 1 0，66(3)：475—84． [16]Asfour IA，El Shazly S，Fayek MH，et a1．Effect of high-dose sodium selenite therapy on polymorphonuclear leukocyte apoptosis in non-Hodgkin’S lymphoma patients．[J]Biol Trace Elem Res，2006， lIO(1)：19-32．
生、发展存在着一定
的关系。自噬现象在 肿瘤发生发展的过程 中发挥着“双刃剑”
癌、肺癌、结肠直肠 癌具有很明显的作用
节信号传导通路、改变细胞 周期、引起凋亡等机制起到 抑制肿瘤生长的效果。
的作用。
二、研究方案
研究目标、研究内容和拟解决 的关键问题； 拟采取的研究方法、技术路线、 0 2 实验方案及可行性分析前期 研究。
亚硒酸钠与自噬
目前研究发现，在多 种人类肿瘤中均存在 自噬活性的改变 , 由此 可见自噬与肿瘤的发
硒 已 被证 实 具有较 好 的
肿 瘤 预防 作 用，近 年 来 多 项 研究 显 示硒化 合 物 具 有 抗肿 瘤 的作用 。 临 床 试 验表 明 硒的介 入 治 疗 能 降低 癌 症的发 生 率 和 死 亡 率 ， 尤以 对肝 亚硒酸钠作为一种小分子的 无机硒，化学性质稳定，十 分适合临床前期研究。已有 研究结果显示，亚硒酸钠可 通过氧化还原反应产生活性 氧等过程引起 DNA 损伤 、调
[5] Biederbick A ,ken HF , Elsasser HP。 Minidansylca daverine (MDC) is a specific in vivo marker for autophagic vacuoles[J ] 。 Eur J Cell Biol ,1995 ,66 (1) :3。 [6] 韩中博,张鹏,付强,等。 肿瘤细胞自噬的诱导及其细胞周期分析[J ] 。 癌症,2006 ,25 (9) :1063 [7] Mizushima N , Ohsumi Y, Yoshimori T。 Autophagosome for2 mation in mammalian cells[J ] 。 Cell Struct Funct , 2002 , 27(6) : 421 - 429。
blotting 检测自噬体LC3蛋白、MTT法检测肝癌HepG2细胞成活率、流 式细胞术检测细胞周期。
技术路线
肝癌细胞HepG2
不同浓度的5-FU
不同浓度的亚硒酸钠
MTT法检测5-FU和亚硒酸钠对 HepG2的IC50浓度

Company Name
技术路线



[4]Bergamini E ,Cavallini G,Donati A ,et al 。 The role of macroautophagy in the ageing process , anti2ageing intervention and age2associated diseases [J ] 。 Int J Biochem Cell Biol ,2004 ,36 (12) :2392。
统计学分析
统计数据用SPSS13.0 软件包进行 分析。 实验数据均以均数±标准差表示
两两比较采用单因素方差分析。
已查阅大量相 关文献
指导老师具有丰 富的临床、教学、 科研经验 技术上 可行
理论上 可行
经费上 可行 课题所需经费 已落实
设备上 可行 已具备完成本 课题的基本实 验条件
（三）创新之处
原发性肝癌(PHC)特点
恶化程度高、预后差 病情发展快、死亡率高 早期无明显症状和体征
由于肝癌发病隐 匿，确诊时能手 术切除者仅占 lO﹪～15﹪
手术 的缺 陷
不能解决患者的基础肝病、免疫 功能低下和肝内微小病变（肝移 植除外）
对血液中可能存在的癌细胞更无 能为力
联合
手术治疗
化疗、生物治疗 等非手术措施
这一实验结果对探讨亚硒酸钠在肝 癌发病过程中所发挥的作用进行了 新的探索。
1.
2.
寻找肝癌治疗的新药物，推测肝癌 治疗中利用自噬抑制结合抗癌药物 的方法很可能是一种新的治疗手段。
3.
观察亚硒酸钠对肝癌细胞 HepG2凋亡和自噬的影 响。
研究计划及预测进展
预期研究成果
相对于未经亚硒酸钠干预组来说，经亚硒酸钠干
肝癌细胞HepG2
空白对照组 5-FU处理组 亚硒酸钠处理组
5-FU+亚硒酸钠 处理组
48h后收集细胞
电镜观察自噬体形态、Western blotting 检测自 噬体LC3蛋白、MTT法检测肝癌HepG2细胞成活 率、流式细胞术检测细胞周期

统计分析
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亚硒酸钠对肝癌细胞发生自噬的 影响
专 导
业：普通外科 师：王世明
硕士研究生：师振茗
1 立论
2 研究 方案
3 研究 基础
4
经费 预算
依据
一、立论依据 1
2
（一）研究意义
肝癌是指发在肝脏的恶性肿瘤，包括原发性肝癌 (primary liver cancer，PHC)和转移性肝癌两种 ， 其死亡率仅次于胃癌、食道癌的第三大常见恶性肿 瘤 。目前，手术是治疗的首选方法。
4
细
胞
实
验
（1）肝癌HepG2细胞的培养。
（2）采用MTT法分别检测亚硒酸钠与5-Fu对肝癌细胞HepG2的IC50浓度 。 （3）将诱导分化培养的肝癌HepG2细胞按照处理因素的不同分组为: ①空白对照组：给予完全培养基。 ② 实验组：亚硒酸钠处理组、5FU处理组、5-FU联合亚硒酸钠处理组。
（4）观察肝癌HepG2细胞的自噬作用：电镜观察自噬体形态、Western
（PCD）在肝癌的发生、发展过程
中起着重要作用。因而，诱导肿瘤 细胞程序性死亡成为一种新的杀伤
肿瘤细胞的治疗新策略
自噬用来描述细胞在饥饿时,为了存
活而降解细胞内成分获得营养。自 噬是真核细胞蛋白降解的重要途径, 其作用主要是清除降解细胞内受损 伤的细胞结构、衰老的细胞器及不 再需要的生物大分子等。以透射电 子显微镜下超微结构的形态学检测 被称为自噬检测的金标准。

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拟解决的关键问题
1
2 3
肝癌HepG2细胞的增殖 培养及分组时做到完全 随机原则。
统计学分析。 Western blotting 检 测自噬相关蛋白准确操 作及MTT法和流式细胞 术相关操作。 由专业老师悉心指导， 以保证实验的顺利完成。
自噬发生过程简图
自噬的检测
微管相关蛋白LC3是哺乳动物
细胞中酵母自噬相关基因8 （ ATG8 ）的同源物， LC3 的
表达强度与自噬泡数量的多
少成正相关，因此，LC3 被认 为是自噬体的标志分子，通 过检测细胞内 LC3 可以判断 细胞自噬状态。
亚硒酸钠（Sodium selenite， Na2SeO3 ) 硒是人体内抗氧化酶和硒．P蛋白 的重要组成部分，在体内起着平衡 氧化还原稳态的作用。它在调节免 疫、抵制病毒突变、防止癌症的发 生等多方面起着十分重要的作用。




[8]Shintani T, Klionky DJ 。 Autophagy in health and disease : adouble2edged sword[J ] 。 Science , 2004 , 306 : 990 - 995。[8] Wallenberg M，OIm E，Hebert C，et a1．Selenium compounds are substrates for glutaredoxins：a novel pathway for selenium metabolism and a potential mechanism for selenium—mediated cytotoxicity[J]．Biochem J，2010，429(1)：85—93． [9] Ibrahim HA'Zhu Y，Wu C，et a1．Selenium-enriched probiotics improves murine male fertility compromised by high fat diet[J]．Biol Trace Elem Res，2012，147(1-3)：251-60． [10] Yao YF，Pei FX，Li XB，et a1．Preventive effects of supplemental selenium and selenium plus iodine on bone and cartilage development in rats fed with diet from kashin-Beck disease endemic area[J]．Biol Trace Elem Res，2012，146(2)：199206 [11]Sirikonda NS，Patten WD，Phillips JR,et a1．Ketogenic diet： rapid onset of selenium deficiency-induced cardiacdecompensation[J]．Pediatr Cardioi，2012，33(5)：834．8． [12]Zeng MS，Li X，Liu Y et a1．A high•selenium diet inducesinsulin resistance in gestating rats and their offspring．Free Radic Biol Med，2012，52(8)：1335-42．